Рацемический 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триен в качестве ингибитора пролиферации опухолевых клеток mcf-7

Авторы патента:

Дроздов Андрей Сергеевич (RU)

Филатов Михаил Валентинович (RU)

Морозкина Светлана Николаевна (RU)

Шавва Александр Григорьевич (RU)

Ковалёв Роман Александрович (RU)

C07J41/00 - Нормальные стероиды, содержащие один или несколько атомов азота вне гетероциклического кольца

C07J31/00 - Нормальные стероиды, содержащие один или несколько атомов серы вне гетероциклического кольца

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61K31/565 - не замещенные в положении 17 бета атомом углерода, например эстран, эстрадиол

Владельцы патента RU 2562242:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный университет" (СПбГУ) (RU)

Изобретение относится к рацемическому 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триену, ингибирующему пролиферацию опухолевых клеток рака молочной железы MCF-7. 1 пр.

Изобретение относится к синтезу рацемического 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триена, ингибирующего пролиферацию опухолевых клеток MCF-7. Это предполагает возможность его применения в медицине.

Рак молочной железы (РМЖ) у женщин является «ведущим» онкологическим заболеванием [1]. 60-70% Опухолей этой локализации эстрогенозависимы [1], т.е. скорость пролиферации опухолевых клеток значительно возрастает в присутствии этой группы гормонов.

Хотя наиболее распространенные методы лечения эстрогенозависимых опухолевых заболеваний включают использование антиэстрогенов и селективных модуляторов рецепторов эстрогенов [2-4], разрабатывается и новая стратегическая линия, состоящая в применении сульфаматов стероидных эстрогенов [5]. Так, запатентован метод получения и использования многих сульфаматов стероидных эстрогенов природного ряда [6], в частности соединение (I) (прототип).

Целью изобретения является расширение группы веществ, блокирующих рост клеток рака молочной железы MCF-7. Поставленная цель достигается синтезом рацемического 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триена (II). Особенностями структуры этого соединения является цис-сочленение колец B и C, а также наличие сульфамоильной группы в положении 2, что принципиально отличает его от всех известных ингибиторов с такими свойствами.

Схема синтеза 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триена (II) представлена ниже.

Пример.

К раствору 2.05 г стероида (III) [7] в 40 мл хлористого метилена добавляют 1.2 г Na₂HPO₄ и 1.6 г м-хлорнадбензойной кислоты в 40 мл хлористого метилена. Реакционную смесь перемешивают 20 ч при комнатной температуре, а затем выливают в 700 мл диэтилового эфира. Органическую фазу отделяют, промывают равным объемом насыщенного раствора бикарбоната натрия, а затем водой до нейтральной реакции. Растворители удаляют в вакууме, продукт реакции выделяют флэш-хроматографией на силикагеле, элюируя смесью петролейный эфир-этилацетат 10:1, 5:1. После кристаллизации из гексана выход 1.69 г (79%), т.пл. 164-165°C. Спектр ЯМР ¹H соединения (IV), δ, м.д.: 6.79 (C¹-H), 6.64 (C⁴-H), 2.63 (C⁶-Hα), 2.78 (C⁶-Hβ), 1.81 (C⁷-Hα), 1.66 (C⁷-Hβ), 2.01 (C⁸-Hα), 2.59 (C⁹-Hα), 1.70 (C¹¹-Hα), 1.61 (C¹¹-Hβ), 1.32 (C¹²-Hα), 1.72 (C¹²-Hβ), 1.66 (C¹⁴-Hα), 1.51 (C¹⁵-Hα), 1.78 (C¹⁵-Hβ), 2.21 (C¹⁶-Hα), 1.51 (C¹⁶-Hβ), 4.62 (C¹⁷-Hα), 0.90 (C¹⁸H₃), 3.78 (CH₃O), 2.04 (CH₃CO), 2.29 (C²-OCOCH₃).

Спектр ЯМР ¹³C, δ, м.д.: 122.9 (C¹), 137.5 (C²), 134.9 (C³), 112.2 (C⁴), 137.5 (C⁵), 31.1 (C⁶), 20.7 (C⁷), 37.3 (C⁸), 41.1 (C⁹), 133.7 (C¹⁰), 28.4 (C¹¹), 37.3 (C¹²), 41.6 (C¹³), 47.1 (C¹⁴), 22.1 (C¹⁵), 26.8 (C¹⁶), 82.4 (C¹⁷), 13.3 (C¹⁸), 55.7 (CH₃O), 21.0 и 170.9 (ацетильная группа при C¹⁷), 20.5 и 169.2 (ацетильная группа при C²). Масс-спектр, m/z (%): 386 (12), 344 (100), 202 (10), 189 (8), 187 (7), 176 (15), 137 (8).

Найдено, %: C 71.45; H 8.08. C₂₃H₃₀O₅. Вычислено, %: C 71.48; H 7.82.

К раствору 200 мг 2,17β-диацетокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триена (IV) в смеси 5 мл бензола и 3 мл метанола добавляют 150 мг NaOH, перемешивают 2 часа при 50°C. Реакционную смесь выливают в 10 мл 1 н. соляной кислоты, продукты реакции экстрагируют тремя порциями этилацетата по 10 мл. Органические слои последовательно промывают двумя порциями воды по 5 мл, 15 мл насыщенного раствора NaCl, сушат над Na₂SO₄. Растворители удаляют на роторном испарителе. После кристаллизации остатка из метанола получают 150 мг (96%) соединения (V), т.пл. 211-213°C.

Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д.): 8.52 с (1H), 6.53 с (1H), 6.50 с (1H), 4.48 д (1H, J 4.5 Гц), 3.69 с (3H), 3.43 д (1H, J 4.5 Гц) 2.63 д (1H, J 16.1 Гц), 2.42 д (1H, J 12.2 Гц), 1.87 дд (2H, J 9.9 Гц, J 14.8 Гц), 1.73-1.45 м (7H) 1.33 т (2H, J 8.7 Гц), 1.11 т (1H, J 11.0 Гц) 0.74 с (3H). Спектр ЯМР ¹³C (DMSO, δ, м.д.): 146.5, 145.1, 134.5, 127.3, 116.6, 113.0, 81.1, 56.4, 48.0, 42.4, 42.1, 38.4, 38.1, 31.1, 30.3, 22.7, 21.6, 13.3.

Найдено, %: C 75.33, H 8.80. C₁₉H₂₆O₃. Вычислено, %: C 75.46; H 8.67.

К раствору 100 мг 2,17β-дигидрокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триена (V) в 2 мл сухого диметилацетамида при комнатной температуре добавляют 150 мг сульфамоилхлорида, реакционную смесь перемешивают 8 ч при комнатной температуре в атмосфере аргона. Реакционную смесь выливают в насыщенный раствор хлористого натрия (10 мл), продукты реакции экстрагируют этилацетатом (3×5 мл). Объединенную органическую фазу промывают водой (2x5 мл), 15 мл насыщенного раствора NaCl, сушат над Na₂SO₄. Растворитель удаляют на ротационном испарителе, остаток кристаллизуют из метанола. Получают 114 мг (75%) целевого продукта (II), т.пл. 215-217°C.

Спектр ЯМР ¹H (DMSO, δ, м.д.): 7.80 с (2H), 7.39 с (2H), 7.07 с (1H), 6.80 с (1H), 4.27 д (1H J=8.1 Гц), 3.74 с (3H), 3.44-3.32 м (1H) 2.86-2.72 м (1H), 2.65-2.55 м (2H), 2.28-2.14 м (1H), 2.02-1.90 м (2H), 1.77-1.39 м (7H), 1.18-1.05 м (1H), 0.85 с (3H). Спектр ЯМР ¹³C (DMSO, δ, м.д.): 150.2, 137.8, 137.0, 134.0, 124.3, 113.9, 88.2, 56.6, 47.1, 42.2, 41.5, 37.9, 37.3, 31.4, 29.0, 27.9, 22.4,21.1, 13.8.

Найдено, %: C 49.51, H 7.31 N 5.88. C₁₉H₂₈N₂O₇S₂. Вычислено, %: C 49.55; H 6.13 N 6.08.

Исследовали влияние стероида (II) на рост перевиваемой культуры клеток человека MCF-7 (аденокарцинома молочной железы). В качестве отрицательного контроля использовали нормальные кожные фибробласты человека (КФЧ) ранних пассажей. Клетки культивировали во флаконах Карреля в среде DMEM/F12 (Биолот) с добавлением 1% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота (Биолот), без антибиотиков, в 5% CO₂ атмосфере, при 37°C. Клетки высаживались на флаконы Карреля по 50×104 клеток на флакон. Для изучения пролиферативной активности клеток через 24 часа после посева в культуральную среду ее заменяли на среду, содержащую ингибитор сульфатазы, до конечной концентрации 50 мкг/мл, после чего инкубировали данные опухолевые клеточные линии в течение различных промежутков времени (от 24 до 72 ч). Конечная концентрация ДМСО в культуральной среде не превышала 0.5%. Для исключения цитотоксического действия ДМСО проводили опыты с добавлением ДМСО без ингибитора сульфатазы. Для исключения неспецифического губительного действия веществ использовались нормальные кожные фибробласты человека. Далее клетки снимали раствором версена-трипсина (Биолот), рассеивали на флаконы Карреля, содержащие новую полную культуральную среду. Подсчет клеток проводили в момент достижения необработанными контрольными клетками максимальной плотности клеток на единицу площади поверхности культурального флакона (монослой), при этом их количество определялось как 100%. Оказалось, что при концентрации стероида (II) 20 мкг/мл рост опухолевых клеток тормозится примерно в той же степени, что и под действием применяемого в клинической практике тамоксифена. При этом стероид (II) не тормозил рост нормальных кожных фибробластов человека. Этот результат весьма важен, так как механизмы действия стероида (II) и тамоксифена различны.

Список использованной литературы

[1] Gururaj А.Е., Rayala S.K., Vadlamudi R.K., Kumar R. Novel mechanisms of resistance to endocrine therapy: genomic and nongenomic considerations // Clin. Cancer Res. 2006. Vol. 12. P. 1001s - 1007s.

[2] Chetrite G.S., Pasqualini J.R. The selective estrogen enzyme modulator (SEEM) in breast cancer // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2001. Vol. 76. P. 95-104.

[3] Fabian C.J., Kimler B.F. Selective estrogen-receptor modulators for primary prevention of breast cancer // J. Clin. Oncol. 2005. Vol. 23. N 8. P. 1644-1655.

[4] Jordan V.C. Antiestrogens and Selective Estrogen Receptor Modulators as Multifunctional Medicines. 2. Clinical Considerations and New Agents // J. Med. Chem. 2003. Vol. 46. N 7. P. 1081-1111.

[5] Maltais R., Poirier D. Steroid sulfatase inhibitors: A review covering the promising 2000-2010 decade // Steroids. Vol. 76. N 10/11. P. 929-948 (2011).

[6] Leese M., Purohit Α., Reed M.J., Newman S.P., Chander R.K., Jourdan F., Potter B.V.L. Oestrogen derivatives as inhibitors of steroid sulfatase // United States Patent Application Publication US 2006/0094698 A1.

[7] Шавва А.Г., Власова К.B., Цогоева С.Б., Егоров М.С., Якуцени П.П. Изучение связывания эстрадиола и 8-изоэстрадиола с α-рецептором эстрогенов методом молекулярного моделирования // Биоорган. химия. 2002. Т. 28. №3. С. 236-241.

Рацемический 2,17β-дисульфамоилокси-3-метокси-8α-эстра-1,3,5(10)-триен формулы

в качестве ингибитора пролиферации опухолевых клеток рака молочной железы MCF-7.

Изобретение относится к способам сохранения целостности пептидов в пищеварительном канале путем применения хенодезоксихолевой кислоты, урсодезоксихолевой кислоты, гликодезоксихолевой кислоты, гликохенодезоксихолевой кислоты или бигуанида, которые ингибируют одну или более сериновые протеазы кишечника.

Глюкокортикоиды, присоединенные посредством ароматического линкера в положении 21 к нитроэфирам, и их применение в офтальмологии // 2501804

Изобретение относится к соединениям формулы (I), их солям и стереоизомерам, а также к их применению для лечения глазных заболеваний, таких как диабетический отек желтого пятна, диабетическая ретинопатия, дегенерация желтого пятна, возрастная дегенерация желтого пятна и других заболеваний сетчатки и желтого пятна. В общей формуле (I) , , или , R1 и R2 взятые вместе являются группой формулы (II), R3 представляет атом водорода или F и R4 представляет F; R1, R2, R3 и R4 присоединены к 17, 16, 6 и 9 углеродным атомам стероидной структуры в положении α или β; R представляет (III) или (IV), остальные значения радикалов указаны в описании.

Новые производные оксима холест-4-ен-3-она, фармацевтические композиции, их содержащие, и способ получения // 2496784

Изобретение относится к производным оксима холест-4-ен-3-она формулы (I) и их фармацевтически приемлемым солям и оптическим изомерам, их применению в качестве цитопротекторных лекарственных средств, а также к фармацевтической композиции на их основе.

Новые стероидные соединения, обладающие повышенной растворимостью в воде и устойчивостью к метаболизму, и способы их приготовления // 2458065

Замещенные производные эстратриена как ингибиторы 17бета hsd // 2453554

Изобретение относится к замещенным эстратриен производным общей формулы (I) (значения радикалов указаны в формуле изобретения), полезным в терапии, особенно для использования для лечения и/или профилактики зависимых от стероидных гормонов расстройств, требующих ингибирования фермента 17 -гидроксистероид дегидрогеназы (17-HSD) типа 1, типа 2 и/или типа 3, а также их солям, фармацевтическим препаратам, содержащим эти соединения, а также способам получения этих соединений.

Способ получения метилового эфира 3-оксо-3'-(нитрометил)-4'-(хлорметил)-спиро[лупан-2,1'-циклопентан]-28-овой кислоты // 2448975

Изобретение относится к области биоорганической и медицинской химии, в частности к способу получения нового потенциально биологически активного производного бетулоновой кислоты - метилового эфира 3-оксо-3'-(нитрометил)-4'-(хлорметил)-спиро[лупан-2,1'-циклопентан]-28-овой кислоты.

Стероиды, высвобождающие оксид азота // 2442790

Изобретение относится к нитрооксипроизводным кортикостероидов общей формулы (I) и их фармакологически приемлемым солям или стереоизомерам, где R представляет остаток кортикостероида формулы (II), где:R1 представляет ОН, R 2 представляет СН3 или R1 и R 2, взятые вместе, образуют группу формулы (III), R 3 представляет Cl или F; где R1, R2 , R3 и R4 могут быть присоединены к соответствующим атомам углерода стероидной структуры в положении или ; при условии, что, когда R1 и R2 представляют группу формулы (III), тогда R3 представляет F и R4 представляет Н или F.

Нитрооксипроизводные стероидов // 2415864

Изобретение относится к новым нитрооксипроизводным стероидов, к способам их получения, их фармацевтическим составам для местного применения для лечения заболеваний или нарушений кожи или слизистой оболочки.

Ингибиторы 17 -гсд1 и стс // 2412196

17 бета-оксиэстратриены // 2339643

Химические соединения // 2462472

Способ этерификации тиокарбоновой кислоты // 2351605

Способ получения пропионата флутиказона, в частности полиморфной формы 1 // 2333218

Способ получения 6 , 9 -дифтор-17 -(1-оксо-пропокси)-11 -гидрокси-16 -метил-3-оксо-андрост-1,4-диен-17 -карботионовой кислоты // 2333217

Способ получения 3-кето-7-алкоксикарбонилзамещенного 4,5-стероида, способы получения промежуточных соединений, промежуточные соединения // 2261865

3альфа-гидрокси-3бета-метоксиметил-21-гетероцикл-замещенные стероиды, фармацевтическая композиция, способ облегчения или профилактики бессонницы или погружения в наркоз // 2243232

Очищенные стероидсульфаматные соединения, эстрон-сульфаматы // 2210574

Изобретение относится к новым ингибиторам стероидсульфатазы, используемым для лечения эстронзависимых опухолей, в частности рака груди. .

Ингибиторы стероидсульфатазы // 2207134

Изобретение относится к медицине и касается фармацевтической композиции, включающей соединение формулы I, обладающее стероидсульфатазной активностью. .

Производные 16-гидрокси-11-(замещенный фенил)-эстра-4,9- диена, соединение, фармацевтическая композиция // 2187510

Изобретение относится к производным 16-гидрокси-11-(замещенный фенил)-эстра-4,9-диена, соответствующим формуле I, где R1 - C1-6 - алкил, трифлат или фенил, где фенильная группа необязательно замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из циано, галогена и С1-4-алкила, R2 - водород, или карбокси -1-оксо-С1-6-алкил; R3 - водород, галоген или С1-6- алкил, необязательно замещенный одним или несколькими С1-6-алкокси, R4 - водород, или С1-6-алкил, и Х, О или NOH; или их фармацевтически приемлемой соли или сольвату; описаны способы их получения и содержащая их фармацевтическая композиция, предназначенная для использования в медицинской терапии, в особенности при лечении или профилактике глюкокортикоидзависимых заболеваний или симптомов.

Ингибиторы стероид-сульфатазы // 2182152

Изобретение относится к медицине. .

Новые аналоги сс-1065 и их конъюгаты // 2562232

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, где DB представляет собой ДНК-связывающую группу и представляет собой группу DB1, R1 представляет собой галоген; R2, R2′, R3, R3′, R4, R4′, R12 и R19 представляют собой Н, X2 представляет собой C(R14)(R14′) и где R14′ и R7′ отсутствуют, что дает двойную связь между атомами, несущими R7′ и R14′; R5, R6 и R7 независимо выбраны из Н и Re, где Re выбран из C1-3алкила; R5′+R6′ отсутствуют, что дает двойную связь между атомами, несущими R5′ и R6′; X1 представляет собой О; X3 выбран из N и NR15; X4 представляет собой CR16; X5 представляет собой О; X6 выбран из CR11, CR11(R11′) и N; X7 выбран из CR8, CR8(R8′), NR8 и N; X8 выбран из CR9, CR9(R9′), NR9 и N; X9 выбран из CR10, CR10(R10′) и N; X11 представляет собой С; X12 выбран из С и N; X34 представляет собой С; подразумевает, что указанная связь может быть необязательно делокализованной, двойной связью; R8 представляет собой Н и N(Rh)С(О)Ri; R8′, R9, R9′, R10, R10′, R11, R11′, R15, R16′ представляют собой Н, Rh представляет собой Н; Ri выбран из С6-С9арила и индола, замещенного одним или несколькими заместителями, выбранными из ОН, NH2, О(СН2СН2О)2-4Н и O(СН2СН2О)2-4СН3; а и b независимо выбраны из 0 и 1; при условии, что кольцо В в DB1 представляет собой гетероцикл.