Способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину е



Способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину е
Способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину е

 


Владельцы патента RU 2554820:

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства (RU)

Изобретение относится к иммунологии и представляет собой способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину Е, который заключается в связывании исследуемых антител с IgE человека в растворе с последующим инкубированием данного раствора с периферической кровью человека, индукцией дегрануляции клеток и последующим определением доли клеток с высоким уровнем экспрессии поверхностного маркера CD63 (CD63high) в популяции базофилов с фенотипом CD123+HLA-DR-. Изобретение позволяет существенно сократить сроки анализа и снизить его трудоемкость. 2 ил., 2 пр.

 

Изобретение относится к иммунологии, в частности к способам определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину Е человека, и может использоваться в биотехнологии, фармацевтике и медицине, например, при диагностике и лечении аллергических заболеваний, в частности бронхиальной астмы.

Бронхиальная астма - тяжелое хроническое заболевание дыхательных путей - наиболее распространенная патология среди аллергических и бронхолегочных заболеваний [Аллергические болезни: диагностика и лечение. Под редакцией Р. Паттерсона, Л.К. Греммера, П.А. Гринберга, Москва, Медицина, 2000]. В России, по разным источникам, бронхиальной астмой страдает от 2,2 до 5-7% населения, т.е. от 3 до 9,8 млн человек, значительная часть которых болеет в тяжелой форме, при которой малоэффективно лечение кортикостероидами.

Проявление бронхиальной астмы является аллергической реакцией, опосредуемой иммуноглобулином Е (IgE). Когда антиген, такой как пыльца, домашняя пыль или иной аллерген, попадает в организм, в крови появляются IgE, специфичные к такому антигену, которые связываются с рецепторами, расположенными на поверхности базофилов и тучных клеток. При дальнейшем контакте с антигеном данный антиген связывается с IgE с образованием комплекса антиген-IgE-рецептор, что приводит к немедленной активации рецептора и проведению в клетку сигнала, вызывающего дегрануляцию клеток, в ходе которой химические медиаторы (главным образом гистамин и лейкотриены) освобождаются из клеточных гранул и попадают в кровоток с последующим развитием аллергических симптомов.

Общепринятые подходы к лечению аллергии, в частности бронхиальной астмы, заключаются в системной терапии антагонистами химических медиаторов, такими как антигистамины и стероиды. Применение данных антагонистов направлено на десенсибилизацию пациентов и на уменьшение воспаления, однако оно обеспечивает только симптоматическую терапию, поскольку не направлено на вмешательство во взаимодействие IgE с клеточным рецептором, запускающее аллергическую реакцию. Кроме того, применение стероидов приводит к ингибированию общего иммунного ответа, что выражается в ряде нежелательных побочных эффектов.

В настоящее время разработан способ лечения, основанный на применении полипептидов, блокирующих связывание IgE с Fc-рецепторами на поверхности клеток, а также способных вытеснить IgE из комплекса с рецептором, если IgE с ним уже связан. Наиболее перспективным является применение для данной цели антител к IgE. Молекула IgE состоит из двух легких и двух тяжелых цепей, сшитых вместе дисульфидными связями. Каждая цепь состоит из вариабельной и константной областей, первая из которых отвечает за связывание антигена, а вторая - за взаимодействие с рецепторами. При этом константная область тяжелой цепи IgE состоит из четырех участков, обозначаемых Ch1, Ch2, Ch3, Ch4. Высокоаффинное связывание IgE с рецептором FcεRI происходит в результате сложного взаимодействия участка Ch3 IgE с α-субъединицей рецептора. Для предотвращения такого связывания предложены антитела, в частности омализумаб [RU 2242515], TES-C21 [WO 2004070011], BSW17 [RU 2193413]. На основе гуманизированного антитела Е25 (омализумаб) выпускается препарат «Ксолар», который представляет собой IgG1kappa антитело, содержащее человеческую структурную основу с определяющими комплементарность участками мышиного антитела, связывающими IgE [health.mail.ru/drug/xolair/].

В настоящее время разрабатываются другие гуманизированные и человеческие моноклональные антитела, однако для выбора оптимальной технологии лечения, позволяющей осуществить быструю и надежную нейтрализацию биологической активности иммуноглобулинов Е человека антителами необходимо разработать методы, позволяющие сравнить их эффективность.

В настоящее время для определения биологической активности иммуноглобулинов Е человека предлагаются, как правило, способы, основанные на использовании клеточных линий животных, стабильно экспрессирующих рецептор FcεRI человека или его субъединицу альфа [Hakimi J, Seals С, Kondas JA, Pettine L, Danho W, Kochan J. The alpha subunit of the human IgE receptor (FcERI) is sufficient for high affinity IgE binding. J Biol Chem. 1990; 265(36): 22079-81]. Связывание IgE клетками таких линий с последующим взаимодействием связанного IgE с антителами к IgE, обладающими анафилогенной активностью, приводит к дегрануляции клеток, которая может быть зарегистрирована, в частности, по мобилизации клетками кальция [WO 2008099188]. Недостатком вышеуказанных способов является их громоздкость и длительность.

Также известны способы, основанные на использовании базофилов человека. При этом выделенные базофилы человека либо гепаринизированную кровь инкубируют с IgE, после чего индуцируют дегрануляцию клеток обработкой антителами к IgE, обладающими анафилогенной активностью. Далее клетки осаждают, в супернатанте и в клеточных лизатах, полученных путем многократного замораживания-оттаивания ацетилируют гистамин, количество которого определяют с помощью иммуноферментного анализа (RU 2242515). Нейтрализацию биологической активности иммуноглобулинов Е антителами определяют по концентрации антител, вызывающей 50% ингибирование биологической активности IgE в стандартных условиях эксперимента.

Так, в патенте WO 2008123999 клетки RBL-2H3(FcεRI) инкубируют с IgE человека и исследуемыми антителами в течение 48 часов, после чего отмывают от IGE-анти-IgE комплексов, оставляя на поверхности клеток только IgE, связанные с рецептором FcεRI. Эти IgE связывают поликлональными антителами, вызывая дегрануляцию клеток, уровень которой определяют по выходу гистамина, определяемого с помощью ИФА. Недостатком данного способа является его длительность и трудоемкость

Наиболее близким к заявляемому по технической сущности является способ определения нейтрализующей активности антител с использованием клеток базофильной клеточной линии крыс RBL-2H3, трансфецированных ДНК, экспрессирующей рецептор FcεRI человека(WO 2008099188). После выделения клона, стабильно экспрессирующего FcεRI, клетки культивируют в присутствии антибиотика, поддерживающего экспрессию рецептора. Для определения нейтрализующей активности антител 5×104 клеток высевают в ячейки планшета для культивирования клеток и подращивают при 37°C в среде, содержащей 5% CO2, с добавлением 400 мкг/мл антибиотика G418 в течение 18-24 часов, после чего клетки многократно промывают и к ним добавляют IgE человека вместе с разведениями исследуемых антител. О степени дегрануляции судят по мобилизации клетками кальция, кинетику которой (80 измерений с интервалом 1 сек и 40 измерений с интервалом 8 сек) регистрируют быстродействующим фотометром).

Недостатком данного способа является его длительность и трудоемкость.

Задачей, решаемой авторами, являлось создание более быстрого и простого способа определения нейтрализующей активности антител к IgE.

Техническая задача состояла в исключении из процесса наиболее трудоемких стадий за счет использования поверхностного маркера CD63, который объединяет группу белков, являющихся компонентами лизосомальных мембран и переносимых на клеточную поверхность при активации базофилов и ряда других клеток.

Предлагаемое решение задачи основано на связывании с рецептором FcεRI базофилов свободного (ненейтрализованного) IgE. После отмывки клеток от IgE, исследуемых антител и комплексов антитела-IgE связывание избытка известных антител к IgE (поликлональные антитела козы к IgE человека) с комплексом IgE-FcεRI вызывает дегрануляцию базофилов и позволяет оценить нейтрализующую способность антител.

Технический результат достигается за счет того, что содержащий базофилы препарат - гепаринизированную кровь донора - инкубируют не менее чем с тремя смесями исследуемых антител с IgE человека, содержащих различные соотношения антител при 37±1°C, отмывают центифугированием, затем добавляют поликлональные антитела козы к иммуноглобулину Е человека и вновь инкубируют при 37±1°C в течение 30-40 мин. Реакцию прекращают введением этилендиаминотетраацетата (ЭДТА), добавляют меченные разными флуоресцентными метками антитела к CD63, CD 123 и HLA-DR, выдерживают при комнатной температуре в темноте в течение 30-35 минут, затем лизируют эритроциты, отмывают смесь центрифугированием и анализируют в проточном цитофлуориметре с последующим подсчетом процента активированных клеток с фенотипом CD63high из пула клеток с фенотипом CD123highHLA-DR-. В качестве положительного контроля используют формил-метионин-лейцин-фенилаланин, а в качестве отрицательного контроля - показатель клеток, инкубированных в отсутствие иммуноглобулина Е, а также показатель клеток, инкубированных с иммуноглобулином Е, предварительно связанным с избытком нейтрализующих антител к иммуноглобулину Е, и констатируют в случае обнаружения дозозависимого увеличения доли клеток CD63high в популяции клеток с фенотипом CD123+HLA-DR-, что исследуемые антитела относят к анафилогенным, а при обнаружении дозозависимого снижения доли клеток CD63high в исследуемой популяции считают, что исследуемые антитела относят к нейтрализующим с вычислением концентрации антител по формуле:

% нейтр = 100×(1-(%АБоп-%АБа-IgE)/(%АБК IgE-%АБа-IgE)),

где % нейтр - процент нейтрализации;

%АБоп - процент активированных базофилов в присутствии соответствующей концентрации исследуемых антител;

%ABa-IgE - процент активированных базофилов в образце контроля анти-IgE;

%АБК IgE - процент активированных базофилов в образце контроля IgE без исследуемого препарата.

Анализ осуществляют следующим образом.

Исследуемые антитела предварительно раститровывают и инкубируют в течение 1 часа с раствором IgE человека с постоянным перемешиванием на орбитальном шейкере при комнатной температуре (по 50 мкл каждого разведения антитела и 50 мкл раствора IgE человека с концентрацией 20 мкг/мл), после чего смесь добавляют к 100 мкл донорской гепаринизированной крови человека и инкубируют при 37°C в течение 1 часа. Клетки дважды отмывают низкоскоростным центрифугированием, добавляют поликлональные антитела козы к IgE человека (50 мкг/мл) в объеме 10 мкл и вновь инкубируют в течение 30 минут при 37°C. Реакцию останавливают добавлением 10 мкл раствора ЭДТА (20 мМ) с последующей инкубацией при комнатной температуре в течение 15 минут. Далее к образцам добавляют 20 мкл смеси меченных разными флуоресцентными метками антител к CD63, CD 123 и HLA-DR (коммерческий набор BD FastImmune CD63 FITC/CD123 PE/Anti-HLA-DR PerCP). После инкубации при комнатной температуре в темноте в течение 30 минут производят лизис эритроцитов внесением 2 мл лизирующего раствора (0/75% раствор хлорида аммония) с последующей трехкратной отмывкой центрифугированием. Далее образцы анализируют в проточном цитофлуориметре с последующим подсчетом процента активированных клеток с фенотипом CD63high из пула клеток с фенотипом CD123highHLA-DR-. В качестве положительного контроля используют формил-метионин-лейцин-фенилаланин (fMLP) (Sigma), в качестве отрицательного контроля определяют показатель клеток, инкубированных в отсутствие IgE, а также показатель клеток, инкубированных с IgE, предварительно связанным с избытком нейтрализующих антител к IgE.

Изобретение иллюстрируется следующими диаграммами.

На фиг.1 представлены результаты нейтрализации биологической активности иммуноглобулинов Е известными антителами против IgE человека «Ксолар». На фиг.2 представлена оценка нейтрализующей активности мышиных антител против IgE человека, данные проточной цитофлюориметрии, анализ CD123+HLA-DR- базофилов. Цифры на гистограммах указывают процент клеток, высокоэкспрессирующих CD63. А - контроль поликлональных анти-IgE антител; Б - положительный контроль (fMLP); В - контроль известных нейтрализующих антител («Ксолар», 5 мкг/мл); Г и Д - 5 мкг/мл и 1 мкг/мл антител клона 1С2; Е и Ж - 5 мкг/мл и 1 мкг/мл антител клона 3В5 соответственно.

Промышленная применимость изобретения поясняется следующими примерами.

Пример 1. Определяли нейтрализацию биологической активности иммуноглобулинов Е человека рекомбинантными гуманизированными антителами к IgE человека (коммерческий препарат «Ксолар»).

Выявление активированных базофилов проводили с помощью набора BD FastImmune CD63 по инструкции изготовителя. В качестве положительного контроля использовали формил-метионин-лейцин-фенилаланин (fMLP) (Sigma) в конечной концентрации 2 мкг/мл. Учет результатов проводили с помощью проточного цитофлюориметра EPICS XL (Beckman Coulter) в трехцветном режиме. Базофилы при анализе выделяли как CD123+HLA-DR- клетки и далее определяли процент базофилов, высокоэкспрессирующих CD63 (CD63high).

Результаты анализа приведены на фиг. 1.

Из фиг. 1 видно, что антитела «Ксолар» дозозависимо снижают процент базофилов, активированных в результате инкубации с IgE человека и последующей обработкой поликлональными антителами к IgE. IC50 в эксперименте составил 0,515 мкг/мл.

Пример 2. Определяли нейтрализующую активность мышиных моноклональных антител клонов 1С2 и 3В5 против иммуноглобулинов Е человека.

Мышиные моноклональные антитела (клоны 1С2 и 3В5) против IgE человека были получены с помощью гибридомной технологии. Нейтрализующую активность антител изучали, как описано выше, используя в тесте конечные концентрации антител 5 мкг/мл и 1 мкг/мл. В качестве положительного контроля нейтрализации использовали препарат «Ксолар» в концентрации 5 мкг/мл. Результаты проточной цитофлюориметрии показаны на фиг. 2. Из фиг. 2 видно, что при увеличении концентрации антител 1С2 наблюдается увеличение процента CD63high активированных базофилов, что указывает на то, что данный клон антител является анафилактогенным. При этом в присутствии антител клона 3В5 имеет место полное подавление активации базофилов, что указывает на нейтрализующие свойства антител данного клона.

Сопоставление заявляемого способа с аналогами показало, что при его использовании время анализа сокращается с 20-30 до 4 часов, при этом достигается существенное снижение трудозатрат.

Способ определения нейтрализующей активности антител к иммуноглобулину Е, включающий в себя взаимодействие базофилов с антителами и иммуноглобулином Е человека, отмывание клеток от излишков иммуноглобулина, анализ физико-химических параметров полученной смеси и определение значимого параметра, отличающийся тем, что предварительно готовят не менее трех смесей антител с иммуноглобулином Е человека, которые потом инкубируют с гепаринизированной кровью донора при 37±1°C, а после отмывки излишков иммуноглобулина добавляют поликлональные антитела козы к иммуноглобулину Е человека и вновь инкубируют при 37±1°C в течение 30-40 мин, после чего реакцию прекращают введением этилендиаминотетраацетата, добавляют меченные разными флуоресцентными метками антитела к CD63, CD123 и HLA-DR, выдерживают при комнатной температуре в темноте в течение 30-35 минут, затем лизируют эритроциты, отмывают смесь центрифугированием и анализируют в проточном цитофлуориметре с последующим подсчетом процента активированных клеток с фенотипом CD63high из пула клеток с фенотипом CD123highHLA-DR, используя в качестве положительного контроля формил-метионин-лейцин-фенилаланин, а в качестве отрицательного контроля - показатель клеток, инкубированных в отсутствие иммуноглобулина Е, а также показатель клеток, инкубированных с иммуноглобулином Е, предварительно связанным с избытком нейтрализующих антител к иммуноглобулину Е, и в случае, если в опытных образцах при увеличении дозы исследуемых антител не отмечается дозозависимых изменений процента активированных базофилов, соответствующие антитела признаются не нейтрализующими, в случае обнаружения дозозависимого увеличения доли клеток CD63high в популяции клеток с фенотипом CD123+HLA-DR- исследуемые антитела относят к анафилогенным, а при обнаружении дозозависимого снижения доли клеток CD63high в исследуемой популяции считают, что исследуемые антитела относят к нейтрализующим с вычислением концентрации антител по формуле:
% нейтр = 100×(1-(%АБоп-%АБа-IgE)/(%АБК IgE-%АБа-IgE)),
где % нейтр - процент нейтрализации; %АБоп - процент активированных базофилов в присутствии соответствующей концентрации исследуемых антител; %АБа-IgE - процент активированных базофилов в образце контроля анти-IgE; %АБК IgE - процент активированных базофилов в образце контроля IgE без исследуемого препарата.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно, к офтальмологии и предназначено для лечения фармакологической формы синдрома «сухого глаза» (Ф-ССГ). Для лечения Ф-ССГ выявляют анамнез, определяют снижение относительно нормы объема слезопродукции и повышение показателя ксероза глазной поверхности.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования формирования окклюзионной постгеморрагической гидроцефалии у недоношенных детей с экстремально низкой массой тела при рождении.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа диагностики нейродегенеративного заболевания у индивидуума, включающего стадии (i) определения одного или нескольких параметров, выбранных из группы, состоящей из 3ab40 или величины вычисленного параметра, выбранного из группы, состоящей из 2ab40+3ab40, 2ab40+3ab40+2ab42+3ab42 и 1ab40+2ab40+1ab42+2ab42; (ii) сравнения величины параметра с эталонной величиной, соответствующей величине указанного параметра в эталонном образце; и (iii) диагностики нейродегенеративного заболевания, в случае, если наблюдается увеличение величины параметра по сравнению с эталонной величиной.
Изобретение относится к области медицины, в частности к ревматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики ревматоидного артрита (РА) с остеоартрозом (OA).

Изобретение касается способа диагностики ревматоидного артрита, способа определения лечебного эффекта терапевтического агента для лечения ревматоидного артрита и набора для осуществления способов.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу дифференциальной диагностики генерализованной формы внутриутробной моно- и микст-цитомегаловирусной инфекции у новорожденных.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложены варианты гуманизированного анти-CD79b антитела, каждый из которых характеризуется наличием легкой и тяжелой цепи и набором 6 CDR с установленной аминокислотной последовательностью и по меньшей мере одним свободным цистеиновым аминокислотным остатком, выбранным из А118С (по Европейской нумерации) в тяжелой цепи и V205C (по нумерации Кэбат) в легкой цепи.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики высокодифференцированного рака у больных с узловыми формами заболеваний щитовидной железы.
Изобретение относится медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования частоты развития инфекционных заболеваний у ребенка на первом году жизни.
Изобретение относится к медицине, а именно к репродуктивной иммунологии и гинекологии, и может быть использовано для диагностики иммунологической формы бесплодия у пар с бесплодием неуточненного генеза.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована для определения еx-vivo эффективности лечения рака. Для этого после введения одной или более доз иммуногенной композиции субъекту измеряют уровень активированных Т-лимфоцитов (CD3+ CD69+) в организме. Уровень активированных Т-лимфоцитов (CD3+ CD69+) выше приблизительно 10,4% свидетельствуют о том, что субъект является таким, который демонстрирует успешный клинический выход для лечения, то есть повышение коэффициента выживания. Использование уровня активированных Т-лимфоцитов (CD3+ CD69+) позволяет применять их в качестве биомаркера для мониторинга, модификации или корректировки лечения рака. 2 н. и 5 з.п. ф-лы, 1 пр., 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Описано антитело, которое специфически связывает денатурированный CD70. Также раскрыт способ диагностики, прогнозирования, профилактики и лечения злокачественных опухолей яичников, поджелудочной железы и других злокачественных опухолей с использованием антител. Предложенная группа изобретений может быть использована в медицине. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 10 ил., 2 табл., 9 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ прогноза эффективности биоуправления параметрами вариабельности сердечного ритма с учетом уровня интерлейкина-6 в периферической крови. Способ характеризуется тем, что у людей определяют уровень интерлейкина-6 в сыворотке периферической крови иммуноферментным методом; при его уровне более 5 пг/мл прогнозируют успешность выполнения сеанса биоуправления параметрами вариабельности сердечного ритма в виде увеличения суммарной мощности спектра вариабельности сердечного ритма в сочетании со снижением индекса напряжения регуляторных систем в сравнении с исходными значениями. Предложенный способ позволяет более точно прогнозировать длительность курса проводимых сеансов биоуправления с целью усиления вагусных влияний на ритм сердца. Изобретение может использоваться для проведения профилактики психосоматических расстройств, в основе которых лежит нарушение нервной регуляции функций сердечной деятельности. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования спонтанного наступления беременности у женщин с I и II стадией наружного генитального эндометриоза. Сущность изобретения состоит в том, что до лечения в периферической крови женщин с бесплодием, ассоциированным с I и II стадией наружного генитального эндометриоза, определяют относительное количество IL- IL-1β + моноцитов и при значении этого показателя, равном 50,0% или более, в моноцитарном гейте прогнозируют спонтанное наступление беременности в течение года после проведения хирургического лечения эндометриоза. Использование данного способа позволяет с высокой точностью прогнозировать спонтанное наступление беременности у женщин с бесплодием при I и II стадии наружного генитального эндометриоза в течение года после лечебной лапароскопии, что дает возможность выбрать оптимальную тактику ведения пациенток и оценить необходимость назначения им методов вспомогательных репродуктивных технологий. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии и инфекционным болезням, и может использоваться для определения стадии фиброзного процесса при мониторинге больных хроническим гепатитом C. Для осуществления способа у больных хроническим гепатитом C с установленной в результате биопсии или другим неинвазивным методом стадией фиброзного процесса 2 раза в год определяют уровни цитокинов сыворотки крови и на их основе рассчитывают интегральный показатель цитокинового профиля (ИПЦП), далее при исходной стадии F0 рост ИПЦП выше -8 свидетельствует о дебюте фиброзных изменений в печени (переход на стадию F1), при исходной стадии F1 падение ИПЦП ниже -10 свидетельствует о переходе на стадию F2, при исходной стадии F2 рост ИПЦП выше -3 свидетельствует о переходе фиброза на стадию F3, при исходной стадии F3 падение ИПЦП ниже -3 свидетельствует о развитии цирроза печени. 3 пр., 1 табл., 5 ил.
Изобретение относится к иммунологии и медицинской диагностике и представляет собой способ иммунохроматографического анализа. В основе способа лежит контакт мембранной тест-полоски с анализируемой жидкой пробой и инициируемое этим контактом движение по мембранам тест-полоски реагентов, которые содержатся в пробе или нанесены на мембрану и в ходе взаимодействий в порах мембраны или на ее поверхности формируют детектируемые иммунные комплексы. Отличительной особенностью предлагаемого способа определения антигенов является то, что на тест-полоску в зоне контакта с тестируемой пробой дополнительно наносится определенное количество специфических антител, которые при движении фронта жидкости взаимодействуют с определяемым антигеном, потенциально содержащимся в пробе, и блокируют определенное количество сайтов связывания. Количество наносимых свободных антител подбирается таким образом, чтобы при низком их содержании в анализируемой пробе, не имеющем диагностического значения, происходило полное блокирования центров связывания, предотвращающее связывание антигена в аналитической зоне тест-полоски и развитие детектируемой окраски в аналитической зоне. Предлагаемый подход позволяет проводить достоверную диагностику на основании результатов определения антигенов заболеваний желудочно-кишечного тракта, исключая получение положительных результатов тестирования для проб с низким содержанием детектируемых антигенов, не свидетельствующем о протекании у лица - источника тестируемой пробы - процесса развития заболевания. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования уровня артериального давления у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России. Способ включает выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови и анализ генетических полиморфизмов +46G/A ADRB2 и 4a/4b eNOS методом полимеразной цепной реакции. Прогнозируют уровень систолического артериального давления у женщин в конце беременности по результатам уравнения множественной регрессии следующего вида: Y1=15,455+2,544x1+9,946x2+0,736x3+4,716x4+0,185x5, где x1 - генетический вариант по локусу - 4а/4b eNOS, а именно 4b4b=1; 4a4b=2; 4a4a=3; x2 - наличие преэклампсии у родственников: да=0, нет=1; x3 - уровень систолического артериального давления до беременности, мм рт.ст.; x4 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы: да=0, нет=1; x5 - вес женщины до беременности, кг. Прогнозируют уровень диастолического артериального давления у женщин в конце беременности, для чего используют уравнение множественной регрессии следующего вида: Y2=14,200+7,768x1-2,877x2+7,500x3+0,414x4+3,668x5, где x1 - генетический вариант по локусу - 4а4b eNOS, а именно 4b4b+4a4b=1, 4а4а=0; x2 - генетический вариант по локусу+46G/A ADRB2, а именно GG+GA=1, АА=0; x3 - наличие преэклампсии у родственников: да=0, нет=1; x4 - систолическое артериальное давление до беременности, мм рт.ст.; x5 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы: да=0, нет=1. Изобретение позволяет осуществить раннее прогнозирование повышения уровня артериального давления у женщин в конце беременности, позволит формировать среди женщин при прегравидарной подготовке и на ранних сроках беременности группы высокого риска развития гипертензии в конце беременности, а также своевременно реализовывать в этих группах необходимые лечебно-профилактические мероприятия по предупреждению развития данного осложнения беременности. 2 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития сочетания пролиферативных заболеваний репродуктивной системы у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрального Черноземья России. Для этого выделяют ДНК из периферической венозной крови. Проводят анализ комбинаций генетических вариантов полиморфных маркеров генов цитокинов гена регулятора активности нормальной экспрессии и секреции Т-клеток (-403 G/А RANTES), макрофагального воспалительного протеина -1β (+1931 A/T MIP 1β), фактора стромальных клеток (-801 G/A SDF1), интерлейкин-1 (-511 C/T IL-1B), моноцитарного хемоаттарактанта протеина -1 (C/G MCP-1), интерлейкина-4 (-590 С/T IL-4). Прогнозируют повышенный риск развития сочетания миомы матки с эндометриозом и гиперпластическими процессами эндометрия при выявлении сочетания аллелей -403 А RANTES, G MCP-1,+1931 A MIP 1β, -590 C IL-4 или сочетания аллелей -403 А RANTES,+1931 A MIP 1β, -801 G SDF1, -511 C IL-1B. Использование данного способа позволяет выявить группу больных с риском развития сочетанных пролиферативных заболеваний репродуктивной системы, что позволяет назначить адекватную терапию для профилактики дальнейшего прогрессирования заболевания. 3 ил., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения целесообразности проведения иммунологического обследования у работников животноводства. Для этого выявляют хронические инфекционно-воспалительные заболевания (ХИВЗ). Выполняют общий анализ крови и бактериологическое исследование. Затем рассчитывают индекс аллергизации (ИА) и индекс иммунореактивности (ИИР), определяют общее количество микроорганизмов в 1 м3 воздуха рабочей зоны с подсчетом общего микробного числа (ОМЧ). При значении ОМЧ менее 500 КОЕ/м3, отсутствии ХИВЗ, значении ИА менее 1,08 усл. ед., значении ИИР менее 13 усл. ед. считают нецелесообразным проведение иммунологического исследования. При значении ОМЧ 500-2500 КОЕ/м3, выявлении одного ХИВЗ, значении ИА 1,08-1,3 усл. ед., значении ИИР 13,1-15,7 усл. ед. считают целесообразным проведение иммунологического исследования тестами первого уровня. При значении ОМЧ более 2500 КОЕ/м3, наличии не менее двух ХИВЗ, значении ИА 1,4-1,5 усл. ед., значении ИИР 15,8-18,3 усл. ед. считают целесообразным проведение иммунологического исследования тестами второго уровня. Изобретение позволяет выявить работников, нуждающихся в дальнейшем обследовании с целью своевременной иммунокоррекции в условиях массовых периодических осмотров. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно гинекологии, и может быть использовано для выявления риска развития гиперпластических процессов эндометрия у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья России. Выделяют ДНК из периферической венозной крови. Типируют методом полимеразной цепной реакции генетические полиморфизмы гена фактора некроза опухоли α (-308 G/А TNFα), рецептора фактора некроза опухоли 1 (+36 A/G TNFR1), интерферона индуцебельного хемоаттрактанта Т-клеток (А/G I-TAC), интерлейкина 1А (-889 С/Т IL-1A), лимфотаксина α (+250 А/G Ltα). Прогнозируют повышенный риск развития гиперпластических процессов эндометрия при выявлении сочетания аллелей -308 G TNFα, +36 A TNFR1, A I-TAC, -889 T IL-1A и/или сочетания аллелей+36 A TNFR1, A I-TAC, -889 T IL-1A и/или сочетания аллелей -308 G TNFα,+250 G Ltα, -889 T IL-1A. 2 ил., 1 табл., 1 пр.
Наверх