Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза



Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза
Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза
Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза
Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза
Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза
Способ определения эффективности лечения в-клеточного хронического лимфолейкоза

 


Владельцы патента RU 2548766:

Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Московской области " Московский областной научно-исследовательский клинический институт им. М.Ф. Владимирского" (ГБУЗ МО МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для мониторинга эффективности противоопухолевого лечения больных В-клеточным хроническим лимфолейкозом. Для этого в периферической крови определяют содержания B-клеток, позитивных по антигену CD20 после курса лечения. При этом дополнительно определяют среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 на B-лимфоцитах, а также содержание B-клеток, позитивных по антигену CD25. При выявлении значений CD20-позитивных B-клеток от 0 до 20%, CD25-позитивных B-клеток от 0 до 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 от 150 у.е. и более определяют лечение как эффективное. При значениях CD20 позитивных B-клеток более 20%, CD25-позитивных B-клеток более 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 менее 150 у.е. лечение считают неэффективным. Использование данного способа позволяет сделать заключение об эффективности проводимых режимов терапии заболевания на более ранних сроках, еще до клинических проявлений, что дает возможность клиницисту своевременно скорректировать тактику лечебных мероприятий, сократит частоту возможных осложнений терапии (миелотоксичности и иммуносупрессии) при применении новых препаратов. 3 пр., 6 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для мониторинга эффективности противоопухолевого лечения больных В-клеточным хроническим лимфолейкозом (В-ХЛЛ).

Известен способ определения эффективности лечения больных В-ХЛЛ на основании ряда клинико-гематологических критериев: степени проявления лимфаденопатии, гепатомегалии, спленомегалии; изменений количества лимфоцитов, тромбоцитов, нейтрофилов периферической крови, уровня гемоглобина; изменений объема костномозгового инфильтрата или нодулярного поражения (Современная онкология, экстренный выпуск «Российские клинические рекомендации по диагностике и лечению лимфопролиферативных заболеваний», под руководством проф. И.В. Поддубной, проф. В.Г. Савченко, 2013 г., с. 57).

Недостатком этого способа является его относительная специфичность, поскольку оценка эффективности терапии с учетом динамики клинико-гематологических показателей отражает органные и/или гематологические изменения, не всегда связанные с изменением объема или количества клеток опухолевого клона. Изменение размеров и нарушение функции лимфоидных органов при В-ХЛЛ регистрируются намного позже, чем происходят молекулярные и иммунофенотипические изменения В-лимфоцитов на уровне отдельной клетки при опухолевой трансформации. В частности, увеличение периферических лимфоузлов может сохраняться довольно долго при ремиссии В-ХЛЛ, когда клетки опухолевого клона практически элиминированы (т.е. удалены) из периферической крови; увеличение печени может быть связано с сопутствующей патологией, а не с прогрессией основного заболевания; увеличение или снижение уровня лимфоцитов крови может быть связано с развитием каких-либо инфекционных или вирусных заболеваний. Динамику клеток опухолевого клона при В-ХЛЛ можно определить только иммунологическим методом, оценивая фенотипические особенности опухолевых В-лимфоцитов.

Наиболее близким является способ оценки эффективности противоопухолевого лечения В-ХЛЛ методом проточной цитометрии по стандартизированному протоколу (Н.А. Купрышина, Л.Ю. Гривцова, Н.Н. Тупицин. «Определение минимальной резидуальной болезни при В-клеточном хроническом лимфолейкозе по стандартизированному европейско-американскому протоколу 2007», Иммунология гемопоэза, №2, 2008, с. 60-75), включающий иммунологическое исследование периферической крови с определением количества В-клеток, позитивных по антигену CD-20 после курса лечения. В основе метода лежит последовательное вычленение опухолевой популяции клеток из других и одновременная оценка коэкспрессии 3 пар антигенов: CD20/CD38, CD81/CD22, CD79b/CD43, определение которых в гейте CD19+/СВ5+лимфоцитов характеризуется наибольшей точностью выявления минимальной резидуальной болезни и минимальным числом ложно-положительных результатов. В целом для этой методики предложено использовать 5 проб биологического материала для каждого пациента, включающих применение в общей сложности 13 специфичностей моноклональных антител, меченных соответствующими флюорохромами для 4-цветной проточной цитометрии. Метод характеризуется высокой воспроизводимостью и чувствительностью 1 клетка В-ХЛЛ на 10000 лейкоцитов. Исследование выполняется на материале периферической крови, клетки выделяются методом лизирования эритроцитов с помощью лизирующего раствора с последующей отмывкой в фосфатно-солевом буфере, содержащем бычий сывороточный альбумин. При исследовании должно быть проанализировано не менее 500000 событий.

Данный метод имеет ряд существенных недостатков:

- Метод применим только после достижения больным В-ХЛЛ полной клинико-гематологической ремиссии; при уровне лейкоцитов периферической крови не менее 1,5Х109/л и при нормализации уровня циркулирующих В-лимфоцитов крови (5-19% или 100-500 кл/мкл), т.е. при ранних сроках после окончания курса лечения, когда больной не дает клинического ответа на терапию, или достигнут только частичный ответ, или в процессе лечения, когда количество В-лимфоцитов менее 5% или менее 100 кл/мкл и количество лейкоцитов крови менее 1,5Х109/л, данный метод не применяется.

- Проведение таких исследований возможно только при наличии проточного цитометра, имеющего как минимум 2 лазера и 4 канала регистрации флюоресценции. В соответствии со стандартным протоколом в наличии у исследователей должна быть полная панель из 13 специфичностей моноклональных антител, меченных 4 разными флюорохромами.

- Данный метод не является простым в технологическом плане, т.к. требует анализа не менее 500000 событий, т.е. большего количества исследуемой периферической крови и расходных материалов и высокой квалификации персонала при проведении аналитического этапа исследования (владение последовательной стратегией гейтирования путем логического ограничения).

Задачей предлагаемого изобретения является устранение указанных недостатков, повышение точности и достоверности определения эффективности проводимого лечения, в том числе и на ранних сроках терапии, упрощение технологии получения данных за счет более углубленного изучения дополнительных функциональных характеристик клеток опухолевого клона.

Для решения поставленной задачи при определении эффективности лечения В-клеточного хронического лимфолейкоза, включающего иммунологическое исследование периферической крови с определением содержания B-клеток, позитивных по антигену CD20, проводимое после курса лечения, предложено дополнительно определять среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 на B-лимфоцитах, а также содержание B-клеток, позитивных по антигену CD25. При выявлении значений CD20-позитивных B-клеток от 0 до 20%, CD25-позитивных B-клеток от 0 до 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 от 150 у.е. и более, определяют лечение как эффективное, при значениях CD20-позитивных B-клеток более 20%, CD25-позитивных B-клеток более 20%) и при значениях средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 менее 150 у.е. лечение считают неэффективным.

Предлагаемый способ основан на анализе меньшего количества событий, чем в прототипе, более простой стратегии гейтирования лимфоцитов, с применением нового показателя - оценки экспрессии антигена CD25 на B-лимфоцитах, отражающего пролиферативный потенциал B-клеток.

На фиг. 1 представлены цитограммы пациентки К. (пример 1) после проведения 5 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом):

Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма B - % содержание CD25-позитивных B-лимфоцитов.

На фиг. 2 представлены цитограммы пациентки К. (пример 1) после проведения 8 курсов иммунохимиотерапии в прежнем режиме:

Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма B - % содержание CD25-позитивных B-лимфоцитов.

На фиг. 3 представлены цитограммы пациента О. (пример 2) после проведения 3 курсов иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом:

Цитограмма A - % содержание CD20-позитивных B-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.

На фиг. 4 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 2 курсов иммунохимиотерапии в режиме RFC (ритуксимаб, флюдара, циклофосфан):

Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.

На фиг. 5 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 3 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом):

Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.

На фиг. 6 представлены цитограммы пациента П. (пример 3) после проведения 2 курсов мелфалана:

Цитограмма А - % содержание CD20-позитивных В-лимфоцитов и средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20;

Цитограмма В - % содержание CD25-позитивных В-лимфоцитов.

Способ осуществляется следующим образом.

Требуется наличие проточного цитометра с одним лазером и 3-мя каналами флюоресценции; достаточно иметь панель из 5 специфичностей моноклональных антител, меченных 3 флюорохромами.

Кровь из вены, предварительно обработанную антикоагулянтом ЭДТА, в количестве 50 мкл смешивают с 20 мкл моноклональных антител определенной специфичности, конъюгированных с флюорохромными красителями (например, CD20-FITC, CD45-APC, CD19-Per-CP, CD25-PE).

Инкубируют пробы при комнатной температуре в темноте в течение 20-25 мин, затем добавляют 1000 мкл лизирующего раствора для освобождения от эритроцитов, инкубируют при комнатной температуре в темноте в течение 12 мин, добавляют 1000 мкл раствора фосфатно-солевого буфера с 0,1% раствора азида натрия для остановки лизиса, 500 мл фиксирующего раствора для стабилизации мембраны клеток и анализируют пробы на цитометре. Образец для исследования всасывается под давлением в потоке жидкости через специальную иглу прибора, проба подвергается анализу.

В основе метода проточной цитометрии лежит проведение фотометрических и флюоресцентных измерений отдельных клеток, пересекающих одна за другой вместе с потоком жидкости лазерный луч монохроматического света.

В результате все клеточные элементы крови, проходя через лазерный луч, распределяются по размеру и «гранулярности» на области гранулоцитов, моноцитов и лимфоцитов. Каналы флюоресценции регистрируют сигналы, исходящие при возбуждении флюорохромных красителей, связанных с моноклональными антителами, которые используются для изучения поверхностных клеточных маркеров. Флюоресцентные сигналы преобразуются в электрические с помощью фотоэлектронных умножителей и после цифровой обработки все искомые данные выводятся на дисплей компьютера в виде цитограмм-графического изображения клеток, меченных определенным комплексом моноклонального антитела с флюорохромом. Таким образом, оператор получает информацию о количестве клеток, позитивных по интересующим его маркерам.

При анализе проб лимфоцитарную популяцию гейтируют (т.е. выделяют область интересов) по пан-лейкоцитарному антигену CD45, регистрируют содержание CD20-позитивных и CD25-позитивных В-клеток в процентах от общего количества лимфоцитов, затем регистрируют среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 в у.е. по параметру «mean» в статистических опциях программы, прилагаемой к прибору.

По полученным данным судят об эффективности проводимого лечения.

Пример 1.

Больная К., 1934 г. р., страдает B-клеточным хроническим лимфолейкозом 2 стадии с 2009 г.

После проведения пациентке 5 курсов иммунохимиотерапии (флюдарабин в сочетании с алемтузумабом) проведено иммунофенотипическое исследование клеток крови по вышеописанной методике: выявлено 2 клона CD20-позитивных B-клеток: 1-ый клон (12,2%) с уровнем средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 68 у.е., 2-ой клон (2,4%) - с уровнем средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 462 у.е.. Средний уровень флюоресценции антигена CD20 определен как 265 у.е.; содержание CD20-позитивных B-клеток - 14,6%. Содержание CD25-позитивных B-клеток составило 14%. Сделан вывод об эффективности проводимого лечения. При дальнейшем обследовании у больной зарегистрирована частичная клинико-гематологическая ремиссия.

В дальнейшем через 8 курсов терапии в прежнем режиме у больной проведено повторное иммунофенотипическое исследование по предлагаемому способу, содержание CD20-позитивных B-клеток составило 9,83%, в том числе 7,8% - со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 71 у.е., а 2,03% клеток - со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 291 у.е.; средний уровень флюоресценции антигена CD20 составил 181 у.е.; содержание CD25-позитивных B-клеток составило 8,4%. Сделан вывод об эффективности проведенной терапии - достигнуто снижение содержания CD20-позитивных B-клеток со слабой интенсивностью флюоресценции, т.е. опухолевых клеток. По клинико-гематологическим критериям состояние пациентки оценено как полная клиническая ремиссия.

При плановом обследовании через 6 месяцев состояние больной не изменилось.

Пример 2.

Пациент О., 1952 г. р., страдает B-клеточным хроническим лимфолейкозом 2 стадии с 2009 г.

После проведения 3 курсов иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом, при иммунологическом исследовании выявлено, что содержание CD20-позитивных B-клеток составляло 11,8%, выявлено 2 клона CD20-позитивных B-клеток: 1-ый (10,1%) - с интенсивностью флюоресценции антигена CD20 (63,8 у.е.) и 2-ой-(1,7%) со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 (259 у.е.), что в среднем составило 162 у.е. При этом содержание CD25-позитивных B-клеток составило 8,1%. Иммунофенотипически лечение было оценено как эффективное.

Цитометрически выявленная гетерогенность клона СО20-позитивных B-клеток с различной величиной средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 свидетельствует о процессе постепенного замещения опухолевого клона клеток, для которого характерна слабая интенсивность флюоресценции, на клон клеток с нормальной мембранной экспрессией антигена CD20, т.е. на неопухолевые лимфоциты. Этот факт может свидетельствовать о наличии положительного эффекта от проводимого лечения на данном этапе, в то время как клиническая картина еще не отражает положительных сдвигов в состоянии больного. В дальнейшем пациенту была продолжена противоопухолевая терапия в прежнем режиме, и после проведения 6 курсов у больного была достигнута частичная ремиссия, которая подтвердила наши предположения.

Пример №3.

Пациент П., 1956 г. р., B-ХЛЛ 2 ст., болен с мая 2011 г. После проведения 2 курсов терапии в режиме RFC (ритуксимаб, флюдара, циклофосфан) проведено иммунофенотипическое исследование периферической крови по указанной методике. Было выявлено, что содержание CD20-позитивных клеток составляло 91% со средней интенсивностью флюоресценции антигена CD20 44,9 у.е. Содержание CD25-позитивны B-клеток составило 86%. Результат лечения был оценен как неэффективный. Больному была заменена тактика лечения и проведено 3 курса иммунохимиотерапии, включающей введение флюдарабина в сочетании с алемтузумабом.

При иммунофенотипическом исследовании после лечения отмечено, что содержание CD20-позитивных клеток составляло 48%, средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 - 61,7 у.е., т.е. наблюдалось некоторое снижение уровня CD20-позитивных клеток, но средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 не изменилась. Содержание CD2 5-позитивных В-клеток составляло 39%. По иммунологическим критериям лечение оценено как неэффективное. В дальнейшем больному заменили схему лечения и провели 2 курса ритуксимаба в сочетании с флюдарабином и алемтузумабом. При иммунофенотипическом исследовании отмечено: содержание CD20-позитивных клеток выросло до 91%, средняя интенсивность флюоресценции антигена CD20 составила 43 у.е. Содержание CD25-позитивных В-клеток увеличилось до 87,5%. Данные иммунофенотипирования лимфоцитов крови указывали на неэффективность проводимой терапии, что впоследствии проявилось в прогрессировании заболевания.

Предлагаемым способом обследовано 130 пациентов, из них 75% больных показали хорошую эффективность лечения, 15% - отсутствие эффекта от проведенных режимов терапии на определенном этапе, что потребовало замены тактики лечения. В дальнейшем была получена положительная корреляция между данными иммунофенотипического исследования и клиническими показателями эффективности лечения, а также с помощью предлагаемого способа исследования подтверждена правильность выбранной тактики лечения.

Предложенный метод позволяет сделать заключение об эффективности проводимых режимов терапии заболевания на более ранних сроках, еще до клинических проявлений, что позволит клиницисту своевременно скорректировать тактику лечебных мероприятий, сократит частоту возможных осложнений терапии (миелотоксичности и иммуносупрессии) при применении новых препаратов, будет способствовать сокращению сроков пребывания больного в стационаре и снижению экономических затрат. В конечном итоге более точная и ранняя оценка эффективности лечения позволит увеличить показатели безпрогрессивной и общей выживаемости пациентов, улучшить качество их жизни.

Способ определения эффективности лечения B-клеточного хронического лимфолейкоза, включающий иммунологическое исследование периферической крови с определением содержания B-клеток, позитивных по антигену CD20 после курса лечения, отличающийся тем, что дополнительно определяют среднюю интенсивность флюоресценции антигена CD20 на B-лимфоцитах, а также содержание B-клеток, позитивных по антигену CD25, и при выявлении значений CD20-позитивных B-клеток от 0 до 20%, CD25-позитивных B-клеток от 0 до 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 от 150 у.е. и более определяют лечение как эффективное, при значениях CD20 позитивных B-клеток более 20%, CD25-позитивных B-клеток более 20%, средней интенсивности флюоресценции антигена CD20 менее 150 у.е. лечение считают неэффективным.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии и гинекологии, и может быть использовано для диагностики скрытой активной формы туберкулеза женских гениталий у пациенток с трубно-перитонеальным бесплодием.

Группа изобретений относится к медицине, а именно диагностике глютен-чувствительной энтеропатии у генетически предрасположенных пациентов, и может быть использована для уточнения диагноза аутоиммунного заболевания.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования часто рецидивирующего течения хронического панкреатита. Определяют концентрацию цитокинов МСР-1 и G-CSF в сыворотке крови.
Изобретение относится к области кардиологии, в частности к прогнозированию течения хронической сердечной недостаточности. Сущность способа: у больных с хронической сердечной недостаточностью определяют в периферической крови полиморфизмы генов AGTR2: 1675 и GNB3: 825.

Изобретение относится к медицине, а именно к определению воздействия метанола, поступающего из производственной среды, на иммунный статус работников, занятых в химическом производстве.
Раскрыты раствор для предварительной обработки для иммуногистохимического окрашивания, который элюирует содержащую парафин заливочную среду с предметного стекла с образцом ткани, залитым в среду, и извлекает антигенность образца ткани, и который можно использовать три или более раз, и концентрат раствора для предварительной обработки для иммуногистохимического окрашивания, который обеспечивает возможность легкого получения раствора для предварительной обработки.

Изобретения относятся к химерным белкам, нуклеиновой кислоте, кодирующей такой белок, экспрессирующей кассете, обеспечивающей экспрессию нуклеиновой кислоты, вектора, включающего экспрессирующую кассету, способу диагностики и набора для диагностики.

Изобретение относится к медицине, а именно, к психиатрии, и может быть использовано для прогноза эффективности лечения больных шизофренией. Для этого у больных шизофренией перед назначением лечения проводится иммунологическое обследовании и определение биохимических показателей сыворотки крови.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики нарушения почек у собак, включающего стадию измерения уровня экспрессии группы биомаркеров в биологическом образце от собаки, где биомаркеры представляют собой кластерин (CLU), секретируемый связанный с frizzle белок-2 (SFRP2); матрилин-2 (Matn2); лумикан (LUM); декорин (DCN); альфа 1 (III) цепи коллаген, вариант 12 (COL3A1); ретинол-связывающий белок 4 (rbp4); ММР-9; трансферрин (TF); Аро-С-1 (АроС1); и ингибин-бета A (INHBA).

Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ иммунохроматографического определения специфических антител. В основе способа лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют иммунные комплексы.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для определения генотипа человека по полиморфизму в гене матриксной металлопротеиназы ММР9-1562 C>Т (rs3918242). Способ основан на снятии кривых плавления с флуоресцентно-мечеными аллель-специфичными олигонуклеотидными пробами. В способе используют общую для всех аллелей пару праймеров, отличающиеся для каждого аллеля флуоресцентно-меченые аллель-специфичные олигонуклеотидные пробы и универсальный олигонуклеотид, меченый гасителем флуоресценции следующего нуклеотидного состава: MMP9-1562s CGAAACCAGCCTGGTCAACG; ММР9-1562а TCTGCCTCCCGGGTTCAAGC; ММР9-1562р1 GGCGCACGCCTATAA-FAM; ММР9-1562р2 GGCGCATGCCTATAA-HEX; ММР9-1562pq BHQ1-ACCAGCTACTCGGGAGGC-3'-(P), где FAM - означает флуоресцентный краситель FAM, HEX - означает флуоресцентный краситель HEX, BHQ1 - означает присоединенный к 5'-концевому нуклеотиду темновой гаситель флуоресценции. Отнесение образца к гомозиготе или гетерозиготе по данному аллелю оценивается по форме кривых плавления ДНК - по максимуму первой производной графиков флуоресценции. Изобретение позволяет повысить надежность и доступность генотипирования. 1 ил.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ донозологической диагностики нарушений здоровья от воздействия вибрации, включающий проведение лабораторных исследований крови, математическую обработку полученных результатов, отличающийся тем, что у пациентов в сыворотке крови определяют уровни фактора некроза опухоли-α и белка S-100β, рассчитывают диагностические коэффициенты F1 и F2 и при F1 меньше F2 диагностируют ранние проявления нарушения здоровья от воздействия локальной вибрации, при F1 больше или равно F2 - делают заключение об отсутствии ранних проявлений нарушения здоровья от воздействия локальной вибрации. Изобретение обеспечивает выявление донозологических признаков нарушений здоровья от воздействия локальной вибрации. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для мониторинга эффективности противоопухолевого лечения больных множественной миеломой. Для этого определяют концентрацию свободных легких цепей иммуноглобулинов до начала и после окончания курса лечения через 24 часа. При снижении концентрации более чем на 60% считают проводимое лечение эффективным, а при снижении концентрации на 60% и менее - неэффективным. Использование данного способа позволяет получить данные об эффективности лечения в короткие сроки, что повышает вероятность достижения ремиссии за счет индивидуального адекватного подбора схемы противоопухолевого лечения. 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии и терапии, и может быть использовано для определения фактора риска артериальной гипертензии у женщин с абдоминальным ожирением. Определяют уровень высокомолекулярного адипонектина и значения уровня высокомолекулярного адипонектина менее 4,6 мкг/мл считают фактором риска артериальной гипертензии. Чувствительность способа составляет 89,3%, специфичность - 88,1%. Способ позволяет достоверно определить фактор риска развития артериальной гипертензии у женщин с абдоминальным ожирением. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для определения наличия ботулинического нейротоксина типа А (BoNT/A). На парамагнитных частицах, несущих иммобилизованный белок G бактерий семейства Streptococcus, с блокированными раствором Денхардт-ДНК адсорбируют белок BoNT/A при помощи специфических высокоаффинных поликлональных антител. Детектируют образование комплекса белка BoNT/A с биотинилированным антителом посредством нековалентного коньюгата фрагментов ДНК с нейтравидином. Проводят ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы с флуоресцентной детекцией сигнала в режиме реального времени. Регистрацию присутствия BoNT/A в исследуемых образцах проводят по изменению уровня флуоресценции против контрольных. Изобретение обеспечивает эффективный способ определения наличия BoNT/A в пробах биологических жидкостей и тканей при первичной и вторичной интоксикации, а также в продуктах питания и может быть использовано для анализа как инфекционно опасных, так и инактивированных образцов. 5 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано для экспресс-определения атерогенности иммунных комплексов (ИК) сыворотки крови человека. Сущность изобретения состоит в том, что в предлагаемом способе преципитат ИК из сыворотки крови человека готовят путем обработки буфером, содержащим 10% раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 (ПЭГ-3350), в соотношении 1:3,5, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Агрегаты ИК осаждают центрифугированием, растворяют в буфере без ПЭГ-3350, определяют содержание холестерина в иммунных комплексах (ХИК) и степень связывания комплемента (ССК) морской свинки преципитированными иммунными комплексами. Рассчитывают атерогенность ИК как отношение ССК к ХИК и при величине менее 4 ЕД констатируют повышенную атерогенность крови. ! табл.
Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано для определения атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛПНП). Для этого преципитат ИК-ммЛПНП из сыворотки крови человека готовят путем обработки буфером, содержащим 10%-ный раствор полиэтиленгликоля с молекулярной массой 3350 (ПЭГ-3350), в соотношении 1:2,5, инкубируют в течение 10 мин при комнатной температуре. Агрегаты ИК-ммЛПНП осаждают центрифугированием, растворяют в буфере без ПЭГ-3350, определяют содержание холестерина в иммунных комплексах (ХИК) и степень связывания комплемента (ССК) морской свинки преципитированными иммунными комплексами. Рассчитывают атерогенность ИК-ммЛПНП как отношение ССК к ХИК. При величине менее 24 ЕД констатируют повышенную атерогенность крови из-за сниженной комплементактивирующей функции IgG в ИК-ммЛПНП. Использование данного способа позволяет проводить оценку атерогенности ИК-ммЛПНП, диагностировать атеросклероз на доклинической стадии, а также прогнозировать как течение атеросклеротического процесса у индивидуумов, так и эффективность проводимой терапии. 1 табл.
Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к клинической иммунологии. Cпособ определения стабилизации C3-конвертазы классического пути активации комплемента человека осуществляется путем проведения реакции лизиса эритроцитов барана 0,8% сывороткой крови человека в течение 10 мин. Реакцию останавливают добавлением буфера, содержащего 10 мМ этилендиаминтетрауксусную кислоту, определяют степень лизиса эритроцитов в контрольной пробе. Опытную пробу дополнительно инкубируют в течение 30 мин при 37°C, определяют степень лизиса, рассчитывают активность C3-конвертазы как разность между опытной и контрольной пробами, при разнице более 10% оценивают как аутоиммунное патологическое состояние. Использование простого и быстрого в осуществлении способа позволяет выявлять доклинические состояния иммунодефицита, может служить специфическим маркером для иммуномодулирующей терапии, проводить углубленное исследование патогенеза аутоиммунных заболеваний. 3 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы диагностики хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ) и проведения различия между стадией I/II и III/IV ХОБЛ у человека, включающие определение количества белков теплового шока 27 (HSP27), 70 (HSP70) и 90 альфа (HSP90 альфа) и определение количества рецептора 4 интерлейкина-1 (ST2) или гистон-связанных-ДНК-фрагментов в образце. ХОБЛ диагностируют, когда количество HSP27, HSP70, HSP90 альфа, ST2 и гистон-связанных-ДНК-фрагментов является увеличенным по сравнению с количеством таковых у здоровых людей. Стадии I/II ХОБЛ диагностируют, когда количество HSP27 в образце указанного субъекта находится в пределах между 2600 и 3300 пг/мл, количество ST2 больше чем 160 пг/мл, а количество HSP70 и HSP90 альфа является по меньшей мере на 40% увеличенным по сравнению с количеством таковых у здоровых людей. Стадии III/IV ХОБЛ диагностируют, когда количество HSP27 в образце находится в пределах между 3400 и 5500 пг/мл, количество HSP70, HSP90 альфа и гистон-связанных-ДНК-фрагментов в образце является по меньшей мере на 40% увеличенным по сравнению с количеством таковых у здоровых людей. Группа изобретений обеспечивает эффективные способы диагностики ХОБЛ и проведения различия между стадией I/II и III/IV ХОБЛ у человека. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 20 ил., 2 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело, способное связываться с амплифицированным рецептором эпидермального фактора роста (EGFR) и с усеченным вариантом EGFR - de2-7 EGFR, и охарактеризованное последовательностями вариабельных доменов. Также рассмотрены основанные на использовании антитела по изобретению набор для диагностирования опухоли, иммуноконъюгат, фармацевтические композиции и способы лечения злокачественной опухоли, а также одноклеточный хозяин для образования антитела по настоящему изобретению. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в диагностике и терапии рака. 8 н. и 35 з.п. ф-лы, 98 ил., 20 табл., 26 пр.
Наверх