Способ активации клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro

Изобретение относится к ветеринарии и заключается в способе активации клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro. К лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,5 мл гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе, затем полученный раствор помещают в термостат на 1 час при Т=37±0,5°С, после этого в раствор вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащую 10⁹ КОЕ в 1 мл физиологического раствора, последний раствор помещают в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°С и после инкубации мазки крови фиксируют в спирт-формалине в течение 10 минут и окрашивают по Романовскому - Гимза в течение 30 минут. Технический результат заключается в активации клеточного иммунитета. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в лабораторной работе по изучению клеточного иммунитета.

Известен способ стимуляции гуморального и клеточного иммунитета при холодовом воздействии (патент РФ №2142809, кл. А61К 35/36, от 03.01.1996).

К недостаткам известного способа можно отнести длительный срок введения препарата (в течение 5 дней), потребность в специальном оборудовании (холодильнике и др.), длительность срока исследований (более 3 часов), необходимость наличия лабораторных животных.

Ближайшим техническим решением к данному изобретению является способ оценки клеточного иммунитета в опсонофагоцитарной реакции (ОФР) нейтрофилов крупного рогатого скота, которую проводили по методике П.Н. Смирнова (2003) (Оценка естественной резистентности сельскохозяйственных животных: метод. Рекомендации / Россельхозакадемия, Сиб. Отд-ие, ГНУ ИЭВС и ДВ, ГНУ ВИЕВ, ФГОУ НРИПК АПК МСХ РФ, НГАУ. - Новосибирск, 2003. - 32 с.). Изменение клеточного иммунитета учитывали по изменению фагоцитарной активности (ФА) нейтрофилов, фагоцитарного числа (ФЧ) нейтрофилов, фагоцитарного индекса (ФИ) нейтрофилов, фагоцитарной емкости (ФЕ) нейтрофилов и переваривающей способности крови (ПСК).

Задача изобретения - расширение арсенала способов активации клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro.

Указанная задача достигается тем, что в способе повышения клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro, включающем использование лейкоцитарной взвеси и гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении, согласно изобретению к лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,5 мл гомеопатического препарата, выбранного из Фитолакка в разведениях С12 или С200, Ипекакуана С6 или С200, Белладонна С12 или С30, Нукс вомика С6, Аконит С6, или С12, или С200, Фенугросци С6 или С12, Кониум С30, Арника С12, Лахезис Д15, или С12, или С30, или С200, Апис С12 или С200, Меркуриус корозивус С6 или С200, Фосфор С6 или С200, Ацидум фосфорикум С6 или С200, Ацидум муриатикум С6 или С200, Гепар сульфур С12, Сульфур С6, или С12, или С200, Калькарея карбоника С6 или С50, Арсеникум альбум С6, или С12, или С30, или С200 разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении, затем полученный раствор помещают в термостат на 1 час при Т=37±0,5°С, после этого в раствор вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащую 10⁹ КОЕ в 1 мл физиологического раствора, последний раствор помещают в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°С и после инкубации мазки крови фиксируют в спирт-формалине 1:9, 40% раствор формалина и 96° спирт, в течение 10 минут и окрашивают по Романовскому - Гимза в течение 30 минут.

Пример 1. Использование 13 (86,6%) гомеопатических лекарственных средств растительного происхождения в различных разведениях вызвало рост показателя ФА нейтрофилов, при этом они оказывали разнонаправленное влияние на показатели ФА нейтрофилов (табл.1). Рост показателя ФА нейтрофилов после контакта с препаратами составил от 3,8 до 56,5%. Рост показателя ФЕ нейтрофилов после внесения гомеопатических лекарственных веществ в разведениях С6 составил от 2,5 до 59,0%, у С12 - от 22,7 до 68,2%, С200 - от 34,6 до 327,0%.

Интенсивность фагоцитоза, проявляющаяся в росте количества поглощенных микробных клеток (ФЧ и ФИ), была выше при культивировании с Фитолаккой С12, Фитолаккой С200, Ипекакуаной С6, Ипекакуаной С200, Нукс вомикой Сб. Наиболее выраженный рост показателей клеточного иммунитета наблюдали при воздействии препаратов Фитолакки С12 (ФЧ - 57,6%, ФИ - от 66,0%, ПСК - 107,0%) и Фитолакки С200 (ФЧ - 119,0%, ФИ - 120,0%, ПСК - 146,0%).

При применении средств растительного происхождения выявлен рост показателя ПСК от 2,8 до 146,0% у 12 исследуемых препаратов. Результаты исследований получены относительно данных контрольной группы, где вместо препарата использовали 1 гранулу лактозы + физиологический раствор. Наличие отрицательного результата проявления одних показателей опсонофагоцитарной реакции нейтрофилов компенсируется наличием других положительных показателей и свидетельствует о разнонаправленном действии препарата на проявление фагоцитарной активности. Так, ФА и ФЧ учитывают количество активированных нейтрофилов в ОФР и характеризуют количественные показатели, а ФИ и ФЕ отражают количество поглощенных микробных клеток нейтрофилами и характеризуют качественные характеристики фагоцитарной активности клеток. Таким образом, наличие слабо выраженного отрицательного при наличии положительного результата позволяет утверждать о стимулирующей роли фагоцитоза у нейтрофилов крови гомеопатическими препаратами.

Пример 2. При внесении всех гомеопатических лекарственных средств животного происхождения отмечен рост показателей ПСК на 15,5-120,0% (табл. 2).

Применение препарата Лахезис в различных разведениях вызывало значительный рост ФА и ФЕ нейтрофилов, зависящий от степени разведения, при одновременном снижении или минимальном росте количества фагоцитированных клеток одним нейтрофилом (ФЧ и ФИ). Применение препарата Апис вызывало выраженный рост ФЧ и ФИ нейтрофилов при менее выраженных других показателях фагоцитоза ФА и ФЕ. Результаты исследований получены относительно данных контрольной группы, где вместо препарата использовали 1 гранулу лактозы + физиологический раствор.

Интенсивность фагоцитоза, проявляющаяся в росте количества поглощенных микробных клеток (ФЧ и ФИ), была выше при культивировании с Аписом С6 (на 62,5 и 53,8%), Аписом С200 (на 41,6 и 30,7%) соответственно.

Установлен рост показателя ПСК при применении препарата Лахезис, при этом тенденция к росту находится в зависимости от степени разведения препарата.

Пример 3. Исследование влияния всех гомеопатических лекарственных препаратов минерального происхождения на ОФР показало рост количества нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе, который выражается в увеличении показателей ФЕ, ФА (табл. 3). Установлено, что применение 7 (36,8%) препаратов оказывают стимулирующее влияние на ФИ и ФЧ нейтрофилов. Рост показателей ФИ, ФЧ после контакта с гомеопатическими лекарственными средствами минерального происхождения зависел от степени разведения.

При контакте гомеопатических лекарственных веществ минерального происхождения установлено, что у всех исследуемых препаратов отмечен рост показателей ПСК. Результаты исследований получены относительно данных контрольной группы, где вместо препарата использовали 1 гранулу лактозы + физиологический раствор.

Способ активации клеточного иммунитета гомеопатическими препаратами in vitro, включающий использование лейкоцитарной взвеси и гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении, отличающийся тем, что к лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,5 мл гомеопатического препарата выбранного из: Фитолакка в разведениях С12 или С200, Ипекакуана С6 или С200, Белладонна С12 или С30, Нукс вомика С6, Аконит С6, или С12, или С200, Фенугросци С6 или С12, Кониум С30, Арника С12, Лахезис Д15, или С12, или С30, или С200, Апис С12 или С200, Меркуриус корозивус С6 или С200, Фосфор С6 или С200, Ацидум фосфорикум С6 или С200, Ацидум муриатикум С6 или С200, Гепар сульфур С12, Сульфур С6, или С12, или С200, Калькарея карбоника С6 или С50, Арсеникум альбум С6, или, С12, или С30, или С200 разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении, затем полученный раствор помещают в термостат на 1 час при Т=37±0,5°С, после этого в раствор вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащую 10⁹ КОЕ в 1 мл физиологического раствора, последний раствор помещают в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°С и после инкубации мазки крови фиксируют в спирт-формалине 1:9, 40% раствор формалина и 96° спирт, в течение 10 минут и окрашивают по Романовскому - Гимза в течение 30 минут.