Питательная среда для культивирования лактобактерий

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования лактобактерий содержит отвар капусты, глюкозу, кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы лактобактерий. 1 табл., 7 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии, а именно к получению питательных сред для культивирования лактобактерий, и может быть использовано для производства пробиотических препаратов.

Известна питательная среда МРС, которая является классической для культивирования лактобактерий (Квасников Е.И., Нестеренко О.А. Молочнокислые бактерии и пути их использования. - М.: Наука, 1975. - С.64). Она включает, масс.%:

Дрожжевой экстракт 0,5
Мясной экстракт 1,0
Пептон 1,0
Глюкоза 2,0
Лимоннокислый аммоний 0,2
Уксуснокислый натрий 0,5
Твин-80 0,1
Фосфорнокислый калий однозамещенный 0,2
Сернокислый магний 0,02
Сернокислый марганец 0,005
Вода остальное

Среда обладает основными ростовыми свойствами, необходимыми для лактобактерий, но недостатком данной среды является труднодоступность и многочисленность компонентов, кроме того, она не позволяет получить достаточно высокую (свыше 109 КОЕ/мл) плотность роста лактобактерий.

Известна питательная среда для выделения лактобактерий (заявка №2012154888/10), включающая капустный отвар, глюкозу, агар, молочную сыворотку, дрожжевой аутолизат и уксусную кислоту при следующем соотношении компонентов, масс.%:

Молочная сыворотка 9-10,0
Дрожжевой аутолизат 9-10,0
Глюкоза 1,9-2,0
Уксусная кислота 70% 0,14-0,16
Агар 1,8-2,0
Капустный отвар остальное

Недостатком данной среды является то обстоятельство, что она предназначена только для выделения лактобактерий из различного материала, однако она не позволяет получить значительную биомассу бактерий, а следовательно, не может быть использована для производства пробиотических препаратов.

Описана питательная среда, которая является наиболее близкой по сути предлагаемому изобретению и поэтому взята авторами за прототип, она включает отвар капусты - 500,0 мл, куда добавлены натрий фософорнокислый - 2,0 г, магний сернокислый - 1,0 г, пептон - 5,0 г, глюкоза - 10,0 г, лимоннокислый натрий - 10,0 г. При этом отвар капусты готовят следующим образом: 500,0 г свежей капусты кипятят 30 мин в 1 л водопроводной воды. В полученный отвар добавляют ингредиенты и стерилизуют (Дзержинская И.С. Питательные среды для выделения и культивирования микроорганизмов: Учебное пособие. - Астрахань: Издательство АГТУ, - 2008. - 236 с.).

Техническим результатом заявляемого изобретения является создание доступной, экономичной и легко воспроизводимой в любой микробиологической лаборатории питательной среды для культивирования лактобактерий.

Технический результат достигается тем, что получена питательная среда для культивирования лактобактерий, включающая отвар капусты, глюкозу и дополнительные источники питания, отличается тем, что в качестве дополнительных источников питания содержит кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при следующем соотношении компонентов, масс.%:

Кислотный гидролизат крови
убойных животных 9,0-10,0
Дрожжевой аутолизат 9,0-10,0
Молочная сыворотка 9,0-10,0
Глюкоза 1,9-2,0
Отвар капусты остальное

Позитивное влияние дрожжевого аутолизата и сывороточных белков молока на рост лактобактерий и буферные свойства среды известно и широко используется в микробиологии и биотехнологии. Обоснованием ввода в питательную среду для культивирования лактобактерий кислотного гидролизата крови убойных животных является его химический состав, который включает заменимые и незаменимые аминокислоты и минералы в органической форме. В аминокислотный состав кислотного гидролизата крови входят (г/л): аспарагиновая аминокислота - 1,55-2,61, глутаминовая аминокислота - 2,46-3,43, серин - 1,24-1,62, глицин - 1,0-1,33, гистидин - 0,81-1,42, треонин - 2,10-3,38, аланин - 2,48-3,09, пролин - 0,57-0,69, аргинин - 1,74-2,05, тирозин - 0,16-0,68, метионин - 0,11-0,27, валин - 1,08-1,58, изолейцин - 0,77-1,20, лейцин - 1,77-2,48, фенилаланин - 1,55-1,94, лизин - 2,29-2,78. В минеральный состав кислотного гидролизата крови входят (мг/л): кальций - 500-700, магний - 130-200, железо - 80-125, цинк - 27-40, марганец - 0,6-1,7, медь - 0,53-0,8, кобальт - 0,10-0,17, селен - 0,008-0,01, йод - 0,0006-0,001. Использование кислотного гидролизата крови в составе питательной среды для лактобактерий исключает дополнительный ввод различных аминокислот и солей микро- и макроэлементов.

Сочетание в предлагаемой питательной среде компонентов растительного и животного происхождения за счет наличия всех необходимых питательных и стимулирующих ингредиентов обеспечивает высокую скорость роста лактобактерий и значительное накопление их биомассы в течение 24 ч. Предлагаемую питательную среду готовят следующим образом. Кислотный гидролизат крови предварительно раскисляют с помощью 10% раствора гидроксида натрия до pH 6,7-6,9, после чего добавляют в него дрожжевой аутолизат, молочную сыворотку, глюкозу и доводят объем до 100% отваром капусты. Полученную смесь нагревают до кипения, кипятят 5-7 минут, при необходимости доводят pH до 6,7-6,9, фильтруют через бумажный фильтр, разливают по флаконам и стерилизуют автоклавированием, получая питательную среду для культивирования лактобактерий со следующим соотношением компонентов, масс.%:

Кислотный гидролизат крови
убойных животных 9,0-10,0
Дрожжевой аутолизат 9,0-10,0
Молочная сыворотка 9,0-10,0
Глюкоза 1,9-2,0
Отвар капусты остальное

По сравнению с прототипом предлагаемая среда обогащена гидролизатом крови, дрожжевым аутолизатом и молочной сывороткой, что значительно улучшает ее ростовые свойства и обеспечивает высокую скорость роста лактобактерий и накопление их биомассы.

Ниже приведены примеры обоснования соотношения компонентов питательной среды для культивирования лактобактерий и ее сравнительную эффективность.

Пример 1. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 7,0, дрожжевой аутолизат 7,0, молочная сыворотка 7,0, глюкоза 1,7, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 3,1×109 КОЕ/мл.

Пример 2. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 8,0, дрожжевой аутолизат 8,0, молочная сыворотка 8,0, глюкоза 1,8, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 9,6×09 КОЕ/мл.

Пример 3. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 9,0, дрожжевой аутолизат 9,0, молочная сыворотка 9,0, глюкоза 1,9, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 5,5×1010 КОЕ/мл.

Пример 4. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 10,0, дрожжевой аутолизат 10,0, молочная сыворотка 10,0, глюкоза 2,0, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 9,1×1010 КОЕ/мл.

Пример 5. В качестве тест-объекта использовали Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 11,0, дрожжевой аутолизат 11,0, молочная сыворотка 11,0, глюкоза 2,1, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 6,4×1010 КОЕ/мл.

Пример 6. В качестве тест-объекта использовали изолят Lactobacillus plantarum, выделенный из кишечного тракта теленка. Данный изолят культивировали на питательной среде следующего состава, масс %: кислотный гидролизат крови убойных животных 12,0, дрожжевой аутолизат 12,0, молочная сыворотка 12,0, глюкоза 2,2, отвар капусты - остальное. Посевная доза составляла 1000 клеток. Через 24 ч культивирования при 37°C концентрация бактерии составила 7,9×1010 КОЕ/мл.

Таким образом, результаты исследований позволили выявить оптимальные варианты соотношения компонентов питательной среды, обеспечивающие высокий выход биомассы лактобактерий при минимальных затратах - это среда, приготовленная по примерам 3 и 4.

Пример 7. Готовят питательную среду по примеру 3 и 4, а также среду-прототип, в которые вносят Lactobacillus plantarum в количестве 1000 клеток. Через 6, 12 и 24 ч из культуральных сред отбирают пробы для определения численности лактобактерий и pH среды. Результаты опыта представлены в таблице. Из данной таблицы видно, что заявляемая среда, приготовленная по примерам 3 и 4, превосходит по ростовым свойствам прототип, т.к. она спустя 12-24 ч содержала в 100-1000 раз больше клеток лактобактерий, чем прототип. Кроме того, заявляемая среда обладает большей буферностью, чем прототип, поскольку в ней при значительно большей численности лактобактерий значение pH только на 0,4 единицы было ниже. Этот показатель авторы также считают позитивным, т.к. резкое повышение кислотности среды приводит к быстрой гибели лактобактерий.

Таким образом, предлагаемая питательная среда обеспечивает интенсивный рост лактобактерий и накопление биомассы, а следовательно, может быть использована в исследовательских целях и для создания пробиотических препаратов.

Питательная среда для культивирования лактобактерий, включающая отвар капусты, глюкозу и дополнительные источники питания, отличающаяся тем, что в качестве дополнительных источников питания содержит кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при следующем соотношении компонентов, масс.%:

Кислотный гидролизат крови
убойных животных 9,0-10,0
Дрожжевой аутолизат 9,0-10,0
Молочная сыворотка 9,0-10,0
Глюкоза 1,9-2,0
Отвар капусты остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Предложены штамм бактерий Serratia plymuthica В-1288, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1297, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1296 и штамм бактерий Serratia plymuthica В-1285.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены пробиотические штаммы Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4036, Lactobacillus paracasei CNCM I-4034 и Bifidobacterium breve CNCM I-4035, выделенные из фекалий детей, вскармливаемых исключительно материнским молоком.
Изобретение относится к биотехнологии и касается новых штаммов Bacillus thuringiensis В-1272 и Bacillus thuringiensis В-1273, депонированных в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор».

Заявленная группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена группа изобретений - псевдомонада вида Pseudomonas azotoformans, штамма F30A, депонированного под регистрационным номером DSM 22077, надосадочная жидкость, ферментативный продукт и сельскохозяйственная композиция на основе штамма Pseudomonas azotoformans F30A, применение штамма Pseudomonas azotoformans F30A или его надосадочной жидкости для увеличения прорастания семян, всхожести растений и/или роста растений, способ увеличения прорастания семян и способ получения сельскохозяйственной композиции.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства пробиотических препаратов. Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий включает предварительное приготовление кислотного гидролизата крови убойных животных, дрожжевого аутолизата и молочной сыворотки известными способами.

Изобретение относится к области микробиологии, в частности к методам определения чувствительности штаммов Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) к антибиотикам.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения рекомбинантного белка интерфероноподобного фактора III типа (ИПФ III) штамма-продуцента E.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен штамм микромицета Aspergillus foetidus 379-К-5-1 - продуцент комплекса пектиназ, β-глюканазы, ксиланазы, целлюлазы, хитиназы, маннаназы и протеазы для деструкции полисахаридов растительного и микробного сырья.
Изобретение касается набора олигонуклеотидных праймеров и зондов для идентификации и субтипирования ДНК бактерии Pasteurella multocida серотипов А, B, D, E, F методом ПЦР в режиме реального времени.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложены штамм бактерий Serratia plymuthica В-1288, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1297, штамм бактерий Serratia plymuthica В-1296 и штамм бактерий Serratia plymuthica В-1285.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены пробиотические штаммы Lactobacillus rhamnosus CNCM I-4036, Lactobacillus paracasei CNCM I-4034 и Bifidobacterium breve CNCM I-4035, выделенные из фекалий детей, вскармливаемых исключительно материнским молоком.
Изобретение относится к биотехнологии и касается новых штаммов Bacillus thuringiensis В-1272 и Bacillus thuringiensis В-1273, депонированных в коллекции бактерий, бактериофагов и грибов Федерального бюджетного учреждения науки «Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор».

Предложены иммуногенная композиция для применения при лечении или профилактике заболеваний, связанных с Clostridium difficile, способ получения такой композиции, путем смешивания входящих в ее состав ингредиентов и способ индуцирования иммунного ответа к C.

Заявленная группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена группа изобретений - псевдомонада вида Pseudomonas azotoformans, штамма F30A, депонированного под регистрационным номером DSM 22077, надосадочная жидкость, ферментативный продукт и сельскохозяйственная композиция на основе штамма Pseudomonas azotoformans F30A, применение штамма Pseudomonas azotoformans F30A или его надосадочной жидкости для увеличения прорастания семян, всхожести растений и/или роста растений, способ увеличения прорастания семян и способ получения сельскохозяйственной композиции.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для производства пробиотических препаратов. Способ приготовления питательной среды для культивирования лактобактерий включает предварительное приготовление кислотного гидролизата крови убойных животных, дрожжевого аутолизата и молочной сыворотки известными способами.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской микробиологии, и может быть использовано для культивирования дифтерийных микробов в искусственных питательных средах при бактериологической диагностике дифтерии.

Группа изобретений относится к штамму Lactobacillus rhamnosus CNCM I-3690 и к молочному пищевому продукту, содержащему указанный штамм. Предложенный штамм обладает специфичными в отношении маннозы адгезионными свойствами.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ получения бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum с повышенным уровнем синтеза L-лизина, включающий высев культуры бактерии Corynebacterium glutamicum или Brevibacterium flavum, способной продуцировать L-лизин, на среду, содержащую фузидиновую кислоту, и отбор среди выросших колоний таких, которые обладают повышенным уровнем синтеза L-лизина.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления и генотипирования бактерии Pasteurella multocida. Предложенный способ включает проведение ПЦР с электрофоретической детекцией результатов, перенос продукта амплификации на гель и оценку проведения реакции. При этом исследование каждой пробы проводят в двух реакциях с помощью праймеров. В первой реакции выявляют бактерию Pasteurella multocida и генотипируют серогруппы А и D, во второй реакции генотипируют серогруппы В, Ε и F. Способ позволяет выявлять и генотипировать штаммы и изоляты бактерии Pasteurella multocida пяти серогрупп - A, B, D, E, и F в чистых или смешанных культурах, а также непосредственно в пробах биологического материала от животных. Способ может быть использован в ветеринарной микробиологии для диагностики пастереллеза сельскохозяйственных животных. 4 табл., 4 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Питательная среда для культивирования лактобактерий содержит отвар капусты, глюкозу, кислотный гидролизат крови убойных животных, дрожжевой аутолизат и молочную сыворотку при заданном соотношении компонентов. Изобретение позволяет повысить выход биомассы лактобактерий. 1 табл., 7 пр.

Наверх