Способ специфической детекции trichophyton verrucosum в клиническом материале при различных клинических формах заболевания


 


Владельцы патента RU 2562540:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к микологии и дерматовенерологии, и может быть использовано для диагностики микроспории. Способ включает выделение тотальной нативной ДНК из кожи и волос, специфическую амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Trichophyton verrucosum с использованием праймеров следующей структуры: 5′ CCACGATAGGGATCAGCGTT 3′, 5′ GAAAGTTTTAACTGATTTTGCTTG 3′. Затем при электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 231 п.н. определяют наличие возбудителя. Использование изобретения позволяет установить факт инфицированности человека Trichophyton verrucosum при различных клинических формах заболевания, в том числе стертых и атипичных. 2 пр.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, лабораторной микологии и дерматовенерологии, и может быть использовано для диагностики зооантропонозной трихофитии.

В настоящее время сохраняется интерес к дерматофитиям, обусловленным зоофильными грибами. Периодические эпидемиологические вспышки этих инфекций регистрируются в различных областях нашей страны и за рубежом. В России наиболее неблагоприятными районами по заболеваемости трихофитией являются Северо-Кавказский и Уральский регионы, где заболеваемость в среднем составляет 7,8 и 6,9 на 100 тысяч населения соответственно. В Республике Башкортостан заболеваемость зооантропонозной трихофитией превышает заболеваемость в РФ в 5-6 раз [Латыпов, А.Б. Научное обоснование профилактики зооантропонозной трихофитии и совершенствования медицинской помощи больным (на примере Республики Башкортостан): дис... канд. мед. наук - Екатеринбург, 2007]. Одним из диагностических критериев постановки диагноза трихофитии являются клинические проявления. Однако клиническое многообразие, наличие атипичных и стертых клинических форм дерматофитий в настоящее время затрудняют своевременную диагностику [Блинов Н.П., Васильева Н.В., Разнатовский К.И. Дерматомикозы, или поверхностные микозы кожи и ее придатков, волос и ногтей. Лабораторная диагностика. Проблемы медицинской микологии 2008; 1:27-34]. Поэтому выставить окончательный диагноз микоза или снять его возможно только при проведении лабораторного обследования.

При подозрении на трихофитию основным методом лабораторной диагностики, как и при других дерматофитиях, является обнаружение возбудителя в исследуемом материале (частички кожи и волосы). Для этого в настоящее время применяются следующие методики [Методики клинических лабораторных исследований: Справочное пособие. Том 3. / Под ред. В.В. Меньшикова. - М.: Лабора, 2009. - 880 с.]:

1. Микроскопия клинического материала - метод предварительной диагностики заболевания. В случаях отсутствия роста возбудителя в культуре положительный результат прямой микроскопии является единственным подтверждением микотической инфекции. Патологический материал изучают в нативных препаратах. Для просветления препаратов, т.е. для растворения роговых масс, используют 20% раствор едкой щелочи (КОН или NaOH).

2. Культуральный метод исследования до сих пор остается предпочтительным методом диагностики микозов. Осуществляется для окончательного уточнения диагноза и выяснения эпидемиологии. Она включает получение культуры гриба с последующим микроскопическим исследованием. По внешнему виду колоний на чашках Петри можно составить представление о роде возбудителя (Trichophyton), его виде (Trichophyton verrucosum). Окончательное уточнение рода и вида гриба возможно только на основании микроскопического исследования полученной культуры.

Однако все используемые методы имеют ряд существенных недостатков:

1. Микроскопия клинического материала не позволяет идентифицировать грибы в патологическом материале до вида по их морфологии. Кроме того чувствительность этого метода недостаточна.

2. Культуральный метод исследования является очень трудоемким и занимает от 5 до 21 дня. Несмотря на то что специфичность этого метода значительно выше, чем при микроскопии клинического материала, чувствительность этого метода тоже не достаточна.

Эффективность перечисленных методов лабораторной диагностики не в полной мере отражает истинную ситуацию по заболеваемости трихофитией. Следовательно, для формирования наиболее объективных представлений о масштабах ее распространения, необходимо широкое внедрение в практику здравоохранения и ветеринарной служб молекулярно-генетических методов диагностики, в частности полимеразной цепной реакции (ПЦР), которую отличает исключительно высокая чувствительность и специфичность, что позволит выявлять Trichophyton verrucosum в клиническом материале при различных формах заболевания и, в особенности - при стертых и атипичных формах.

Известен способ диагностики дерматомикозов, заключающийся в том, что диагностику дерматомикозов осуществляют путем высева дерматофитов из клинического материала на плотную селективную среду Сабуро с добавлением антибиотика - левомицетина и гидролизата кератина, полученного из куриного пера. Питательная среда для выделения дерматофитов имеет следующий состав, г/л: глюкоза - 40,0; пептон - 10,0; агар - 18,0-20,0; гидролизат кератина (в пересчете на сухое вещество) - 10,0-20,0; левомицетин - 50000 ЕД; дистиллированная вода - остальное. Посев инкубируют при температуре 22-24°С в течение 4-8 дней с последующей идентификацией вида колоний. Способ наиболее эффективен при выделении из материала от больных культур грибов-дерматофитов, в частности Microsporum canis, Trichophyton verrucosum, Trichophyton mentagrophytes var. gypseum, Trichophyton rubrum [патент RU №2275631, 2006 г.].

Прототипом предлагаемого изобретения является способ диагностики онихомикоза кистей и стоп, сущность которого заключается в том, что грибок Trichophyton rubrum идентифицируют методом ПЦР, для чего выделяют ДНК из образца кожи или ногтевых пластинок, при этом для выделения ДНК образец инкубируют в 2-4 М растворе щелочи не менее 1 ч при температуре 50-65°С, нейтрализуют раствор 30%-ной соляной кислотой, переосаждают образец в 50%-ном растворе этанола при температуре минус 10 - минус 20°С и высушивают при температуре 50-65°С; проводят ПЦР ДНК с применением высокоспецифичных для гена 28 S РНК Trichophyton rubrum синтетических ДНК-зондов, имеющих последовательность: TR-1-F (смысловой): 5′ atcgaatctttgaacgcaca 3′; TR-1-R (антисмысловой): 5′ tataaagattggggccaggg 3′ и при положительном результате диагностируют онихомикоз, вызванный грибком Trichophyton rubrum [патент RU №2319962, 2008 г.].

Задачей изобретения является разработка высокоспецифичного и высокочувствительного способа детекции Trichophyton verrucosum при различных клинических формах заболевания и,1 в особенности, при стертых и атипичных формах.

Технический результат при использовании изобретения - повышение точности лабораторной диагностики трихофитии у человека за счет достоверного обнаружения мицелия и спор Trichophyton verrucosum в клиническом материале.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе детекции Trichophyton verrucosum, включающем выделение тотальной нативной ДНК из клинического материала, представляющего образец кожи, проведение полимеразной цепной реакции, согласно изобретению в качестве клинического материала дополнительно используют волосы, проводят специфическую амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Trichophyton verrucosum с использованием праймеров следующей структуры:

5′ CCACGATAGGGATCAGCGTT 3′;

5′ GAAAGTTTTAACTGATTTTGCTTG 3′ и при электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 231 п.н. определяют наличие возбудителя.

Предлагаемый способ детекции Trichophyton verrucosum осуществляется следующим образом. Из клинического материала (частички кожи и волосы) выделяют тотальную нативную ДНК, после чего проводят специфическую амплификацию (ПЦР) фрагмента гена 5.8S рибосомальной РНК (pPHK) Trichophyton verrucosum с использованием праймеров следующей структуры:

5′ CCACGATAGGGATCAGCGTT 3′,

5′ GAAAGTTTTAACTGATTTTGCTTG 3′.

При электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 231 п.н. констатируют факт присутствия возбудителя в клиническом материале и подтверждают соответствующий диагноз.

ДНК выделяют из клинического материала (частички кожи и волосы). Для обеспечения необходимой степени чистоты ДНК и достаточного ее количества используют методику Boom R. [Boom R., et al. 1990. Rapid and Simple Method for Purification of Nucleic Acids. J. Clin. Microbiol. 28: 495-503]:

1. В пробирку с 300 мкл лизирующего раствора (5М гуанидинтиоционат, 1% Triton X100) вносится 1 грамм исследуемого материала. Проба тщательно перемешивается на вортексе и прогревается 5 мин при температуре 65°С. Центрифугировали 5 сек при 5 тыс. об/мин на микроцентрифуге. Когда проба растворялась не полностью, - пробирку центрифугировали на микроцентрифуге 5 мин при 12 тыс. об/мин. Надосадочная жидкость переносится в новую чистую пробирку.

2. Отдельным наконечником в пробирку вносят 25 мкл ресуспендированного сорбента (силикагель, SiO2). Перемешивают на вортексе, ставят в штатив на 2 мин, еще раз перемешивают и оставляют в штативе на 5 мин.

3. Сорбент осаждается центрифугированием при 5 тыс. об/мин в течение 30 сек. Надосадочная жидкость удаляется с использованием вакуумного отсасывателя.

4. Далее в пробирку с сорбентом вносится 300 мкл раствора для отмывки (5М гуанидинтиоционат). Образовавшуюся смесь тщательно ресуспендируют на вортексе.

5. Сорбент осаждается центрифугированием при 5 тыс. об/мин на микроцентрифуге в течение 30 сек. Надосадочная жидкость удаляется с помощью вакуумного отсасывателя и чистого наконечника.

6. Добавляется 950 мкл отмывочного раствора (70% этиловый спирт). Сорбент ресуспендируют на вортексе, центрифугируют 30 сек при 10 тыс. об/мин на микроцентрифуге. Надосадочную жидкость удаляют, используя вакуумный отсасыватель и чистый наконечник.

7. Пробирку инкубируют при температуре 65°С 5-10 мин для подсушивания сорбента. При этом крышка пробирки должна быть открыта. В пробирку после подсушки добавляется 50 мкл ТЕ-буфера (1 мМ EDTA, 10 мМ TRIS-HCl рН 8.0) для элюции ДНК. Перемешивается на вортексе. Для лучшей элюции пробирка инкубируется в термостате при температуре 65°С в течение 5 мин с периодическим встряхиванием на вортексе.

8. Далее сорбент осаждается центрифугированием при 12 тыс. об/мин в течение 1 мин на микроцентрифуге. Надосадочная жидкость, содержащая очищенную ДНК, готова к постановке ПЦР.

Раствор ДНК можно хранить при температуре -18°С в течение 6 месяцев.

В дальнейшем полученную ДНК используют в качестве матрицы для полимеразной цепной реакции (ПЦР) и амплификации нужного фрагмента гена 5.8S рРНК, выявляемого при помощи подобранных нами праймеров следующей структуры:

5′ CCACGATAGGGATCAGCGTT 3′,

5′ GAAAGTTTTAACTGATTTTGCTTG 3′.

Амплификацию специфичного фрагмента гена 5.8S рРНК проводят в 30 мкл общего объема смеси, содержащей 1 мкл тотальной ДНК, 3 мкл 10-кратного буфера для Taq-полимеразы, по 1 мкл каждого праймера, 3 мкл dNTP и 1 мкл Taq-полимеразы.

Режим амплификации следующий: начальная денатурация при 94°С в течение 2 мин; 30 циклов, включая денатурацию при 94°С - 20 сек, отжиг праймеров и синтез ДНК при 61°С - 20 сек; элонгация при 72°С - 20 сек; терминальная элонгация - 1 мин.

Амплифицированные фрагменты ДНК разделяют электрофоретически в 1% агарозном геле и после окрашивания геля бромидом этидия идентифицируют в ультрафиолетовом свете. В качестве электролита для электрофореза применяют 0,5 Х боратный буфер (0,089 М трисНСl, рН=7,9; 0,089 М борная кислота, 0,002 ЭДТА, рН=8,0).

Электрофорез проводят при постоянном напряжении 100 В. Детекцию результатов проводят путем окрашивания агарозного геля бромистым этидием в течение 10-15 минут с последующей визуализацией в ультрафиолетовом свете на трансиллюминаторе. Продукт амплификации размером 231 п.н. обнаруживается в виде светящейся полосы красно-оранжевого цвета.

Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Больной И., 10 лет, поступил с жалобами на высыпания на волосистой части головы, сопровождающиеся зудом и болезненностью.

Анамнез: Заболевание заметили родители 15 дней назад. Пораженные участки смазывали настойкой йода. Заразился от коровы.

Status localis: Процесс поражения локализовался на коже волосистой части головы, где имелись на гиперемированном, отечном фоне один крупный очаг размером 10,5×8,5 см в диаметре и пять мелких отсевов по периферии. В виде полушаровидных, опухолевидных образований ярко-красного цвета, с множеством воспалившихся волосяных фолликулов. При надавливании из расширенных отверстий фолликулов появлялись капли гноя (Kerion Celsii), волосы отсутствовали, оставшиеся легко эпилировались. Шейные и затылочные лимфатические узлы были увеличены, болезненны. Отмечались повышение температуры и головная боль.

Результаты лабораторных исследований:

OAK лейкоциты - 9,0×109/л, СОЭ 24 мм/ч.

Микроскопия: Т. ectothrix megaspores.

Посев: нет роста.

Результаты ПЦР: в клиническом материале (частички кожи и волосы) методом полимеразной цепной реакции обнаружены и идентифицированы специфичные для Trichophyton verrucosum фрагменты гена 5.8S рРНК.

Окончательный диагноз: Инфильтративно-нагноительная трихофития волосистой части головы (6 очагов).

Пример 2.

Больной В., 8 лет, поступил с жалобами на поражение кожи левой кисти.

Анамнез: Болен в течение 10 дней. Источник заражения не известен.

Status localis: Процесс поражения локализовался на коже тыла левой кисти, где имелся на отечном и гиперемированном фоне воспалительный инфильтрат округлой формы, размером 8-9 см в диаметре, занимающий всю поверхность тыла кисти. Края очага незначительно приподняты и состоят из пустул и папул, покрытые серозно-гнойными корками. Были резко увеличены регионарные лимфатические узлы.

Результаты лабораторных исследований:

OAK лейкоциты - 10,0×109/л, СОЭ - 17 мм/ч, эозинофилия - 11%.

Микроскопия: С гладкой кожи споры не обнаружены. В пушковых волосах мицелий не обнаружен.

Посев: Tr. verrucosum.

Результаты ПНР: в клиническом материале (частички кожи и волосы) методом полимеразной цепной реакции обнаружены и идентифицированы специфичные для Trichophyton verrucosum фрагменты гена 5.8S рРНК.

Окончательный диагноз: Инфильтративно-нагноительная трихофития кожи левой кисти (1 очаг).

Таким образом, предлагаемый способ специфической детекции Trichophyton verrucosum в клиническом материале при различных клинических формах заболевания в отличие от микроскопического и культурального методов позволяет выявлять и идентифицировать мицелий и споры Trichophyton verrucosum в доступном клиническом материале при различных клинических формах заболевания (в особенности, при стертых и атипичных формах), что надежно коррелирует с результатами других исследований и, соответственно, обеспечивает единую интерпретацию данных.

Способ детекции Trichophyton verrucosum, включающий выделение тотальной нативной ДНК из клинического материала, представляющего образец кожи, проведение полимеразной цепной реакции, отличающийся тем, что в качестве клинического материала дополнительно используют волосы, проводят специфическую амплификацию фрагмента гена 5.8S рРНК Trichophyton verrucosum с использованием праймеров следующей структуры:
5′ CCACGATAGGGATCAGCGTT 3′;
5′ GAAAGTTTTAACTGATTTTGCTTG 3′ и при электрофоретическом обнаружении продукта амплификации размером 231 п.н. определяют наличие возбудителя.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики высокодифференцированной эндометриоидной аденокарциномы тела матки.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики обострения язвенного колита. Проводят исследование иммунного статуса в сыворотке крови, определяют уровень циркулирующих иммунных комплексов и при повышении циркулирующих иммунных комплексов C1q до 60,8 ед./мл и выше уровня циркулирующих иммунных комплексов C3d до 39,0 ед./мл и выше и С-реактивного белка до 10,2 мг/л и выше диагностируют обострение язвенного колита.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и пульмонологии. Изобретение позволяет прогнозировать анемический синдром во втором триместре гестации при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом A(H3N2) в первом триместре беременности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, и может быть использовано для диагностики тяжести дисциркуляторной энцефалопатии у мужчин. Определяют уровень липопротеинов высокой плотности, коэффициенты коморбидности Cirs и Kaplan-Feistein.

Изобретение относится к онкологии и касается способов прогнозирования достижения полных морфологических регрессий (ПМР) у больных операбельным трипл-негативным раком молочной железы.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии, и может быть использовано для мониторинга состояния пациента после трансплантации органа. Для этого, после трансплантации производят мониторинг редокс потенциала (РП) плазмы крови пациента.

Изобретение относится к области медицины. Изобретение представляет способ прогнозирования неразвивающейся беременности путем выявления факторов риска в сыворотке крови с помощью иммуноферментного анализа и дальнейшей обработки полученных результатов методом бинарной логистической регрессии.

Группа изобретений относится к ветеринарии и может быть использована для диагностики лейкоза крупного рогатого скота (КРС). Средство для диагностики лейкоза КРС содержит водорастворимую белковую фракцию клеточной линии почки эмбриона свиньи, контаминированной онкорнавирусами С и D и полученной при культивировании в анаэробных условиях, имеющую молекулярную массу от 75 до 82 кД в количестве 0,49-0,52 масс.% и характеризующуюся наличием пиков при длине волны 214 нм в ультрафиолетовой области спектра, и дополнительно содержит фосфатно-солевой буферный раствор.

Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки хирургического риска у больных с атеросклеротической окклюзией бедренно-подколенно-берцового сегмента в стадии критической ишемии, включающий балльную оценку сопутствующих заболеваний сердечно-сосудистой системы, где каждому фактору риска присваивают определенное количество баллов, присвоение баллов происходит следующим образом: возраст более 70 лет - 1 балл, острое нарушение мозгового кровообращения или транзиторная ишемическая атака в анамнезе - 2 балла, постинфарктный кардиосклероз - 1 балл, фракция выброса левого желудочка от 46% до 50% - 2 балла, фракция выброса левого желудочка от 41% до 45% - 4 балла, фракция выброса левого желудочка 40% и менее - 6 баллов, ишемическая болезнь сердца: хроническая коронарная недостаточность I функциональный класс - 1 балл, ишемическая болезнь сердца: хроническая коронарная недостаточность II функциональный класс - 2 балла, ишемическая болезнь сердца: хроническая коронарная недостаточность III функциональный класс - 7 баллов, пароксизмальная форма фибрилляции-трепетания предсердий, эктопический ритм, частые (>5 в минуту) наджелудочковые экстрасистолы - 3 балла, постоянная форма фибрилляции-трепетания предсердий - 2 балла, желудочковые экстрасистолы >30 в час - 1 балл, баллы складывают, оценивают уровень хирургического риска данного больного, при сумме баллов 8 и более присваивают высокий хирургический риск, рекомендуют выполнение эндоваскулярной интервениции, при сумме баллов от 0 до 3 присваивают низкий хирургический риск, рекомендуют шунтирующую операцию, в случае суммы баллов от 4 до 7 присваивают средний хирургический риск, возможно использование обоих методов артериальной реконструкции.

Настоящее изобретение относится к отбору проб жидкости, которая находится в эластичном закрытом контейнере, например, в контейнере для сбора мочи или крови. Устройство для отбора жидкости, находящейся в эластичном контейнере (13, 14), содержит первую секцию (20), имеющую базовую поверхность (21), и элемент (22) для перфорирования пленки, выступающий от базовой поверхности (21).
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования рецептивности эндометрия в циклах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Сущность способа состоит в том, что определяют оптическую плотность экспрессии лейкемия ингибирующего фактора (LIF) в поверхностном и железистом эпителии эндометрия в период окна имплантации в цикле, предшествующем проведению экстракорпорального оплодотворения, и дополнительно определяют содержание сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в цервикальной слизи в день трансвагинальной пункции фолликулов, систолодиастолическое отношение (S/D) и индекс резистентности (IR) спиральных артерий в день введения триггера овуляции, а затем рассчитывают значение регрессионной функции (Z) по формуле. При значении Z>0 прогнозируют, что эндометрий рецептивен, а при Z<0 - эндометрий не рецептивен. Использование заявленного способа позволяет прогнозировать рецептивность эндометрия и наступление беременности в результате цикла ЭКО с высокой степенью точности. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики опухолей головного мозга (ОГМ). Для этого путем электронной феноменологической спектроскопии измеряют оптическую плотность плазмы крови человека в видимой и ультрафиолетовой области спектра. При этом предварительно осуществляют измерение оптической плотности плазмы крови у группы доноров с диагностированной ОГМ и группы доноров, не имеющих такого диагноза. Рассчитывают интегральную силу осцилляторов в видимой (ИСО vis) и ультрафиолетовой (ИСО uv) областях спектра для каждого донора. Проводят построение графика зависимости ИСО vis от ИСО uv для обеих групп доноров и фиксацию результирующих прямых этих зависимостей на обоих графиках. Диагностику осуществляют путем измерения расстояния показателя конкретного больного на графике зависимости ИСО vis от ИСО uv до результирующих прямых доноров с диагнозом ОГМ (d1) и доноров, не имеющих такого диагноза (d2), и при d1<d2 делают вывод о вероятности наличия ОГМ. Изобретение позволяет осуществить первичную диагностику ОГМ у пациентов. 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области судебно-медицинской экспертизы, а именно к тестовым наборам, и позволяет произвести тестирование спермы в пятнах на исследуемом образце. Набор содержит две тестовые полоски из фильтровальной бумаги, одна из которых пропитана раствором, содержащим: цитратный буфер концентрации 50 ммоль/л - 10 мл, α-нафтил фосфат концентрации 10 ммоль/л - 26,5 мг, прочный красный TR концентрации 1,5 ммоль/л - 3,9 мг; а другая полоска пропитана раствором, содержащим: тартрат натрия концентрации 2 ммоль/л - 10 мл, α-нафтил фосфат концентрации 10 ммоль/л - 26,5 мг, прочный красный TR концентрации 1,5 ммоль/л - 3,9 мг; дистиллированную воду для получения водного экстракта исследуемого образца и емкость для проведения тестирования. При этом чувствительность полосок к сперме составляет не менее 0,00625 мг/мл. Изобретение позволяет ускорить и упростить процесс анализа на наличие спермы в исследуемом образце как в лабораторных условиях, так и непосредственно на месте происшествия, а также позволяет сохранять результаты исследования. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано при ранней диагностике шизофрении. Способ включает генетический анализ Vall58Met полиморфизма гена катехол-О-метил-трансферазы, при этом у носителей гаплотипа Met/Met проводят избирательную оценку предстимульного торможения и базового латентного периода акустической стартл-реакции. При снижении предстимульного торможения и возрастании базового латентного периода акустической стартл-реакции диагностируют шизофрению. 2 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования синдрома задержки внутриутробного развития плода в третьем триместре гестации при реактивации хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ) у женщин с угрозой невынашивания во втором триместре беременности. Сущность способа состоит в том, что во втором триместре гестации при реактивации хронической цитомегаловирусной инфекции у женщин определяют уровень антител IgM к ЦМВ и антител IgG к ЦМВ в парных сыворотках крови, в баллах - А, оценивают степень выраженности угрозы прерывания беременности, в баллах - В, определяют концентрацию фактора некроза опухоли-α (пг/мл) - С. Рассчитывают величину дискриминантной функции D с граничным значением равным +18,61. При D меньше граничного значения дискриминантной функции прогнозируют отсутствие синдрома задержки внутриутробного развития плода, а при D равной или больше граничного значения дискриминантной функции прогнозируют развитие синдрома задержки внутриутробного развития плода. Использование заявленного способа позволяет эффективно спрогнозировать синдром внутриутробного развития плода в третьем триместре гестации при реактивации хронической цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ) у женщин с угрозой невынашивания во втором триместре беременности. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования ранней гипогалактии - перед родами у беременных женщин при анализе анамнеза, течения настоящей беременности выявляют факторы риска гипогалактии. Проводят сравнительную оценку морфологии кристаллограмм секрета молочных желез, забираемого с началом родовой деятельности, в первые и вторые сутки послеродового периода. При отсутствии изменения морфологии кристаллограмм секрета молочных желез в первые, вторые сутки послеродового периода по сравнению с кристаллограммой, выполненной с началом родовой деятельности, в 100% прогнозируют раннюю гипогалактию. При отсутствии изменения морфологии кристаллограммы секрета молочных желез в первые сутки и изменении морфологии кристаллограммы во вторые сутки послеродового периода по сравнению с кристаллограммой, выполненной с началом родовой деятельности, с вероятностью в 70,3% прогнозируют раннюю гипогалактию, при этом изменение морфологии кристаллограммы в первые сутки послеродового периода по сравнению с кристаллограммой, выполненной с началом родовой деятельности, свидетельствует о физиологическом становлении лактации. Способ неинвазивен, безопасен для матери и ребенка, доступен, повышает точность прогнозирования ранней гипогалактии. 8 ил., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, биологии, фармации и пищевой технологии применительно к исследованию гомолитических свойств липидов и их участия в свободнорадикальных реакциях окисления, а также - к осуществлению подбора антиоксидантов. Способ осуществляют путем экстрагирования из навески биоматериала жирорастворимого антиоксиданта в виде гептанового экстракта и водорастворимого антиоксиданта в виде изопропилового экстракта, насыщения пробы модельного субстрата каждого антиоксиданта кислородом с перемешиванием при температуре 60,0±0,2°C и определения объема поглощенного кислорода во времени волюмометрическим методом в термостатированной установке типа Варбурга с построением графика в координатах ΔV/t, последующим определением из кинетических кривых величины периода индукции (τi) и расчетом суммарной антиоксидантной активности компонентов биоматериала в составе модельного субстрата с учетом контрольных проб, не содержащих гептанового и изопропилового экстракта, причем модельный субстрат жирорастворимого антиоксиданта включает в себя: биоматериал, метиловый или этиловый эфир высших ненасыщенных жирных кислот, раствор азо-бис-изобутиронитрила (АИБН) в хлорбензоле в концентрации в пробе (2-60)×10-3 M, полученный образец доводят хлорбензолом до 2 мл, модельный субстрат водорастворимого антиоксиданта включает в себя: биоматериал, метиловый или этиловый эфир ненасыщенных жирных кислот, водный раствор хлорида меди (II) в концентрации в пробе (1-3)×10-3 М, водный раствор цетилтриметиламмония бромида (ЦТМАБ) в концентрации в пробе (1-5)×10-3 М, полученный образец доводят водой до 4 мл, а определение суммарной антиоксидантной активности жирорастворимых и водорастворимых компонентов биоматериала осуществляют из заданной расчетной зависимости. Достигаются повышение точности и ускорение определения. 1 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способов прогнозирования достижения ПМР у больных ТНР молочной железы. Проводят иммунногистохимическое исследование ткани опухоли. Для полученных параметров оценивают уровень экспрессии. Рассчитывают значение уравнения регрессии по формуле: Y=(5,38-16,2X1-11,2X2+5,98X3+12,4X4-5,39X5), где X1 - состояние регионарного лимфатического аппарата (0 - отсутствие метастатического поражения лимфатических узлов, 1 - поражение до 4 лимфатических узлов, 2 - поражение 4-9 лимфатических узлов, 3 - поражение 10 и более лимфатических узлов); X2 - уровень экспрессии EGFR1 (1 - менее 10%, 2 - 10% и более); X3 - уровень экспрессии тимидилатфосфорилазы в цитоплазме опухолевой клетки (1 - менее 20%, 2 - 20% и более); X4 - уровень экспрессии Ki-67 (1 - менее 20%, 2 - 20% и более); X5 - уровень экспрессии VEGFR-2 (1 - менее 70%, 2 - 70% и более). Значение вероятности достижения ПМР - P рассчитывают по формуле: P=eY/(1+eY), где е - математическая константа, равная 2,72, и при P<0,5 прогнозируют низкую, а при P>0,5 высокую вероятность достижения ПМР у больных, получавших схему САХ. Способ прогнозирования позволяет прогнозировать достижение ПМР регрессий у больных ТНР, получивших курсы химиотерапии по схеме САХ. 5 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к области экспериментальной биологии и медицины для приготовления тотальных препаратов биологических тканей для оптической проекционной томографии, конфокальной, мультифотонной и светоплоскостной микроскопии и может быть использована для предклинических испытаний фармакологических препаратов и оценки физиологических воздействий на организм, а также для работы с материалом биопсий в диагностических и исследовательских целях. Способ иммуногистохимического окрашивания тотальных препаратов образцов биологической ткани включает фиксацию ткани раствором параформальдегида. Также способ включает постфиксацию, которую сначала проводят 0,5-1%-ным параформальдегидом в течение 48 ч при 4°C, а затем после трехкратной отмывки фосфатным буфером при комнатной температуре, в растворе 20%-ного диметилсульфоксида в 100%-ном метаноле в течение 1-2 ч при комнатной температуре. После этого образец ткани отбеливают в растворе, содержащем 100%-ный метанол:диметилсульфоксид: 30% Н2О2 в соотношении 4:1:1, в течение 2-4 ч на ярком свету при комнатной температуре до полного обесцвечивания. Затем образец отмывают 3 раза по 60 мин в 100%-ном метаноле при комнатной температуре и замораживают не менее чем на 1 час при -70…-80°C, после чего регидратируют последовательно в 50, 25 и 12,5%-ных растворах метанола в фосфатном буфере по 45-60 мин в каждом при комнатной температуре. Затем образцы трижды отмывают от метанола фосфатным буфером, причем два раза отмывают по 1-2 ч при комнатной температуре, а последнюю отмывку проводят в течение ночи при 4°C. Последующую пермеабилизацию образца проводят в фосфатном буфере, содержащем 2%-ный Triton Х-100, 5%-ную нормальную сыворотку, 5%-ный диметилсульфоксид, в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем образец отмывают трижды в фосфатном буфере, содержащем 0,2%-ный Triton Х-100, причем два раза отмывают по 30-60 мин при комнатной температуре, а последнюю отмывку проводят в течение ночи при 4°C. После этого проводят инкубацию последовательно в растворах первичных и вторичных антител, приготовленных на буфере, состоящем из 0,05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, 5% диметилсульфоксид и 2,5-5,0% нормальной сыворотки животного-хозяина вторичных антител, при 4°C в течение 2-7 суток, с отмывками после каждой инкубации в буфере, состоящем из 0.05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, сначала 3 раза по 60 мин при комнатной температуре, а затем в течение ночи при 4°C. Окрашенные образцы дегидратируют последовательно в 50, 96%-ных растворах этанола в фосфатном буфере по 45-60 мин в каждом при комнатной температуре. Затем образцы выдерживают сначала в 100%-ном этаноле при комнатной температуре 2-3 раза по 45-60 мин, а после в 2-бутоксиэтаноле при 4°C в течение 12-18 ч. Дегидратированные образцы просветляют при комнатной температуре в смеси бензил бензоата:бензиловый спирт, взятых в соотношении 2:1 в течение 3-4 ч. При этом способ окрашивания, начиная с операции постфиксации, проводят при помешивании со скоростью 650-800 об/мин. Второй вариант способа заключается в том, что инкубацию проводят в растворе флуоресцентно-меченных первичных антител, приготовленных на буфере, состоящем из 0,05 М Tris-HCl с pH 7,5; 0,15 М NaCl; 0,2% Triton Х-100, 5% диметилсульфоксид и 2,5-5.0% нормальной сыворотки, при 4°C в течение 2-7 суток. Достигаемый при этом технический результат заключается в осуществлении окрашивания тотальных препаратов образцов биологических тканей с сохранением их морфологии и обеспечением более широкого охвата выявляемых антигенов, а также в возможности проведения количественного анализа иммуногистохимически выявленных меток за счет высокого соотношения фон-сигнал и снижения аутофлуоресценции. 2 н. и 16 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 пр.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для снижения токсического эффекта энрофлоксацина на опсонофагоцитарную активность нейтрофилов с применением гомеопатических препаратов in vitro. Для этого к лейкоцитарной взвеси в объеме 0,5 мл добавляют 0,15 мл антибактериального препарата энрофлоксацин 5%. Затем полученный раствор помещают в термостат на 3 часа при Т=37±0,5°C, после инкубации вносят по 0,5 мл гомеопатического препарата, разведенного в физиологическом растворе в выбранном разведении С6, С12, С30, С200. После этого пробирки вновь помещают в термостат на 4 часа при Т=37±0,5°C и затем вносят взвесь микроорганизмов референтного штамма Staphylococcus albus №182 по 0,5 мл, содержащего 109 КОЕ в 1 мл физиологического раствора. Далее помещают в термостат на 30 минут при Т=37±0,5°C, после инкубации мазки крови фиксируют в спирт-формалине 1:9, 40% раствор формалина и 96° спирта, в течение 10 минут и окрашивают по Романовскому - Гимзе в течение 30 минут. Использование данного способа позволяет in vitro оценить влияние гомеопатических препаратов на снижение токсического эффекта энрофлоксацина на опсонофагоцитарную активность нейтрофилов. 4 табл.
Наверх