Галотолерантный штамм rhodococcus wratislaviensis - деструктор полихлорированных бифенилов


 


Владельцы патента RU 2548804:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7 обладает деструктивной активностью в отношении группы стойких токсичных хлорароматических соединений - полихлорированных бифенилов (ПХБ). Штамм бактерий Rhodococcus wratislaviensis депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ Ас-2623D и может быть использован для разложения моно-, ди- и трихлорированных конгенеров, орто-, мета- и паразамещенных бифенилов, а также промышленной смеси ПХБ. 4 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой новый аэробный штамм бактерий, способный эффективно разлагать стойкие токсичные соединения - полихлорированные бифенилы (ПХБ), в том числе в условиях засоления.

Данные вещества включены в группу Стойких Органических Загрязнителей (СОЗ) [Стокгольмская конвенция, ФЗ-РФ №164 «О ратификации Стокгольмсокй конвенции…»] и подлежат полному уничтожению. Однако при реализации положений конвенции возникает проблема уничтожения соединений группы СОЗ, так как за длительный период производства и применения накоплены сотни тонн данных веществ, значительная часть которых попала в окружающую среду [Трегер Ю.А. Стойкие органические загрязнители. Проблемы и пути их решения // Вестник МИТХТ, 2011, т.6, №5].

Известен ряд способов термической и химической переработки ПХБ, однако эти способы являются высокозатратными и могут приводить к образованию более токсичных соединений - диоксинов [Полихлорбифенилы: Проблемы экологии, анализа и химической утилизации / отв. Ред. В.Н. Чарушин. - М.: КРАСАНД; Екатеринбург: УрО РАН, 2011. - 400 с.].

Наиболее экологически безопасным способом утилизации полихлорированных бифенилов (ПХБ) является их биологическая деструкция с использованием бактерий [Васильева Г.К., Стрижакова Е.П. Биоремедиация почв и седиментов, загрязненных полихлорированными бифенилами // Микробиология. 2007. Т.76. №6. С.725-741. и Beyer A., Biziuk М. Environmental fate and global distribution of polychlorinated biphenyls // Rev. Environ. Contamin. Toxic. 2009. V.201. P.137-158]. Известно, что в промышленных масштабах выпускались коммерческие смеси ПХБ, содержащие от 20 до 60 конгенеров с разной степенью хлорирования. Поэтому наибольший интерес представляют штаммы, способные утилизировать коммерческие смеси ПХБ.

В патентной литературе имеются сведения о бактериальных штаммах родов Pseudomonas, Burkcholderia и Rhodococcus [Патент US №4999300 А, 12.03.91; Патент US №6537797 В1, 25.03.2003; Патент РФ №2262531 С2, 20.10.2005], осуществляющих полное разложение отдельных конгенеров моно- и дихлорированных бифенилов.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к предлагаемому решению является «Штамм бактерий Rhodococcus ruber (ИЭГМ 896) - деструктор полихлорированных бифенилов» (Патент РФ №2262531 С2, 20.10.2005 г., МПК C12N 1/20; C02F 3/34).

Недостатками аналогов и прототипа является ограниченность эффективного разложения стойких токсичных соединений - в классе полихлорированных бифенилов (ПХБ), в том числе в условиях засоления почв.

Задачей создания изобретения является создание нового штамма - деструктора полихлорированных бифенилов, а также расширение арсенала средств для эффективного разложения стойких токсичных соединений - в классе полихлорированных бифенилов (ПХБ), в том числе в условиях засоления почв.

Поставленная задача решается с помощью Штамма Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7, депонированного во Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ) ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ Ac-2623D - который является активным деструктором полихлорированных бифенилов.

Ниже приведен сопоставительный анализ эффективности предлагаемого Штамма по сравнению с прототипом.

Для штамма Rhodococcus ruber ИЭГМ896 описан рост на трех конгенерах ПХБ (ПХБ1, ПХБ3, ПХБ8), наиболее «легких» для бактериального разложения и не содержащих заместителей в метаположении. О полной утилизации данных ПХБ судится по косвенным признакам: рост бактериальной культуры, способность штамма расти на продуктах разложения данных ПХБ, а именно на хлорбензойных кислотах.

Предлагаемый штамм Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7 разлагает более широкий спектр конгенеров ПХБ (26 конгенеров), в том числе содержащих более 2 заместителей в молекуле и/или заместителей в метаположении (табл.1, 2). Четко показано, что происходит убыль каждого конкретного конгенера ПХБ (количества указаны в соответствующей концентрации), установлены промежуточные соединения для 11 конгенеров, позволяющие утверждать, что разложение происходит без накопления токсичных продуктов.

Для штамма Rhodococcus ruber ИЭГМ896 описана «острая» деструкция 7 конгенеров ПХБ, содержащих от 1 до 3 заместителей в орто- и/или параположении, и показаны 2 возможных промежуточных продукта. Нет сведений об изменении концентрации начальных конгенеров ПХБ, а также не указано, будут ли проявляться данные свойства штамма в отношении остальных конгенеров ПХБ (их всего 209, содержащих от 1 до 10 заместителей).

Преимущество Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7.

Ниже показана убыль 11 конгенеров ПХБ, содержащих от 1 до 3 заместителей в орто-, мета-, параположениях при деструкции каждого конгенера индивидуально, установлены основные промежуточные соединения, подтверждающие, что разложение происходит без накопления токсичных продуктов. Кроме того, показана убыль 26 конгенеров ПХБ в составе коммерческой смеси «Совол», содержащих от 3 до 6 заместителей. Приведенные результаты демонстрируют более высокий деградативный потенциал штамма Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7.

В прототипе нет сведений о способности штамма Rhodococcus ruber ИЭГМ896 разлагать коммерческие смеси ПХБ, содержащие конгенеры с количеством заместителей больше трех. Способность разлагать отдельные (моно-три)-хлорированные бифенилы не позволяет предполагать, что штамм проявит деградативные свойства в отношении коммерческих смесей ПХБ.

Преимущество Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7.

Показана способность разлагать коммерческую смесь ПХБ марки «Совол». Деструкция составляет 93.8%.

По прототипу нет сведений о способности штамма Rhodococcus ruber ИЭГМ896 разлагать коммерческие смеси ПХБ в почве, а также при повышенном уровне засоления среды.

Преимущество Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7.

Показана способность разлагать коммерческую смесь ПХБ марки «Совол» в почве, а также при содержании хлорида натрия в концентрации 30 г/л. Данные свойства уникальны и ранее описаны не были.

Технический результат от предлагаемого решения - Штамм R. wratislaviensis КТ112-7 осуществляет разложение индивидуальных конгенеров ПХБ: монозамещенных на 96.7-96.9%, ди- и трихлорированных (заместители расположены в одном кольце молекулы в орто-, мета- или параположении) на 69.4-89.0%, дихлорированных с заместителями в каждом кольце в положениях орто- и/или пара- на 78.0-96.4%, трихлорированных (расположение заместителей два в одном кольце и один во втором кольце в орто- или параположении) на 67.0-88.9% за 24 часа и коммерческой смеси ПХБ торговой марки «Совол» на 93.8% за 5 суток.

Предлагаемый штамм Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7, обладающий способностью к деструкции широкого спектра токсичных веществ, выделен из отходов (техногенно-минеральных образований) производства калийно-магниевых солей ОАО «Уралкалий» (г. Березники, Пермский край) методом накопительного культивирования на среде Раймонда состава (г/л): NH4NO3 - 2.0, MgSO4×7Н2O - 0.2, К2НРO4 - 2.0, Na2HPO4 - 3.0, СаСl2×6Н2O - 0.01, Na2CO3 - 0.1, с добавлением ортофталевой кислоты - 1 г/л. Полученный штамм бактерий депонирован 07.05.2013 г. во Всероссийской коллекции микроорганизмов (ВКМ) ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под номером ВКМ Ac-2623D.

Характеристика предлагаемого штамма.

Аэроб. Хемоорганотроф. В состав клеточной стенки входят миколовые кислоты. Клетки грамположительные, неподвижные, не образуют спор, каталазоположительные. При развитии бактериальная культура характеризуется жизненным циклом кокк-палочка-кокк. Штамм растет при температуре 10-45°C с оптимумом роста 28°C.

На богатой агаризованной среде Раймонда (состав среды см. выше), содержащей (г/л): триптон - 5, дрожжевой экстракт - 2.5, NaCl - 10, агар - 1, образует непрозрачные округлые, матовые, светло-розовые колонии. Штамм способен к росту в диапазоне концентрации NaCl от 0 до 10% в среде культивирования. При росте на минеральной среде Раймонда не нуждается в дополнительных факторах роста. Использует в качестве источника углерода нафталин, бифенил, бензол, толуол, фенол, opтoфталевую кислоту, бензойную кислоту.

По нуклеотидным последовательностям гена 16S рРНК наиболее близок к штамму Rhodococcus wratislaviensis NCIMB 13082T. На основании морфофизиологических и молекулярно-генетических признаков штамм идентифицирован как Rhodococcus wratislaviensis. Методом ВОХ-ПЦР [Versalovic J., Schneider М., de Bruijn F.J., Lupski J.R. Genomic fingerprinting of bacteria using repetitive sequence based-polymerase chain reaction // Methods Cell. Mol. Biol. 1994. V.5. P.25-40] и последующей разгонки в агарозном геле получен набор фрагментов ДНК, характерный только для штамма R. wratislaviensis КТ112-7 (=ВКМ Ac-2623D). Изучение генома штамма показало наличие двух плазмид размером около 470 т.п.н. и 500 т.п.н. Штамм содержит гены «верхнего» пути разложения бифенила/ПХБ, а также гены, кодирующие ферменты деструкции бензойной и opтoфталевой кислот, а также хлоркатехола. Анализ показал, что штамм КТ112-7 по морфофизиологическим, биохимическим, генетическим характеристкам имеет существенные отличия от других представителей данного вида.

Преимуществом данного изобретения является способность штамма R. wratislaviensis КТ112-7 эффективно разлагать без накопления токсичных продуктов моно-, ди- и тризамещенные хлорбифенилы (ПХБ1, ПХБ2, ПХБ3, ПХБ8, ПХБ12, ПХБ15, ПХБ17, ПХБ28, ПХБ29, ПХБ30) и коммерческую смесь ПХБ торговой марки «Совол» как в качестве субстрата, так и в качестве загрязняющего вещества в почве. R. wratislaviensis КТ112-7 является галотолерантным штаммом, способным эффективно осуществлять разложение ПХБ (индивидуально и в составе коммерческой смеси) в условиях повышенной солености среды (30 г/л NaCl).

Данные свойства штамма описываются впервые, в связи с чем можно сделать вывод о соответствии предлагаемого изобретения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Ниже приведены примеры осуществления изобретения.

Пример 1. Разложение конгенеров ПХБ штаммом R. wratislaviensis КТ112-7

Деструкцию ПХБ штаммом R. wratislaviensis КТ 112-7 проводили в экспериментах с «отмытыми клетками». Штамм выращивали в жидкой среде Раймонда состава (г/л): NH4NO3 - 2.0, MgSO4×7Н2O - 0.2, К2НРO4 - 2,0, Na2HPO4 - 3.0, СаСl2×6Н2O - 0.01, Na2CO3 - 0.1, содержащей 30 г/л NaCl и бифенил (1 г/л) в качестве источника углерода и энергии при 28°C до ОП600=1.0. Отмытые дважды в среде Раймонда клетки (1 мл, ОП600=2.0) переносили во флаконы с тефлоновыми крышками.

В качестве субстрата вносили ацетоновый раствор хлорбифенилов до конечной концентрации: моноХБ - 94.25 мг/л, диХБ - 22.3 мг/л, триХБ - 12.5 мг/л (табл.1).

Для выделения хлорированных бифенилов культуральную жидкость экстрагировали смесью конц. Н2SO4 - 12.5%-ный додецил-сульфат-натрия (ДДС-Na)-гексан (1:10:25) в течение 60 мин при 30°C, скорость перемешивания 200 об/мин. Экстракты обезвоживали Na2SO4 и анализировали на газовом хроматографе GC6890N ("Agilent Technology", США) с масс-селективным детектором MSD5973N ("Agilent Technology", США).

Количественное содержание выделенных хлорбифенилов оценивали на основании сравнения величины полученных пиков и стандартных соединений.

Продукты деградации хлорбифенилов определяли спектрофотометрически и методом ВЭЖХ.

Для выделения и идентификации продуктов биодеструкции хлорированных бифенилов культуральную жидкость очищали от бактериальных клеток методом центрифугирования (9660 g в течение 3 мин на центрифуге miniSpin ("Eppendorf", Германия)). Для дальнейших анализов использовали надосадочную жидкость.

Образование продуктов метарасщепления ароматического кольца хлорбифенилов-2-гидроксо-6-оксо-(хлорфенил)гекса-2,4-диеновые кислоты (ГОФДК) определяли методом спектроскопии на спектрофотометре UV-Visible BioSpec-mini ("Shimadzu", Япония) при λмакс от 390 нм до 440 нм.

Наличие в надосадочной жидкости хлор- и гидрокси-бензойных кислот (ХБК, (ОН)БК), а также катехолов определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) на хроматографе LC-20A ("Shimadzu", Япония) с колонкой Discovery С18 (150×4.6 мм) ("Supelco", "Sigma-Aldrich", США) и УФ-детектором при 205 нм. Анализ проводили в системе ацетонитрил - 0.1%-ый Н3РO4 (70:30). Идентификацию проводили с помощью сравнения времени удержания на колонке исследуемых и стандартных соединений. Количество образовавшихся продуктов оценивали по величине площади и высоты пиков на хроматограмме относительно данных величин стандартных соединений.

В результате проведенных исследований было установлено, что штамм R. wratislaviensis КТ112-7 эффективно разлагает конгенеры ПХБ, содержащие заместителей в одном из колец молекулы (табл.1). Уровень деструкции составил 69.0-96.9%. При этом эффективность разложения зависела не от положения заместителя (орто-, мета-, пара-), а от количества заместителей во втором кольце молекулы бифенила. Так, уровень деструкции монозамещенных ХБ (ПХБ1, ПХБ2, ПХБ3) составил 96.7-96.9%, а ди- и тризамещенных (ПХБ12, ПХБ29, ПХБ30) - 69.0-89.0%. Также показано, что образующиеся при этом хлорбензойные кислоты не являются конечным продуктом (табл.1), а разлагаются через стадию образования гидрокси-производных ((ОН)БК) до соединений основного обмена.

Анализ деградационной активности по отношению к дихлорированным бифенилам, содержащим по одному заместителю в каждом кольце в орто- и/или параположении (ПХБ4, ПХБ8, ПХБ15), а также по отношению к трихлорированным бифенилам, у которых в одном из колец также располагается один заместитель в орто- или параположении, показал, что штамм КТ112-7 предпочтительнее окисляет ортохлорированное кольцо молекулы ПХБ (табл.1). На эффективность деструкции, в случае если заместители располагаются в обоих кольцах молекулы, влияют оба фактора: и расположение заместителей, и их количество.

Таким образом, эффективность разложения ПХБ штаммом КТ112-7 изменяется в ряду не замещенное > ортозамещенное > паразамещенное кольцо и моноХБ > диХБ ≥ триХБ.

Таблица 1.
Разложение отдельных конгенеров ПХБ штаммом R. wratislaviensis КТ112-7
Промежуточные продукты
ГОФДК
№ ПХБ (по IUPAK) Положение заместителей в молекуле Время, ч ПХБ, мг/л Длина волнымакс,н.м. ОП, о.е. Хлорбензойные кислоты, мкг/л Гидрокси-бензойные кислоты, мкг/л
1 2 3 4 5 6 7 8
ПХБ1 2-(орто-) 0 94.25 - - - -
2 20.6 390 0.268 - -
24 3.0 390 0.247 - -
ПХБ2 3-(мета-) 0 94.25 - - - -
2 26.2 392 0.401 - -
24 2.9 392 0.235 - -
ПХБ3 4-(пара-) 0 94.25 - - - -
2 41.7 416 0.196 18.7 25.9
24 3.1 416 0.291 23.0 19.2
ПХБ12 3,4- 0 22.3 - - - -
2 7.68 390 0.372 5.51 0.48
24 5.57 390 0.235 0.53 0.19
Продолжение табл.1
1 2 3 4 5 6 7 8
ПХБ29 2,4,5- 0 12.5 - - - -
2 - 394 0.652 7.9 -
24 1.37 394 0.292 4.8 -
ПХБ30 2,4,6- 0 12.5 - - -
2 - 449 0.249 - -
24 3.87 449 0.297 - -
ПХБ4 2,2′- 0 22.3 - - - -
2 1.42 394 0.962 86.8 -
24 0.81 394 0.761 12.3 -
ПХБ8 2,4′- 0 22.3 - - - -
2 15.4 390 0.246 1.2 2.5
24 2.2 390 0.245 0.7 0.6
ПХБ15 4,4′- 0 22.3 - - - -
2 11.6 428 0.274 3.2 0.5
24 4.9 428 0.508 0.3 0.3
ПХБ17 2,4,2′- 0 12.5 - - - -
2 6.25 449 0.277 3.8 -
24 1.38 449 0.209 2.4 -
ПХБ28 2,4,4′- 0 12.5 - - - -
2 - 392 0.067 0.2 4.7
24 4.12 392 0.271 0.1 2.7
«- » - вещества не определены

Пример 2. Разложение штаммом Rhodococcus wratislaviensis КТ112-7 коммерческой смеси ПХБ торговой марки «Совол»

Деструкцию смеси ПХБ «Совол» штаммом R. wratislaviensis КТ 112-7 проводили в экспериментах с «отмытыми клетками» по схеме, описанной в примере 1.

В эксперименте использовали коммерческую смесь ПХБ марки «Совол» (ГСО №7821-2000), основной состав которой представлен тетра- (22%), пента- (53%) и гекса- (23%) замещенными конгенерами. «Совол» вносили в виде ацетонового раствора до конечной концентрации 0.8 г/л.

Экстракцию и анализ ПХБ, анализ возможных метаболитов проводили как описано в примере 1.

В результате проведенных исследований установлено, что штамм R. wratislaviensis КТ 112-7 эффективно разлагает коммерческую смесь ПХБ марки «Совол». За 5 суток концентрация «Совола» снизилась на 93.8%, при этом отмечена деградационная активность ко всем представленным в смеси конгенерам (таблица 2).

Таблица 2.
Разложение смеси ПХБ «Совол» штаммом R. wratislaviensis КТ 112-7
№ пика № ПХБ по классификации IUPAK Площадь пика % деструкции
1 сут. 3 сут. 5 сут.
1 28 23521 8740 3812 83,8
2 52 8142 2391 1019 87,5
3 49 2476 0 0 100,0
4 44 10954 3706 1553 85,8
5 41\64 6132 2205 865 85,9
6 74 7139 2902 1087 84,8
7 70 21149 8209 3371 84,1
8 66\95 34511 12668 5279 84,7
9 91 5986 2475 1019 83,0
10 60\56 8942 2980 1137 87,3
11 84\101 45555 15421 6321 86,1
12 99 29093 9531 3866 86,7
13 97 12424 4046 1681 86,5
14 87 12685 6934 2837 77,6
15 85 45049 4267 1729 96,2
16 110 6324 15500 6247 1,2
17 82 3152 2427 423 86,6
18 119 2229 0 0 100,0
19 118 33262 0 0 100,0
20 153 1904 1773 641 66,3
21 105 17875 5613 2205 87,7
22 138 25900 9267 3347 87,1
23 128 7725 0 0 100,0
24 156 2487 1060 100,0
25 180 29789 9700 3734 87,5
26 170 6472 2090 674 89,6
Общий % деструкции смеси «Совол» 51,3 84,2 93,8

При этом, как и в случае разложения индивидуальных конгенеров, происходит снижение концентрации образовавшихся метаболитов (табл.3).

Таблица 3.
Разложение смеси ПХБ «Совол» штаммом R. wratislaviensis КТ112-7 при разных концентрациях хлорида натрия в среде
NaCl, г/л Время деструкции, сут. Совол, г/л Промежуточные соединения
ГОФДК, ОП452 ХБК, мг/л (ОН)БК, мг/л
0 0 0.8 - - -
1 0.39 0.145 25.1 46.2
3 0.13 0.100 21.8 35.4
5 0.05 0.091 20.4 31.9
30 0 0.8 - - -
1 0.41 0.288 31.5 45.4
3 0.12 0.259 28.4 25.4
5 0.03 0.180 12.5 11.1
«-» - вещества не определены

Динамика изменения концентрации метаболитов свидетельствует об их утилизации штаммом R. wratislaviensis КТ112-7. Разложение метаболитов происходит до соединений основного обмена клетки, при этом повышение осмолярности среды не оказывает негативного влияния на данный процесс.

Пример 3. Разложение ПХБ в почве штаммом R. wratislaviensis КТ112-7

Для разложения ПХБ, содержащихся в почве, штамм R. wratislaviensis КТ112-7 вносили в почву, содержащую ПХБ (марка «Совол»), отобранную с промышленной площадки г. Чапаевск Самарской области из расчета 106 и 107 клеток на грамм. Бактерии выращивали на среде Раймонда состава (г/л): NH4NO3 - 2,0, MgSO4×7Н2O - 0,2, К2НРO4 - 2,0, Na2HPO4 - 3,0, СаСl2×6Н2O - 0,01, Na2CO3 - 0,1, бифенил - 1,0. Через 3 месяца оценивали содержание ПХБ в почве с использованием хромато-масс-спектрометра Agilent 6890N (Agilent Technology, США).

Через 3 месяца обработка загрязненной почвы бактериями R. wratislaviensis КТ112-7 привела к значительной убыли ПХБ (табл.4). Снижение концентрации ПХБ в загрязненной почве с внесенными бактериями относительно почвы без обработки составило в варианте с внесением 106 кл/г почвы в 4,2 раза, а в варианте с внесением 107 кл/г почвы в 4,1 раза.

Таблица 4.
Концентрация смеси ПХБ «Совол» в почве после ее обработки бактериальным штаммом R. wratislaviensis КТ112-7
Соединение Количество бактерий штамма КТ112-7, внесенных в почву, количество кл/г почвы
0 106 107
смесь ПХБ, мг/кг 0,997 0,235 0,241

Таким образом, штамм R. wratislaviensis КТ112-7 эффективно разлагает моно-, ди- и трихлорированные конгенеры орто-, мета- и паразамещенных бифенилов, а также промышленную смесь ПХБ марки «Совол» как в виде единственного источника углерода, так и в виде загрязнителя в почве.

Штамм Rhodococcus wratislaviensis, депонированный во Всероссийской коллекции микроорганизмов ИБФМ им. Г.К. Скрябина РАН под регистрационным номером ВКМ Ac-2623D - активный деструктор полихлорированных бифенилов.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и касается фармацевтической композиции. Представленная композиция содержит рекомбинантный лизоцим бактериофага FMV Р.

Изобретение относится к микробиологии. Питательная среда содержит лимонную кислоту, янтарную кислоту, глицин, фосфорнокислый калий двузамещенный, сернокислый магний, сернокислый цинк, сернокислое железо, хлористый натрий, глюкозу, глицерин и дистиллированную воду в заданном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Lactobacillus pentosus DSM 21980, продуцирующий бактериоцин.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения кормового пробиотического препарата для сельскохозяйственных животных. Способ предусматривает подготовку фитоносителя путем смешивания содержащего клетчатку растительного сырья, водопроводной воды, автолизата пекарских дрожжей, калия фосфорнокислого двузамещенного, магния сернокислого и мелассы в заданном соотношении компонентов.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ получения персонифицированного аутопробиотического продукта в виде молочнокислой закваски на основе аутоштаммов лактобактерий и способ лечения синдрома раздраженной кишки, сопровождающегося дисбиозом кишечника, с его использованием.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Bifidobacterium longum NCIMB 41676, обладающий иммуномодулирующим действием.

Группа изобретений относится к биотехнологии и сельскому хозяйству. Предложены соединения A-87774, представленные соединениями A-87774-1, A-87774-2, A-87774-3 или их солью, способ получения соединений A-87774, штамм Streptomyces sp.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для получения биопрепаратов. Штамм Serratia ficaria TP депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов (ВКПМ) под регистрационным номером ВКПМ В-11403 и обладает выраженными антагонистическими, фитостимулирующими и фунгицидными свойствами по отношению к фитопатогенным грибам.

Способ получения питательной основы микробиологических сред относится к биотехнологии. Способ предназначен для получения основы для приготовления микробиологических питательных сред из сырья морского генеза и может быть использован в медицинской и технической микробиологии, в научно-исследовательской и практической работе для выделения и культивирования микроорганизмов. В способе получают щелочной гидролизат из моллюсков и соединяют с кислотным гидролизатом из рыбного сырья в соотношении 1:3-3:1, чтобы количество аминного азота была в пределах 600-900 мг %.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к бескапсульному природно-ослабленному штамму Bacillus anthracis. Штамм В.
Изобретение относится к пищевой микробиологии, в частности к получению питательной среды для определения в кондитерских изделиях, микроорганизмов, вырабатывающих липазы. Способ предусматривает подбор и предварительную подготовку компонентов путем стерилизации с последующим смешиванием компонентов в равных количествах. Первым компонентом питательной среды является питательная основа, содержащая растворенные в воде пептон, хлорид натрия, хлорид кальция, агар и краситель спиртовой синий в заданных соотношениях. Вторым компонентом питательной среды является жировая эмульсия, стерилизуемая при заданных параметрах , состоящая из заменителя какао-масла Твина 80 и воды, смешанных между собой в заданных количествах. При этом питательная основа и жировая эмульсия смешиваются после стерилизации непосредственно перед использованием в равных количествах с добавлением красителя спиртового синего в заданном количестве. Изобретение позволяет повысить точность выявления микроорганизмов, вырабатывающих липазы.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ получения бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum с повышенным уровнем синтеза L-лизина, включающий высев культуры бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum, способной продуцировать L-лизин, на среду, содержащую фузидиновую кислоту, и отбор среди выросших колоний таких, которые обладают повышенным уровнем синтеза L-лизина. Изобретение относится также к способу микробиологического синтеза L-лизина путем культивирования бактерии, полученной указанным способом. Изобретение позволяет получать L-лизин с высокой степенью эффективности. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.

Группа изобретений относится к штамму Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690 и к молочному пищевому продукту, содержащему указанный штамм. Предложенный штамм обладает специфичными в отношении маннозы адгезионными свойствами. Штамм обладает противомикробными свойствами в отношении, например, Escherichia coli, Salmonella enteritidis и Lysteria monocytogenes. Штамм обладает иммуномодулирующими свойствами, в частности обладает способностью ингибировать воспалительную реакцию эпителиальных клеток НТ-29. 2 н.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии. Питательная среда содержит твердую и жидкую фазы. Твердая фаза питательной среды содержит гидролизат панкреатический рыбной муки, стимулятор роста гемофильных микроорганизмов, натрий хлористый, экстракт дрожжевой, глюкозу, агар, теллурит калия - 2% раствор и воду дистиллированную при заданном соотношении компонентов. Жидкая фаза содержит гидролизат панкреатический рыбной муки, пептон ферментативный, экстракт дрожжевой, глюкозу, агар, натрий хлористый, теллурит калия - 2% раствор, сыворотку крови крупного рогатого скота и воду дистиллированную в заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить ингибирующие свойства питательной среды относительно микробов-ассоциантов - стафилококков. 4 табл., 3 пр.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства пробиотических препаратов. Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий включает предварительное приготовление кислотного гидролизата крови убойных животных, дрожжевого аутолизата и молочной сыворотки известными способами. Кислотный гидролизат крови убойных животных раскисляют до рН 6,7-6,9 и добавляют к нему дрожжевой аутолизат, молочную сыворотку, глюкозу и отвар капусты в заданном соотношении компонентов. Затем смесь нагревают и кипятят в течение 5-7 минут. Определяют pH питательной среды и доводят до значения 6,7-6,9. Полученную питательную среду фильтруют и фасуют во флаконы с последующей стерилизацией автоклавированием при 0,5 атм в течение 25-30 мин. Изобретение позволяет повысить выход биомассы и увеличить интенсивность ее роста. 3 табл., 3 пр.

Заявленная группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена группа изобретений - псевдомонада вида Pseudomonas azotoformans, штамма F30A, депонированного под регистрационным номером DSM 22077, надосадочная жидкость, ферментативный продукт и сельскохозяйственная композиция на основе штамма Pseudomonas azotoformans F30A, применение штамма Pseudomonas azotoformans F30A или его надосадочной жидкости для увеличения прорастания семян, всхожести растений и/или роста растений, способ увеличения прорастания семян и способ получения сельскохозяйственной композиции. Способ получения сельскохозяйственной композиции предусматривает смешивание штамма Pseudomonas azotoformans F30A или его надосадочной жидкости с одним или несколькими жидкими и/или твердыми носителями, а также с одними или несколькими микроорганизмами, стимулирующими рост растений, микроорганизмами биологического контроля, органическими удобрениями и/или агрохимикатами в эффективном количестве. Способ увеличения прорастания семян, всхожести растений и/или роста растений предусматривает внесение ферментативного продукта или сельскохозяйственной композиции на семя, растение и/или окружающую их среду в эффективном количестве. Группа изобретений позволяет повысить прорастание семян, приживаемость сеянцев, всхожесть растений и/или урожай сельскохозяйственных культур. 8 н. и 9 з.п. ф-лы, 21 ил., 7 табл., 18 пр.

Предложены иммуногенная композиция для применения при лечении или профилактике заболеваний, связанных с Clostridium difficile, способ получения такой композиции, путем смешивания входящих в ее состав ингредиентов и способ индуцирования иммунного ответа к C. Difficile, включающий введение такой композиции индивидууму. Представленная композиция включает токсин или анатоксин Clostridium difficile и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, содержащих а) буфер, выбранный из группы цитрата и фосфата, в концентрации от 10-30, 15-25 или 20 мМ и б) сахар или сахарный спирт, выбранный из группы, состоящей из сорбита, трегалозы и сахарозы в концентрации 4-20%. Входящие в состав композиции эксципиенты увеличивают устойчивость и/или уменьшают агрегацию токсинов, что позволяет получать композиции более устойчивые для хранения с сохранением их конформационной целостности. 3 н. и 38 з.п. ф-лы, 16 ил., 13 табл.
Изобретение относится к биотехнологии и касается новых штаммов Bacillus thuringiensis В-1272 и Bacillus thuringiensis В-1273, депонированных в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор». Предложенные штаммы обладают способностью нейтрализовать инфекционную активность вируса гриппа человека A/H3N2. Индекс нейтрализации инфекционной активности вируса A/H3N2 при использовании препаратов на основе культуральной жидкости любого из предложенных штаммов составляет 0,5-3,2 lg. 2 н.п. ф-лы, 1 табл., 8 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены пробиотические штаммы Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4036, Lactobacillus paracasei CNCM I-4034 и Bifidobacterium breve CNCM I-4035, выделенные из фекалий детей, вскармливаемых исключительно материнским молоком. Указанные штаммы как по отдельности, так и в смеси используют в составе пробиотической композиции. Предложенные штаммы, благодаря своим свойствам, оказывают положительное воздействие на здоровье тех, кто их принимает. 5 н. и 31 з.п. ф-лы, 14 ил., 4 табл., 12 пр.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложены штамм бактерий Serratia plymuthica В-1288, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1297, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1296 и штамм бактерий Serratia plymuthica В-1285. Указанные штаммы депонированы в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор»». Штаммы обладают противовирусной активностью в отношении вируса гриппа типа А. При использовании препаратов на основе предложенных штаммов индекс нейтрализации вируса гриппа типа А составляет 2,5-6,5 lg при исходной концентрации вируса 102.5-6.5 lg ТЦД50/мл. 4 н.п. ф-лы, 5 табл., 13 пр.
Наверх