Способ определения связывания радиофармпрепарата на основе ципрофлоксацина, меченного 99mtc c бактериями


 


Владельцы патента RU 2558929:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт кардиологии" (НИИ Кардиологии) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и описывает способ определения связывания радиофармпрепарата на основе ципрофлоксацина, меченного 99mTc с бактериями, заключающийся в следующем. В стерильный флакон вливают по 1 мл бактериальной культуры, затем добавляют по 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc (концентрация ципрофлоксацина в готовом радиофармпрепарате 4 мг/мл) и предварительно отфильтрованного фильтром-насадкой для шприцов с диаметром пор 100 нм. Полученную суспензию инкубируют в термостате при 37°C в течение сроков, выбранных исследователями. По истечении сроков инкубации радиоактивную бактериальную суспензию забирают в стерильный шприц и пропускают через антибактериальный фильтр-насадку для шприцов с диаметром пор 200 нм, затем фильтр промывают 10 мл 0,9% раствором NaCl и измеряют радиоактивность осадка в фильтре и во флаконе с отмывочным раствором на радиометре. В качестве контроля используют фильтры, через которые пропускают 1 мл 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами бактерий. Изобретение обеспечивает сокращение сроков и повышение безопасности процедуры. 1 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может применяться для доклинического испытания радиофармпрепаратов.

Известен способ определения связывания радиофармпрепарата на основе ципрофлоксацина, меченного 99mTc с Escherichia coli [1], заключающийся в инкубировании культуры Escherichia coli с 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc, и концентрацией ципрофлоксацина в готовом радиофармпрепарате 4 мг/мл, с последующим центрифугированием радиоактивной бактериальной суспензии в течение 10 мин при 2000 g, двукратной отмывкой меченых бактерий 0,9% NaCl и радиометрией бактериального осадка, надосадка и центрифужной пробирки.

Данный способ является наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому результату и выбран в качестве прототипа.

Его недостатком является длительность выполнения процедуры (60 мин) и контакта исследователя с бактериями вследствие двукратной отмывки бактериальной суспензии и трехкратного ее центрифугирования, а также потеря радиоактивной бактериальной суспензии в наконечниках пипеток при выполнении отмывки.

Цель изобретения - сокращение сроков и повышение безопасности процедуры.

Поставленная цель достигается техническим решением, представляющим собой способ определения связывания радиофармпрепарата на основе ципрофлоксацина, меченного 99mTc с бактериями, заключающийся в следующем. В стерильный флакон вливают по 1 мл бактериальной культуры, затем добавляют по 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc (концентрация ципрофлоксацина в готовом радиофармпрепарате 4 мг/мл) и предварительно отфильтрованного фильтром-насадкой для шприцов с диаметром пор 100 нм. Полученную суспензию инкубируют в термостате при 37°C в течение сроков, выбранных исследователями. По истечении сроков инкубации радиоактивную бактериальную суспензию забирают в стерильный шприц и пропускают через антибактериальный фильтр-насадку для шприцов с диаметром пор 200 нм, затем фильтр промывают 10 мл 0,9% раствором NaCl и измеряют радиоактивность осадка в фильтре и во флаконе с отмывочным раствором на радиометре. В качестве контроля используют фильтры, через которые пропускают 1 мл 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами бактерий.

Новым в предлагаемом способе является использование для сепарации радиоактивных бактерий и раствора несвязанного ципрофлоксацина, меченного 99mTc, антибактериальных фильтр-насадок для шприцов с диаметром пор 200 нм, а также использование контрольной фильтрации растворов ципрофлоксацина, меченного 99mTc и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами бактерий.

Новые признаки проявили в заявляемой совокупности новые свойства. Идентичной совокупности признаков в известных технических решениях не обнаружено.

Предлагаемый способ может быть использован при выполнении доклинических испытаний новых радиофармпрепаратов, а также в научно-исследовательских работах.

Исходя из вышеизложенного предлагаемое изобретение соответствует условиям патентоспособности «Новизна», «Изобретательский уровень» и «Промышленная применимость».

Изобретение будет понятно из следующего описания и приложенных рисунков.

Диагностика воспалительных процессов бактериальной этиологии остается одной из наиболее актуальных проблем современной медицины. Широкая распространенность такой патологии и связанные с ней высокая степень инвалидизации и летальности требует разработки новых методов диагностики. Решением этой проблемы может служить использование радионуклидных методов исследования, которые во многих случаях позволяют оценить патофизиологические изменения в поврежденных органах и тканях с помощью гамма-сцинтиграфии. В последние годы была предпринята попытка синтезировать радиофармпрепараты (РФП), связывающиеся непосредственно с возбудителем и, таким образом, позволяющие селективно визуализировать очаги бактериального воспаления. В качестве таких индикаторов могут быть использованы меченные радиоактивными изотопами антибактериальные лекарственные средства (ЛС), при этом антибиотик выполняет функцию транспорта и фиксации радионуклида в патологическом очаге.

Ципрофлоксацин - антибиотик фторхинолонового ряда - обладает химической структурой, позволяющей проводить его радиоизотопное мечение технецием-99m. Кроме того, указанное ЛС необратимо связывается с ферментами бактерий и аккумулируется в очагах скопления микроорганизмов. Эти свойства дают основание рассматривать ципрофлоксациц, меченный технецием-99m, в качестве перспективного РФП для диагностики бактериального воспаления. В рамках доклинических исследований указанного РФП обязательным является исследование его способности селективно связываться бактериями, присутствующими в патологическом очаге.

Новые существенные признаки позволяют сократить время исследования и повысить безопасность выполняемой процедуры.

Способ осуществляется следующим образом.

В стерильный флакон вливают по 1 мл бактериальной культуры, затем добавляют по 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc (концентрация ципрофлоксацина в готовом радиофармпрепарате 4 мг/мл) и предварительно отфильтрованного фильтром-насадкой для шприцов с диаметром пор 100 нм. Полученную суспензию инкубируют в термостате при 37°C в течение сроков, выбранных исследователями. По истечении сроков инкубации радиоактивную суспензию живой или инактивированной бактериальной культуры забирают в стерильный шприц и пропускают через антибактериальный фильтр-насадку для шприцов с диаметром пор 200 нм, затем фильтр промывают 10 мл 0,9% раствором NaCl и измеряют радиоактивность осадка в фильтре и во флаконе с промывочным раствором на радиометре. В качестве контроля используют фильтры, через которые пропускают 1 мл 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами бактерий.

Пример 1

В ходе доклинических испытаний определяли долю связывания ципрофлоксацина, меченного 99mTc со Staphylococcus aureus, в 3-х сериях опытов следующим образом.

В стерильные флаконы (общее количество 18 шт. на 1 опыт) вливали по 1 мл живой бактериальной культуры (6 флаконов), инактивированной культуры (6 флаконов) и ципрофлоксацин-резистентной культуры S. aureus (6 флаконов). Затем в 3 флакона, содержащих каждую из исследуемых культур, добавляли по 1 мл (0,37 МБк) 99mTc-ципрофлоксацина, предварительно отфильтрованного фильтром-насадкой для шприцов Minisart ® (Sartorius Stedim biotech) с диаметром пор 100 нм. Полученную суспензию инкубировали в термостате при 37°C в течение 15, 30 и 60 мин. Для того чтобы определить возможность взаимодействия свободного 99mTc с микроорганизмами, аналогичным образом проводили инкубацию оставшейся части культур Staphylococcus aureus с натрия пертехнетатом (Na99mTcO4). По истечении сроков инкубации каждый вид суспензии забирали в стерильный шприц и пропускали через антибактериальный фильтр-насадку для шприцов Minisart ® (Sartorius Stedim biotech) с диаметром пор 200 им, затем фильтр промывали 10 мл 0,9% раствором NaCl и измеряли радиоактивность осадка в фильтре и во флаконе с промывочным раствором на радиометре. В качестве контроля использовали фильтры, через которые пропускали 1 мл (20 МБк) 99mTc-ципрофлоксацина и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами S. aureus.

Результаты инкубации культур Staphylococcus aureus с ципрофлоксацином, меченным 99mTc, представлены на рис.1. Так, через 15 мин после смешивания бактерий с РФП меченный 99mTc антибиотик в большем количестве накапливался в суспензии инактивированных, чем в живых и резистентных бактериях. Известно, что ципрофлоксацин обладает бактерицидным действием не только на активно делящиеся, но и на покоящиеся клетки [2]. Накопление РФП в убитой культуре стафилококка можно объяснить увеличением проницаемости поврежденной нагреванием клеточной стенки микроорганизмов, что облегчает попадание антибиотика в бактериальную клетку.

В то же время из рис.1 следует, что с течением времени происходило вымывание РФП из инактивированной культуры и увеличение степени его аккумуляции в живых образцах. К 60 мин инкубации количество 99mTc-ципрофлоксацина, связавшегося с бактериями, становилось одинаковым во всех опытах. Эти данные свидетельствуют об обратимом взаимодействии меченного изотопной меткой антибиотика с убитыми бактериями и о необратимом его связывании с живыми культурами.

Предлагаемый способ апробирован в 3 сериях экспериментов и позволяет сократить время исследования, а также уменьшить затраты на его проведение.

Используемая литература

1. K. Alexander, Wm. Tod Drost, J.S. Mattoon, et al. Binding of ciprofloxacin labelled with technetium Tc 99m versus 99m Tc-pertechnetate to a live and killed equine isolate of Escherichia coli // The Canadian Journal of Veterinary Research 2005. V 69. P.272-277.

2. Сидоренко С.В. Роль хинолонов в антибактериальной терапии. Механизм действия, устойчивость микроорганизмов, фармакокинетика и переносимость // Клин. фармакология и терапия. 2003. Т.11. №2. С.46-51.

Способ определения связывания радиофармпрепарата на основе ципрофлоксацина, меченного 99mTc с бактериями, заключающийся в инкубировании при 37°C бактериальной культуры с 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc и концентрацией ципрофлоксацина в готовом радиофармпрепарате 4 мг/мл, с последующей радиометрией радиоактивной бактериальной суспензии и отмывочного раствора на радиометре, отличающийся тем, что ципрофлоксацин, меченный 99mTc, предварительно пропускают через фильтр-насадку с диаметром пор 100 нм, а по окончании срока инкубации радиоактивную бактериальную суспензию пропускают через фильтр-насадку с диаметром пор 200 нм и промывают фильтр 10 мл 0,9% раствором NaCl, а в качестве контроля используют фильтры, через которые пропускают 1 мл 0,37 МБк/мл ципрофлоксацина, меченного 99mTc и Na99mTcO4 без предварительной инкубации с культурами бактерий.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу выявления костных метастазов при почечно-клеточной карциноме (RCC), включающему введение нуждающемуся в этом субъекту эффективного количества 124I-меченного антитела против карбоангидразы-IX или его антигенсвязывающего фрагмента, выполнение визуализации с помощью позитронно-эмиссионной томографии (PTE) для измерения уровня радиации в указанном субъекте и определение костных метастазов.

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии. .

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения сигнальных лимфатических узлов у больных РМЖ. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиопедиатрии. .

Изобретение относится к медицине, а именно пульмонологии. .

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности радиоаналитической химии, и может быть использовано для определения серы в различных жидких органических системах, в том числе в нефти и продуктах ее переработки.

Изобретение относится к области радиационной биохимии. .

Изобретение относится к области радиофармацевтики и представляет собой способ получения термочувствительного йодсодержащего радиофармпрепарата (РФП) с радиохимической чистотой 95-98%, заключающийся в ковалентном присоединении изотопов радиоактивного йода к тирозиновым группам, включенным в цепь поли-N-изопропилакриламида, с последующим отделением меченой полимерной компоненты от низкомолекулярных соединений на хроматографической гелевой колонке путем элюирования водой, отличающийся тем, что в качестве подвижной фазы используются водные растворы химических соединений, преимущественно неорганических солей, обладающих коэффициентом дестабилизации полимер-гидрат-йодидных комплексов γ = − d T f t d C s из интервала γ=30-60 град·л/моль, где Tft - температура фазового перехода в растворе, содержащем дестабилизирующую добавку, Cs - концентрация добавки, ограниченная сверху условием γ ⋅ C s < T f t 0 − T к ( T f t 0 = T f t , при Cs=0, Tк - температура в колонке).

Изобретение относится к медицине, медицинской радиологии и может быть применено для оценки всасывательной функции тонкой кишки с использованием динамической абсорбционной энтеросцинтиграфии с зондовым способом введения 99mTc-пертехнетата.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному моноклональному анти-LOXL2 антителу или его антиген-связывающему фрагменту, а также к конъюгатам, их содержащим.
Изобретение относится к медицине, онкологии и может применяться для ранней диагностики опухолей позвонков. Проводят трехступенчатую диагностику всем больным с опухолевыми заболеваниями различной локализации.

Изобретение относится к технике для ядерной медицины, в частности к изготовлению изотопных генераторов. Генератор рубидия-82 включает защитный от ионизирующего излучения корпус, внутри полости которого размещена емкость с разъемным защитным вкладышем из вольфрама или вольфрамового сплава, генераторной колонкой и подводящей и отводящей трубками, размещенными во внутренних пазах разъемного вкладыша, при этом крышка корпуса снабжена предохранительной полостью для сбора утерянной жидкости.

Изобретение относится к микрожидкостной радиофармацевтической системе. Система включает реакционный сосуд, адаптированный для приема радиоизотопа, выбранного из углерода-11 и фтора-18, и одного реагента, причем реакционный сосуд связан с источником тепла, посредством которого, когда радиоизотоп и реагент смешиваются в реакционном сосуде, к реакционному сосуду из теплового источника подводится тепло, и синтезируется радиофармацевтический раствор.

Изобретение (варианты) относится к медицине, онкологии, лучевой диагностике, позитронно-эмиссионной томографии с 18F-фтордезоксиглюкозой (18F-ФДГ). Больному с 18F-ФДГ-негативной опухолью не ранее чем через 18 часов после инъекции 18F-ФДГ дополнительно внутривенно вводят 350 МБк/м2 11С-метионина, затем через 10-15 мин выполняют ПЭТ сканирование органов грудной клетки.
Изобретение относится к медицине, онкологии, гастроэнтерологии. Способ позволяет исследовать моторику желудка, тонкой кишки, желчных путей у пациентов после перенесенных радикальных и паллиативных вмешательств при опухолевом поражении головки поджелудочной железы, функциональную активность гастроэнтеро- и билиодигестивных анастомозов.

Описываются новые производные изатин-5-сульфонамида общей формулы или их физиологически приемлемые соли, где R представляет собой фенил, 3-фторфенил, 2,4-дифторфенил, 3,5-дифторфенил, тетрагидропиранил, диазин или триазолилметил, возможно замещенный одним C1-6алкилом, который дополнительно может быть замещен одним галогеном; R' представляет собой фенил, возможно замещенный одним или двумя галогенами, или триазолил, возможно замещенный одним C1-6алкилом, который дополнительно может быть замещен одним галогеном; причем когда R означает фенил, R' представляет собой возможно замещенный триазолил, фармацевтические композиции, содержащие указанные производные, их применение в качестве агентов молекулярной визуализации, их применение для диагностики или лечения заболеваний или расстройств, связанных с дисрегуляцией апоптоза, способы синтеза указанных производных, способы молекулярной визуализации каспазной активности и апоптоза и способы оценки терапевтического воздействия исследуемого соединения на каспазную активность.
Изобретение относится к медицине, а именно к лучевой терапии опухолей. Способ включает введение в опухоль средства, содержащего наноразмерные частицы золота и йодсодержащее контрастное вещество.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины. Сущность изобретения заключается в следующем: в течение 6 месяцев телкам 6-месячного возраста, свободным от ВЛКРС по результатам серологических (РИД) и молекулярно-биологических (ПЦР) исследований в комплексе, назначают лигфол, фоспренил и Е-селен, которые вводят внутримышечно по следующей схеме: лигфол и фоспренил в дозе 5 мл/гол.
Наверх