Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2558861:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к области медицинской диагностики, и описывает способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы (ПОУГ). Способ характеризуется тем, что производят забор периферической венозной крови, выделение ДНК из крови и анализ полиморфизмов генов TNFR2 (+1663A/G TNFR2). Определяют значения y1 и y2 по формулам линейной дискриминантной функции с учетом возраста пациентов, наличия патологии сердечно-сосудистой системы, систолического и диастолического артериального давления, наличия ПОУГ у родственников, наличия сопутствующей патологии глаз, микрососудистых нарушений в переднем отрезке глаза и состояния пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза, наличия степени пигментации угла передней камеры и генетического варианта по локусу +1663A/G TNFR2. Прогнозируют риск формирования первичной открытоугольной глаукомы в случае, если y2 больше y1. Предложенный способ позволяет прогнозировать развитие ПОУГ на основе данных о генетическом полиморфизме +1663A/G TNFR2 в сочетании с другими предикторами развития глаукомы. Изобретение может использоваться для получения критериев оценки риска развития ПОУГ у жителей Центрального Черноземья России русской национальности для формирования группы с повышенным риском развития ПОУГ. 2 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы.

Глаукома - одна из наиболее тяжелых форм офтальмопатологии, имеющая большое медико-социальное значение ввиду высокой распространенности, постоянного роста заболеваемости и тяжести исходов заболевания, ведущего к слепоте и инвалидности. По данным ВОЗ число больных глаукомой в мире превысило 100 млн. человек. В России в 2011 году общее количество больных глаукомой составило более 1,1 млн., а уровень заболеваемости с 2005 по 2011 г. вырос с 1,021 до 1,091 на 1 тысячу взрослого населения [http://www.relevantmedia.ru]. Среди клинических форм заболевания наиболее распространенной является первичная открытоугольная глаукома (ПОУГ), на долю которой приходится от 72,3 до 96,1% [Глаукома [Текст]: нац. руководство /под ред. Е.А. Егорова - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 824 с.] всех форм глауком. ПОУГ - мультифакториальное заболевание глаз, характеризующееся повышением внутриглазного давления за пределы толерантного для зрительного нерва уровня, глаукомной оптической нейропатией и типичным снижением зрительных функций [Нестеров, А.П. Глаукома [Текст] /А.П. Нестеров. - М.: ООО "Медицинское информационное агентство", 2008. - 360 с.]. Установлено, что в возрастной группе до 59 лет распространенность ПОУГ составляет 0,88 случая на 1000 человек, от 60 до 70 - 6,44 на 1000 человек, среди лиц старше 75 лет глаукома встречается с частотой 17,3 на 1000 населения [Глаукома [Текст]: нац. руководство /под ред. Е.А. Егорова - Москва: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 824 с.].

В настоящее время важное этиопатогенетическое значение при ПОУГ придается нарушениям в системе апоптоза [Алексеев, В.Н. Роль апоптоза и метаболизма мюллеровских клеток при экспериментальной глаукоме [Текст] /В.Н. Алексеев, Е.Б. Мартынова, И.А. Самусенко. - Клин. Офтальмология, 2005. - №2. - с.52-55]. Одно из центральных звеньев в этом процессе занимают факторы некроза опухолей [Glaucomatous neurodegeneration: An eye on tumor necrosis factor-alpha [Text] /R. Agarwal, P. Agarwal //Indian. J. Ophthalmol. - 2012. - Vol.60. - P. 255]. Обладая множеством медико-биологических эффектов, эти цитокины могут влиять на развитие и прогрессирование ПОУГ [Tezel, G. TNF-alpha signaling in glaucomatous neurodegeneration [Text] /G. Tezel //Prog Brain Res. - 2008. - Vol.173. - P. 409-421; Fan, B.J. Association of polymorphisms of tumor necrosis factor and tumor protein p53 with primary open-angle glaucoma [Text] /B.J. Fan, K. Liu, D.Y. Wang, C.C. Tham, P.O. Tam, D.S. Lam, C.P. Pang //Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. - 2010. - Vol.51. - P. 4110-4116; Al-Dabbagh, N.M. Association of TNF-α and TNF-β Gene Polymorphisms with Primary Open Angle and Primary Angle Closure Glaucoma [Text] /N.M. Al-Dabbagh, N. Al-Dohayan, A. Al-Asmari, M. Arfin, M. Tariq //In: Tomas Kubena, editor. The Mystery of Glaucoma. InTech. - 2011. - P. 229-256]. Факторы некроза опухолей (TNFα, Ltα) проявляют свои действия, связываясь с высокоаффинными рецепторами на поверхности клетки, что приводит к возникновению широкого спектра ответов клетки, включая активацию транскрипции генов и индукцию апоптоза [Saklatvala, J. Interleukin 1 (IL-1) and tumour necrosis factor (TNF) signal transduction [Text] /J. Saklatvala, W. Davis, F. Guesdon //Philos Trans R Soc Lond B Biogr. Sci. - 1996. - Vol.351. - P. 151-157; Gravestein, L.A. Tumor necrosis factor receptor family members in the immune system [Text] /L.A. Gravestein, J. Borst //Semin. Immunol. - 1998. - Vol.10. - P. 423-434]. В настоящее время идентифицированы два типа рецепторов TNFα: TNFRI и TNFRII.

TNFRII - гликопротеин, имеющий молекулярную массу 75 кДа и включающий 440 аминокислот. Со структурной точки зрения данный рецептор содержит экстраклеточный (240 аминокислот), трансмебранный (27 аминокислот) и цитоплазматический (173 аминокислоты) домены. Ген TNFR2 локализован в хромосоме 1p36.2 и состоит из 10 экзонов.

Для оценки сложившейся патентной ситуации был выполнен поиск по охранным документам за период с 1990 по 2012 гг. Анализ документов производился по направлению: способ прогнозирования риска развития ПОУГ на основе молекулярно-генетических данных в зависимости от полиморфных маркеров генов TNFR2.

Способ диагностирования глаукомы (А.с. 812283, Бюлл. изобр. №10, 1981) путем повышения ВГД вакуумированием до 35-44 мм рт.ст. и определения порогов статической периметрии, в меридианах 45°-135°-225°-315°, и по наличию дефектов в поле зрения устанавливают диагноз глаукомы, а по их динамике судят об эффективности лечения.

Недостатком прототипа является его травматичность, т.к. искусственное повышение офтальмотонуса выше 40 мм рт.ст. сопровождается отеком роговицы с возможными кровоизлияниями в сосудистой и сетчатой оболочке.

Способ ранней диагностики глаукомы раскрыт в патенте РФ №2166276 (Опубликовано: 10.05.2001). Способ основан на оценке зрительных функций на фоне повышения внутриглазного давления путем исследования КЧСМ в зоне Бьеррума, а повышение ВГД производят с помощью вакуумной компрессии на 1/4 часть перилимбальной зоны и при снижении КЧСМ на фоне компрессии на 20% и более от исходной величины и при восстановлении КЧСМ после снятия компрессии более чем на 5 мин диагностируют глаукому. Способ не позволяет осуществлять диагностику на преморбидной стадии заболевания.

За прототип выбран способ дифференциальной диагностики начальной стадии открытоугольной глаукомы и глазной гипертензии по патенту РФ №2018834 (опубликован 30.08.1994), сущность которого заключается в том, что у пациента берут пробу крови, определяют в сыворотке крови выход оксида углерода, двуокиси углерода, воды и бензола, и при повышении выхода первого показателя в 1,5 раза, второго - в 1,8 раза, третьего - в 1,7 раза и неизменном выходе четвертого показателя, по сравнению с контролем, диагностируют начальную стадию открытоугольной глаукомы, а при неизменном выходе 1, 2, 3 показателей и при повышении выхода четвертого показателя в 1,4 раза диагностируют глазную гипертензию.

Способ также не позволяет осуществлять диагностику на преморбидной стадии заболевания.

Задачей настоящего исследования является расширение арсенала способов диагностики, а именно создание способа прогнозирования развития ПОУГ на основе данных о генетическом полиморфизме+1663A/G TNFR2 в сочетании с другими предикторами развития глаукомы.

Технический результат использования изобретения - получение критериев оценки риска развития ПОУГ у жителей Центрального Черноземья России русской национальности для формирования группы с повышенным риском развития ПОУГ.

В соответствии с поставленной задачей был разработан способ прогнозирования риска развития ПОУГ, включающий:

- забор крови у пациента;

- выделение ДНК из периферической венозной крови;

- анализ полиморфизмов генов TNFR2 (+1663A/G TNFR2);

- определение y1 и y2 по формулам линейной дискриминантной функции (ЛДФ):

y1=-99,183+1,096x1-5,681x2+0,310x3+0,976x4+1,801x5+0,845x6-10,976x7-6,057x8+0,886x9+11,665x10;

y2=-116,796+1,202x1-6,693x2+0,392x3+0,920x4+3,507x5+3,175x6-14,243x7-6,939x8+4,184x9+12,587x10,

где x1 - возраст (лет), x2 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы (нет - 0; да - 1), x3 - систолическое артериальное давление (САД в мм рт.ст.), x4 - диастолическое артериальное давление (ДАД в мм рт.ст.), x5 - наличие ПОУГ у родственников (нет - 0; да - 1), x6 - наличие сопутствующей патологии глаз (нет - 0; да - 1), x7 - микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаза (нет - 0; да - 1), x8 - состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза (не изменена - 0; слабая атрофия пигментной каймы - 1; выраженная атрофия пигментной каймы - 2), x9 - степень пигментации угла передней камеры (нет - 0; слабая пигментация в задней части трабекулы - 1; интенсивная пигментация в задней части трабекулы - 2; интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны - 3; интенсивная пигментация всех структур угла передней камеры-4), x10 - генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2 (AA-1; AG и GG-2);

- прогнозирование риска формирования ПОУГ в случае, если y2 больше y1.

Новизна и изобретательский уровень заключаются в том, что из уровня техники не известна возможность прогноза риска развития ПОУГ по данным о генетических вариантах локуса+1663A/G TNFR2 в сочетании с другими предикторами.

Способ осуществляют следующим образом

Производят забор крови у пациента. ДНК выделяют из образцов периферической венозной крови индивидуумов в 2 этапа. На первом этапе к 4 мл крови добавляют 25 мл лизирующего буфера, содержащего 320 мМ сахарозы, 1% тритон Х-100, 5 мМ MgCl2, 10 мМ трис-HCl (pH=7,6). Полученную смесь перемешивают и центрифугируют при 4ºС, 4000 об./мин в течение 20 минут. После центрифугирования надосадочную жидкость сливают, к осадку добавляют 4 мл раствора, содержащего 25 мМ ЭДТА (рН=8,0) и 75 мМ NaCl, ресуспензируют. Затем прибавляют 0,4 мл 10% SDS, 35 мкл протеиназы К (10 мг/мл) и инкубируют образец при 37ºС в течение 16 часов.

На втором этапе из полученного лизата последовательно проводят экстракцию ДНК равными объемами фенола, фенол-хлороформа (1:1) и хлороформа с центрифугированием при 4000 об./мин в течение 10 минут. После каждого центрифугирования производят отбор водной фазы. ДНК осаждают из раствора двумя объемами охлажденного 96% этанола. Сформированную ДНК растворяют в бидистиллированной, деионизованной воде и хранят при -20°С. Выделенную ДНК затем подвергают полимеразной цепной реакции.

Анализ полиморфизма+1663A/G (rs 5746065) рецептора фактора некроза опухоли второго типа проводят методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК на амплификаторе IQ5 (Bio-Rad) в режиме real time с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы «Силекс-М» и олигонуклеотидных праймеров и зондов, синтезированных фирмой «Синтол» (табл.1) с последующим анализом полиморфизмов методом дискриминации аллелей. Для дискриминации аллелей используют программу Bio-Rad «IQ5-Standart Edition». Генотипирование осуществляют методом TagMan зондов по данным величин уровня относительной флуоресценции (УОФ) каждого зонда.

Изобретение охарактеризовано на фиг. 1, где представлена дискриминация аллелей по локусу+1663A/G TNFR2, где ○ - гомозиготы+1663GG, □ - гомозиготы+1663AA, ∆- гетерозиготы+1663AG, ◊ - отрицательный контроль.

Две полосы, вертикальная и горизонтальная, делят график на Фиг.1 на четыре секции: одна для каждого гомозиготного состояния, одна для гетерозиготного состояния и секция без реакции. Присвоение генотипов неизвестным образцам определяется вычерчиванием УОФ для одного флуорофора на оси x относительно УОФ для другого флуорофора на оси y на диаграмме дискриминации аллелей. Зонд с флуоресцентным красителем ROX соответствует аллелю A, зонд с красителем FAM - аллелю G.

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и правее вертикальной полосы, генотип гетерозиготен (GA).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся выше горизонтальной полосы и левее вертикальной полосы, генотип гомозиготен по аллелю A (УОФ аллеля A отложены по оси y).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и правее вертикальной, генотип гомозиготен по аллелю G (УОФ аллеля A отложены по оси x).

• Если значения УОФ неизвестного образца находятся ниже горизонтальной полосы и левее вертикальной, определение генотипа невозможно: в данном случае неопределенный образец - отрицательный контроль.

Возможность использования предложенного способа для оценки риска развития ПОУГ подтверждает анализ результатов наблюдений 252 пациентов с ПОУГ и 191 человек контрольной группы.

Критерии включения в исследуемые выборки:

1. Индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Центрального Черноземья РФ и не имеющие родства между собой.

2. Добровольное согласие пациентов на проведение исследования.

3. В группу больных включались индивидуумы с впервые установленным или подтвержденным диагнозом глаукомы. Диагностика осуществлялась на основании результатов общепринятых в мировой офтальмологической практике стандартов по исследованию диска зрительного нерва (далее ДЗН) и состоянию полей зрения с учетом данных офтальмотонометрии [Национальное руководство по глаукоме: издание 2-е [Текст] /Под ред. Е.А. Егорова, Ю.С. Астахова, А.Г. Щуко //М.: ГЭОТАР-Медиа, 2011. - 148 с.].

4. В контрольную группу включались индивидуумы, не имеющие острых заболеваний глаз на момент обследования, а также соматической патологии, приводящей к вторичному поражению глаз.

Критерии исключения из исследуемых выборок:

1. Пациенты с вторичной глаукомой любой этиологии, а также пациенты с закрытым иридокорнеальным углом.

2. Больные, у которых глаукома сочеталась с иной глазной патологией или системным заболеванием, влияющим на состояние поля зрения.

3. Наличие тяжелой соматической патологии (сердечная, дыхательная, почечная недостаточность).

4. Индивидуумы, отказавшиеся от проводимого исследования.

Клиническое и лабораторное обследование индивидуумов проводилось на базе отделения микрохирургии глаза Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа. Типирование молекулярно-генетических маркеров осуществлялось в лаборатории «Молекулярной генетики человека» медицинского института Белгородского государственного национального исследовательского университета. Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0».

Прогнозирование риска развития ПОУГ осуществлялось с использованием дискриминантного анализа [Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA [Текст] /О.Ю. Реброва. - [3-е изд.]. - Москва: Медиа Сфера, 2006. - 305 с.: ил.; Боровиков, В.П. Statistica: искусство анализа данных на компьютере [Текст] /В.П. Боровиков. - 2-е изд. - Санкт-Петербург: Питер, 2003. - 688 с.]. Анализировались результаты молекулярно-генетического обследования, анамнестические данные, клинико-лабораторные показатели, позволяющие дискриминировать индивидуумов на две группы: с ПОУГ и без ПОУГ. Уравнение линейной дискриминантной функции (ЛДФ) имеет следующий вид [Реброва О.Ю., 2006]:

y=a1х12х23х3+…+аnхn+C,

где хi - информативные признаки, аi - коэффициенты для данных признаков, С - константа.

Коэффициенты в уравнениях линейных дискриминантных функций для индивидуумов с ПОУГ и без нее включают следующие признаки: генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2, возраст, наличие сердечно-сосудистых заболеваний, уровень систолического артериального давления, уровень диастолического артериального давления, наличие ПОУГ среди родственников, наличие сопутствующей патологии глаз, микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаз, состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки, степень пигментации угла передней камеры.

Таблица 1
Значения коэффициентов аi для информативных признаков хi в уравнениях линейных дискриминантных
Признаки хi Значения коэффициентов аi
для индивидуумов с минимальным риском развития ПОУГ (y1)
Значения коэффициентов аi
для индивидуумов с высоким риском развития ПОУГ(y2)
х1 - генетический вариант по локусу
+1663A/G TNFR2
(AA-1; AG и GG-2)
11,665 12,587
х2 - возраст, лет 1,096 1,202
х3 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы (нет - 0; да - 1) -5,681 -6,693
х4 - систолическое артериальное давление, мм рт.ст. 0,310 0,392
х5 - диастолическое артериальное давление, мм рт.ст. 0,976 0,920
х6 - наличие ПОУГ у родственников (нет - 0; да - 1) 1,801 3,507
х7 - наличие сопутствующей патологии глаз (нет - 0; да - 1) 0,845 3,175
х8 - микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаза (нет - 0; да - 1) -10,976 -14,243
х9 - состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза
(не изменена - 0; слабая атрофия пигментной каймы - 1; выраженная атрофия пигментной каймы - 2)
-6,057 -6,939
х10 - степень пигментации угла передней камеры
(нет - 0; слабая пигментация в задней части трабекулы - 1; интенсивная пигментация в задней части трабекулы - 2; интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны - 3; интенсивная пигментация всех структур угла передней камеры - 4)
0,886 4,184
Константа -99,183 -116,796

Следовательно, после подстановки соответствующих коэффициентов аi, приведенных в таблице 1, в уравнение линейных дискриминантных функций получают две дискриминантные функции:

y1=-99,183+1,096x1 -5,681x2+0,310x3+0,976x4+1,801x5+0,845x6 -10,976x7 -6,057x8+0,886x9+11,665x10;

y2=-116,796+1,202x1 -6,693x2+0,392x3+0,920x4+3,507x5+3,175x6 -14,243x7 -6,939x8+4,184x9+12,587 x10,

где x1 - возраст (лет),

x2 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы (нет - 0; да - 1),

x3 - САД (в мм рт.ст.), x4 - ДАД (в мм рт.ст.),

x5 - наличие ПОУГ у родственников (нет - 0; да - 1),

x6 - наличие сопутствующей патологии глаз (нет - 0; да - 1),

x7 - микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаза (нет - 0; да - 1),

x8 - состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза (не изменена - 0; слабая атрофия пигментной каймы - 1; выраженная атрофия пигментной каймы - 2),

x9 - степень пигментации угла передней камеры (нет - 0; слабая пигментация в задней части трабекулы - 1; интенсивная пигментация в задней части трабекулы - 2; интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны - 3; интенсивная пигментация всех структур угла передней камеры - 4),

x10 - генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2 (AA-1; AG и GG-2).

Выявленные при дискриминантном анализе показатели дали значение критерия Уилкса 0,322, при F(10,409)=86,127 и р<0,00001. Эти данные позволяют заключить, что две рассматриваемые нами группы по набору из десяти изученных признаков демонстрируют неслучайную межгрупповую вариацию. Значения критериев Уилкса, F-критериев, вероятности Р, а также показателей толерантности для каждого из выявленных в дискриминантном анализе признаков представлены в таблице 2.

Таблица 2
Значения критериев отбора для признаков, включенных в дискриминантный анализ
Признаки Критерий Уилкса F критерий Р Толеран-тность (т)
Генетический вариант по локусу
+1663A/G TNFR2
(AA-1; AG+GG-2)
0,325 3,95 0,05 0,984
Возраст, лет 0,338 20,27 0,0000 0,631
Наличие патологии сердечно-сосудистой системы (нет - 0; да - 1) 0,325 4,05 0,04 0,798
Систолическое артериальное давление, мм рт.ст. 0,343 26,80 0,0000 0,544
Диастолическое артериальное давление, мм рт.ст. 0,325 4,30 0,04 0,584
Наличие ПОУГ у родственников
(нет - 0; да - 1)
0,329 9,42 0,002 0,969
Наличие сопутствующей патологии глаз
(нет - 0; да - 1)
0,350 35,51 0,00000 0,955
Микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаза
(нет - 0; да - 1)
0,369 59,85 0,00000 0,637
Состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза
(неизменена - 0; слабая атрофия пигментной каймы - 1; выраженная атрофия пигментной каймы - 2)
0,325 4,14 0,04 0,411
Степень пигментации угла передней камеры
(нет - 0; слабая пигментация в задней части трабекулы - 1; интенсивная пигментация в задней части трабекулы - 2; интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны - 3; интенсивная пигментация всех структур угла передней камеры - 4)
0,440 150,50 0,00000 0,448

Анализ F-критериев и показателей вероятности статистической ошибки 1- го рода (р) по отдельным признакам свидетельствует о том, что по всем изученным показателям р≤0,05 и это позволяет их использовать при дискриминантном анализе.

Значения толерантности по рассматриваемым показателям (Т=0,41-0,98) существенно выше критического уровня Т<0,10 [Дерябин, 2001], что исключает мультиколлениарность данных признаков, т.е. отсутствуют высокие взаимные корреляции этих признаков, наличие которых снижает точность оценок. Точность распознания индивидуумов, относящихся к группе больных с ПОУГ, составляет 91,43%, а контрольной группы - 93,14%. В среднем процент правильных дискриминаций в исследуемых группах составляет 92,14%.

В вышеуказанные уравнения ЛДФ подставляют значения соответствующих показателей у конкретного индивидуума и рассчитывают значения y1 и y2. Установлено, что в случае, когда y1 больше y2, индивидуума следует отнести в группу пациентов с минимальным риском развития ПОУГ, а в случае, когда y2 больше y1, можно прогнозировать риск развития ПОУГ.

С целью проверки работоспособности заявленного технического решения в анализ были включены дополнительно еще два пациента.

У пациента А. определены следующие показатели: x1возраст - 71 год, наличие сердечно-сосудистых заболеваний - да, т.е. x2=1, уровень систолического артериального давления x3=130 мм рт.ст., уровень диастолического артериального давления x4=80 мм рт.ст., наличие ПОУГ среди родственников - да, т.е. x5=1, наличие сопутствующей патологии глаз - да, т.е. x6=1, микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаз - да, т.е. x7=1, состояние радужной оболочки - выраженная атрофия пигментной каймы, т.е. x8=2, степень пигментации угла передней камеры - интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны, т.е. x9=3, генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2 - GG, т.е. x10=2. Подставляем эти значения информативных признаков в два вышеуказанных уравнения ЛДФ и находим в каждом уравнении значение y:

y1=-99,183+1,096*71-5,681*1+0,310*130+0,976*80+1,801*1+0,845*1-10,976*1-6,057*2+0,886*3+11,665*2=96,876;

y2=-116,796+1,202*71-6,693*1+0,392*130+0,920*80+3,507*1+3,175*1-4,243*1-6,939*2+4,184*3+12,587*2=112,7.

Поскольку у данного пациента значение y2 превышает значение y1, можно ожидать развитие ПОУГ. Дальнейшее детальное клиническое обследование данного пациента подтвердило наш прогноз - у пациента А. была обнаружена ПОУГ.

Для пациента В. были определены следующие показатели: возраст - 66 лет, наличие сердечно-сосудистых заболеваний - да (1), уровень систолического артериального давления - 140 мм рт.ст., уровень диастолического артериального давления - 90 мм рт.ст., наличие ПОУГ среди родственников - нет (0), наличие сопутствующей патологии глаз - нет (0), микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаз - нет (0), состояние радужной оболочки - слабая атрофия пигментной каймы (1), степень пигментации угла передней камеры - нет (0), генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2 - AA (1). Подставляя эти значения информативных признаков в два вышеуказанных уравнения ЛДФ, при расчетах максимальное значение у1:

у1=-99,183+1,096*66-5,681*1+0,310*140+0,976*90+1,801*0+0,845*0-10,976*0 -6,057*1+0,886*0+11,665*1=104,32;

у2=-116,796+1,202*66-6,693*1+0,392*140+0,920*90+3,507*0+3,175*0-4,243*0-6,939*1+4,184*0+12,587*1=99,171.

Это дает возможность отнести пациента В. в группу с минимальным риском развития ПОУГ. При дальнейшем обследовании прогноз подтвердился.

Предложенный способ прогнозирования риска развития ПОУГ позволяет формировать среди пациентов группы риска по развитию данного заболевания, что будет способствовать более эффективной реализации лечебно-профилактических мероприятий по предупреждению развития ПОУГ и ее раннему выявлению с целью раннего начала лечения и предупреждения прогрессирования заболевания.

Способ прогнозирования риска развития первичной открытоугольной глаукомы, включающий забор крови у пациента, отличающийся тем, что выделяют ДНК из периферической венозной крови, проводят анализ полиморфизмов генов TNFR2 (+1663A/G TNFR2), определяют значения y1 и y2 по формулам линейной дискриминантной функции:
y1=-99,183+1,096x1-5,681x2+0,310x3+0,976x4+1,801x5+0,845x6-10,976x7-6,057x8+0,886x9+11,665x10;
y2=-116,796+1,202x1-6,693x2+0,392x3+0,920x4+3,507x5+3,175x6-14,243x7-6,939x8+4,184x9+12,587x10,
где x1 - возраст (лет), x2 - наличие патологии сердечно-сосудистой системы (нет - 0; да - 1), x3 - систолическое артериальное давление (САД в мм рт.ст.), x4 - диастолическое артериальное давление (ДАД в мм рт.ст.), x5 - наличие ПОУГ у родственников (нет - 0; да - 1), x6 - наличие сопутствующей патологии глаз (нет - 0; да - 1), x7 - микрососудистые нарушения в переднем отрезке глаза (нет - 0; да - 1), x8 - состояние пигментной каймы зрачкового края радужной оболочки глаза (не изменена - 0; слабая атрофия пигментной каймы - 1; выраженная атрофия пигментной каймы - 2), x9 - степень пигментации угла передней камеры (нет - 0; слабая пигментация в задней части трабекулы - 1; интенсивная пигментация в задней части трабекулы - 2; интенсивная пигментация всей трабекулярной зоны - 3; интенсивная пигментация всех структур угла передней камеры - 4), x10 - генетический вариант по локусу+1663A/G TNFR2 (AA-1; AG и GG-2), и прогнозируют риск формирования первичной открытоугольной глаукомы в случае, если y2 больше y1.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования лимфогенного метастазирования при трипл негативной инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для прогнозирования эффективности антиэстрогенной терапии тамоксифеном. У пациенток с люминальным типом рака молочной железы проводят иммуногистохимическое исследование ткани опухоли, определяют характер распределения экспрессии рецепторов эстрогенов альфа в ткани опухоли.

Группа изобретений раскрывает антительные матрицы для определения активационного состояния и/или общего количества одного или нескольких онкогенных слитых белков в таких биологических образцах, как цельная кровь или раковая ткань, а также способы их применения.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования развития профессиональных гиперкератозов. Сущность способа состоит в том, что выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, проводят генотипирование полиморфизма rs1625895 гена ТР53 методом полимеразной цепной реакции с последующим рестрикционным анализом.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики гестационного сахарного диабета у беременных, включающий проведение исследования крови утром натощак с определением содержания глюкозы венозной плазмы.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфекционным болезням и гастроэнтерологии. Способ диагностики наличия и стадии фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С заключается в том, что определяют концентрации ГГТ, ТФР-β1, ТИМП-1 и комплекс ММП-9/ТИМП-2 в сыворотке крови, на 1-м этапе рассчитывают вероятность наличия HCV-ассоциированного фиброза печени (РНФП) по формуле: РНФП=(ey/(1+ey))×100%, где y=-13,6+3,78·X1-0,1·X2 где X1 - сывороточное значение прогностического фактора ММП-9/ТИМП-2, X2 - сывороточное значение прогностического фактора ТИМП-1, ey - экспоненциальная функция.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов.
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для диагностики кариеса зубов методом инфракрасной спектроскопии. Для этого образец слюны пациента предварительно высушивают, сухой остаток измельчают и суспензируют в вазелиновом масле.
Изобретение описывает способ интраоперационной оценки состояния периферических нервов путем выявления положительной активности ацетилхолинэстеразы. Способ заключается в изготовлении криостатных срезов нерва, промывании их в двух порциях малеатного буфера, инкубации в инкубационной среде.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики стафилококковой аллергии при аллергическом рините. Сущность способа состоит в том, что с помощью хемилюминесцентного анализа исследуют функциональную активность нейтрофильных гранулоцитов, рассчитывают индекс образования активных форм кислорода (ИОАФК), представляющий собой отношение площади под кривой люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов, индуцированной живой бактериальной суспензией золотистого стафилококка, ко времени выхода на максимум люминолзависимой хемилюминесценции нейтрофильных гранулоцитов, индуцированной живой бактериальной суспензией золотистого стафилококка.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской терапевтической стоматологии, и предназначено для диагностики воспаления пульпы временного зуба. Для этого проводят исследование десневой жидкости в области проблемного зуба, определяя активность ферментов ACT и АЛТ. При снижении активности ACT и АЛТ и соотношении ACT/АЛТ > 1,5 диагностируют воспаление пульпы. Способ обеспечивает получение объективной оценки состояния пульпы временного зуба у детей неинвазивным путем. 1 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к нефрологии и относится к применению комбинации метаболитов, включающей по меньшей мере две аминокислоты, по меньшей мере два ацилкарнитина и по меньшей мере два биогенных амина, в качестве массива биомаркеров, предназначенного для оценки хронической болезни почек в образце крови. Также предложены способ и набор биомаркеров для оценки хронической болезни почек у млекопитающего. Группа изобретений обеспечивает точную и раннюю диагностику почечных заболеваний путем исследования указанных специфических биомаркеров в образце крови, полученном от пациента. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 14 ил., 27 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда, и описывает способ диагностики ранних нарушений от воздействия вредных производственных факторов в организме работников, занятых в производстве синтетических смол не более 5 лет. Способ характеризуется тем, что в нейтрофилах мазка крови у работников производства синтетических смол со стажем работы не более 5 лет определяют содержание миелопероксидазы, рассчитывают средний цитохимический коэффициент, при его значении менее 2,23 у.е. диагностируют воздействие вредных производственных факторов. Предложенный способ позволяет диагностировать ранние нарушения от воздействия вредных производственных факторов в организме работников, занятых в производстве синтетических смол, с минимальными трудовыми и материальными затратами. Изобретение может использоваться для профилактики воздействия вредных производственных факторов производства синтетических смол. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики меланоцитарных новообразований кожи. Способ включает получение биоптата исследуемого новообразования кожи, затем с исследуемым образцом проводят ПЦР в реальном времени для количественного определения относительного уровня экспрессии микроРНК по нормализующей микро-РНК - snRNA-U6, при этом маркером дифференциальной диагностики является ген hsa-miR-205. При относительном уровне экспрессии от 0,29926 до 13,202 исследуемое меланоцитарное образование кожи является меланомой, а при относительном уровне экспрессии от 25,70993 до 1583,114 - невусом; при промежуточном интервале значений от 13,202 до 25,70993 необходимо проведение иммуногистохимического исследования биоптата с применением первичных антител к специфичным маркерам: S 100, НМВ 45, MART 1, MELAN A, CD-63, MITF. Использование изобретения позволяет оптимизировать и ускорить дифференциальную диагностику меланоцитарных новообразований кожи. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к гинекологии и представляет собой способ прогнозирования риска развития пролапса гениталий (ПГ) у женщин с родовыми травмами в анамнезе, включающий отбор биоматериала для выделения ДНК, проведение генотипирования ДНК методом тетра-праймерной аллель-специфической полимеразной цепной реакции, выявление полиморфизма гена FBLN5 по сайтам rs12586948, rs2018736, rs12589592 и rs2474028, в котором высокий риск развития пролапса гениталий прогнозируют при выявлении совокупности генотипов: rs12586948-A/*, rs2018736-C/*, rs12589592-G/G и rs2474028-T/*, а низкий риск - при совокупности генотипов: rs12586948-G/G, rs2018736-A/A, rs12589592-A/A и rs2474028-С/С. Изобретение обеспечивает расширение арсенала средств для прогнозирования риска развития ПГ. 3 пр., 3 табл., 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования депрессии тяжелой степени у мужчин с ишемической болезнью сердца (ИБС). Сущность способа состоит в том, что у мужчин с ИБС устанавливают временную и структурную связь между ИБС и признаками депрессии, измеряют уровень личностной тревожности с помощью теста Спилбергера-Ханина. При уровне личностной тревожности менее 45 баллов определяют полиморфизмы -1438A/G гена рецептора серотонина типа 2А и Val66Met гена нейротрофического мозгового фактора, после чего у больных, являющихся носителями аллеля S полиморфизма 5-HTTLPR, аллеля G полиморфизма -1438A/G и генотипа ValVal полиморфизма Val66Met, прогнозируют депрессию тяжелой степени. Использование заявленного способа позволяет эффективно выявлять пациентов с высоким риском развития депрессии тяжелой степени и назначить им своевременную дифференцированную психофармакотерапию. 7 пр.
Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки эффективности диализно-фильтрационной очистки крови, заключающийся в том, что в сыворотке крови больного определяют суммарную концентрацию фенилуксусной (ФУК), пара-гидроксифенилуксусной (п-ГФУК), фенилмолочной (ФМК) и пара-гидроксифенилмолочной (п-ГФМК) кислот до и после очистки крови и при снижении ее в 2 и более раз очистку крови оценивают как эффективную. Способ обладает высокой методической точностью и объективностью и позволяет своевременно определить эффективность проводимой операции очистки крови у больных с разными заболеваниями. 8 табл., 6 пр.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения иммуностимулятора из нервной ткани головоногих моллюсков, мозга морских млекопитающих и рыб. Способ получения иммуностимулятора из нервной ткани головоногих моллюсков, мозга морских млекопитающих и рыб, включающий размораживание и измельчение сырья, затем измельченное сырье обрабатывают ферментами протеолитического типа, полученную надосадочную жидкость отделяют и сушат конечный продукт, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет повысить выход конечного продукта. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 4 пр.

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии, иммунологии и медицины и предназначена для идентификации популяций аутореактивных Т-клеток у индивидуумов с аутоиммунными заболеваниями. Для взятия аутоиммунных Т-клеток у индивидуума, страдающего аутоиммунным заболеванием, получают пептоид, который специфически связывается с аутоиммунными Т-клетками. Указанный пептоид связан с носителем. Выполняют контактирование образца, взятого от указанного индивидуума, с указанным пептоидом, связанным с носителем, в течение периода времени, достаточного для связывания аутоиммунных Т-клеток с указанным пептоидом, связанным с носителем. Затем отделяют указанный носитель от указанного образца. В других воплощениях обеспечиваются способы уничтожения аутоиммунных Т-клеток, взятых у индивидуума, страдающего аутоиммунным заболеванием. Использование группы изобретений обеспечивает более эффективную идентификацию аутоиммунных заболеваний различного типа и проведение терапии, направленной против таких популяций. 4 н. и 46 з.п. ф-лы, 15 ил., 1 табл., 3 пр.

Изобретение касается способа выявления ионов кальция в эритроцитах периферической крови беременных. Способ включает выполнение гистохимической реакции на монослойных мазках периферической крови с помощью их последовательной обработки растворами, состоящими из 5% нитрата серебра, промывки 5% тиосульфатом натрия и дистиллированной водой с последующей докраской 1% раствором сафранина на 96% этиловом спирте, дифференцировки в 96% этиловом спирте, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, просветление в кислоте и заключение в бальзам. Затем изучают компьютерным цитофотометрическим методом содержание кальция в отдельно взятых эритроцитах и устанавливают. При обострении цитомегаловирусной инфекции до титра антител 1:1600, снижении содержания кальция в мембранах эритроцитов до 12,80±0,40 усл. ед., при контроле - 34,00±0,07 усл. ед., увеличении количества дегенеративных форм эритроцитов до 12,0±0,95% и снижении содержания оксигемоглобина до 92,3±1,5% определяют угрозу формирования в организме беременной гипоксии. 2 ил.
Наверх