Способ выделения микровезикул эритроцитов


 


Владельцы патента RU 2558776:

Федеральное Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Нижегородская Государственная Сельскохозяйственная Академия" (ФГБОУ ВПО НГСХА) (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу выделения микровезикул эритроцитов. Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающих забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, далее к полученному супернатанту добавляют хлористый лантан, перемешивают, центрифугируют, и получают осадок микровезикул. Вышеописанный способ позволяет ускорить процесс получения микровезикул эритроцитов. 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к биологии и медицине и может использоваться в опытах in vitro для получения и изучения микровезикул эритроцитов с помощью биохимических и морфологических методов исследования.

Известен способ выделения микровезикул эритроцитов из надосадочной жидкости (супернатант), который включает забор крови, промывание эритроцитов, инкубацию отмытых клеток в присутствии кальция и ионофора А 23187, центрифугирование при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта, ультрацентрифугирование супернатанта при 100000 g в течение 60 минут, получение осадка, содержащего микровезикулы (Allan D., Thomas P., Limbrick A.R. Biochem.J. - 1980.- Vol. 188. - P.881-887).

В качестве прототипа взят способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый цинк до конечной концентрации 5-10 мМ, перемешивают, оставляют на 60 минут при комнатной температуре и получают осадок, содержащей микровезикулы (Шереметьев Ю.А., Левин Г.Я., Поповичева А.Н., Егорихина М.Н. Способ выделения микровезикул эритроцитов. Патент 2464563 РФ, 2012).

Однако в этом способе используются очень высокие концентрации хлористого цинка (5-10 мМ). Существенным недостатком является длительность выделения микровезикул (60 мин).

Задача предлагаемого изобретения - совершенствование способа.

Технический результат - ускорение процесса получения микровезикул эритроцитов.

Технический результат достигается за счет того, что в способе, включающем забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, к супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают, центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.

Способ осуществляется следующим образом. Кровь от здоровых людей забирают в вакуумные пробирки, содержащие цитрат натрия. Эритроциты трижды промывают физиологическим раствором и инкубируют в инкубационной среде. Затем эритроциты центрифугируют при 1000 g в течение 10 минут для получения супернатанта. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.

Пример 1. Отмытые эритроциты инкубируют в безглюкозной среде при 37°C в течение 24 часов. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.

Пример 2. Отмытые эритроциты инкубируют в среде, содержащей кальций и ионофор А 23187, в течение 30 минут. К супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, интенсивно перемешивают и центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок с микровезикулами.

Способ выделения микровезикул эритроцитов, включающий забор крови, промывание эритроцитов, их инкубирование и центрифугирование для получения супернатанта, отличающийся тем, что к супернатанту добавляют хлористый лантан до конечной концентрации 300-500 мкМ, перемешивают, центрифугируют при 1000 g в течение 5 минут и получают осадок, содержащий микровезикулы.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ определения вероятности прогрессирования клинического течения красного плоского лишая слизистой оболочки рта у больных с гиперхолестеринемией и гепатобилиарными расстройствами.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики воздействия электромагнитных излучений на человека. Для этого проводят клинико-лабораторное исследование крови, определяют активность кислой фосфатазы нейтрофилов, лимфоцитов, тромбоцитов и эритроцитов, затем рассчитывают интегральный диагностический индекс лизосомальной активности крови по предложенной формуле.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения целесообразности проведения иммунологического обследования у работников животноводства.

Изобретение относится к медицине, в частности к исследованиям функциональной активности факторов периферической крови при действии искусственного света. Для этого на половозрелых морских свинок воздействуют излучением оптического диапазона, генерируемых светодиодами или люминесцентными лампами с цветовой температурой 4500 К в диапазоне длин волн 360-460 нм в течение различных временных интервалов.

Изобретение относится к лабораторной диагностике, а именно к способу сохранения белка мочи, взятой для диагностики инфекционной геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС) методом ПЦР.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, гериатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения системной воспалительной реакции (СВР) у пациентов с острым инфарктом миокарда (ОИМ).

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, реаниматологии и респираторной терапии, и описывает способ прогнозирования эффективности неинвазивной вентиляции легких у недоношенных новорожденных.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, реаниматологии и респираторной терапии, и описывает способ прогнозирования эффективности неинвазивной вентиляции легких у недоношенных новорожденных.

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования умеренного и выраженного гемолиза у больных ишемической болезнью сердца после операции коронарного шунтирования.
Изобретение относится к клинической иммунологии и может быть использовано для определения атерогенности иммунных комплексов, содержащих множественно модифицированные липопротеины низкой плотности (ИК-ммЛПНП).
Изобретение относится к медицине, в частности к способу получения гематогенного порошка из сгустка крови. Способ получения гематогенного порошка из сгустка крови включает забор крови у животных или человека, отстаивание и центрифугирование крови с образованием сыворотки крови и сгустка крови, далее сыворотку крови сливают, а сгусток крови выливают в сосуд, куда добавляют этиловый спирт, и инкубируют, после сгусток отделяют, высушивают и измельчают до получения порошка, при определенных условиях.

Изобретение относится к области медицины, в частности трансфузиологии, а именно к способу получения полимерного модифицированного гемоглобина путем ступенчатой поликонденсации выделенного из эритроцитарной массы очищенного гемоглобина в смешанной окси/дезокси форме с синтезированным полифункциональным сшивающим агентом - глутаровым альдегидом с глутаминовой кислотой и глутаматом натрия, где на первой стадии реакции ведут внутримолекулярную химическую сшивку лабильной в водном растворе молекулы гемоглобина, а на второй стадии - межмолекулярную сшивку уже модифицированных молекул гемоглобина с образованием полимерного модифицированного гемоглобина.
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и эфферентной терапии, и может быть использовано при лечении пациентов с черепно-мозговой травмой на фоне гипертензионного синдрома в острый период.
Изобретение относится к медицине, а именно к эфферентной терапии, неврологии и нейрохирургии, и может быть использовано при лечении пациентов с черепно-мозговой травмой на фоне гипертензионного синдрома в период реабилитации.
Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа разделения свиной крови на плазму и эритроцитарную массу. .
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано при лечении рака молочной железы (РМЖ). .

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к гематологии, и может быть использовано для лечения депрессии эритроидного ростка кроветворения при цитостатической миелосупрессии.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для снижения концентрации аммиака в крови с помощью внедренного в эритроциты фермента глутаминсинтетазы.
Изобретение относится к медицине, в частности к гематологии, и касается разработки способа обработки цельной крови или ее компонентов. .
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения клеящей массы из эритроцитов. Способ получения клеящей массы заключается в выделении из сгустка крови эритроцитов, добавлении к ним дистиллированной воды, перемешивании, добавлении соляной кислоты до перехода темно-красного цвета эритроцитов в черный и приобретения раствором тягучей консистенции, выдерживании раствора и добавления в него насыщенного раствора хлористого натрия, перемешивании и выдерживании, после чего раствор фильтруют с удалением осадка и добавляют в фильтрат порошок хлористого натрия до полного насыщения и появления на поверхности белого липкого осадка, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет получить клеящую массу из отходов крови, которую можно использовать непосредственно после приготовления в качестве клея для получения медицинских препаратов.
Наверх