Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения



Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения
Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла альфа, обладающие фотодинамической активностью, и способ их получения

 


Владельцы патента RU 2548675:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Московский государственный университет тонких химических технологий имени М.В. Ломоносова" (МИТХТ им. М.В. Ломоносова) (RU)

Изобретение относится к аминоамидам в ряду бактериохлорофилла а общей формулы:

где n=2,4,8,10, обладающим фотоиндуцированной противоопухолевой активностью, и к способу их получения путем взаимодействия метилового эфира бактериофеофорбида а с диаминоалканом формулы NH2(CH2)nNH2, где n=2, 4, 8, 10, в пиридине. Техническим результатом является получение высокоэффективных фотосенсибилизаторов, аминоамидов в ряду бактериохлорофилла а, на основе бактериохлорина е, обладающих высокой фотоиндуцированной противоопухолевой активностью. 2 н.з. п. ф-лы, 4 ил., 11 пр.

 

Настоящее изобретение относится к химии биологически активных соединений, конкретно к новому классу соединений - аминоамидам бактериохлорофилла а или бактериоаминоамидам, которые имеют интенсивное поглощение в ближней ИК-области, обладают химической и фотостабильностью, а также улучшенными гидрофильными свойствами за счет протонирования терминальной аминогруппы, что позволяет рассматривать их в качестве перспективных фотосенсибилизаторов (ФС) для фотодинамической терапии рака.

В клиниках ряда стран мира (США, Германии, Израиле, Канаде, России и др.) в течение последних 20 лет в онкологии активно применяются методы флуоресцентной диагностики (ФД) и фотодинамической терапии (ФДТ) опухолей, которые основаны на фотофизических и фотохимических эффектах, возникающих при облучении введенных в организм фотосенсибилизаторов светом определенной длины волны. Несомненным преимуществом фотодинамической терапии перед другими консервативными методами лечения злокачественных новообразований является локальность воздействия на опухоль, которая обеспечивается повышенной концентрацией фотосенсибилизатора в опухолевом очаге и направленным световым воздействием.

Клинические испытания метода ФДТ свидетельствуют о его эффективности при тяжелых дисплазиях, начальных поверхностно расположенных опухолях различной локализации у онкологических больных с тяжелой сопутствующей патологией.

Основное ограничение метода ФДТ связано с глубиной его воздействия. Используемые в клинике препараты имеют спектр фотодинамического воздействия с максимумами поглощения в области 630-675 нм. Проницаемость биологических тканей в этом диапазоне незначительна и составляет не более 1 см. Это часто приводит к частичной деструкции опухолевого очага, что впоследствии обусловливает продолженный рост опухоли. К недостаткам фотосенсибилизаторов первого поколения (Фотогем, Россия; Фотофрин, США; Фотосан, Германия) также следует отнести длительное время циркуляции в организме и выраженную кожную фототоксичность.

Создание и внедрение новых фотосенсибилизаторов, поглощающих в дальней красной области спектра - «окне проницаемости» биологических тканей, может расширить сферу применения ФДТ. Поэтому на протяжении последнего десятилетия проводится активный поиск новых высокоэффективных фотосенсибилизаторов, а также изучение их фотоиндуцированной активности in vitro и in vivo. Фотосенсибилизаторы природного происхождения легко выводятся из организма и быстро подвергаются биодеградации, что существенно снижает побочные эффекты ФДТ.

В ряду хлорофилла а исследована фотодинамическая активность хлорина е6 (Хл е6) и его аминоамидного производного (ЭДА-Хл е6), содержащего в положении 13 хлоринового макроцикла остаток этилендиамина [J.Photochem. Photobiol.B: Biol., 1992]. Было показано, что эффективность фототерапии с аминоамидом хлорина е6 значительно выше по сравнению с незамещенным хлорином. В биологических испытаниях на животных-опухоленосителях коэффициент селективности накопления ЭДА-Хл е6 в опухоли составляет 20, тогда как для Хл е6 он не превышает 3, что объясняется высокой аффинностью аминоамидного производного Хл е6 к липопротеинам низкой плотности в кровотоке и направленной доставкой подобных конъюгатов в опухолевую ткань.

Известны фотосенсибилизаторы 1, представляющие собой соли эфиров моноамида хлорина е6. Известен также способ их получения и способ ФДТ, включающий системное введение фотосенсибилизатора и облучение патологического участка оптическим излучением в спектральном диапазоне 655-662 нм. Вышеуказанные фотосенсибилизаторы и способ фотодинамической терапии с их участием являются ближайшими аналогами настоящего изобретения [Патент РФ 2416614].

Однако недостаточная глубина проникновения света в ткани у производных хлорофилла а ограничивает их использование в качестве фотосенсибилизаторов.

Из фотосенсибилизаторов хлоринового ряда в России применяются препараты «Фотодитазин» (662 нм) и «Радахлорин» (662 нм), в Республике Беларусь - «Фотолон» (660 нм), которые являются производными хлорофилла а.

В последние годы активно разрабатываются препараты, имеющие полосы поглощения в спектральной области так называемого «терапевтического окна прозрачности» (700-900 нм), где поглощение света биологическими тканями минимальное. Эти ФС относят к третьему поколению наряду с препаратами, включающими векторные молекулы, наночастицы или липосомы с целью улучшения селективности накопления ФС в опухолевых клетках.

Технический результат изобретения - получение высокоэффективных фотосенсибилизаторов, аминоамидов в ряду бактериохлорофилла а, на основе бактериохлорина е с улучшенными спектральными свойствами, обладающих высокой фотоиндуцированной противоопухолевой активностью в системах in vitro и in vivo, обеспечивающих излеченность животных-опухоленосителей, селективное накопление в опухоли и быстрое выведение из организма млекопитающих.

Технический результат достигается обработкой метилового эфира бактериофеофорбида а 2 диаминоалканом формулы NH2(CH2)nNH2, где n=2, 4, 8, 10. Исходный бактериофеофорбид а получают из бактериохлорофилл/каротиноидной смеси, выделенной из биомассы бактерий Rhodobacter Capsulata, путем двухстадийного кислотного гидролиза этой смеси 15% соляной и 80% трифторуксусной кислот. В качестве фотосенсибилизаторов предлагаются бактериоаминоамиды 3 (метиловый эфир 131-(ω-аминоалкилкарбомоил)бактерихлорина е) общей формулы:

Под действием нуклеофилов пентаноновый экзоцикл в бактериофеофорбиде легко раскрывается с разрывом связи С(131)-С(132). Раскрытие экзоцикла обусловлено наличием стерически доступного нуклеофильного центра при атоме углерода С(131). Механизм раскрытия экзоцикла без участия кислорода представляет собой катализируемое основанием нуклеофильное присоединение к 131-карбонильной группе бактериофеофорбида, который трансформируется в соответствующий 131-карбоксамид. Эффективность аминолиза экзоцикла определяется основностью используемого амина и стерическими эффектами при координации нуклеофильного центра 131 с азотсодержащими нуклеофилами.

Реакция протекает по схеме:

Предлагаемый способ заключается в следующем.

К раствору метилового эфира бактериофеофорбида а в пиридине добавляют диаминоалкан формулы NH2(CH2)nNH2, где n=2, 4, 8, 10, в 10-кратном мольном избытке и перемешивают при комнатной температуре в течение 2 часов. За ходом реакции следят по изменениям в спектрах поглощения и хроматографической подвижности. Раскрытие циклопентанонового фрагмента в молекуле бактериофеофорбида сопровождается незначительным гипсохромным смещением длинноволновой полосы поглощения с 760 нм до 754 нм, тогда как хроматографическая подвижность продукта реакции сильно снижается (Rf=0.3) по сравнению с исходным пигментом (Rf=0.7).

Полученный раствор разбавляют хлороформом, к нему добавляют 0.1 N раствор HCl и переносят в делительную воронку. Органический слой отделяют, промывают раствором гидрокарбоната натрия, высушивают сульфатом натрия и упаривают. Продукт перекристаллизовывают из петролейного эфира.

Отличительными признаками заявляемых производных бактериохлорофилла а и способа их получения являются:

1) использование в качестве исходного соединения бактериофеофорбида, что позволяет получать бактериоаминоамиды с поглощением в области 750-755 нм;

2) использование в синтезе бактериоаминоамидов диаминоалканов формулы NH2(CH2)nNH2, где n=2, 4, 8, 10, что позволяет направленно регулировать амфифильные свойства целевых пигментов;

3) наноструктурированная водная дисперсия на основе бактериоаминоамидов химически и фотостабильна;

4) наноструктурированная водная дисперсия на основе бактериоаминоамидов обладает высокой фотоиндуцированной активностью по отношению к опухолевым клеткам человека различного генеза при отсутствии темновой токсичности;

5) наноструктурированная водная дисперсия на основе бактериоаминоамидов при ФДТ приводит к увеличению продолжительности жизни (от 55 до 180%) и излеченности животных (от 30 до 100%);

6) наноструктурированная водная дисперсия на основе бактериоаминоамидов быстро выводится из организма млекопитающих, в том числе из кожи и мышц в течение 72 часов после введения ФС.

Строение полученных соединений доказано электронной, ИК-,1Н ЯМР - спектроскопией, а также подтверждено данными матричной лазерно-активируемой масс-спектрометрии (MALDI).

Оценку фотоиндуцированной активности проводили:

- в системе in vitro на опухолевых клетках человека различного эпителиального происхождения: эпидермоидной карциномы гортаноглотки (НЕр2) и аденокарциномы легкого (А549);

- в системе in vivo на мышах с саркомой 37 (S37).

Предлагаемое изобретение иллюстрируется нижеследующими примерами, но не ограничивается ими.

Пример 1. Получение метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил) бактериохлорина е (3, n=4).

К раствору 20 мг (0,03 ммоль) метилового эфира бактериофеофорбида а в 4 мл пиридина прибавляли 0,033 мл (0,3 ммоль) диаминобутана. Полученный раствор перемешивали в течение 6 часов при комнатной температуре. Ход реакции контролировали спектрофотометрически и при помощи тонкослойной хроматографии (ТСХ). Реакционную смесь переносили в делительную воронку, добавляли хлороформ (50 мл) и 0,1N раствор соляной кислоты (100 мл). Органический слой отделяли, промывали водным раствором гидрокарбоната натрия, сушили над безводным сульфатом натрия, упаривали на роторном испарителе при температуре 35-40°C. Продукт очищали с помощью препаративной ТСХ на силикагеле в системе хлороформ-метанол с градиантом концентрации метанола от 0,5 до 40%.

Выход соединения 3 (n=4) составил 19 мг (85%). Электронный спектр, λmax, нм (ε х 10-3, М-1см-1): 400 (100), 522 (55), 754 (68). Масс-спектр (MALDI), m/z:712,3 (М+).

Данные ядерно-магнитного резонанса 1Н ЯМР (300 МГц, CDCl3, δ, м.д.): 9.25 (Н, с, 5-Н), 8.63 (Н, с, 10-Н), 8.46 (Н, с, 20-Н), 5.15 и 4.89 (2Н, д, J=19 Гц, 151-Н), 4.27 (Н, м, 7-Н), 4.16 (Н, м, 18-Н), 4.13 (Н, м, 17-Н), 4.01 (Н, м, 8-Н), 3.62 (3Н, с, 153-Н), 3.55 (3Н, с, 174-Н), 3.40 (3Н, с, 21-Н), 3.10 (3Н, с, 121-Н), 2.92 (3Н, с, 32-Н), 2.47 и 2.19 (2Н, м, 172-Н), 2.31 и 1.93 (2Н, м, 81-Н), 2.03 и 1.77 (2Н, м, 171-Н), 1.74 (3Н, д, J=7 Гц, 71-Н), 1.57 (3Н, д, J=7 Гц, 181-Н), 1.26 (8Н, м, 133-136-Н), 1.04 (3Н, т,J=7Гц, 82-Н).

Протоны при аминогруппах: 6.68 (Н, т, 132-NH), 5,88 (2Н, т, 137-NH), 2.15 (2Н, с, индол).

Пример 2. Получение метилового эфира 131-(2-аминоэтилкарбомоил) бактериохлорина е (3, n=2).

Аналогично пр. 1 реакцию проводили 4 часа.

Выход соединения 3 (n=2) составил 20 мг (93%). Электронный спектр, λmax, нм (ε х 10-3, М-1см-1): 400 (100), 522 (55), 754 (68). Масс-спектр (MALDI), m/z:684,2 (М+).

Пример 3. Получение метилового эфира 131-(8-аминооктилкарбомоил) бактериохлорина е (3, n=8).

Аналогично пр. 1 реакцию проводили 36 часов.

Выход соединения 3 (n=8) составил 16 мг (66%). Электронный спектр, λmax, нм (ε х 10-3, M-1см-1): 400 (100), 522 (55), 754 (68). Масс-спектр (MALDI), m/z:768,7 (М+).

Пример 4. Получение метилового эфира 131-(8-аминодецилкарбомоил) бактериохлорина е (3, n=10).

Аналогично пр. 1, реакцию проводили 48 часов.

Выход соединения 3 (n=10) составил 14 мг (53%). Электронный спектр, λmax, нм (ε х 10-3, М-1см-1): 400 (100), 522 (55), 754 (68). Масс-спектр (MALDI), m/z: 797,0 (М+).

Пример 5. Получение наноструктурированной водной эмульсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил) бактериохлорина е с использованием Кремофора EL.

Растворяли 5 мг метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил) бактериохлорина е в 0.25 мл Кремофора EL. К полученному раствору добавляли 0.9% раствор хлористого натрия до концентрации 1 мг/мл при перемешивании при комнатной температуре. Полученный объем фильтровали через мембранный фильтр «Millipore» с размером пор 0.22 мкм.

Пример 6. Оценка фотостабильности наноструктурированной водной дисперсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе Кремофора в бесклеточной среде.

Оценку фотовыцветания проводили в среде Игла MEM, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки (ЭТС). Концентрация раствора составляла 7 мкМ. Раствор облучали полихроматическим светом. В качестве источника света использовали галогеновую лампу с широкополосным фильтром КС-13 (λmax≥640 нм) и водным фильтром толщиной 5 см. Световая доза составляла 5 и 10 Дж/см2 при плотности мощности 11,4 мВт/см2. Измерения флуоресценции проводили контактным способом на лазерном спектральном анализаторе «ЛЭСА-06» (ТОО «БиоСпек», Россия) в спектральном диапазоне 649-950 нм. Флуоресценцию возбуждали излучением He-Ne лазера (длина волны генерации 632,8 нм). Спектры флуоресценции регистрировали сразу после приготовления раствора и после облучения.

При облучении красителя не происходит сдвига максимума флуоресценции (λmах=753±3 нм), интенсивность флуоресценции при дозе 10 Дж/см2 снижается не более чем на 15% без изменений в профиле спектра относительно максимального значения, полученного ех tempore, что свидетельствует о его стабильности при воздействии светом (Фиг.1).

Пример 7. Накопление и распределение наноструктурированной водной дисперсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе кремофора в клетках А549.

Накопление, распределение и локализация соединений в клетках А549 были изучены методами конфокальной микроскопии и реконструкции спектральных изображений (КОМИРСИ) и лазерной сканирующей конфокальной микроскопии (ЛСКМ).

Конфокальные спектральные изображения клеток, а также спектры флуоресценции калибровочных растворов измеряли с помощью экспериментальной установки для микроспектрального конфокального анализа на основе спектрографа OMARS-89 (Dilor, Франция), микроскопа Olympus ВН-2 (Япония) и предметного столика с электронной системой микропозиционирования (Marzhauser-Wetziar, Германия). В качестве системы детекции использовали прибор с зарядовой связью (1024×256 элементов) с воздушным Пельте охлаждением (Wright Instruments LTD, Англия).

Возбуждение флуоресценции осуществляли, облучая образец лазером с длиной волны 532 нм (12 мкВт). Полученные спектры флуоресценции представлялись в виде суммы модельных спектров: аутофлуоресценции в клетке, базовой линии, обусловленной особенностями прибора и флуоресценции исследуемого соединения, измеренной в 1% CrEL. По полученным спектральным изображениям определяли среднюю интенсивность флуоресценции в цитоплазме клетки. Среднюю цитоплазматическую концентрацию соединения (Сцит) рассчитывали по формуле:

Сцит - (Iцит×Ск×tk)/(Ik×t),

где Iцит, Ik - средняя интенсивность флуоресценции в цитоплазме клетки и интенсивность калибровочного спектра соответственно, Ск - концентрация вещества при снятии калибровочного спектра флуоресценции, t, tk - время накопления спектра в отдельной точке в эксперименте и при измерении калибровочного спектра соответственно.

Коэффициенты накопления (К) рассчитывали по формуле:

К=Сцитвнеш,

где Свнеш - концентрация соединения во внешней среде. В каждой выборке обрабатывалось и усреднялось 20-30 клеток.

Внутриклеточное распределение соединений изучали с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа SP2-4Pi (Leica, Германия). Конфокальные флуоресцентные изображения получали с использованием 100× маслоиммерсионного объектива (планапохромат, числовая апертура 1,46) и лавинного фотодиода в качестве детектора. Латеральное разрешение составляло 0,3 мкм, аксиальное разрешение - 1,5 мкм. Флуоресценцию соединений возбуждали Ar+-лазером (514 нм) и регистрировали в области 700-850 нм.

Методом ЛСКМ установлено, что соединение эффективно проникает в клетки А549 и накапливается в цитоплазматической области. Происходит концентрирование в везикулярных клеточных структурах субмикронного размера, а также диффузное окрашивание цитоплазмы, которое усиливается в околоядерной области (Фиг.2). Соединение в ядро клетки не проникает и не накапливается в плазматической мембране.

Согласно результатам микроспектральных исследований внутриклеточные спектры флуоресценции одинаковы по форме и максимуму во всех участках цитоплазматической области и совпадают со спектрами флуоресценции в 1% CrEL. Это позволяет предположить, что данные соединения накапливаются в клетке в липидоподобном окружении.

Нами были определены коэффициенты внутриклеточного накопления (отношение внутриклеточной концентрации соединения к его концентрации в инкубационной среде). При этом клетки инкубировали с соединением 3 (n=4) в концентрации 0,5 мкМ в течение 2 часов. Коэффициент внутриклеточного накопления составляет 65.

Пример 8. Фотоиндуцированная активность наноструктурированной водной дисперсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе кремофора в отношении клеток культуры Нер2.

Оценку фотоиндуцированной активности проводили при варьировании концентрации и времени инкубации от 30 минут до 6 часов. Исследования проводили как с удалением фотосенсибилизатора перед облучением, так и без удаления ФС, что позволяет нам также говорить о накоплении красителей в клетке.

Клетки рассеивали в лунки плоскодонного 96-луночного микропланшета (Costar, США) в концентрации 7×104 кл/мл. Соединения вносили через 24 часа после посева клеток, варьируя концентрацию от 8 до 700 нМ. Облучение проводили галогеновой лампой с использованием широкополосного фильтра КС-13 (λmах≥640 нм) и водного фильтра толщиной 5 см. Уровень ингибирования роста клеток в культуре вычисляли по формуле:

ИР(%)=[(Пко)/Пк]×100%,

где ИР - ингибирование роста клеток культуры, в процентах;

Пo и Пк - число жизнеспособных клеток, выраженное в единицах оптической плотности, соответственно в опытных (с красителем) и контрольных (без красителя) пробах.

Биологически значимым эффектом считали ингибирование роста культуры на 50% (ИК50).

Выявлено, что краситель 3 (n=4) проявлял максимальную фотоиндуцированную активность относительно клеток культуры Нер2 при 4-часовой инкубации (32±3 нМ), с увеличением времени инкубации до 6 часов величина ИК50 увеличивается (43±2 нМ), что свидетельствует о выведении красителя из клеток (Фиг.3).

Удаление красителя из культуральной среды перед воздействием светом не снижает эффективность фотодинамического воздействия (ИК50=34±3 нМ) (Фиг.3). Это говорит о том, что уже через 2 часа после внесения ФС в культуральную среду фотоиндуцированная активность реализуется преимущественно за счет активации внутриклеточного красителя, что и было доказано методами КОМИРСИ и ЛСКМ.

Таким образом, результаты, полученные in vitro, показывают, что метиловый эфир 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) эффективно накапливается в клетках и обладает высокой фотоиндуцированной активностью в отношении клеток Нер2.

Пример 9. Распределение наноструктурированной водной дисперсии диметилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе кремофора в опухоли S37 и флуоресцентная контрастность относительно окружающей ткани.

Оценку распределения ФС в опухолевой и окружающих тканях проводили у мышей с саркомой S37 в интервале от 0 до 72 часов методом ЛФС. Фотосенсибилизатор вводили внутривенно в дозе 5,0 мг/кг. Флуоресценцию регистрировали контактным способом на лазерном спектральном анализаторе для флуоресцентной диагностики опухолей и контроля за ФДТ «ЛЭСА-06».

В опухолевой ткани нормированная флуоресценция ФС достигала максимального значения (10.4±3.1 усл. ед.) через 30 минут и сохраняется на высоком уровне до 2 часов после введения, а затем к 72 часам снижается на 74% от максимального значения. Наиболее высокие уровни нормированной флуоресценции в коже (3.7±0.9 усл. ед.) наблюдаются через 30 минут после введения ФС, в мышце (4.9±0.8 усл. ед.) - через 15-30 минут. Максимальная флуоресцентная контрастность ФС относительно окружающих нормальных тканей кожи регистрировалась через 0.25-2 часа после введения и составляла 2.8±0.5-3.0±0.3 усл. ед., а относительно мышцы - через 30 минут после введения и составляла 2.3±0.5 усл. ед.

Пример 10. Фотоиндуцированная противоопухолевая активность

наноструктурированной водной дисперсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе кремофора у животных с саркомой S37.

Исследование фотодинамической терапии с соединением 3 (n=4) в виде наноструктурированной водной дисперсии на основе кремофора проводили у животных с саркомой S37, привитой подкожно с внешней стороны правого бедра мышам BDF1, в зависимости от дозы ФС на 7 сутки после инокуляции опухоли.

В первой, второй и третьей опытных группах животным вводили ФС однократно внутривенно в хвостовую вену в дозах 1.25, 2.5 и 5.0 мг/кг, соответственно. Облучение проводили через 30 минут после введения фотосенсибилизатора. Для облучения использовали светодиодный источник с длиной волны 754±14 нм и плотностью мощности 150 мВт/см2 (плотность энергии 150 Дж/см2). Четвертая группа животных - контрольная без воздействия.

Эффективность ФДТ оценивали, используя общепринятые в экспериментальной онкологии критерии:

- торможение роста опухоли ТРО=[(Vk-Vоп)/Vк]·100%, где Vоп и Vk - объем опухоли в опытной и контрольной группах соответственно;

- увеличение продолжительности жизни УПЖ=[(СПЖоп - СПЖк)/СПЖк]·00%, где СПЖоп и СПЖк - средняя продолжительность жизни в опытной и контрольной группах соответственно;

- критерий излеченности КИ=[Nи/No]·100%, где Nи и No - количество излеченных животных и общее количество животных в опытной группе, соответственно.

Объем опухоли рассчитывали по формуле: V=d1·d2·d3, где d1, d2 и d3 - три взаимно перпендикулярных диаметра опухоли.

Измерение объема опухоли проводили в течение 20 суток после проведенного облучения с помощью электронного цифрового кронциркуля STORMtm 3С301 «Central». За животными наблюдали 120 суток.

В опытных группах в течение суток после облучения у животных образовывался интенсивный отек в зоне воздействия, который сохранялся до 5-10 суток. При использовании соединения 3 (n=4) в дозе 1.25 мг/кг, среднее значение объема опухоли увеличивалось медленно по отношению к объему опухоли контрольной группы. ТРО составило 92.6 - 100%, УПЖ - 170.8%, КИ - 66.7%. Для доз 2.5 и 5.0 мг/кг выявлена еще более высокая эффективность: 100% торможение роста опухоли в течение всего срока наблюдения, 100% излеченность животных в течение 120 суток наблюдения (Фиг.4).

Пример 11. Фармакокинетика наноструктурированной водной дисперсии метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е (3, n=4) на основе кремофора у интактных мышей.

Фармакокинетику диметилового эфира 131-(8-аминобутилкарбомоил) бактериохлорина изучали методом ЛФС в органах и тканях интактных мышей в дозе 5.0 мг/кг.

Максимум спектра флуоресценции ФС в тканях животных регистрировали при 753±2 нм. Флуоресцирующая форма фотосенсибилизатора быстро (в течение 15-30 минут) регистрировалась во внутренних органах и тканях организма, преимущественно в печени, затем снижалась с различной скоростью. Максимальная флуоресценция соединения 3 (n=4) в крови определялась сразу после внутривенного введения и в течение 4-х часов снижалась более чем на 95% от максимального значения и через сутки уже не регистрировалась.

Во внутренних органах через 24 часа уровень нормированной флуоресценции снижался в печени на 79%, почках - на 69%, селезенке - на 91% от максимального значения. Флуоресцирующая форма фотосенсибилизатора в дозе 5.0 мг/кг определялась в селезенке до 6 суток, а в почках и печени остаточное количество определялось до 14 суток.

В коже максимальное значение флуоресценции регистрировалось через 30 минут после введения фотосенсибилизатора, затем его нормированная флуоресценция быстро снижалась и через 24 часа составляла 30% от максимального значения и через 72 часа не определялась. Это свидетельствует о быстром элиминировании ФС из кожи. В мышце через 24 часа уровень нормированной флуоресценции также снижался на 62%, в жировой ткани - на 72%. Флуоресцирующая форма ФС определялась в мышце и жировой ткани до 72 часов.

Полученные данные свидетельствуют о быстрой циркуляции метилового эфира 131-(4-аминобутилкарбомоил)бактериохлорина е в организме млекопитающих и его выведении преимущественно через печень с желчью и почки с мочой.

Таким образом, заявляемые аминоамиды бактериохлорина е являются высокоактивными фотосенсибилизаторами нового поколения, поглощающими в ближней ИК-области спектра и обеспечивающими высокую фотоиндуцированную противоопухолевую активность, 100%-ное торможение роста опухоли и 100% излеченность животных за счет селективного накопления в опухоли и быстрого выведения из организма.

1. Аминоамиды в ряду бактериохлорофилла a общей формулы:

где n=2, 4, 8, 10, обладающие фотоиндуцированной противоопухолевой активностью.

2. Способ получения аминоамидов по п. 1, включающий обработку метилового эфира бактериофеофорбида а диаминоалканом формулы NH2(CH2)nNH2, где n=2, 4, 8, 10, в пиридине.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к химии и химической технологии, а именно к синтезу модифицированных силикагелей, содержащих ковалентно связанные с ними молекулы замещенных фталоцианинов, и их применению для фотообеззараживания воды.

Изобретение относится к медицине, а именно к фотосенсибилизатору для фотодинамической терапии. Заявлен метиловый эфир 13,17-бис(N-метил-N,N-диэтиламмониоэтиламид) хлорина e6 дитозилат в качестве фотосенсибилизатора, имеющий формулу: Заявленное соединение стабильно, обладает высокой фотобактерицидной активностью in vitro и высокой фотодинамической эффективностью.

Изобретение относится к получению новой светочувствительной композиции, пригодной для фотодинамической терапии рака. Заявлен способ получения фотосенсибилизатора, заключающийся в том, что 3-пиридилкарбоксальдегид конденсируют с пирролом в смеси пропионовая кислота - пропионовый ангидрид при их соотношении 3-4:1-2 при кипении в течение 80-100 мин.

Изобретение относится к способам получения бактериохлоринов, представленных формулами (I), (III) где значения радикалов X1-X8, R1-R8, Y, R' указаны в пп.1, 2 формулы, предназначенных для фотодинамической терапии (ФДТ) гиперпролиферативных тканей, таких как опухоли, гиперпролиферативные кровеносные сосуды и другие заболевания или аномалии, которые реагируют на ФДТ.

Изобретение относится к новым замещенным металлофталоцианинам, в частности, к тетра-(4-трет-бутил-5-нитро)фталоцианину кобальта или меди (I), проявляющему свойство красителя для полимерных материалов. (I). Предложенные металлокомплексы тетра-(4-трет-бутил-5-нитро)фталоцианина(I) расширяют цветовую гамму ближайших по структуре металлокомплексов тетра-4-трет-бутилфталоцианинов до голубых и синих цветов при крашении полимерных материалов.
Изобретение относится к области органической химии, в частности к химии природных соединений, а именно к получению метилфеофорбида (а), который предназначен для синтеза на его основе порфиринов и хлоринов для целей фотодинамической терапии.

Изобретение относится к карборансодержащим порфиринам (порфириновым соединениям) формулы: R1, R2, R3 и R4, независимо, обозначают -NO2, -NH 2, галоген или заместитель, представленный следующей формулой ;при условии, что, по меньшей мере, один из R1 R2, R3 и R4 обозначает заместитель, изображенный формулой (2), и при условии, что, по меньшей мере, один из R1, R2, R 3 и R4 обозначает заместитель, представленный как NO2, NH2 или галоген.

Изобретение относится к четвертичным аммониевым солям мезо-тетра[1- (4'-бромбутил)-3-пиридил]бактериохлорина общей формулы где , . .
Изобретение относится к области микрокапсулирования, в частности к способу получения микрокапсул лекарственных препаратов группы пенициллинов. Способ характеризуется тем, что в качестве оболочки микрокапсул используется каппа-карагинан, при этом к навеске каппа-каррагинана в ацетоне добавляют порошок лекарственного препарата в присутствии поверхностно-активного вещества Е472с, при этом соотношение количества лекарственного препарата к каппа-каррагинану при пересчете на сухое вещество составляет от 1:1 до 1:3, после образования самостоятельной твердой фазы очень медленно по каплям добавляют 5 мл карбинола и 1 мл дистиллированной воды, полученную суспензию микрокапсул фильтруют, промывают и сушат, процесс получения микрокапсул осуществляется в течение 15 минут.

Изобретение относится к медицине. Описаны имплантируемые устройства с различными вариантами загрузки биологически активного компонента, которые можно выбирать и применять для создания профиля пролонгированного высвобождения или профиля высвобождения с низким начальным выбросом биологически активного компонента из имплантированного устройства.

Изобретение относится к области фармацевтики и пищевой промышленности. Изобретение представляет биологически активный состав в форме ородисперсной таблетки, характеризующийся тем, что содержит дегидроэпиандростерон (DHEA) в качестве активного компонента и инертные наполнители: маннитол, сорбитол, мальтитол, кросповидон, коповидон, скользящее вещество, интенсивный подсластитель и ароматизатор при определенном соотношении компонентов.
Изобретение относится к области микрокапсулирования, в частности к способу получения микрокапсул лекарственных препаратов группы цефалоспоринов. Способ характеризуется тем, что в качестве оболочки микрокапсул используется полудан, при этом к водному раствору полудана добавляют порошок препарата группы цефалоспоринов в присутствии поверхностно-активного вещества E 472с, соотношение количества полудана и препарата группы цефалоспоринов при перерасчете на сухое вещество составляет 3:1, полученную смесь перемешивают до полного растворения компонентов реакционной смеси и по каплям приливают карбинол в качестве первого осадителя, а затем диэтиловый эфир в качестве второго осадителя, полученную суспензию микрокапсул фильтруют, промывают ацетоном, сушат в эксикаторе.
Изобретение относится к области микрокапсулирования, в частности к способу получения микрокапсул оксида цинка. Способ характеризуется тем, что в качестве оболочки микрокапсул используется каррагинан, при этом к навеске оксида цинка в диметилсульфоксиде добавляют суспензию каррагинана в бутаноле в присутствии поверхностно-активного вещества Е472c, к полученной смеси приливают этанол в качестве осадителя, полученную суспензию отфильтровывают и сушат при комнатной температуре.
Изобретение относится к области микрокапсулирования лекарственных препаратов, в частности к способу получения микрокапсул фенбендазола. Способ характеризуется тем, что в качестве оболочки микрокапсул используется натрий карбоксиметилцеллюлоза, при этом навеску фенбендазола, растворенную в диоксане, или диметилсульфоксиде, или диметилформамиде, диспергируют в раствор натрий карбоксиметилцеллюлозы в циклогексаноле в присутствии поверхностно-активного вещества E472с, перемешивание осуществляют при 1000 об/с, при этом массовое соотношение фенбендазола и натрий карбоксиметилцеллюлозы составляет 1:3 соответственно, затем добавляют смесь бутанола дистиллированной воды, взятых в объемном соотношении 2:1 соответственно, полученную суспензию микрокапсул отфильтровывают и сушат, при этом процесс получения микрокапсул фенбендазола осуществляют при 25°C.
Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию для лечения ВИЧ-инфекции в виде твердой лекарственной формы, включающую, по меньшей мере, один ингибитор протеазы ВИЧ в терапевтически эффективном количестве, выбранный из группы нелфинавир, саквинавир, типранавир, дарунавир, индинавир, ритонавир, лопинавир, палинавир или фосампренавир, и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, отличающуюся тем, что в качестве фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ содержит, по меньшей мере, один водонерастворимый полимер от 0,39 до 28 масс.% от массы всей готовой лекарственной формы, поверхностно-активные вещества, наполнители до массы 100% всей готовой лекарственной формы, а также способ лечения ВИЧ-инфекции.

Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения рака мочевого пузыря. Указанная композиция содержит эффективное количество валрубицина и диметилсульфоксида, а также полиэтоксилированное касторовое масло или одно или более веществ, выбранных из триметилхитозана, моно-N-карбоксиметилхитозана, N-диэтилметилхитозана, натрий каприновокислого, цитохалазина В, IL-1, поликарбофила, карбопола 934Р, N-сульфат-N,O-карбоксиметилхитозана, токсина Zonula occludens, 1-пальмитоил-2-глутароил-sn-глицеро-3-фосфохолина, и представлена в дозированной форме для внутрипузырного введения путем инстилляции.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой средство внутриклеточной доставки биологически активного высокомолекулярного соединения, содержащее высокомолекулярное соединение, выбранное из белка сыворотки молока, пептидных фрагментов белка сыворотки молока, белка вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней, термостабильного белка туберкулина, выделенного из микобактерии Mycobacterium bovi, белка M1 вируса гриппа штамма PR8, белка вируса ящура VP1, наночастицы - коллоидный селен, дистиллированную воду, причем компоненты в средстве находятся в определенном соотношении в мас.%.
Изобретение относится к медицине, в частности к способу доставки активных субстанций (АС) через эпидермальный барьер. Заявленный способ включает использование трансдермального пластыря матричного типа, содержащего подложку, защитную ленту и полимерный слой, и характеризуется тем, что в полимерный слой трансдермального пластыря вносят 10% ниосом на основе ПЭГ-12 диметикона и затем полимерный слой наносят на подложку.

Изобретение относится к медицине, а именно к фотосенсибилизатору для фотодинамической терапии. Заявлен метиловый эфир 13,17-бис(N-метил-N,N-диэтиламмониоэтиламид) хлорина e6 дитозилат в качестве фотосенсибилизатора, имеющий формулу: Заявленное соединение стабильно, обладает высокой фотобактерицидной активностью in vitro и высокой фотодинамической эффективностью.
Наверх