Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum



Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum
Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum
Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum
Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых mycoplasma hominis и ureaplasma urealyticum

 


Владельцы патента RU 2553548:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) (RU)

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Изобретение представляет собой набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых урогенитальными микоплазмами Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, содержащий лиофилизированную транспортную среду для хранения исследуемых проб, лиофилизированную питательную среду для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum и стрипы для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, для полуколичественного определения титра возбудителя и для определения чувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к антибиотикам, который содержит три вида стрипов, первый из которых предназначен для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum и для полуколичественного определения их титра, причем часть лунок первого вида стрипов, которые предназначены для выявления и определения титра Mycoplasma hominis, содержат аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, другая часть лунок этого стрипа, которые предназначены для выявления и определения титра Ureaplasma urealyticum, содержат мочевину и линкомицин, второй вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, содержит специфические реагенты для выявления Mycoplasma hominis - аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, мидекамицин, офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин, клиндамицин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации, третий вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, содержит специфические реагенты для выявления Ureaplasma urealyticum - мочевина и линкомицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин, рокситромицин, азитромицин, офлоксацин и спарфлоксацин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации. Использование набора позволяет одновременно выявлять Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, оценивать их титр и определять чувствительность к различному спектру антибиотиков, причем для Mycoplasma hominis и для Ureaplasma urealyticum используют разные антибиотики. 2 ил., 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии, может быть использовано для культивирования и идентификации урогенитальных микоплазм, в частности Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, для лабораторной диагностики урогенитальных микоплазмозов путем выявления микоплазм в клиническом материале, для полуколичественного определения титра возбудителя, а также для определения их антибиотикочувствительности.

В последние годы отмечается рост урогенитальных инфекций. Наряду с возбудителями «классических» инфекций, передаваемых половым путем (ИППП), таких как гонорея, сифилис, трихомониаз, урогенитальный хламидиоз, возрастает удельный вес заболеваний, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, в том числе урогенитальными микоплазмами.

Согласно данным современных исследователей, более чем у 40% больных с воспалительными заболеваниями органов малого таза выявляются урогенитальные микоплазмы, при этом наибольшее клиническое значение имеют три вида микоплазм: Mycoplasma genitalium, Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum.

Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum могут являться причиной ряда заболеваний урогенитального тракта: негонококковых уретритов, неспецифических вагинитов, простатитов и эпидермитов, развитием цервицитов и кольпитов, в том числе эндометритов и сальпингитов. Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum могут являться этиологическим фактором невынашивания беременности, преждевременных родов, нарушения репродуктивной функции, случаев мертворождения. Частота колонизации урогенитальными микоплазмами нижних отделов мочеполовой системы у детей, по данным различных исследований, варьирует от 2,9 до 22% для Mycoplasma hominis, от 8,3 до 30,4% для Ureaplasma urealyticum. Таким образом, очевидна необходимость специального обследования всех беременных женщин для выявления случаев урогенитального микоплазмоза и последующей санации.

Для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum пользуются различными лабораторными диагностическими методами. Наиболее надежным и простым является культуральный метод диагностики урогенитальных инфекций, в том числе для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum на селективной жидкой питательной среде. Использование этого метода позволяет осуществлять выявление и идентификацию Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, а также проводить полуколичественную оценку титра. Последнее особенно важно для клинической оценки этиологии воспалительных процессов, так как для микоплазменной инфекции этиологическим значением считается концентрация Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в исследуемом материале не менее 10000 КОЕ/мл. Культуральным методом можно определять чувствительность выделенных культур к антибиотикам, что выгодно отличает культуральный метод от других методов диагностики урогенитальных микоплазмозов (полимеразной цепной реакции (ПЦР) и реакции иммунофлюоресценции (РИФ)).

Для реализации культурального метода диагностики Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum используются различные наборы реагентов.

Наиболее близким к заявляемому набору реагентов является набор реагентов Mycoplasma IST 2 для диагностики урогенитального микоплазмоза: культивирования, идентификации, полуколичественной оценки титра, определения чувствительности к антибиотикам возбудителей урогенитального микоплазмоза Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis (bioMerieux SA, France, Ref. 42 505, wwwhttp://www.biomerieux.com), состоящий из транспортной лиофилизированной среды Mycoplasma R1 для подготовки исследуемых проб, лиофилизированного мочевино-аргининового бульона Mycoplasma R2 и стрипов с сорбированными в них субстратами (феноловый красный - контроль, феноловый красный и линкомицин - тест на Ureaplasma spp., эритромицин - тест на Mycoplasma hominis) и антибиотиками для определения чувствительности Ureaplasma spp. и Mycoplasma hominis (доксициклин, джозамицин, офлоксацин, эритромицин, тетрациклин, ципрофлоксацин, азитромицин, кларитромицин - в двух концентрациях, пристинамицин - в одной концентрации). Однако данный набор реагентов не позволяет одновременно определить антибиотикочувствительность к каждому возбудителю (Mycoplasma hominis, либо Ureaplasma urealyticum) в случае микс-инфекции.

Изобретение направлено на создание набора реагентов для лабораторной диагностики урогенитальных микоплазмозов, вызываемых Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum, при этом обеспечен следующий технический результат - одновременное выявление Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, оценка их титра и определение чувствительности к различному спектру антибиотиков.

Набор содержит лиофилизированную транспортную среду для хранения исследуемых проб, лиофилизированную питательную среду для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum и стрипы для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, для полуколичественного определения титра возбудителя и для определения чувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к антибиотикам.

Отличительной особенностью набора является то, что он содержит три вида стрипов. Первый вид стрипов предназначен для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, а также для полуколичественного определения их титра. Часть лунок первого вида стрипов, которые предназначены для выявления и определения титра Mycoplasma hominis, содержат аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, другая часть лунок этого стрипа, которые предназначены для выявления и определения титра Ureaplasma urealyticum, содержат мочевину и линкомицин. Второй вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, содержит специфические реагенты для выявления Mycoplasma hominis - аргинин, бриллиантовый синий и кларитромиц, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, мидекамицин, офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин, клиндамицин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации. Третий вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, содержит специфические реагенты для выявления Ureaplasma urealyticum - мочевина и линкомицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин, рокситромицин, азитромицин, офлоксацин и спарфлоксацин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации.

Сущность изобретения поясняется чертежами, где на фиг.1 представлена схема расположения сред, реагентов и проб в лунках стрипов, на фиг.2 представлен способ анализа инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum.

Изобретение реализуется следующим образом.

Пример 1. Приготовление лиофилизированной питательной среды для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum.

Селективная универсальная питательная среда для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum содержит питательную основу, стимуляторы роста, селективные компоненты, лошадиную сыворотку, рН-индикатор и дистиллированную воду. В качестве питательной основы служит пептон ферментативный, плацентарный бульон, PPLO бульон и натрий хлористый, в качестве стимуляторов роста - дрожжевой экстракт, и в качестве селективных добавок - антибиотики и противогрибковый препарат.

Плацентарный бульон готовят из свежей плаценты, промытой водопроводной водой и тщательно измельченной. Плаценту помещают в кастрюлю, заливают двойным количеством дистиллированной воды и кипятят в течение 30 мин. Полученный бульон осветляют и стерилизуют автоклавированием.

Дрожжевой экстракт готовят из свежих хлебопекарных дрожжей (ООО «Дю-Ле», Яст Болагет, Швеция, кат. № 00462, 2014 г). Дрожжи помещают в кастрюлю в кипящую дистиллированную воду из расчета 250 г/л, кипятят в течение 40 мин. Полученный экстракт осветляют и стерилизуют автоклавированием.

Содержание питательной среды имеет следующее соотношение ингредиентов (оптимальное), г/л:

1. Плацентарный бульон 160,00 мл
2. Пептон ферментативный (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия, RM 1892, 2014 г.) 3,20
3. Натрий хлористый (хч, Нева Реактив, ГОСТ 4233-77, 2014 г.) 1,60
4. PPLO бульон б/кф (Pronadisa, Laboratorios CONDA, ЗАО «ДиаКон», кат. №1262, 2014 г.) 10,08
5. Феноловый красный (Нева Реактив, PANREAC - 131615, 2014 г.) 0,06
6. Дрожжевой экстракт 100,00 мл
7. Лошадиная сыворотка (ООО «БиолоТ», код: 1.1.5., 2014 г.) 100,00 мл
8. Селективные добавки 0,087
9. Дистиллированная вода остальное

Питательная среда содержит селективные добавки - антибиотики и противогрибковый препарат, при следующем соотношении ингредиентов, г/л:

10. Цефтриаксон 0,064
11. Амоксиклав (амоксициллин натриевая соль/клавулановая кислота калиевая соль) 0,016
12. Ванкомицин гидрохлорид 0,0020
13. Флуконазол 0,020

Для приготовления основы питательной среды в 600 мл дистиллированной воды добавляют плацентарный бульон - 160,00 мл, растворяют пептон ферментативный (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия, RM 1892, 2014 г.) - 3,20 г, натрий хлористый (хч, Нева Реактив, ГОСТ 4233-77, 2014 г.) - 1,60 г, PPLO бульон б/кф (Pronadisa, Laboratories CONDA, ЗАО «ДиаКон», кат. №1262, 2014 г.) - 10,08 г, феноловый красный (Нева Реактив, PANREAC-131615, 2014 г.) - 0,06 г. Полученную основу среды стерилизуют автоклавированием.

Для приготовления среды в стерильных условиях смешивают основу питательной среды с дрожжевым экстрактом - 100,00 мл, лошадиной сывороткой (ООО «БиолоТ», код: 1.1.5., 2014 г.) - 100,00 мл. Смесь тщательно перемешивают, затем добавляют цефтриаксон - 0,064 г, амоксиклав (амоксициллин натриевая соль / клавулановая кислота калиевая соль) - 0,016 г, ванкомицина гидрохлорид - 0,0020 г, флуконазол - 0,020 г. Устанавливают pH 6,25-6,45, добавляя по каплям 1N соляную кислоту.

Питательную среду разливают в 50 мл флаконы по 15 мл и лиофильно сушат. Перед использованием флакон с лиофилизированной селективной универсальной питательной средой для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum растворяют 15 мл дистиллированной воды. Условия хранения питательной среды см. таб. 1.

В предложенном составе питательной среды представлено оптимальное количественное соотношение компонентов, концентраций антибиотиков и индикаторного красителя.

Данная питательная среда дает возможность проведения идентификации на сорбированных специфическими реагентами и антибиотиками стрипах выделенных культур микоплазм и оценки их количества (титра) в образцах.

Селективная питательная среда для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum при ее использовании в стрипах, сорбированных специфическими реагентами и антибиотиками, обеспечивает оптимальные условия для роста данного возбудителя при подавлении роста других микоплазм, дрожжеподобных грибов и большинства представителей бактериальной флоры, потенциально содержащихся в исследуемом образце. Наличие в среде pH-индикатора позволяет проводить визуальную оценку результатов исследования по изменению цвета питательной среды в процессе культивирования Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum на стрипах за счет проявления ферментативной активности.

Пример 2. Приготовление стрипов, сорбированных специфическими реагентами и антибиотиками.

В используемых вместе с селективной универсальной питательной средой для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum стрипах сорбированы специфические реагенты и антибиотики (см. фиг.1). В качестве специфических реагентов в лунках стрипов для выявления и определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis служат аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин (для подавления роста других видов микоплазм). В качестве специфических реагентов в лунках стрипов для выявления и определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum служат мочевина и линкомицин (для подавления роста других видов микоплазм).

Содержание лунок стрипов, предназначенных для выявления и определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, имеет следующее соотношение специфических реагентов и антибиотиков, г/л:

1. L-аргинина гидрохлорид (имп, НТК «Диаэм», кат. №1119-34-2,2014 г.) 50,00
2. Бриллиантовый синий (Нева Реактив, ACROS-22973, 2014 г.) 0,15
3. Кларитромицин 0,020
4. Доксициклина гидрохлорид 0,010
5. Джозамицин 0,010
6. Мидекамицин 0,040
7. Офлоксацин 0,020
8. Ципрофлоксацина лактат 0,010
9. Спарфлоксацин 0,0025
10. Моксифлоксацин 0,0025
11. Клиндамицина фосфат 0,010

Содержание лунок стрипов, предназначенных для выявления и определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, имеет следующее соотношение специфических реагентов и антибиотиков, г/л:

1. Мочевина (SERVA Feinbiochemica, кат. 39305.01, 2014 г.) 5,00
2. Линкомицина гидрохлорид 0,080
3. Доксициклина гидрохлорид 0,010
4. Джозамицин 0,010
5. Кларитромицин 0,0050
6. Эритромицин 0,0050
7. Рокситромицин 0,010
8. Азитромицин 0,0050
9. Офлоксацин 0,020
10. Спарфлоксацин 0,0050

Для сорбирования стрипов специфическими реагентами и антибиотиками готовят два раствора. Первый раствор содержит следующие реагенты из расчета концентрации на одну лунку: мочевину (SERVA Feinbiochemica, кат. 39305.01, 2014 г.) - 5,00 г/л, линкомицина гидрохлорид - 0,080 г/л, а второй - L-аргинина гидрохлорид (имп, НТК «Диаэм», кат. № 1119-34-2, 2014 г.) - 50,00 г/л, бриллиантовый синий (Нева Реактив, ACROS-22973, 2014 г.) - 0,15 г/л и кларитромицин - 0,020 г/л. Затем сорбируют по 20 мкл с помощью Labsystems Multidrop в лунки, предназначенные для выявления Ureaplasma urealyticum, первый раствор, а в лунки, предназначенные для выявления Mycoplasma hominis, второй раствор.

Затем в стрипы, предназначенные для определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, сорбируют по 20 мкл растворы антибиотиков, при этом их концентрации в лунках следующие: доксициклина гидрохлорид - 0,010 г/л, джозамицина - 0,010 г/л, кларитромицина - 0,0050 г/л, эритромицина - 0,0050 г/л, рокситромицина - 0,010 г/л, азитромицина - 0,0050 г/л, офлоксацина - 0,020 г/л, спарфлоксацина 0,0050 г/л. В стрипы, предназначенные для определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, сорбируют по 20 мкл растворы антибиотиков, при этом их концентрации в лунках следующие: доксициклина гидрохлорид - 0,010 г/л, джозамицина - 0,010 г/л, мидекамицина - 0,040 г/л, офлоксацина - 0,020 г/л, ципрофлоксацина лактат - 0,010 г/л, спарфлоксацина - 0,0025 г/л, моксифлоксацина - 0,0025 г/л, клиндамицина - 0,010 г/л.

Пример 3. Способ диагностики инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, с помощью предложенного набора реагентов.

Селективная питательная среда должна обеспечивать рост Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum в лунках стрипов, сорбированных специфическими реагентами и антибиотиками, который сопровождается изменением цвета среды с желтого на красный или красно-малиновый в лунках, предназначенных для выявления Ureaplasma urealyticum, за счет проявления уреазной активности, а также изменением цвета среды с зеленого на фиолетовый в лунках, предназначенных для выявления Mycoplasma hominis, за счет проявления ферментативной активности, и тормозить рост сопутствующих микроорганизмов (грамположительных и грамотрицательных бактерий, грибов).

Диагностика инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, с помощью предложенного набора реагентов включает введение универсальной питательной среды в лунки стрипов с сорбированными в них специфическими реагентами и антибиотиками, исследуемого материала и вещества, создающего анаэробные условия, и анализ изменения цвета питательной среды (см. фиг. 2).

Набор реагентов прост в постановке, не требует специального оборудования, позволяет проводить как выявление возбудителей, так и полуколичественное определение титра и чувствительности к различным антибактериальным препаратам. Использование предложенного набора позволяет повысить скорость, точность и экономичность диагностики микоплазменной инфекции.

Диагностика инфекций, вызываемых Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, с помощью предложенного набора:

1. В лиофилизированную универсальную питательную среду для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum добавляют 15 мл дистиллированной воды и перемешивают до полного растворения (в течение 1 мин).

2. Полученную прозрачную среду желтого цвета разливают по 0,85 мл в пробирки для микропроб (для приготовления инокулятов на антибиотикочувствительность Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum) и по 0,8 мл в пробирки для микропроб (для контролей), закрывают и хранят до применения при температуре 2-8°С не более 7 сут или при температуре минус 7°C и ниже не более 2 мес. Перед проведением анализа пробирки со средой выдерживают при комнатной температуре (18-25°C) в течение 1 ч.

3. Анализ состоит из двух этапов:

3.1. Выделение и идентификация урогенитальных микоплазм.

В лунки первого стрипа (без полоски), содержащего различные специфические реагенты, вносят по 90 мкл раствора из пробирки, содержащей 0,8 мл селективной универсальной питательной средой без пробы. При этом среда в лунках, предназначенных для обнаружения, идентификации и полуколичественной оценки титра Ureaplasma urealyticum, окрашивается в желтый цвет, а среда в лунках, предназначенных для обнаружения, идентификации и полуколичественной оценки титра Mycoplasma hominis, окрашивается в зеленый цвет.

Затем из пробирки, содержащей транспортную среду с исследуемой пробой, вносят 10 мкл в лунку N1 и 10 мкл в лунку N5, и делают два последовательных разведения исследуемой пробы с шагом 10. Переносят 10 мкл раствора из лунки N1 в лунку N2 (разведение в 10 раз) и перемешивают пипетированием, затем переносят 10 мкл раствора из лунки N2 в лунку N3 (разведение в 100 раз) и перемешивают пипетированием. После переносят 10 мкл из лунки N5 в лунку N6 (разведение в 10 раз) и перемешивают пипетированием, затем переносят 10 мкл раствора из лунки N6 в лунку N7 (разведение в 100 раз) и перемешивают пипетированием.

3.2. Определение антибиотикочувствительности.

Готовят два инокулята добавлением по 85 мкл раствора из пробирки, содержащей транспортную среду с исследуемой пробой, в две пробирки с селективной универсальной питательной средой для выявления Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum (0,85 мл).

Во все лунки стрипов с красной и зеленой полосками (стрипы с антибиотиками) вносят по 100 мкл двух приготовленных инокулятов. Оба стрипа осторожно перемешивают встряхиванием до растворения сорбированных субстратов.

4. Во все лунки стрипов добавляют по 2-3 капли (50-75 мкл) вазелинового масла и стрипы помещают в термостат при температуре 37±1°C.

5. Учет результатов проводят через 24 ч для Ureaplasma urealyticum (лунки N1-4) и для Mycoplasma hominis (лунки N5-8). Окончательный учет результатов проводят через 48 ч для Ureaplasma urealyticum (лунки N1-4) и через 72 ч для Mycoplasma hominis (лунки N5-8). Интерпретацию результатов анализа см. таб.2.

5.1. Интерпретация качественного анализа.

В процессе роста микоплазм образуются продукты метаболизма, которые приводят к изменению pH сред. Визуально это проявляется в изменении цвета сред.

Появление красной или красно-малиновой окраски среды (без помутнения) в одной или нескольких лунках N1, N2, и N3 с положительными контролями K(+++), K(++) и K(+) при сохранении исходной желтой окраски среды в контрольной лунке N4 с K(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе присутствует Ureaplasma urealyticum, т.е. результат является положительным «+».

Отсутствие изменений окраски среды (без помутнения) в лунках N1, N2 и N3 с положительными контролями K(+++), K(++) и K(+) при сохранении исходной желтой окраски среды в контрольной лунке N4 с K(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе отсутствует Ureaplasma urealyticum, т.е. результат является отрицательным «-».

Появление фиолетовой окраски среды (без помутнения) в одной или нескольких лунках N5, N6 и N7 с положительными контролями K(+++), K(++) и K(+) при сохранении исходной зеленой окраски среды в контрольной лунке N8 с K(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе присутствует Mycoplasma hominis, т.е. результат является положительным «+».

Отсутствие изменений окраски среды (без помутнения) в лунках N5, N6 и N7 при сохранении исходной зеленой окраски среды в контрольной лунке N8 с K(-) свидетельствует о том, что в исследуемой пробе отсутствуют Mycoplasma hominis, т.е. результат является отрицательным «-».

5.2. Интерпретация полуколичественного анализа.

Изменение окраски среды только в лунке N1 (или N5) с K(+++) при отсутствии изменений в окраске среды в лунках N2, N3 и N4 (или N6, N7 и N8) с K(++), K(+) и K(-) указывает на то, что титры соответствующих возбудителей составляют не более 102 колониеобразующих единиц в мл (КОЕ/мл).

Изменение окраски среды только в лунках N1, N2 (или N5, N6) с K(+++) и K(++) при отсутствии изменений в окраске среды в лунке N3 и N4 (или N7 и N8) с K(+) и K(-) указывает на то, что титры соответствующих возбудителей составляют не более 103 (КОЕ/мл).

Изменение окраски среды в лунках N1, N2, N3 (или N5, N6, N7) с K(+++), K(++) и K(+) при отсутствии изменения в окраске среды в лунке N4 (или N8) с K(-) указывает на то, что титры соответствующих возбудителей составляют не менее 104 (КОЕ/мл).

5.3. Определение антибиотикочувствительности.

В лунках других двух стрипов сорбированы антибиотики. После внесения в эти лунки инокулята сорбированные антибиотики растворяются. При изменении цвета среды «+» в лунках стрипа с антибиотиками (красная полоска) штамм Ureaplasma urealyticum расценивается как резистентный (R). При отсутствии изменения цвета среды «-» - как чувствительный (S).

При изменении цвета среды «+» в лунках стрипа с антибиотиками (зеленая полоска) штамм Mycoplasma hominis расценивается как резистентный (R). При отсутствии изменения цвета среды «-» - как чувствительный (S).

5.3. Примечание.

В исследуемой пробе могут одновременно обнаруживаться Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma hominis, что свидетельствует о смешенной инфекции или носительстве.

Помутнение среды (при изменении или без изменения окраски) в какой-либо из лунок свидетельствует о росте посторонней микрофлоры. Результаты исследований таких проб учету не подлежат и требуют повторного проведения анализа или дополнительного посева образца на плотную питательную среду Ureaplasma urealyticum и (или) Mycoplasma hominis.

В качестве транспортной среды используют среду при следующем соотношении ингредиентов,: г/л:

Плацентарный бульон 400,0 мл
Пептон ферментативный (HiMedia Laboratories Pvt. Limited, Индия, RM 1892, 2014 г.) 8,0
Натрий хлористый (хч, Нева Реактив, ГОСТ 4233-77, 2014 г.) 4,0
Дрожжевой экстракт 100,0 мл
Лошадиная сыворотка (ООО «БиолоТ», код: 1.1.5., 2014 г.) 60,0 мл
Цефтриаксон 0,06
Амоксиклав (амоксициллина натриевая соль/клавулановая кислота калиевая соль) 0,016
Ванкомицина гидрохлорид 0,002
Амфотерицин В 0,005
Дистиллированная вода остальное

Для проведения диагностики используется следующий клинический материал:

- соскоб клеток влагалища, цервикального канала, слизистой уретры;

- секрет предстательной железы (0,50-0,10 мл), эякулят (0,50-0,10 мл);

- первая порция утренней мочи (осадок, полученный центрифугированием 10 мл первой порции утренней мочи).

Для достоверной диагностики возбудителей урогенитальных уреаплазмозов необходимо стандартное взятие исследуемого материала и соблюдение условия его хранения:

1. Процедура взятия материала должна быть стандартной. Забор проб осуществлять с помощью ложки Фолькмана или одноразового тампона (щетки);

2. Не использовать при взятии материала местных антисептиков;

3. Необходимо брать материал до начала проведения антибактериальной терапии;

4. Важно получить достаточное количество клеток, поскольку уреаплазма является микроорганизмом, колонизирующим клеточную поверхность;

5. Необходимо тщательное удаление слизи из цервикального канала;

6. Взятие уретральных образцов следует проводить не ранее чем через 2-3 часа после мочеиспускания;

7. Получение секрета предстательной железы и эякулята проводить непосредственно после мочеиспускания;

8. Исследуемый материал помещать в специальную транспортную среду, наилучшим образом обеспечивающую сохранение жизнеспособности микоплазм.

9. Пробирки с пробами в транспортной среде закрыть, промаркировать и доставить в лабораторию. Время и условия транспортировки исследуемых образцов см. таб. 1.

Набор для лабораторной диагностики инфекций, вызываемых урогенитальными микоплазмами Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, содержащий лиофилизированную транспортную среду для хранения исследуемых проб, лиофилизированную питательную среду для выявления Mycoplasma hominis и/или Ureaplasma urealyticum и стрипы для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum, для полуколичественного определения титра возбудителя и для определения чувствительности Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum к антибиотикам, отличающийся тем, что он содержит три вида стрипов, первый из которых предназначен для идентификации Mycoplasma hominis и Ureaplasma urealyticum и для полуколичественного определения их титра, причем часть лунок первого вида стрипов, которые предназначены для выявления и определения титра Mycoplasma hominis, содержат аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, другая часть лунок этого стрипа, которые предназначены для выявления и определения титра Ureaplasma urealyticum, содержат мочевину и линкомицин, второй вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Mycoplasma hominis, содержит специфические реагенты для выявления Mycoplasma hominis - аргинин, бриллиантовый синий и кларитромицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, мидекамицин, офлоксацин, ципрофлоксацин, спарфлоксацин, моксифлоксацин, клиндамицин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации, третий вид стрипов предназначен для определения антибиотикочувствительности Ureaplasma urealyticum, содержит специфические реагенты для выявления Ureaplasma urealyticum - мочевина и линкомицин, а также восемь антибиотиков - доксициклин, джозамицин, кларитромицин, эритромицин, рокситромицин, азитромицин, офлоксацин и спарфлоксацин, сорбированных в лунки стрипов в одной концентрации.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области микробиологии, в частности к методам определения чувствительности штаммов Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa) к антибиотикам.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способам определения активности веществ, обладающих способностью встраиваться в биологические мембраны клеточных стенок с нарушением функционирования клеток.
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно к получению плотной питательной среды, с помощью которой возможно определение антибиотикочувствительности культур возбудителя легионелеза - Legionella pneumophila.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения коклюшного компонента комплексных вакцин. Представленный способ включает выращивание культуры B.
Изобретение относится к области медицины, а именно к медицинской бактериологии и медицинской микологии, и описывает способ количественной оценки адгезивных свойств условно-патогенных микроорганизмов, выделенных от человека и объектов окружающей среды.
Группа изобретений относится к биотехнологии и может быть использована для биотестирования токсичности объектов окружающей среды. Заявлены штамм бактерий Vibrio aquamarinus, способ определения токсичности проб с его помощью и применение штамма в качестве тест- культуры для определения химической токсичности проб.
Изобретение относится к области контроля качества дезинфекции. Способ предусматривает дезинфекцию помещений, отбор тест-объектов, в качестве которых используют суспензию Bacillus subtilis штамма АТСС-РТА 6737 (РВ6), сорбированную на носителе - фильтровальной бумаге с клейким участком поверхности.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии и представляет собой способ идентификации кластера генов, кодирующих стафилококковые белки, являющиеся экзотоксинами.

Представленные решения касаются способа генерирования заквасочной культуры, заквасочной культуры и способа ферментации с использованием такой заквасочной культуры.
Изобретение относится к области микробиологии. Готовят две взвеси.
Изобретение относится к области гельминтологии и касается способа сбора оплодотворенных яиц (in vitro) от возбудителя Fasciola hepatica при жизни. Охарактеризованный способ включает стадии: отбор из желчных протоков печени зараженных фасциолами домашних и/или диких животных только живых половозрелых F. hepatica. Помещение их в отдельные пробирки с отфильтрованной и отцентрифугированной желчью, разбавленной изотоническим раствором хлорида натрия 1:1. Экспозицию пробирок при t=38-39°С, если F. hepatica от крупного рогатого скота, и при t=39-40°C, если F. hepatica от овец и/или коз, в условиях термостата в течение 5 часов. Последующее отмывание яиц в изотоническом растворе хлорида натрия. Представленное изобретение позволяет получить до 100% оплодотворенных яйц фасциол вида Fasciola hepatica и может быть использовано для исследований в условиях лаборатории и/или полевых экспериментов, при решении фундаментальных и прикладных научных задач в области эпизоотологии, терапии и профилактики фасциолеза домашних или/и диких животных. 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов. Изобретение позволяет получить полипептид, обладающий ингибиторной активностью в отношении агрегации тромбоцитов и/или ингибиторной активностью в отношении адгезии тромбоцитов. 6 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ определения функциональной устойчивости сапротрофного микробного комплекса почвы. Проводят компостирование образца почвы в лабораторных условиях. Методом МСТ определяют выравненность функционального спектра микробного сообщества по формуле E = 1 / ∑ ( p i ) 2 . Учет показателя выравненности функционального спектра проводят 3 раза: через 0, 15 и 30 суток после начала компостирования. По результатам учетов рассчитывают коэффициент вариации показателя выравненности функционального спектра сапротрофного микробного сообщества почвы (VE) между сроками учета. Оценивают функциональную устойчивость сапротрофного микробного комплекса почвы. Устойчивость считается высокой, если величина критерия VE не превышает 20%, средней, если колеблется в пределах 20-50%, низкой - 50-100%, очень низкой - превышает 100%. Преимуществом способа является оценка функционального спектра наиболее мобильной, культивируемой части микробного сообщества почвы, а также почва подвергается относительно мягкому стрессу - компостированию без дополнительных источников углерода. 5 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к способу скрининга и выделения клеток Bacillus subtilis, к композиции кормовой добавки к кормовому продукту для животного, содержащей указанные клетки, и способу кормления животного. Способ предусматривает отбор и выделение споровых клеток Bacillus subtilis, характеризующихся быстрым прорастанием и ростом в присутствии среды с 4 мМ или 6 мМ солей желчных кислот, получение вегетативных клеток из споровых клеток, УФ-мутирование указанных вегетативных клеток, отбор и выделение клеток вегетативных клеток Bacillus subtilis, характеризующихся высоким уровнем продукции по меньшей мере одной незаменимой аминокислоты, анализ полученных вегетативных клеток Bacillus subtilis для подтверждения сохранения прорастания и роста в присутствии среды с солями желчных кислот и выделение отобранных клеток Bacillus subtilis. Полученные клетки в количестве 105 до 1012 КОЕ/г входят в состав композиции кормовой добавки. Способ кормления животного включает введение указанной композиции кормовой добавки животному вместе с другими ингредиентами корма. Группа изобретений оказывает пробиотическое воздействие на организм и усиливает пищеварение и доступность нутриентов из кормовых продуктов для животных. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Исследуемую культуру V. cholerae выращивают на агаре Мартена, готовят бактериальную суспензию 1х109 м.к./мл по стандарту мутности ОСО ГИСК им. Тарасевича, вносят в 2 емкости с питательной средой с последующим культивированием при 37°C. По специальной методике определяют показатели внеклеточного и внутриклеточного продуцирования кадаверина. Проводят исследование проб в системе капиллярного электрофореза Backman. Учет результатов ведут с помощью компьютерных электрофореграмм с получением показателей образцов в момент детекции кадаверина. По формуле определяют количество продуцируемого кадаверина в исследуемых пробах. Изобретение позволяет по количественной концентрации кадаверина оценивать потенциал холерных вибрионов в реализации их адаптивных функций и возможности выживать в различных средах. 1 ил., 3 табл. 3 пр.

Изобретение относится к области клинической микробиологии. Исследуемую культуру стафилококков выращивают в условиях постоянного встряхивания, в качестве контроля используют смесь бульона и культуры без лизоцима, проводят двукратное измерение оптической плотности опытных и контрольных лунок через 2 и 4 часа инкубации и об уровне антилизоцимной активности судят по степени выраженности признака у определенного штамма стафилококков, которую рассчитывают по формуле: где K - коэффициент антилизоцимной активности стафилококков; VК - объем бульонной культуры исследуемого штамма; VЛ - объем раствора лизоцима исходной концентрации; CЛ - концентрация лизоцима; MО4 - среднее значение оптической плотности опытных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма с лизоцимом через 4 часа инкубации, ед. оптической плотности; MО2 - среднее значение оптической плотности опытных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма с лизоцимом через 2 часа инкубации, ед. оптической плотности; MК4 - среднее значение оптической плотности контрольных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма без лизоцима через 4 часа инкубации, ед. оптической плотности; MК2 - среднее значение оптической плотности контрольных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма без лизоцима через 2 часа инкубации, ед. оптической плотности. При значении K<0,49 определяют низкую степень выраженности АЛА, K в пределах 0,5-2,49 - определяют среднюю степень выраженности АЛА, K>2,5 - определяют высокую степень выраженности АЛА стафилококков. Использование данного способа позволяет повысить точность определения АЛА. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии и касается набора lux-биосенсоров для определения генотоксичных продуктов неполного окисления НДМГ в окружающей среде. Представленный набор состоит из проб клеток Escherichia coli, полученных методом рекомбинантных ДНК, содержащих плазмиды с бактериальными luxCDABE-генами под контролем индуцируемых стрессовых промоторов PalkA, PkatG, PsoxS, PrecA и PgrpE. Изобретение позволяет быстро в стационарных или полевых условиях определить содержание генотоксичных продуктов неполного окисления НДМГ в окружающей среде и может быть использовано при оценке степени загрязнения окружающей среды несимметричным диметилгидразином (НДМГ) и генотоксичными продуктами его окисления. 5 ил., 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Способ определения токсичности среды включает определение показателей роста тест-культур в контроле и опыте. В качестве тест-культур используют микромицеты и предварительно определяют показатель степени угнетения роста тест-культур в опыте по отношению к контролю, %, по формуле: . Осуществляют определение интегрального показателя токсичности среды в баллах по общему количеству баллов у всех тест-культур за весь период инкубации, который сравнивают с пятью классами опасности среды, условно установленными в зависимости от балльной интегральной оценки токсичности исследуемой среды от 0 до 100 баллов. Изобретение позволяет повысить объективность оценки токсичности среды для растений, животных и человека. 8 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 пр.

Предложен способ определения антиоксидантной активности вещества, предусматривающий приготовление контрольных проб, содержащих буферный раствор и биолюминесцентный сенсор, определения исходной интенсивности биолюминесценции. Добавляют в часть контрольных проб исследуемое вещество с получением рабочих проб. Уравнивают объемы контрольных и рабочих проб. Определяют интенсивность биолюминесценции контрольных и рабочих проб после их инкубации для определения токсичности исследуемого вещества. Добавляют в контрольные и рабочие пробы оксидант и определяют интенсивность биолюминесценции контрольных и рабочих проб с оксидантом после их инкубации для определения антиоксидантной активности исследуемого вещества. Изобретение позволяет определять антиоксидантную активность вещества с одновременным определением его токсичности с сокращением времени определения. 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к хлебопекарной промышленности. Настоящее изобретение предлагает дрожжи, пригодные для производства хлебобулочных изделий с применением большого количества дрожжей, а также композиции, которые могут дать хлебобулочное изделие, содержащие указанные дрожжи. Указанные дрожжи получены культивированием дрожжей, выбранных из группы, состоящей из штамма дрожжей, депонированного 9 февраля 2011 г. в CNCM (Национальная коллекция культур микроорганизмов, Франция) под номером I-4445; штамма дрожжей, депонированного 9 февраля 2011 г. в CNCM под номером I-4446; штамма дрожжей, депонированного 9 февраля 2011 г. в CNCM под номером I-4447. Предлагаемые дрожжи позволяют получать готовые хлебобулочные изделия без характерного дрожжевого привкуса. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 1 ил., 11 табл., 2 пр.
Наверх