Способ интраоперационной оценки состояния периферических нервов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2555750:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ярославская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение описывает способ интраоперационной оценки состояния периферических нервов путем выявления положительной активности ацетилхолинэстеразы. Способ заключается в изготовлении криостатных срезов нерва, промывании их в двух порциях малеатного буфера, инкубации в инкубационной среде. Инкубацию производят в течение 30-60 минут и инкубационная среда имеет следующий состав: ацетилхолин иодид 10 мг; 0,1М Na-малеатный буфер 2 мл; 0,1М цитрат натрия 4 мл; 0,03М сульфат меди 4 мл; 0,005М феррицианид калия 4 мл; рН среды составляет от 7,4 до 7,6 и температура от 50 до 55°C. Способ по изобретению позволяет в короткое время оценить жизнеспособность периферических нервов, что необходимо во время реконструктивно-восстановительных и высокотехнологичных нейрохирургических операций. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к реконструктивной микрохирургии, и предназначено для интраоперационной оценки состояния периферических нервов.

Оценка состояния периферических нервов, банкированных фрагментов нервов представляет значительный интерес для нейрохирурга, т.к. исход восстановительных и реконструктивных операций напрямую зависит от жизнеспособности подшиваемых нервов. Оценить, есть ли в нерве прорастание нервных волокон, сохранен ли в поврежденном нервном стволе обмен медиатора, есть ли аксональный ток, невозможно без применения специальных морфологических методов.

Известны электрофизиологические методы оценки проводимости по нерву: электростимуляция нерва, электромиография (Одинак М.М., Живолупов С.А. Заболевания и травмы периферической нервной системы (обобщение клинического и экспериментального опыта): руководство для врачей. - М.: СпецЛит, 2009, 384 с). Импульс, вызванный электростимуляцией нерва, направляется по двигательным, чувствительным и смешанным нервам, и характеристики проведения импульса оцениваются с помощью записи потенциалов с мышц, либо непосредственно с нерва. Если нерв поврежден и еще не произошло восстановления контакта с мишенями иннервации, то значение этих методов резко снижается. Кроме того, они не могут использоваться во время восстановительных и реконструктивных микрохирургических операций из-за сложности определения проекции тонких ветвей нервов.

Наиболее близким техническим решением (прототипом) предлагаемого способа является метод Karnovsky M.J., Roots L. (Karnovsky M.J., Roots L., 1964 A ′′direct-coloring′′ Thiocholine method for cholinesterase, J. Histochem. Cytochem., 12, 219-22), который используется для выявления положительной активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ) в нервной ткани, определения системной принадлежности нервных проводников и изучения особенностей постсинаптической мембраны в нервно-мышечных синапсах соматических мышц (Николаев Г.М. Изменение активности ацетилхолинэстеразы в моторных окончаниях поперечнополосатой мускулатуры при гипоксической гипоксии / Г.М. Николаев // Архив патологии, - 1970. - №3, - с.61-65).

Фермент ацетилхолинэстераза образуется в соме нейрона и транспортируется по аксону к пресинаптическим нервным окончаниям или к нейромышечным синапсам (Диксон М., Уэбб Э., Ферменты, пер. с англ., т.I, М., 1982, с.363-364). Позитивная реакция на АХЭ является признаком сохранения синтетических и транспортных процессов в соме нейрона и его отростках. Позитивная реакция может проявляться только в осевых цилиндрах проводников и не зависит напрямую от состояния миелиновых оболочек. Негативная реакция на АХЭ свидетельствует о том, что в данном фрагменте нерва еще нет прорастающих волокон.

Определение активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ) по Карновскому-Рутс выполняется следующим образом: забирают материал, затем изготавливают замороженные срезы, фиксируют образцы в 10% формалине до суток, промывают в двух порциях натрий-малеатного буфера по 5 минут в каждой, инкубируют в специальной среде: ацетилхолин иодид 10 мг; 0,1М Na-малеатный буфер 2 мл; 0,1М цитрат натрия 4 мл; 0,03М сульфат меди 4 мл; 0,005М феррицианид калия 4 мл, ингибитор неспецифической холинэстеразы (1,0 мл 10-4 М изо-ОМФА) при температуре 4°С, рН 6,0-24 часа, промывают дистиллированной водой, заключают в бальзам, микроскопируют. Общая длительность реакции составляет 18-24 часа.

Этот метод является специфичным для выявления определенной фракции ацетилхолинэстеразы.

Недостатки этого метода следующие: сложность и длительность процедуры, вследствие чего невозможность использования его интраоперационно.

Целью предлагаемого способа является упрощение процедуры и сокращение времени определения состояния периферического нерва.

Поставленная цель достигается тем, что изменяется режим инкубации: время инкубации от 30 до 60 мин, и состав инкубационной среды: отсутствует ингибитор неспецифической холинэстеразы, рН среды составляет от 7,4 до 7,6, температура от 50 до 55°C.

Предлагаемый способ оценки состояния периферических нервов по активности АХЭ позволяет за короткий промежуток времени провести исследование их жизнеспособности, что дает возможность использовать его интраоперационно.

Новизна предлагаемого способа заключается в том, что значительно сокращается время инкубации, инкубационная среда имеет более простой состав: ацетилхолин иодид 10 мг; 0,1М Na-малеатный буфер 2 мл; 0,1М цитрат натрия 4 мл; 0,03М сульфат меди 4 мл; 0,005М феррицианид калия 4 мл, а ее рН составляет от 7,4 до 7,6; температура от 50 до 55°C.

Технические решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого нами способа, не выявлены, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого способа критерию «изобретательский уровень».

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом: во время операции забирают фрагмент нерва, затем изготавливают криостатные срезы. Полученные срезы наклеивают на предметные стекла, промывают в двух порциях малеатного буфера, помещают в инкубационную среду следующего состава: ацетилхолин иодид 10 мг; 0,1М Na-малеатный буфер 2 мл; 0,1М цитрат натрия 4 мл; 0,03М сульфат меди 4 мл; 0,005М феррицианид калия 4 мл, при температуре от 50 до 55°C, рН 7,4-7,6. Время инкубации 30-60 минут. После инкубации проводят микроскопию срезов для выявления активности ацетилхолинэстеразы (АХЭ). Если реакция на ацетилхолинэстеразу позитивна, нерв считается жизнеспособным; если негативна - нерв оценивается как нежизнеспособный. Срезы обезвоживают, заключают в бальзам, фотографируют для документирования.

Пример 1. Пациент Т. 27 лет, диагноз: частичный левосторонний паралич лицевого нерва. Во время операции для определения состояния ствола лицевого нерва был взят отрезок нерва длиной 0,3 см. Отрезок нерва доставили в лабораторию, приготовили криостатные срезы 40 мкм, промывали их в двух порциях малеатного буфера, помещали в инкубационную среду с рН 7,4, температурой 52°C, время инкубации 45 мин. Через 45 минут срезы промыли в дистиллированной воде и произвели микроскопирование. В результате было установлено, что активность ацетилхолинэстеразы в стволе положительна, ствол нерва жизнеспособный. Затем произвели восстановление поврежденного лицевого нерва с помощью нервного аутотрансплантата, вшитого между стволом лицевого нерва и его скуловой ветвью. В качестве нервного аутотрансплантата был использован икроножный нерв. Достигнуто восстановление мимики левой стороны лица.

Пример 2. Больной М. 35 лет поступил в клинику с диагнозом: повреждение правого плечевого сплетения. Выполнялась операция по восстановлению целостности поврежденных нервов. Во время операции было обнаружено повреждение срединного нерва и неврома на протяжении. Была удалена часть нерва, которая содержала неврому. После удаления части поврежденного нерва возникла необходимость пластики нерва икроножными нервными аутотрансплантатами, так как был дефект нерва 7 см. После чего возник вопрос: не поврежден ли нерв проксимальнее? Для оценки состояния проксимальной части срединного нерва была взята часть нерва 0,3 см для интраоперационной гистохимической оценки состояния. Данный образец был доставлен в лабораторию, где образцы нерва замораживали в криостате и изготавливали криостатные срезы, 40 мкм. Срезы промывали в двух порциях буферного раствора (0,1М Na-малеатный буфер, рН=7,6). Далее срезы помещались в инкубационную среду с рН=7,6. Инкубировали в термостате при температуре 55°C в течение 30 минут. Через 30 минут срезы промывали в дистиллированной воде и производили микроскопирование. В результате было установлено, что нерв на данном уровне имеет положительную ацетилхолинэстеразную активность, что дало возможность сократить расстояние между поврежденными нервами и тем самым уменьшить размеры икроножных нервных аутотрансплантатов для замещения дефекта нерва. В результате оперативного вмешательства появилась подвижность правой кисти.

Предлагаемый способ использовался в хирургической клинике при операциях аутотрансплантации периферических нервов.

Способ интраоперационной оценки состояния периферических нервов путем выявления положительной активности ацетилхолинэстеразы, заключающийся в изготовлении криостатных срезов нерва, промывании их в двух порциях малеатного буфера, инкубации в инкубационной среде, отличающийся тем, что инкубацию производят в течение 30-60 минут в инкубационной среде, которая имеет следующий состав: ацетилхолин иодид 10 мг; 0,1М Na-малеатный буфер 2 мл; 0,1М цитрат натрия 4 мл; 0,03М сульфат меди 4 мл; 0,005М феррицианид калия 4 мл, pH от 7,4 до 7,6 и температуру от 50 до 55°C.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики стафилококковой аллергии при аллергическом рините. Сущность способа состоит в том, что с помощью хемилюминесцентного анализа исследуют функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов, рассчитывают индекс образования активных форм кислорода (ИОАФК), представляющий собой отношение площади под кривой люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов, индуцированной живой бактериальной суспензией золотистого стафилококка, ко времени выхода на максимум люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов, индуцированной живой бактериальной суспензией золотистого стафилококка.

Изобретение относится к кардиологии и представляет собой способ определения вероятности сохранения миокарда от инфарктного повреждения, для чего создается «база данных» на основе исследования на момент поступления 7 параметров периферической крови, 11 параметров биохимического анализа крови и 6 параметров стандартной 12-канальной электрокардиограммы у 200 больных с Q-инфарктом миокарда и 200 больных, у которых развитие инфаркта миокарда не происходило.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использована в лабораторной диагностике как тест-система и способ определения антивирусной активности интерферона альфа (ИФН-α) в сыворотке крови человека.
Изобретение относится к медицине и описывает способ диагностики инфицированного панкреонекроза с установлением показаний к оперативному вмешательству путем обследования больного, где газохроматографическим методом определяют в крови содержание уксусной, пропионовой, масляной и изовалериановой кислот и при концентрации уксусной кислоты больше 0,11 ммоль/л устанавливают наличие инфицированного панкреонекроза, а при концентрации любой из трех кислот: пропионовой больше 0,0095 ммоль/л, масляной больше 0,0035 ммоль/л, изовалериановой больше 0,0003 ммоль/л - устанавливают наличие инфицированного панкреонекроза с активным развитием анаэробной инфекции, требующего одного из вариантов оперативного вмешательства.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования вероятности снижения скорости клубочковой фильтрации (СКФ) через 3 месяца наблюдения после аортокоронарного шунтирования без искусственного кровообращения (АКШ без ИК).
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам диагностики и может быть использовано для диагностики угрозы оценки формирования анемии на третьем триместре беременности вследствие снижения процессов оксигенации гемоглобина при обострении цитомегаловирусной инфекции.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии. Проводят нейровизуализационное исследование головного мозга, определяют коэффициент коморбидности Cirs и коэффициент коморбидности Kaplan-Feinstein, выявляют кохлеовестибулярный синдром, глазодвигательные расстройства, тип сахарного диабета.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для неинвазивной экспресс-диагностики воспалительного процесса в кишечнике у телят. Способ включает определение в кале лейкоцитов, белка, гемоглобина и pH-реакции кала.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики вагинита у женщин репродуктивного возраста. Во влагалищных соскобах измеряют уровни экспрессии мРНК генов TNF, IL18, GATA3 и TLR4.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к способу анализа еx-vivo, будет ли больной раком субъект отвечать терапевтически на способ лечения. Для этого от пациента получают биологический образец, выбранный из группы, состоящей из образца общей крови, плазмы или сыворотки.
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики кариеса зубов методом инфракрасной спектроскопии. Для этого образец слюны пациента предварительно высушивают, сухой остаток измельчают и суспензируют в вазелиновом масле. ИК-спектроскопию проводят в области спектра 1200-800 см-1 и определяют высоту пиков полос поглощения с максимумами 1070, 1017, 960, 860 см-1. Затем вычисляют значения четырех соотношений высоты пика с максимумом при 1070 см-1 к высоте пика с максимумом 1017 см-1, высоты пика с максимумом при 1070 см-1 к высоте пика с максимумом 960 см-1, высоты пика с максимумом при 1070 см-1 к высоте пика с максимумом 860 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1017 см-1 к высоте пика с максимумом 860 см-1. Кариес зубов диагностируют при следующих значениях соотношений высот пиков 1070/1017, равных 11,64±0,14, высот пиков 1070/960, равных 1,08±0,12, высот пиков 1070/860, равных 6,40±0,41, и высот пиков 1017/860, равных 4,15±0,44. Изобретение обеспечивает информативность диагностики и повышает ее точность. 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов. Изобретение позволяет получить полипептид, обладающий ингибиторной активностью в отношении агрегации тромбоцитов и/или ингибиторной активностью в отношении адгезии тромбоцитов. 6 н. и 4 з.п. ф-лы, 4 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и гастроэнтерологии. Способ диагностики наличия и стадии фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С заключается в том, что определяют концентрации ГГТ, ТФР-β1, ТИМП-1 и комплекс ММП-9/ТИМП-2 в сыворотке крови, на 1-м этапе рассчитывают вероятность наличия HCV-ассоциированного фиброза печени (РНФП) по формуле: РНФП=(ey/(1+ey))×100%, где y=-13,6+3,78·X1-0,1·X2 где X1 - сывороточное значение прогностического фактора ММП-9/ТИМП-2, X2 - сывороточное значение прогностического фактора ТИМП-1, ey - экспоненциальная функция. При значении РНФП>50% прогнозируют наличие HCV-ассоциированных фиброзных изменений в печени. Далее на 2-м этапе рассчитывают вероятность стадии HCV-ассоциированного фиброза печени (РСФП) по формуле: РСФП=(ey/(1+ey))×100%, где y=-12+0,134317·X1+0,527778·X2-0,05·X3, где X1 - сывороточное значение прогностического фактора ММП-9/ТИМП-2, X2 - сывороточное значение прогностического фактора ТФР-β1; X3 - сывороточное значение прогностического фактора ГГТ. При значении РСФП>50% диагностируют наличие предцирротической стадии фиброза и цирроза печени при ХВГС (F3-4 ст.), при РСФП<50% - HCV-ассоциированного фиброза печени начальной стадии (F0-2 ст.). Заявленный способ является простым в исполнении, доступным для практических медицинских учреждений здравоохранения, неинвазивным и безопасным для пациентов, экономичным по стоимости и времени, эффективным для скрининга предцирротической стадии фиброза и цирроза печени. 3 пр., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики гестационного сахарного диабета у беременных, включающий проведение исследования крови утром натощак с определением содержания глюкозы венозной плазмы. Сущность способа состоит в том, что при уровне глюкозы венозной плазмы натощак менее 5,1 ммоль/л, выявлении факторов риска диабета: ожирение с исходной, до беременности, избыточной массой тела более или равной 30 кг/м2, или сахарном диабете 2 типа у ближайших родственников, или нарушении углеводного обмена в анамнезе, или глюкозории, в сроках беременности до 24 недель дополнительно проводят определение глюкозы капиллярной крови путем непрерывного мониторирования в течение 3 суток. При фиксировании одного или более показателей уровня глюкозы венозной плазмы крови натощак более или равном 5,1 ммоль/л, но менее 7,0 ммоль/л, через один час после еды, показателя уровня глюкозы венозной плазмы более или равным 10 ммоль/л, через 2 часа после еды, показателя уровня глюкозы венозной плазмы более или равным 8,5 ммоль/л диагностируют гестационный сахарный диабет. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность диагностики гестационного сахарного диабета у беременных. 3 ил., 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития профессиональных гиперкератозов. Сущность способа состоит в том, что выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, проводят генотипирование полиморфизма rs1625895 гена ТР53 методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом. При выявлении генотипа G/A и аллеля А прогнозируют риск развития профессиональных гиперкератозов. Использование изобретения дает возможность прогнозировать развитие профессиональных гиперкератозов при воздействии на организм вредных производственных факторов. 2 табл., 2 пр.

Группа изобретений раскрывает антительные матрицы для определения активационного состояния и/или общего количества одного или нескольких онкогенных слитых белков в таких биологических образцах, как цельная кровь или раковая ткань, а также способы их применения. В некоторых случаях активационное состояние и/или общее количество онкогенного слитого белка в образце может быть измерено в сочетании с одной или несколькими молекулами сигнальной трансдукции. Композиции и способы настоящего изобретения обладают преимуществами специфичности, связанной с ферментным иммуносорбентным анализом, чувствительности, связанной с амплификацией сигнала, и высокопроизводительного мультиплексирования, связанного с микроматрицами. 6 н. и 25 з.п. ф-лы, 32 ил., 10 пр., 3 табл.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования эффективности антиэстрогенной терапии тамоксифеном. У пациенток с люминальным типом рака молочной железы проводят иммуногистохимическое исследование ткани опухоли, определяют характер распределения экспрессии рецепторов эстрогенов альфа в ткани опухоли. Оценивают наличие полиморфизма rs2228480 G/A в 8 экзоне гена рецепторов эстрогенов альфа (ERα) методом ПЦР в реальном времени. Оценивают состояние регионарных лимфатических узлов. Степень злокачественности опухоли, эффективность антиэстрогенной терапии тамоксифеном рассчитывают по формуле. При Р>0,5 прогнозируют высокую эффективность антиэстрогенной терапии тамоксифеном. При Р<0,5 прогнозируют низкую эффективность проводимой терапии с большой вероятностью прогрессирования. Изобретение позволяет с высокой долей вероятности прогнозировать эффективность лечения и тем самым индивидуализировать подход к выбору вида эндокринотерапии у пациенток с люминальным типом рака молочной железы. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при трипл негативной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы. Определяют молекулярно-генетический тип рака молочной железы путем иммуногистохимического исследования препаратов ткани первичной опухоли, дополнительно учитывают состояние менструальной функции пациенток и морфологические признаки, и рассчитывают значение уравнения регрессии Y по формуле: Y=(11+32X1-69,2Х2+1,04Х3-3,5Х4), где Y - значение уравнения регрессии; (11) - значение коэффициента регрессии свободного члена; X1 - состояние менструальной функции пациенток (1 - сохранена; 2 - менопауза); (32) - значение коэффициента регрессии этого признака; Х2 - наличие тубулярных структур в инфильтративном компоненте опухоли (1 - нет; 2 - есть); (-69,2) - значение коэффициента регрессии этого признака; Х3 - количество разных типов структур в инфильтративном компоненте опухоли (1 - один, 2 - два, 3 - три, 4 - четыре, 5 - пять; (1,04) - значение коэффициента регрессии этого признака; Х4 - выраженность воспалительной инфильтрации стромы опухоли (1 - слабо, 2 - умеренно, 3-резко выражена; (-3,5) - значение коэффициента регрессии этого признака. Значение вероятности Р определяют по формуле: Р=eY/(1+eY), где е - математическая константа, равная 2,72, и при Р≥50% определяют высокий, а при Р<50% - низкий риск развития лимфогенных метастазов. Способ позволяет повысить точность прогнозирования лимфогенного метастазирования, своевременно оптимизировать тактику лечения. 3 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). Способ характеризуется тем, что производят забор периферической венозной крови, выделение ДНК из крови и анализ полиморфизмов генов TNFR2 (+1663A/G TNFR2). Определяют значения y1 и y2 по формулам линейной дискриминантной функции с учетом возраста пациентов, наличия патологии сердечно-сосудистой системы, систолического и диастолического артериального давления, наличия ПОУГ у родственников, наличия сопутствующей патологии глаз, микрососудистых нарушений в переднем отрезке глаза и состояния пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза, наличия степени пигментации угла передней камеры и генетического варианта по локусу +1663A/G TNFR2. Прогнозируют риск формирования первичной открытоугольной глаукомы в случае, если y2 больше y1. Предложенный способ позволяет прогнозировать развитие ПОУГ на основе данных о генетическом полиморфизме +1663A/G TNFR2 в сочетании с другими предикторами развития глаукомы. Изобретение может использоваться для получения критериев оценки риска развития ПОУГ у жителей Центрального Черноземья России русской национальности для формирования группы с повышенным риском развития ПОУГ. 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской терапевтической стоматологии, и предназначено для диагностики воспаления пульпы временного зуба. Для этого проводят исследование десневой жидкости в области проблемного зуба, определяя активность ферментов ACT и АЛТ. При снижении активности ACT и АЛТ и соотношении ACT/АЛТ > 1,5 диагностируют воспаление пульпы. Способ обеспечивает получение объективной оценки состояния пульпы временного зуба у детей неинвазивным путем. 1 пр., 1 табл.
Наверх