Способ моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс



Способ моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс
Способ моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс

 


Владельцы патента RU 2556571:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Осетинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии и может быть использовано для моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных. Способ заключается в однократном введении старым крысам-самцам смеси, состоящей из гомогенезированной ткани миокарда крыс - 25%, яичного альбумина - 25% и адъюванта Фрейнда - 50%. Введение осуществляют по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа. Способ, являясь легко воспроизводимым и экономически выгодным, эффективен в отношении создания модели с целью получения возможности изучения патогенеза, профилактики и лечения кардиопатии. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Данное изобретение относится к медицине, экспериментальной биологии и может быть использовано для моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных с целью получения возможности изучения патогенеза, профилактики и лечения кардиопатии.

Кардиопатия, cardiopathia (от греч. cardia - сердце и pathos - страдание, поражение), термин, применяемый по отношению к таким изменениям сердца, которые представляют собой длительное или стойкое патологическое состояние, являющееся следствием предшествовавших дегенеративных или воспалительных процессов.

Особый интерес вызывает проблема амилоидоза сердца, который обнаруживают у 2,3% умерших в возрасте до 50 лет, в возрастной группе 50-70 лет его выявляют у 30%, в группе 70-80 лет - уже у 41%, а у лиц, умерших в возрасте старше 90 лет, амилоидоз обнаруживали в 71%-90% случаев. В связи с этим целью нашего исследования является попытка смоделировать более простой способ кардиопатического типа амилоидоза для получения возможности дальнейшего изучения патогенеза, профилактики и лечения амилоидной кардиопатии.

Амилоидоз, амилоидная дистрофия, нарушение белкового обмена, сопровождающееся образованием в тканях специфического белково-полисахаридного комплекса - амилоида. Развитие аимлоидоза связано с извращением белково-синтетической функции ретикуло-эндотелиальной системы, накоплением в плазме крови аномальных белков, служащих аутоантигенами и вызывающих образование аутоантител. В результате взаимодействия антигена с антителом происходит осаждение грубодисперсных белков, участвующих в образовании амилоида. Откладываясь в тканях, амилоид вытесняет функционально специализированные элементы органа, что ведет к гибели этого органа.

Исходя из вышеуказанного гомогенизированный миокард крыс применен с целью запуска специфической аутоиммунной реакции организма, что в сочетании с амилоидогеном способствует образованию и отложению амилоидных масс в миокарде.

Известен способ моделирования экспериментального амилоидоза у крыс, взятый авторами за прототип (патент РФ на изобретение 2410761 С1, Габуева А.А., Брин В.Б., Козырев К.М., зарегистрированный 09.10.2009 г., заявка 2009137437/14, 09.10.2009 МПК′ G09B 23/28), заключающийся в введении экспериментальным животным равнодолевой смеси нативного яичного альбумина и полного адъюванта Фрейнда из расчета по 0,2 мл в 5 точек инъекций.

Недостатками прототипа является низкая эффективность для специфичного моделирования амилоидоза сердца.

Также известен способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных, взятый нами за аналог (патент РФ на изобретение №2306617 С1, Гиоева З.В., Заалишвили Т.В., Козырев К.М., Брин В.Б., зарегистрированный 18.04.2006, заявка 2006113109/13, 18.04.2006 МПК′ G09B 23/28), заключающийся во введении белкового препарата подкожно. В качестве белкового препарата вводят сирийским хомякам нативную бычью плазму через день из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 60 дней эксперимента.

Недостатками аналога является необходимость многократного введения белкового препарата подкожно через день в течение 60 дней эксперимента, а также относительно малые размеры животных, что затрудняет проведение функциональных методов исследования модели. Помимо этого, сирийские хомяки труднодоступны и экономически невыгодны.

Существует способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных, взятый авторами за аналог (патент РФ на изобретение №2347279 С1, Пухова И.У., Козырев К.М., Брин В.Б., зарегистрированный 27.09.2007, заявка 2007135901/14, 27.09.2007 МПК′ G09B 23/28), включающий введение нативной свиной плазмы через день из расчета 0,025 мл/г массы тела в течение 60 дней эксперимента.

Недостатками аналога является необходимость многократного введения белкового препарата в течение 60 дней через день, и малый размер животных, что в значительной степени затрудняет исследования функционального состояния сердечно-сосудистой системы.

Также существует способ моделирования экспериментального амилоидоза у животных, также взятый авторами за аналог (патент РФ на изобретение №2446482 С1, Брин В.Б., Беликова А.Т., Козырев К.М., зарегистрированный 13.11.2010, заявка 2010146365/14, 13.11.2010 МПК′ G09B 23/28), в котором предлагается однократное введение сирийским хомякам нативной человеческой плазмы, смешанной с адъювантом Фрейнда в равных пропорциях. Инъекции осуществляют в симметричные подмышечные и паховые области, и внутрибрюшинно из расчета 0,1 мл в каждую точку.

Недостатком данного аналога является низкая специфичность безселективного воздействия на миокард.

Заявляемое изобретение направлено на решение задачи, заключающейся в разработке нового способа моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных, заключающегося в ведении смеси, состоящей из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа.

Решение этой задачи обеспечивает расширение возможностей моделирования экспериментальной кардиопатии у животных.

Предлагаемый способ отличается тем, что для моделирования амилоидной кардиопатии вводят смесь, состоящую из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа.

Заявленный способ является эффективным, экономически выгодным и легко воспроизводимым.

По имеющимся у автора сведениям совокупность существенных признаков, характеризующих сущность заявляемого изобретения, не известна, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «новизна».

Экспериментальным животным (старые крысы-самцы в возрасте 18-24 мес, массой тела 350-400 гр) однократно вводят смесь, состоящую из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа, что обеспечивает расширение возможностей моделирования экспериментальной кардиопатии у животных, и позволяет сделать вывод о соответствии критерию «изобретательский уровень».

Совокупность существенных признаков, характеризующих сущность изобретения, в принципе может быть многократно использована в медицине с получением результата, заключающегося в эффективном и легко воспроизводимом способе моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у животных, что позволяет сделать вывод о соответствии изобретения критерию «промышленная применимость».

Данный способ осуществляется следующим образом.

Для получения экспериментальной кардиопатии в качестве экспериментальных животных выбраны крысы-самцы линии «Вистар» массой 350-400 гр в возрасте 18-24 мес, так как именно старческая брадитрофия тканей позволяет ставить вопрос о моделировании кардиопатии. Для моделирования кардиопатии экспериментальным животным однократно вводят смесь, состоящую из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа.

У контрольных и опытных животных под тиопенталовым наркозом исследуются гемодинамические показатели инвазивным способом в сроки 60 дней эксперимента, после чего животные забиваются. Образцы тканей фиксируются в 10% нейтральном формалине, с последующим приготовлением парафиновых срезов толщиной 5-6 микрон. Срезы окрашиваются гематоксилином и эозином, конго-красным. Изучение срезов проводится в проходящем свете при помощи микроскопа Микмед-1 под увеличением × 80, × 200, × 600.

Сущность заявляемого способа подтверждается функционально и морфологически.

При исследовании основных показателей гемодинамики достоверно отмечалось снижение: сердечного индекса (СИ) и ударного индекса (УИ) и повышение удельного периферического сосудистого сопротивления (УПСС) по сравнению с контролем (таб. 1). Отмечалась тенденция к снижению среднего артериального давления (САД) и частоты сердечных сокращений (ЧСС).

Таблица 1
Изменения основных показателей гемодинамики при формировании экспериментальной амилоидной кардиопатии
Группа Показатель САД Сердечный индекс Ударный индекс УПСС ЧСС
Интактная M±m 109,9±1,6 44 65±0,730,002 0,116±0,002 1,954±0,0043 385±5,42
Опытная M±m 107,3±2,07 34,944±1,12 00915±0,004 2,407±0,8 384,1±9,72
P >0,1 <0,001 <0001 <0,001 >0,1

Пример №1. Проведены серии опытов из 2-х групп:

1-я группа - (20 крыс-самцов линии «Вистар») - контрольная

2-я группа (20 крыс-самцов линии «Вистар») - опытная - старым крысам-самцам (возраст 18-24 мес, масса тела 350-380 г) однократно вводили смесь, состоящую из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа.

Морфологическому исследованию на предмет выявления кардиопатии подвергнут миокард, кровеносные сосуды.

В результате проведенных исследований получены морфологические доказательства эффективности применения нативного яичного альбумина в сочетании с полным адъювантом Фрейнда для моделирования экспериментальной кардиопатии у старых крыс-самцов.

Гистологически у 2-й группы животных в миокарде (фиг. 1, 2) при окраске срезов гематоксилином-эозином и конго-красным выявлены участки паренхиматозной белковой дистрофии, местами переходящей в очаговый распад и фрагментации кардиомиоцитов с исчезновением поперечной исчерченности (1). Отмечается выраженная периваскулярная лимфогистиоцитарная инфильтрация (2), отек стромы (3), полнокровие сосудов микроциркуляторного русла (4). Помимо этого отмечаются склеротические изменения стромы. Имеет место плазматическое пропитывание стенок сосудов микроциркуляторного русла и периваскулярные участки плазморрагии (5).

При окраске конго-красным отмечается отложение аморфных масс амилоида в стенках сосудов и строме миокарда (6).

Таким образом, результаты морфологического исследования тканей экспериментальных животных, получавших в качестве амилоидогена равнодолевую смесь, состоящую из гомогенизированной ткани миокарда крыс - 25%, яичного альбумина - 25% и адьюванта Фрейнда - 50%, по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа, свидетельствуют о развитии экспериментального амилоидоза с преимущественным поражением миокарда.

Подводя итог, следует отметить, что однократное введение смеси, состоящей из гомогенизированной ткани миокарда крыс (25%), яичного альбумина (25%) и адьюванта Фрейнда (50%), по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа является эффективным способом моделирования экспериментальной кардиопатии.

Способ моделирования экспериментальной амилоидной кардиопатии у крыс, заключающийся в однократном введении старым крысам-самцам смеси, состоящей из гомогенезированной ткани миокарда крыс - 25%, яичного альбумина - 25% и адъюванта Фрейнда - 50%, по 0,3 мл в 5 точек инъекции: внутрибрюшинно, в паховые и подмышечные области подкожно слева и справа.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к рентгеноскопии, а именно к элементам медицинской рентгенодиагностики. Тест-фантом состоит из двух частей, образующих единое целое.

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии, патофизиологии, и касается моделирования острого панкреатита. Для этого способ включает лигирование основного ствола выводного протока поджелудочной железы, введение в систему протоков поджелудочной железы агрессивного раствора для проявления панкреатита, удаление лигатуры.

Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и касается моделирования коркового вида катаракты in vivo. Для этого у экспериментального животного проводят хирургическую двустороннюю десимпатизацию путем иссечения верхнего шейного симпатического ганглия.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для моделирования состояния ингибирования функциональной активности гликопротеина-Р линестренолом в организме.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной онкологии, и может быть использовано для изучения механизмов лимфатического канцерогенеза и разработки новых методов лечения лимфом.

Изобретение относится к медицине, в частности к фармакологии, и касается расширения арсенала средств для коррекции патологических изменений состояния жизнеспособного потомства при цитостатическом воздействии.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности разработке способов лечения лучевой болезни. Способ осуществляют путем проведения лабораторным мышам через час после облучения внутривенной аллогенной трансплантации мультипотентных мезенхиальных стромальных клеток (ММСК) и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК).

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и предназначено для профилактики и лечения острой лучевой болезни. Животным после облучения в дозах, вызывающих костномозговую форму радиационного поражения, перорально вводят меланин с водорастворимостью не менее 80% и концентрацией парамагнитных центров не менее 8·1017 спин/г, в растворенном виде в дистиллированной воде в эффективной концентрации.

Изобретение относится к области медицины, а именно к физиологии поведения животных. Ориентировочно-исследовательское и двигательное поведение крыс исследуют на фоне выработки пищедобывательного навыка посредством дифференциации траектории движения животных в Ж-образном лабиринте.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной хирургии, патологической анатомии, патологической физиологии и может быть использовано для оценки остеоинтеграции пористых проволочных материалов в эксперименте.

Изобретение относится к медицине, а именно к сосудистой хирургии, и может быть использовано при разработке способов лечения хронических облитерирующих заболеваний артерий нижних конечностей. Для этого моделируют ишемию конечности у крысы-самца породы Вистар путем иссечения бедренной, подколенной артерий и начальных отделов артерий голени под наркозом хлоралгидратом в дозе 250-300 мг/кг. Затем вводят предварительно полученную мононуклеарную фракцию аутологичного костного мозга в дозе 4×106 клеток в объеме 200 мкл. Введение осуществляют в ишемизированную конечность из двух точек, в каждую по 100 мкл. Одна точка - это непосредственно под паховой связкой паравазально в зоне анатомического расположения коллатералей внутренней подвздошной артерии и ее ветвей. Другая точка - в икроножной мышце переднелатеральной поверхности средней трети голени. Способ обеспечивает повышение эффективности лечения в эксперименте за счет стимуляции развития коллатерального кровотока в ишемизированной конечности и улучшения артериального притока крови из проксимальных отделов конечности в дистальные. 1 пр., 1 табл.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и экспериментальной хирургии и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени. Для этого лабораторному животному на вторые сутки эксперимента осуществляют резекцию печени в объеме 70%. В качестве стимулятора регенерации печени вводят L-норвалин внутрижелудочно в суточной дозе 10,0 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает эффективную стимуляцию регенерации резецированной печени, подтверждаемую снижением летальности животных, улучшением микроциркуляции в печени, уменьшением выраженности цитолиза, улучшением синтетической функции печени. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области испытаний изделий медицинской техники, а именно к вопросу производственных испытаний эндопротезов суставов с металлической парой трения, состояние которой в процессе испытаний оценивается с применением электрических (электрорезистивных) методов диагностирования. Способ диагностирования эндопротезов суставов с металлической парой трения заключается в том, что эндопротез закрепляют в испытательном стенде, нагружают осевой силой, формируют смазочный слой между поверхностями компонентов эндопротезов и определяют физические характеристики поверхностного слоя компонентов в зоне трения. При этом пропускают через зону трения эндопротеза малый по значению переменный электрический ток, регистрируют временную функцию комплексного сопротивления трибосопряжения эндопротеза, по параметрам активной и реактивной составляющих которой судят о фактической толщине смазочного слоя и о доминирующем в трибосопряжении виде смазки и режиме трения. По отношению временных отрезков, в которых активная часть комплексного сопротивления больше реактивной части, к общему времени измерения оценивают фактическое техническое состояние трибосопряжения эндопротеза сустава. Изобретение обеспечивает сокращение времени испытаний, оценку реального времени контактного взаимодействия поверхностей трения, повышение мощности выделяемого полезного сигнала, его помехоустойчивость в формировании объективной исходной диагностической информации из зоны трения для последующего прогнозирования долговечности эндопротеза сустава с металлической парой трения. 5 ил.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается разработки тактики лечения химических ожогов пищевода и желудка. Для этого у лабораторных крыс моделируют химический ожог. Начиная с 5-х суток после создания модели осуществляют внутрибрюшное введение лекарственных средств. При этом вводят цефатаксим в дозе 100 мг/кг в течение 7 суток. Преднизолон вводят в дозе 1 мг/кг в течение 3 суток. Введение 3%-ного раствора ксимедона осуществляют в дозе 30 мг/кг 1 раз в течение 40 суток. Способ обеспечивает эффективное лечение ожогов пищевода и желудка за счет быстрого восстановления толщины мышечной пластинки слизистой оболочки и предупреждения образования рубцов. 1 табл., 16 ил.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной патофизиологии и трансплантологии, и касается моделирования посттрансплантационных изменений почки. Для этого лабораторному животному - крысе выполняют одностороннюю нефрэктомию, денервацию и делимфатизацию второй почки. Затем пережимают почечные артерию и вену на 40-60 минут. После выполнения хирургического вмешательства проводят трехкратную иммунизацию лабораторного животного почечным антигеном, полученным из удаленной почки, адъювантным методом. При этом за 5 недель до хирургического вмешательства у лабораторного животного производят забор клеток костного мозга, получают из них in vitro культуру мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток. Денервацию и делимфатизацию оставшейся почки выполняют путем удаления адвентиции и клетчатки, окутывающих мочеточник, почечные артерию и вену, в области ворот почки на протяжении 7-10 мм и декапсуляции почки в области ее медиального края шириной 7-10 мм, протяженностью от одного полюса почки до другого с захватом области ее ворот. Для получения почечного антигена используют целую почку и доводят содержание белка в нем до 70 мг/мл. На 35-40 сутки после выполнения хирургической операции вводят полученную культуру мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток тому же животному внутривенно в дозе 1,5-3,0 млн клеток в 1 мл физиологического раствора. Способ позволяет создать адекватную, доступную для выполнения модель хронического отторжения в аутологичных почках у мелких лабораторных животных с ускоренным развитием визуализируемых деструктивных посттрансплантационных процессов. 1 пр., 1 табл., 9 ил.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, травматологии и ортопедии, хирургическому лечению травматических повреждений спинного мозга с одновременным ускорением его регенерации. По задней поверхности травмированного спинного мозга экспериментального животного (ЭЖ) без его компрессии размещают биосовместимый имплантат (БИ) из магнитного материала в биосовместимой матрице (БМ). Затем периодически помещают ЭЖ в постоянное магнитное поле. Вектор напряженности его воздействия совпадает с кранио-каудальной ориентацией проводящих путей спинного мозга. В качестве БМ БИ используют желатин животного или растительного происхождения, в котором иммобилизованы в качестве магнитного материала БИ наполнитель в виде наночастиц ферромагнитного магнетита или ферромагнитного феррита в количестве 18-42 мас.% с размером наночастиц 2,0-38 нм и с напряженностью магнитного поля (Н) 5-10 мТл. Магнитное воздействие на травматические повреждения спинного мозга проводят сочетанным воздействием магнитного поля БИ и внешнего вращающегося постоянного магнитного поля с магнитной индукцией 0,15-0,35 Тл. Периодичность внешнего магнитного воздействия 1-2 раза в сутки, длительность 2-8 мин за один сеанс, количество сеансов 2-4. В качестве желатина животного происхождения БМ БИ можно использовать агар-агар, желатина растительного происхождения - пектин. В БМ БИ могут быть дополнительно введены способствующие росту и пролиферации клеток полиамины, например спермин или спермидин, в количестве 1-5 мас.%. Способ обеспечивает достаточно полное восстановление функции спинного мозга дистальнее зоны его повреждения, обеспечение благоприятных условий для достаточного роста нейроглии с прорастанием аксонов реципиента из неповрежденного проксимального отдела спинного мозга в дистальный для восстановления его проводящей функции, обеспечение уменьшения образования рубцовой ткани в области травмы спинного мозга, устранение отека мозговой ткани. 2 з.п. ф-лы, 8 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии. Для моделирования инфравезикальной обструкции у мелких животных проводят перевязку уретры. Дополнительно в естественное отверстие уретры вводят стержень из ахиллова сухожилия крупного рогатого скота до полного погружения. Перевязку уретры осуществляют в области наружного отверстия. Изобретение обеспечивает высокую физиологичность модели при низкой травматичности способа ее создания.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной офтальмологии, и предназначено для получения модели пролиферативной витреоретинопатии. Для этого крысам в полость стекловидного тела глаза вводят 2 мкл раствора диспазы, содержащего фермент в дозе 0,03U. Устанавливают признаки витреоретинопатии через 6 недель после введения фермента. Способ позволяет получить адекватную модель заболевания. 3 ил., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ ингибирования тромбообразования и ускорения фибринолиза с помощью ДНК аптамеров (олигонуклеотидов), ингибирующих активность тромбина. В способе использован ДНК аптамер, характеризующийся нуклеотидной последовательностью GTGACGTAGGTTGGTGTGGTTGGGGCGTCAC и конъюгированный по 5′ или 3′ концу с NH2 группой и/или с полиэтиленгликолем (PEG), и отвечающий общей формуле d-R-GTGACGTAGGTTGGTGTGGTTGGGGCGTCAC-R, где d - дезоксирибоза, при этом олигонуклеотид содержит дезоксирибозу во всех позициях, R - NH2 группа и/или PEG. Изобретение может быть использовано для повышения эффективности антитромботической и фибринолитической терапии. 4 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии и экспериментальной хирургии, и может быть использовано для стимуляции регенерации резецированной печени. Для этого лабораторному животному на вторые сутки эксперимента осуществляют резекцию печени в объеме 70%. Для стимуляции регенерации печени животному вводят внутрижелудочно дигидрокверцитин в суточной дозе 5,5 мг/кг каждые 46 часов первые 7 суток эксперимента. Способ обеспечивает восстановление объема, структуры и функции резецированного органа до 28 суток после резекции. 1 пр., 2 табл.
Наверх