Олигонуклеотидные праймеры для получения библиотеки полноразмерных генов, кодирующих иммунодоминантные белки gn, gc и n вируса лихорадки долины рифт

Изобретение относится к области биотехнологии и касается специфических олигонуклеотидных праймеров. Представленные праймеры включают сайты эндонуклеазного расщепления, фланкирующие участки генома, кодирующие гликопротеины Gn и Gc, а также нуклеопротеин N, для получения библиотеки генов, кодирующих гликопротеины Gn и Gc и нуклеопротеин N вируса лихорадки долины Рифт. Охарактеризованное изобретение может быть использовано в создании банка нуклеотидных последовательностей, кодирующих иммунодоминантные белки вируса лихорадки долины Рифт Gn, Gc и N, которые можно использовать при создании диагностических и вакцинных препаратов, на основе рекомбинантных технологий. 3пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается библиотеки нуклеотидных последовательностей, в составе клонировочного плазмидного вектора.

Лихорадка долины Рифт (ЛДР) - острое трансмиссивное зооантропонозное арбовирусное заболевание, включенное в группу болезней, регулируемых международными медико-санитарными правилами 2005 г. на национальном и региональном уровне [1]. Возбудитель относится к семейству буньявирусов рода Phlebovirus.

Лихорадка долины Рифт наносит огромный социально-экономический ущерб, сопровождающийся большими потерями поголовья скота во время эпизоотии, заболеваниями и гибелью людей, затратами на проведение карантинных и профилактических мероприятий, а также - на госпитализацию и лечение людей.

В регионах Африки животных прививают живой вакциной (штамм «Smithburn»), но в неэндемичных регионах применение живых вакцин запрещено. В данный момент в разработке, или на стадии испытаний, находится ряд кандидатных живых, рекомбинантных и ДНК-вакцин. Для применения среди людей разработана инактивированная вакцина. Однако эта вакцина не лицензирована, и ее нет в продаже. Она используется в экспериментальных целях для защиты ветеринаров и работников лабораторий, подвергающихся высокому риску инфицирования ЛДР [3].

Появление ЛДР за пределами африканского континента создает реальную угрозу для стран Европы и Азии, где присутствуют компетентные векторы. Учитывая опасность появления возбудителя на новых территориях и неопределенность в отношении вакцинопрофилактики, возникает необходимость создания новых научных подходов для прогнозирования, диагностики и профилактики данного заболевания.

Так, в работе зарубежных исследователей L. Liu, Cr. Celma и P. Roy «Rifit Valley fever virus structural proteins: expression, characterization and assembly of recombinant proteins» описан процесс получения рекомбинантных белков Gn, Gc и N, а также их последующая характеристика и анализ.

Определенные успехи имеются и по конструированию рекомбинантных и ДНК-вакцин. Так N. Bhardwaj с соавторами показали индукцию высоких титров вируснейтрализующих антител после инокуляции мышей плазмидой, экспрессирующей химерный белок Gn-C3d [5].

G. Lorenzo с соавторами (2010) получили защиту, иммунизируя различными ДНК конструкциями. Положительные результаты получили Н. Boshra с соавторами (2012), добившиеся защиты от контрольного заражения вирулентным вирусом, после ДНК-иммунизации конструкцией, экспрессирующей убиквитинизорованный нуклеопротеин N вируса ЛДР.

В работах по конструированию рекомбинантных вакцин гены, кодирующие протективные белки ЛДР, клонируют в безопасных вирусных векторах. Подобные конструкции получены Elena Lopez-Gil с соавторами (2013), на основе модифицированного вируса vaccinia Ankara (rMVA), на основе вируса болезни Ньюкасла Kortekaas J, с соавторами (2010) и др.

Для проведения подобных исследований, а также решения различных теоретических задач (например, определение нуклеотидной последовательности генома штаммов, изучения структуры, функции и регуляции индивидуальных генов, структуры и функции белков) получают библиотеку генов, кодурующие иммунодоминантные белки вируса ЛДР, которую можно использовать для создания диагностических и вакцинных препаратов на основе рекомбинантных технологий. Вставки из библиотеки благодаря сайтам рестрикции позволяют переклонировать кодирующие последовательности под различные промоторы (Т5, Т7, CMV и др.) и вектора (плазмиды, фаги, вирусы).

Поэтому целью изобретения является конструирование олигонуклеотидных праймеров для получения библиотеки полноразмерных генов, кодирующих иммунодоминантные белки Gn, Gc и N, вируса лихорадки долины Рифт.

Поставленная цель достигается синтезом специфических праймеров, фланкирующих участки нуклеотидных последовательностей генома ЛДР для получения библиотеки.

В табл.1 приведены последовательности специфических праймеров для амплификации полноразмерных копий кДНК, кодирующих иммунодоминантные белки вируса ЛДР.

название и включенный сайт рестрикции нуклеотидная последовательность* длина, nt. фланкируемый участок
F-RVFV-Gn EcoRI 5′-CTCGAATTCATGCCTCATCTCAGAAACAGACCA-3′ 33 M segment 474…2067 nt 1626 nt
R-RVFV-Gn Sail 5′-CCGGTCGACTTATGATGCATATGAGACAATCAA-3′ 33
F-RVFV-Gc EcoRI 5′-CGCGAATTCATGTGTTCAGAACTAATTCAGGCA-3′ 33 M segment 2079…3474 nt 1428 nt
R-RVFV-Gc Sail 5′-CCGGTCGACTTACTTAAGAGGCCCTCCAAACCA-3′ 33
F-RVFV-Np Sail 5′-CCCGTCGACTTAGGCTGCTGTCTTGTAA-3′ 28 S segment 906…1635 nt 757 nt
R-RVFV-Np StuI 5′-CCGAGGCCTAATGGACAACTATCAAGAG-3′ 28
* сайт рестрикции указан подчеркиванием.

Технический результат заключается в создании банка нуклеотидных последовательностей, кодирующих иммунодоминантные белки вируса лихорадки долины Рифт Gn, Gc и N, которые можно использовать при создании диагностических и вакцинных препаратов, на основе рекомбинантных технологий.

Сущность изобретения состоит в том, что специфические праймеры предназначены для получения библиотеки генов, кодирующих иммунодоминантные белки вируса лихорадки долины Рифт Gn, Gc и N и содержат сайты рестрикции для дальнейшей манипуляций с нуклеотидными последовательностями вставок.

Примеры конкретного выполнения

Пример 1. Получение библиотеки генов включает в себя следующие этапы:

1. Освежение и наработка вирусного материала (Мыши-сосуны и/или чувствительная культура клеток).

2. Выделение РНК из вируссодержащего материала (Методами с использованием 4М ГТЦ, реактива Trizol©, либо с использованием коммерческих наборов: GeneJET RNA Purification Kit (Thermo Scientific) и др.).

3. Постановка ОТ ПЦР на матрице пула РНК (С использованием случайных гексамерных или специфических праймеров).

4. Амплификация полноразмерных копий кДНК, кодирующих соответствующие белки.

5. Клонирование амплификатов в клонировочном векторе (плазмиды, фаги и др.).

В качестве источника может выступать вируссодержащий материал (зараженная культура клеток, патологический материал, лиофилизированная закладка) вакцинного или эпизоотического штамма вируса ЛДР. В случае необходимости вирус освежают и нарабатывают:

Вирус титром не ниже 3,0 lg освежают внутримозговым заражением суточных мышей-сосунов дозой 0,1 мл на голову. Через 48-72 часа отбирают мышат с явными клиническими признаками: светобоязнь, цианотичность слизистых, параличи и другие нервные явления. У данных особей асептически отбирают головной мозг и готовят 10%-ную суспензию на физиологическом растворе и перемещают на -40°C.

Вирус титром не ниже 4,0 lg освежают на чувствительной культуре клеток: почка сайги «ПС», почка зеленой мартышки «CV-1», почка сирийского хомячка «ВНК» и др. Доза заражения составляет 10-3-10-4 ТЦД50/кл. На 3-5 сутки, при достижении ЦПД порядка 40-50% культуральную жидкость сливают, а монослой заливают буфером ТЕ рН 7,0 и перемещают на -40°C.

Выделение тотального пула РНК из вируссодержащего материала проводят по стандартным методикам с использованием 4М ГТЦ, реактива Trizol и др., либо с применением коммерческих наборов GeneJET RNA Purification Kit (Thermo Scientific) и др. Вируссодержащим материалом служат вышеописанные подготовленные образцы.

Постановка ОТ ПЦР осуществляется согласно паспорту выбранной ревертазы, с использованием random, либо специфических праймеров, приведенных в табл.1. В качестве РНК-зависимой ДНК полимеразы могут выступать AMV и M-MLV ревертазы различных производителей (Promega, Fermentas, α фермент). Полученная кДНК может хранится при -40°C в течение месяца.

Постановка ПЦР на полученных кДНК. В качестве ДНК-зависимой ДНК полимеразы могут выступать полимеразы различных производителей, вносящие небольшое количество нуклеотидных замен при амплификации протяженных участков.

Постановка проводилась в с использованием рассчитанных специфических праймеров, приведенных в табл. 1.

Пропись ПЦР смеси

матрица к ДНК - 0,5 мкл

10Х Buffer (with 2,5 mM MgCl2) - 2,0 мкл

10 mM dNTP mix - 0,4 мкл

10 рМ F-праймер - 1,0 мкл

10 рМ R-праймер - 1,0 мкл

Pfu-полимераза - 0,5 мкл (1,25 u)

DNAse-free Н2O - 14,6 мкл

Температурно-временные профили реакции

Для амплификации полноразмерных копий кДНК, кодирующих гликопротеины Gn и Gc:

95°C - 2 мин.

22 цикла:

95°C - 30 сек.

55°C - 30 сек.

72°C - 3 мин. 20 сек.

72°C - 7 мин.

Для амплификации полноразмерных копий кДНК, кодирующих нуклеопротеин N:

95°C - 2 мин.

22 цикла:

95°C - 30 сек.

55°C-30 сек.

72°C - 1 мин. 35 сек.

72°C - 3 мин.

Детекцию и подтверждение моллекулярной массы ПЦР продуктов проводят в 1,2%-ом ТАЕ или ТВЕ агарозном геле, с EtBr в качестве интеркалирующего красителя.

Молекулярные массы ПЦР продуктов, полученные после постановки ОТ ПЦР на матрице генома ЛДР штамма «1974 ВНИИВВиМ»:

Амплификоны Gn - 1626 bp;

Амплификоны Gc - 1428 bp;

Амплификоны N - 757 bp.

Библиотека генов вируса лихорадки долины Рифт, представляет собой неполную библиотеку нуклеотидных последовательностей, кодирующие основные иммунодоминантные белки: гликопротеины Gn и Gc, а также нуклеопротеина N в составе клонировочных векторов.

Существенным отличием данных клонировочных праймеров заключается в том, что в последовательности праймеров включены сайты эндонуклеазного расщепления с температурой отжига для гликопротеинов 57°C, для нуклеопротеина - 55°C.

Пример 2. Клонирование амплификатов Gn и Gc, нуклеопротеина N вируса ЛДР штамма «1974-ВНИИВВиМ» в плазмидном векторе

Благодаря амплификации копий кДНК с применением Pfu-полимеразы концы фрагментов остаются «тупыми», т.е. полимераза не навешивает дополнительные нуклеотиды на его концы.

Клонирование проводят в плазмидном векторе pJET1.2, используя коммерческий набор CloneJET PCR Cloning Kit. (Thermo Scientific). Особенностью клонирования в данном векторе является то, что клонирование проводят по «тупым» концам, с негативно летальным скринингом (вставка нарушает рамку считывания летального гена Есо471К в составе плазмиды).

Клонирование проводят согласно стандартной прописи набора. Для этого 1 мкл неочищенного Reaction Buffer, ПЦР продукта вносят в смесь, состоящую из 10 мкл 2Х Buffer, 1 мкл pJET1.2/Blunt, DNAse-free Н2O - 7 мкл. Перемешивают на вортексе 3-5 сек., затем вносят 5u Т4 DNA Ligase. Инкубируют при 22°C в течение 10 мин.

Трансформацию проводят с применением реактивов TransformAid Bacterial Transformation Kit (Termo Scientific). В качестве компетентных клеток Е. Coli выбран штамм KRX (Promega).

Дальнейший скрининг ведут в отношении колоний, выросших на чашках Петри на среде с добавлением ампициллина.

Наиболее простым методом является ПЦР анализ. Для этого единичные, обособленные колонии делят надвое, половину вносят в 2 мл питательной среды SOB с добавлением ампициллина, вторую половину - в подготовленную ПЦР смесь:

10Х Buffer (with2,5 mM MgCl2) - 2,0 мкл

10 mM DNTP mix - 0,4 мкл

10 рМ F-праймер - 1,0 мкл

10 рМ R-праймер - 1,0 мкл

Tag-полимераза - 0,5 мкл (2,5 u)

DNAse-free Н2O - 15,0 мкл

Температурно-временной профиль реакции:

Для скрининга клонов, содержащие вставку гликопротеинов Gn или Gc:

98°C - 2 мин.

25 цикла:

95°C - 30 сек.

57°C - 30 сек.

72°C - 1 мин. 45 сек.

72°C - 4 мин.

Для скрининга клонов, содержащие вставку нуклеопротеина №98°C - 2 мин.

25 циклов:

95°C - 30 сек.

57°C - 30 сек.

72°C - 48 сек.

72°C - 2 мин.

Детекцию и контроль молекулярной массы ПЦР продуктов проводят в 1,2%-ном ТАЕ агарозном геле с добавлением EtBr.

Клоны, в пробах которых имеются ПЦР продукты заданной моллекулярной массой нарабатываются.

После выделяется плазмида и направляется на секвенирование с использованием «pJET1.2 sequencing primers». По результатам секвенирования отбирают клоны, несущие плазмиды с ненарушенной рамкой считывания, данную клонотеку закладывают аликвотами.

Пример 3. Применение библиотеки генов вируса ЛДР штамма «1974-ВНИИВВиМ»

Благодаря наличию сайтов эндонуклеазного расщепления (в случае гликопротеинов Gn и Gc - Sail и EcoRI, нуклеопротеина N - Sail и StuI) данные библиотеки могут выступать в роли источников специфических вставок с сохранием рамок считывания в плазмидные вектора рЕТ32а (нуклеопротеин - в pET32b), pET20b, pCI-neo и т.д.

Данные нуклеотидные последовательности вставок могут быть использованы для получения продуцентов рекомбинантных белков, в частности, работа по получению хроматографически очищенного препарата рекомбинантного нуклепротеина N вируса ЛДР [Методические положения по хроматографической очистке рекомбинантного нуклеопротеина N вируса лихорадки долины Рифт (ЛДР). Балышева В.И., Казакова А.С., Иматдинов И.Р., 2013].

В качестве продуцента выступает культура клеток E.Coli штамма KRX с экспрессирующей плазмидой pET32b/RVFV/Np/3/9b. Для переклонирования вставки плазмиду из библиотеки, содержащую нуклеотидную последовательность, кодирующую нуклеопротеин N, рестрицировали по сайтам эндонуклеазного расщепления StuI и Sail. Вектор рЕТ32b рестрицирован Sail и EcoRV.

Лигирование, трасформация и скрининг клонов проводятся по стандартным методикам (M.R. Green и J. Sambrook, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 4th Edition, 2012) и могут выполняться любым известным исследователю способом.

Данные нуклеотидные последовательности вставок могут быть использованы для создания кандидатных ДНК вакцин.

Перспективность работ касательно ДНК-иммунизации при ЛДР показали в своих работах ряд зарубежных исследователей (W. Sheng, W. Вао, 2007; N. Lagerqvist, J. Naslund, 2009; G Lorenzo, R. Martin-Folgar, 2010).

Для создания конструкций, экспрессирующих в эукариотической системе, был выбран плазмидный вектор pCI-neo (Promega). Данный вектор содержит «сильный» цитомегаловирусный промотор, что обеспечивает экспрессию целевого белка в различных культурах клеток.

Для переклонирования гликопротеинов Gn и Gc, плазмиды из библиотеки, содержащие нуклеотидные последовательности, кодирующие гликопротеин Gn и гликопротеин Gc, соответственно, рестрицировали по сайтам эндонуклеазного расщепления EcoRI и Sail. Вектор pCI-neo рестрицирован Sail и EcoRI.

Лигирование, трасформация и скрининг клонов проводили по стандартным методикам (M.R. Green и J. Sambrook, 2012, (Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 4th Edition) и могут выполняться любым известным исследователю способом.

После иммунизации мышей изотоническим раствором плазмид pCI-neo/Gn/1 и pCI-neo/Gc/1 на 14 сутки наблюдали рост титра специфических антител, который составил 1:160-1:320.

Источники информации

1. Всемирная организация здравоохранения. Международные медико-санитарные правила (2005 г.). - 2-е изд. - Швейцария, 2008. 82 с. - ISBN 978 92 4 458041 7.

2. Информационный бюллетень №207. ВОЗ. «Лихорадка Рифт-Валли». http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs207/ru/index.html.

3. Проект Эпидемиолог.ру. «Лихорадка Рифт-Валли». http://view-source:www.epidemiolog.ru/prof/1582.html.

4. Public Health England. «Rift Valley Fever Advice for Health Professionals, 23 May 2011». http://www.hpa.org.uk/web/HPAweb&Page&HPAwebAutoListName/Page/1274087829165.

5. Bhardwaj N, Pierce BR, Ross TM (2012) Immunization with DNA Vaccine Expressing Gn Coupled to C3d Prevents Clinical Symptoms of Infection and Protects Mice against an Aerosol Rift Valley Fever Virus Infection. J Bioterr Biodef S3:006. doi: 10.4172/2157-2526.S3-006.

Специфические олигонуклеотидные праймеры с включенными сайтами эндонуклеазного расщепления, фланкирующие участки генома, кодирующие гликопротеины Gn и Gc, нуклеопротеин N, для получения библиотеки генов, кодирующих гликопротеины Gn и Gc, нуклеопротеин N вируса лихорадки долины Рифт, имеющие следующий нуклеотидный состав и сайты рестрикции:
F-RVFV-Gn (EcoRI) 5′-CTCGAATTCATGCCTCATCTCAGAAACAGACCA-3′
R-RVFV-Gn (SalI) 5′-CCGGTCGACTTATGATGCATATGAGACAATCAA-3′
F-RVFV-Gc (EcoRI) 5′-CGCGAATTCATGTGTTCAGAACTAATTCAGGCA-3′
R-RVFV-Gc (SalI) 5′-CCGGTCGACTTACTTAAGAGGCCCTCCAAACCA-3′
F-RVFV-Np (SalI) 5′-CCCGTCGACTTAGGCTGCTGTCTTGTAA-3′
R-RVFV-Np (StuI) 5′-CCGAGGCCTAATGGACAACTATCAAGAG-3′



 

Похожие патенты:

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются олигонуклеотидных праймеров и способа выявления ДНК Mycobacterium avium с их использованием. Охарактеризованные олигонуклеотидные праймеры комплементарны специфичной области mig-гена Mycobacterium avium и имеют следующий нуклеотидный состав: 5'-CGT CAA AAG CGA ACT GCA-3' и 5'-ТАА ТТС GTT GCC CGA СТС-3'. Способ выявления ДНК Mycobacterium avium выключает выделение ДНК, проведение амплификации ДНК с использованием олигонуклеотидных праймеров, перенос продукта амплификации на гель с последующим детектированием результатов анализа на трансиллюминаторе.

Изобретение относится к области кардиологии и касается набора синтетических олигонуклотидов. Представленный набор используется для выявления мутаций кодирующей части генов NKX2.5, CFC1, GATA4, ассоциированных с орфанной моногенной патологией, лежащей в основе семейных форм врожденных пороков сердца.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к паре синтетических олигонуклеотидных праймеров, применяемых для выделения ДНК провируса и РНК вируса иммунодефицита кошек, и к способу диагностики вирусного иммунодефицита кошек с использованием данных праймеров.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к набору олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации вируса лихорадки долины Рифт методом обратно транскриптазной полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу подвидовой дифференциации штаммов возбудителя чумы. Способ предусматривает выделение ДНК, проведение ПЦР с применением синтезированных праймеров для амплификации фрагментов межгенных участков wzyE-dapF и YPDF_0064-YPDSF_0065 исследуемого штамма.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к лентивирусной доставке апоптина в опухолевые ткани, и может быть использовано в медицине. Способ включает получение лентивирусного конструкта, экспрессирующего модифицированный апоптин, слитый с секреторным сигналом лактотрансферрина и трансдукторным сигналом (ST-CTP-апоптин), с последующим получением рекомбинантных лентивирусных частиц, дефектных по репликации и несущих модифицированный апоптин, которые затем вводятся в Т-лимфоциты (TILs), полученные при хирургическом удалении опухоли или в процессе получения биопсии, которые обладают способностью проникать в опухолевые ткани.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу анализа соматических мутаций в генах EGFR, KRAS и BRAF. Способ включает амплификацию фрагментов генов EGFR, KRAS и BRAF с помощью LNA-блокирующей мультиплексной «гнездовой» ПЦР, в которой в качестве матрицы для амплификации используется образец опухолевой ДНК.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики вагинита у женщин репродуктивного возраста. Во влагалищных соскобах измеряют уровни экспрессии мРНК генов TNF, IL18, GATA3 и TLR4.

Группа изобретений относится к области биотехнологии, в частности к микроматричной геномной селекции (MGS). Устройство содержит:(a) по меньшей мере одну реакционную зону, содержащую микроматрицу, одну или более единиц контроля и регуляции температуры для контроля и регуляции температуры внутри реакционной зоны; (b) по меньшей мере одну нереакционную зону, содержащую одну или более единиц контроля и регуляции температуры для контроля и регуляции температуры внутри нереакционной зоны, которая соединена с возможностью переноса жидкости с реакционной зоной; и (c) по меньшей мере одно средство переноса, способное генерировать и/или регулировать поток жидкости между указанной реакционной зоной (а) и указанной нереакционной зоной (b).

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу выявления устойчивых к пиразииамиду изолятов Mycobacterium tuberculosis, путем определения наличия мутаций в гене pncA, ассоциированных с формированием устойчивости к пиразинамиду, посредством проведения ПЦР в режиме «реального времени» с использованием HRM-анализа.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для идентификации гетеромультимерных убиквитинов со способностью связываться с лигандом-антигеном.

Представлены композиция и способ ее получения. Охарактеризованная композиция содержит: эффективное количество вирусного антигена, который представляет собой живой аттенуированный ротавирус, предварительно обработанный 0,1% сывороточным альбумином человека, и фармацевтически приемлемый буфер.

Изобретения касаются инфекционной молекулы нуклеиновой кислоты, кодирующей инфекционный вирус Torque teNO свиней (PTTV), которая содержит по меньшей мере одну копию геномной последовательности, выбранной из группы, состоящей из последовательностей, соответствующих генотипам или подтипам PTTV1a-VA, PTTV1b-VA, PTTV2b-VA и PTTV2c-VA, а также биологически функциональной плазмиды или вирусного вектора, содержащего такую инфекционную нуклеотидную геномную последовательность, и клетки-хозяина, содержащей такую плазмиду или вектор.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picomaviridae, рода Aphtovirus.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии. Объектом изобретения является новый штамм вируса Сендай Sen293nsk1, адаптированный к эффективному размножению в культуре клеток человека НЕК293.
Данное изобретение имеет отношение к таким композициям и фармацевтическим композициям, которые включают поксвирусы, и более конкретно, которые включают внеклеточные оболочечные вирусы.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и касается синтетических олигонуклеотидных праймеров и способа их использования. Предложенный способ выявления и дифференциации генома вакцинного штамма В-82 от полевых изолятов вируса миксомы кроликов включает: выделение ДНК из биологического материала, постановку мультиплексной полимеразной цепной реакции с использованием синтезированных праймеров, комплементарных участкам генов M130R и M151R вируса миксомы кролика и имеющих следующий нуклеотидный состав: амплификацию ДНК вируса и оценку проведения реакции.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и иммунологии. В частности, настоящее изобретение относится к новому птичьему астровирусу; к антителам и их фрагментам, направленным против указанного нового вируса; к антигенным препаратам, белкам и ДНК-молекулам нового птичьего астровируса; к вакцинам на основе указанного нового вируса или к его антигенным препаратам, белку или ДНК; к способам получения таких вакцин и к диагностическим наборам.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Предложен способ получения вирусов гриппа А или В в культуре клеток, и композиция клеточной культуры для получения вирусов гриппа А или В.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Предложен способ получения вирусоподобных частиц вируса гриппа (ВПЧ) в растении или его части.

Изобретения касаются штаммов вируса гриппа A/PR/8/59/M2 (H1N1), A/Калифорния/1/66 (H2N2) и A/Токио/3/67 (H2N2). Вакцинные штаммы A/59/M2/Калифорния/66/2211 (H2N2) и A/59/M2/Токио/67/22111 (H2N2) - реассортанты, полученные путем скрещивания эпидемических вирусов A/Калифорния/1/66 (H2N2) и А/Токио/3/67 (H2N2) с холодоадаптированным температурочувствительным вирусом A/PR/8/59/M2 (H1N1). Штаммы A/59/M2/Калифорния/66/2211 (H2N2) и A/59/M2/Токио/67/22111 (H2N2) характеризуются температурочувствительностью, холодоадаптированностью, безвредностью и иммуногенностью для лабораторных животных. Реассортанты унаследовали два гена, кодирующие поверхностные антигены вируса (гемагглютинин и нейраминидазу), от эпидемического вируса и остальные шесть генов, кодирующие негликозилированные белки, от донора аттенуации A/PR/8/59/M2 (H1N1). Представленные изобретения могут быть использованы при получении живой гриппозной интраназальной вакцины для взрослых и детей. 3 н.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл., 1 пр.
Наверх