Способ диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита с



Способ диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита с
Способ диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита с

 


Владельцы патента RU 2563129:

государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Западный государственный медицинский университет им. И.И. Мечникова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к внутренним болезням, а именно гепатологии, и может быть использовано для проведения неинвазивной диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита С (ХГС). В периферической крови пациента с хроническим вирусным гепатитом С определяют абсолютное количество клеток Т-киллеров с фенотипом CD3+CD8+ и при их значении, равном или ниже 295/л, диагностируют цирротическую стадию (F IV по METAVIR). Изобретение обеспечивает повышение чувствительности способа диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита С (F IV по METAVIR), снижение стоимости способа, а также расширение контингента пациентов при выполнении способа за счет пациентов с индексом массы тела более 30 кг/м2, с наличием узких межреберных промежутков, наличием асцита и желчнокаменной болезни. 1 ил., 4 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к внутренним болезням, а именно гепатологии, и может быть использовано для проведения неинвазивной диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита С (ХГС).

В настоящее время хронической HCV-инфекцией в мире страдают более 180 млн человек, что составляет почти 3% населения земного шара [Hatzakis A., Wait S., Bruix J. et al. The state of hepatitis В and С in Europe: report from the hepatitis В and С summit conference. J. Viral. Hepat. 2011; 18 (Suppl. 1) 1-16].

Определение стадии фиброзирования у пациентов с хроническим вирусным гепатитом С имеет большое значение для установления прогноза заболевания, определения показаний и противопоказаний к проведению противовирусной терапии [EASL: Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis С virus infection. J. Hepat, 2014, Vol.60, Issue 2, 392-420].

Согласно современным рекомендациям по лечению больных с ХГС, этиотропная (противовирусная) терапия противопоказана на цирротической стадии заболевания, когда имеется высокий риск возникновения осложнений, прогрессирования портальной гипертензии, что приводит к увеличению летальности [EASL: Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis С virus infection. J. Hepat., 2014, Vol.60, Issue 2, 392-420].

С другой стороны, тяжелый фиброз печени при ХГС считается неблагоприятным предиктором к предстоящей противовирусной терапии [Шифф Ю.Р., Соррел М.Ф., Мэддрей У.С. Болезни печени по Шиффу. Вирусные гепатиты и холестатические заболевания/ М.: ГЕОТАР-Медиа, 2010. 408 с.]. У больных с цирротической стадией заболевания устойчивый вирусологический ответ на проводимую противовирусную терапию достигается крайне редко, а сама терапия сопряжена с большой частотой возникновения нежелательных явлений [EASL: Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis С virus infection. J. Hepat, 2014,Vol.60, Issue 2, 392-420; Manns M.P., McHutchison J.G., Gordon S. et al. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin compared to interferon alfa-2b plus ribavirin for the treatment of chronic hepatitis C: a randomized trial. Lancet. 2001. Vol.358. 958-965; Fried M.W., Shiffman M.L, Reddy R. et al. Peginterferon alfa-2b plus ribavirin for chronic hepatitis С virus infection. N. Engl. J. Med. 2002. Vol.347. 975-982].

В этой связи диагностика цирротической стадии заболевания при ХГС является чрезвычайно актуальной с целью определения тактики лечения данной категории больных.

К настоящему времени разработаны несколько общепринятых классификаций фибротических изменений при хронических заболеваниях печени. Однако в последнее время для пациентов с ХГС наиболее часто используется классификация степени тяжести фиброза печени по METAVIR [EASL: Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis С virus infection. J. Hepat., 2014, Vol.60, Issue 2, 392-420], согласно которой циррозу печени соответствует стадия F IV.

Эталонным методом определения стадии фиброза печени считается гепатобиопсия [Dienstag JL. The role of liver biopsy in chronic hepatitis C. Hepatology. 2002; 36: 152-160; Saadeh S., Cammel G., Carey WD., et al. The role of liver biopsy in chronic hepatitis C. Hepatology. 2001; 33: 196-200; Gebo KA., Herlong HF., Torbenson MS, et al. Role of liver biopsy in management of chronic hepatitis C: a systematic review. Hepatology. 2002; 36: 161-172]. Для верификации стадии фиброзирования у пациентов с ХГС этот способ используется все реже ввиду его инвазивности, высокого риска развития серьезных осложнений, наличия противопоказаний для его проведения у ряда пациентов [N. Gara, X. Zhao, D.E. Kleiner, et al. Несоответствие между данными ультразвуковой эластографии, индексом APRI и результатами гистологической оценки фиброза печени у больных хроническим гепатитом С. Клиническая гастроэнтерология и гепатология. Русское издание. 2013. Т.6, №3, 119-125].

В то же время неверное определение стадии фиброза по данным гепатобиопсии возможно в 10-15% случаев [Regev A., Berho М., Jeffers LJ., et al. Sampling error and intraobserver variation in liver biopsy in patients with chronic HCV infection. Am. J. Gastroentroenterol. 2002; 97: 2614-2618; Bedossa P., Dargere D., Paradis V., Sampling variability of liver fibrosis in chronic hepatitis C. Hepatology 2003; 38: 1449-1457; Colloredo G., Guido М., Sonzogni A., et al. Impact of liver biopsy size on histological evaluation of chronic viral hepatitis: the smaller the sample, the milder the disease. J. Hepatol. 2003; 39: 239-244]. Выполнение манипуляции возможно исключительно в условиях стационара.

В этой связи в настоящее время неинвазивные методы оценки стадии фиброза печени у пациентов с ХГС практически полностью заменили проведение гепатобиопсии [Ghany MG., Strader DB., Thomas DL, et al. Diagnosis, management and treatment of hepatitis C: an update. Hepatology 2009; 49: 1335-1374; Craxi A., Pawlotsky JM., Wedermeyer H., EASL Clinical Practice Guidelines: management of hepatitis C virus infection. J. Hepatol. 2011; 55: 245-264].

К неинвазивным методам определения стадии фиброза печени относят ряд клинических оценочных шкал, в которых используются данные лабораторных исследований. К подобным способам определения стадии фиброза печени на основе сочетания суррогатных маркеров и биохимических показателей относят диагностические тесты ФиброТест и ФиброМакс. Для их осуществления используются такие биохимические маркеры, как α-2-макроглобулин, гаптоглобин, аполипопротеин А1, гамма-глутамилтранспептидаза (ГГТП), общий билирубин, аланинаминотрансфераза (АЛТ) и др., также учитываются возраст, вес, рост и пол. Однако одним из значимых недостатков указанных способов является ограничение применения у пациентов с признаками выраженного холестаза, при котором повышены показатели ГГТП и общего билирубина, что отрицательно влияет на диагностическую точность данных неинвазивных методов.

В ряде случаев для определения цирротической стадии у пациентов с ХГС используют определение индекса APRI (отношение активности аспартатаминотранферазы (ACT) к числу тромбоцитов) [Wai СТ., Greenson JK., Fontana RJ., et al. A simple noninvasive index can predict both significant fibrosis and cirrhosis in patients with chronic hepatitis C. Hepatology. 2003; 38: 518-526]. Однако чувствительность APRI при значении, равном 1,0, составляет 76% [Lin ZN., Xin YN., Dong QJ., et al. Performance of the aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index for the staging of hepatitis C-related fibrosis: an updated meta-analysis. Hepatology 2011; 53: 726-736]. С помощью данного способа диагностики некорректно судить о стадии фиброзирования печени у больных с сопутствующей патологией, проявляющейся тромбоцитопенией (заболевания крови, аутоиммунные болезни и др.).

Разработан неинвазивный способ диагностики степени фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С с помощью определения концентрации в сыворотке крови трансформирующего фактора роста-1β (TGF-1β) методом твердофазного иммуноферментного анализа. В зависимости от полученных значений TGF-1β определяют степень фиброзных изменений в печени [RU 2408289 С1, 2011 г. Баранов А.В. Способ дифференциальной диагностики фиброза печени при хроническом вирусном гепатите С]. Недостатком данного метода является изменение концентрации данного показателя при наличии сопутствующих патологических состояний, в частности хирургической патологии [Смолина Е.Н., Приданцева О.В., Кадинская М.И. и др. Динамика показателей тромбоцитарного пула и уровня TGF-P при различных формах острого панкреатита. Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2013: №3; Т.172. 73-75], эндокринной патологии [Здор В.В., Маркелова Е.В., Михайлов А.О. и др. Показатели сывороточного уровня цитокинов ИЛ-17, TGF-β и ИЛ-1β, β при болезни Грейвса. Вестник уральской медицинской академической науки. 2012: №4 (41); 114-115], онкопатолии [Бабышкина Н.Н., Малиновская Е.А., Стахеева М.Н. и др. Роль трансформирующего ростового фактора TGF-β1 в патогенезе рака молочной железы. Сибирский онкологический журнал. 2010: №6; 63-70].

Существует несоответствие между данными ультразвуковой эластографии, индексом APRI и результатами гистологической оценки фиброза печени у больных хроническим гепатитом С [N. Gara, X. Zhao, D.Е. Kleiner, et al. Несоответствие между данными ультразвуковой эластографии, индексом APRI и результатами гистологической оценки фиброза печени у больных хроническим гепатитом С. Клиническая гастроэнтерология и гепатология. Русское издание. 2013: Т.6, №3; 119-125].

В качестве прототипа нами выбран неинвазивный способ диагностики стадии фиброза печени, в том числе и цирротической, при ХГС с помощью ультразвуковой эластографии аппаратом FibroScan (Echosens, Франция). Метод позволяет определить наличие фиброза печени с помощью вибрационных импульсов, оценить эластические свойства печени и темп прогрессирования фиброза печени. К достоинствам способа следует отнести простоту и неинвазивность медицинской манипуляции.

Среди недостатков метода ультразвуковой эластографии описаны: существенное ограничение у больных с асцитом, с узкими межреберными промежутками, у тучных пациентов с избыточной подкожно-жировой клетчаткой, что связано с особенностями распространения ультразвуковой волны [Вялов С.С. Скрининговые методы выявления фиброза печени. Архив внутренней медицины. 2012; №3: 48-57]. Противопоказаниями к применению ультразвуковой эластографии является желчнокаменная болезнь ввиду риска развития обострения хронического калькулезного холецистита, провокации приступа желчной колики и их осложнений [Вялов С.С. Скрининговые методы выявления фиброза печени. Архив внутренней медицины. 2012; №3: 48-57].

Кроме того, большое значение имеет аккуратность выполнения данной методики: неправильный выбор точки исследования и/или некорректное расположение датчика фиброскана может повлиять на конечный результат исследования, что повлечет за собой наличие ложноотрицательных результатов [Вялов С.С. Скрининговые методы выявления фиброза печени. Архив внутренней медицины. 2012. №3: 48-57; N. Gara, X. Zhao, D.E. Kleiner, et al., 2013]. Чувствительность эластометрии при циррозе печени составляет 87% [Lin ZN, Xin YN., Dong QL, et al. Performance of the aspartate aminotransferase-to-platelet ratio index for the staging of hepatitis C-related fibrosis: an updated meta-analysis. Hepatology. 2011: 53: 726-736; N. Gara, X. Zhao, D.E. Kleiner, et al., 2013].

Таким образом, к недостаткам способа, выбранного нами в качестве прототипа, можно отнести:

- недостаточно высокую чувствительность - 87%.

- ограничение применения у больных с асцитом, с узкими межреберными промежутками, у тучных пациентов с избыточной подкожно-жировой клетчаткой, что связано с особенностями распространения ультразвуковой волны;

- противопоказания к применению при наличии желчнокаменной болезни ввиду риска развития обострения хронического калькулезного холецистита;

- высокую стоимость исследования: так, стоимость однократного проведения эластографии в различных медицинских учреждениях составляет от 3500 до 4000 рублей.

Техническим результатом изобретения является повышение чувствительности способа диагностики цирротической стадии хронического вирусного гепатита С (F IV по METAVIR), снижение стоимости способа, а также расширение контингента пациентов при выполнении способа за счет пациентов с индексом массы тела более 30 кг/м2, с наличием узких межреберных промежутков, наличием асцита и желчнокаменной болезни.

Технический результат изобретения достигается тем, что в периферической крови пациента с хроническим вирусным гепатитом С определяют абсолютное количество клеток Т-киллеров с фенотипом CD3+CD8+ и при их значении, равном или ниже 295/л, диагностируют цирротическую стадию (F IV по METAVIR).

Способ осуществляется следующим образом.

Способ не требует специальной подготовки больного. Пациенту с ХГС проводят исследование субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови с определением абсолютного количества Т-киллеров (клетки с фенотипом CD3+CD8+) методом лазерной проточной цитофлуориметрии. Если абсолютное количество Т-киллеров периферической крови равно или ниже 295/л, это указывает на наличие у пациента с ХГС цирротической стадии (F IV по METAVIR).

Отличительным существенным признаком заявляемого неинвазивного способа является определение у пациента с ХГС в периферической крови абсолютного количества клеток Т-киллеров с фенотипом CD3+CD8+. При их значении, равном или ниже 295/л, диагностируют цирротическую стадию (F IV по METAVIR).

Причинно-следственная связь между отличительным существенным признаком и достигаемым результатом

В настоящее время в мире принята вирусно-иммуногенетическая теория развития хронической HCV-инфекции. Как известно, важнейшую роль в прогрессировании ХГС имеет не столько непосредственно цитопатическое действие вируса гепатита С, сколько характер иммунного ответа организма хозяина [Стельмах В.В. Морфофункциональное состояние системы мононуклеарных фагоцитов у больных хроническими вирусным гепатитом В и С при проведении этиопатогенетической терапии. Диссертация на соискание ученой степени к.м.н./СПб - 2003; Скляр Л.Ф. Система цитокинов и показатели оксидативного стресса при хроническом гепатите C с учетом иммунокорригирующей терапии. Диссер.… доктора медицинских наук, Владивосток, 2006.; Козлов В.К., Стельмах В.В., Радченко В.Г. Хронический гепатит C: иммунопатогенез, аспекты диагностики и современная стратегия комплексного лечения. Руководство для врачей. СПб.: Альтер Эго, 2009. - 172 с.].

В печени сосредоточено значительное количество иммунокомпетентных клеток. Количество лимфоцитов печени составляет 10% общего числа лимфоцитов и 35% Т-лимфоцитов всего организма [Шифф Ю.Р., Соррел М.Ф., Мэддрей У.С. Болезни печени по Шиффу. Вирусные гепатиты и холестатические заболевания/ М.: ГЕОТАР-Медиа, 2010. - 408 с.]. Кроме того, гепатоциты способны самостоятельно экспрессировать на своей поверхности адгезионные молекулы и выделять провоспалительные цитокины, привлекая экзогенные лейкоциты (Т-лимфоциты, циркулирующие макрофаги, моноциты).

Известно, что важную роль в уничтожении инфицированных HCV клеток играют специфические Т-киллеры, имеющие фенотип CD8+, поэтому количественное содержание этой субпопуляции лимфоцитов имеет большое значение в элиминации вирусного агента из организма человека [Козлов В.К., Стельмах В.В., Радченко В.Г. Хронический гепатит C: иммунопатогенез, аспекты диагностики и современная стратегия комплексного лечения. Руководство для врачей. СПб.: Альтер Эго, 2009. - 172 с.]. Одним из возможных факторов прогрессирования ХГС до стадии цирроза печени (F IV по METAVIR) является снижение содержания данной популяции лимфоцитов как в ткани печени, так и в периферической крови. В свою очередь, достаточное количество этих клеток является важным фактором предотвращения прогрессии хронической HCV-инфекции до стадии цирроза печени.

Нами было обследовано 40 пациентов с ХГС. Из них у 16 больных выявлена цирротическая стадия (F IV по METAVIR) хронического гепатита C, у 24 больных диагностирован ХГС на доцирротических стадиях заболевания (F I-III по METAVIR), группу контроля составили 20 практически здоровых человек. Стадия заболевания верифицировалась с помощью эластографии печени, выполненной аппаратом FibroScan (Echosens, Франция), у части пациентов проводилась чрескожная пункционная гепатобиопсия. Также у пациентов исследовался иммунный статус с определением субпопуляционного состава лимфоцитов, включая абсолютное количество Т-киллеров CD3+CD8+ периферической крови методом лазерной проточной цитофлуориметрии. По результатам исследования проводился сравнительный анализ содержания абсолютного количества Т-киллеров CD3+CD8+ периферической крови у пациентов с цирротической стадией ХГС (F IV по METAVIR) и у больных с ХГС на доцирротических стадиях заболевания (F I-III по METAVIR). Полученные данные представлены в таблице 1 и на графике, приведенном на Фиг. 1.

При изучении абсолютного количества Т-киллеров периферической крови у пациентов с ХГС на цирротической и доцирротических стадиях было установлено, что снижение данного показателя в крови наблюдалось в группах пациентов с циррозом печени (F IV по METAVIR) и его средние значения составили 229,42±23,12/л, в то время как в группе пациентов на доцирротических стадиях (F I-III по METAVIR) среднее значение абсолютного количества Т-киллеров периферической крови составило 444,47±27,03/л, что достоверно выше в сравнении с пациентами с циррозом печени, F IV по METAVIR (p<0,01).

При изучении абсолютного количества Т-киллеров периферической крови у пациентов с ХГС на цирротической и доцирротических стадиях было установлено достоверное снижение данного показателя в крови у пациентов с циррозом печени (F IV по METAVIR), и его среднее значение составило 229,42±23,12/л, в то время как у пациентов на доцирротических стадиях (F I-III по METAVIR) среднее значение абсолютного количества Т-киллеров периферической крови составило 444,47±27,03/л (p<0,01).

Пороговое диагностическое значение абсолютного количества Т-киллеров периферической крови - 295/л, определено в результате измерения максимальных значений данного показателя для группы пациентов с цирротической стадией ХГС.

Таким образом, можно сделать вывод, что снижение абсолютного количества Т-киллеров периферической крови до значения, равного или ниже 295/л, с фенотипом CD3+CD8+ характерно для цирротической стадии ХГС (F IV по METAVIR). Выявленные значимые отличия между данными показателями у пациентов с ХГС на цирротической и доцирротических стадиях заболевания позволяют дифференцировать пациентов с ХГС на стадии цирроза печени от пациентов с менее выраженными фибротическими изменениями и использовать данный метод в качестве неинвазивного способа определения цирротической стадии ХГС без проведения гепатобиопсии, а также расширить категорию пациентов, для которых выполнение эластометрии печени и гепатобиопсии имеют ряд ограничений.

Клинические примеры этого дифференциально-диагностического способа, демонстрирующие возможность эффективного использования определения абсолютного количества Т-киллеров периферической крови в клинической практике для выявления пациентов с цирротической стадией ХГС (F IV по METAVIR) представлены ниже.

Клинический пример №1. И/б №5553/5. Пациент К., 52 года, находился в клинике внутренних болезней и нефрологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова в 2014 г. по поводу цирроза печени в исходе хронического вирусного гепатита C. Из сопутствующей патологии обращало на себя внимание наличие желчнокаменной болезни III ст., хронического калькулезного холецистита. При госпитализации предъявлял жалобы на общую слабость, наличие отечно-асцитического синдрома. Из анамнеза заболевания установлено, что ХГС выявлен в 1995 г. В 2011 г. для решения вопроса о проведении противовирусной терапии (ПВТ) выполнено молекулярно-биологическое исследование, по результатам которого выявлена PCR RNA HCV сыворотки 4,3*105 МЕ/мл, генотип 3а. В результате комплексного лабораторно-инструментального обследования установлена цирротическая стадия ХГС, портальная гипертензия (Варикозно расширенные вены пищевода, гиперспленизм). В связи с выявленной цирротической стадией ХГС ПВТ была противопоказана. В 2013 г. выполнена эластометрия печени для инструментального подтверждения стадии заболевания, по результатам которой эластичность печени составила 62,7 кПа, что соответствует F IV по METAVIR. На момент госпитализации в 2014 г. по данным клинического анализа крови: гемоглобин 119 г/л, эритроциты - 3,88*1012/л, лейкоциты - 3,1*109/л, тромбоциты - 52*109/л, СОЭ - 10 мм/ч; по данным биохимического анализа крови выявлен синдром печеночно-клеточной недостаточности: общий белок - 68 г/л, альбумин - 33 г/л, протромбиновый индекс - 67%. По данным ФГДС - варикозно-расширенные вены пищевода. По данным УЗИ органов брюшной полости - признаки цирроза печени, желчнокаменной болезни, хронического калькулезного холецистита, портальной гипертензии (асцит, расширение воротной вены до 15 мм, селезеночной вены до 10 мм, спленомегалия). Пациенту было выполнено комплексное иммунологическое обследование с определением Т-киллеров CD3+CD8+ периферической крови, по результатам которого данный показатель составил 92/л, что ниже порогового значения 295/л, что согласно заявляемому способу может свидетельствовать о наличии цирротической стадии ХГС.

В приведенном примере показано соответствие результатов эластометрии печени, данных лабораторно-инструментальных исследований и заявляемого способа, а также возможность его применения у пациентов с отечно-асцитическим синдромом, а также в случаях риска обострения желчнокаменной болезни.

Клинический пример №2. И/б №26260/5. Пациент Я., 50 лет, находился на плановой госпитализации в клинике внутренних болезней и нефрологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова в 2013 г. по поводу цирроза печени в исходе хронического вирусного гепатита C. На момент поступления больной предъявлял жалобы на общую слабость, повышенную утомляемость, эпизодические боли в области правого подреберья при погрешности в диете. Из анамнеза заболевания известно, что в 2009 г при прохождении планового обследования впервые выявлены антитела к HCV. По данным молекулярно-биологического исследования: PCR RNA HCV в сыворотке крови 1,32×106 МЕ/мл, генотип 1в. Неоднократно проводился курс стандартной противовирусной терапии (ПВТ) пегилированными интерферонами и нуклеозидными аналогами без достижения вирусологического ответа, в связи с неэффективностью ПВТ была прекращена. В 2013 г. обратился в клинику внутренних болезней и нефрологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова для проведения дополнительного обследования и лечения. При поступлении по данным клинического анализа крови - гемоглобин 156 г/л, эритроциты - 4,96*1012/л, лейкоциты - 4,2*109/л, СОЭ - 9 мм/ч; по данным биохимического анализа крови наблюдался синдром цитолиза (АЛТ 46 ЕД/л, ACT 110 ЕД/л), холестаза (ГГТП 370 ЕД/л), белок-синтетическая функция печени сохранена (общий белок - 69 г/л, альбумин - 42 г/л, протромбиновый индекс - 95%). По данным ФГДС - гастродуоденит. По данным УЗИ органов брюшной полости - гепатомегалия, диффузные изменения печени, поджелудочной железы, воротная вена - 13 мм, признаки портальной гипертензии - расширение селезеночной вены - 10 мм, спленомегалия. Проведена ультразвуковая эластография печени, по результатам которой из серии 10 измерений плотности печени общий результат эластичности составил 31,6 кПа, что соответствует F IV по METAVIR. Также пациенту выполнялось комплексное иммунологическое обследование с определением Т-киллеров CD3+CD8+ периферической крови, по результатам которого данный показатель составил 237/л, что ниже порогового значения 295/л и может свидетельствовать о наличии цирротической стадии заболевания.

В приведенном примере показано соответствие результатов эластометрии печени, данных лабораторно-инструментальных исследований и заявляемого способа.

Клинический пример №3. И/б №157256. Пациентка П., 29 лет, в 2011 г. находилась на плановой госпитализации в клинике внутренних болезней и нефрологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова по поводу хронического вирусного гепатита C. Из клинических проявлений беспокоил периодический дискомфорт в правом подреберье, повышенная утомляемость. Из анамнеза заболевания известно, что в 2009 г. выявлены положительные антитела к HCV. По данным молекулярно-биологических исследований выявлена RNA HCV в сыворотке 2,1*105/л, генотип 3а. По данным клинического анализа крови: гемоглобин 155 г/л, эритроциты - 5,3*1012/л, лейкоциты - 9,6*109/л, тромбоциты - 293*109/л, СОЭ - 20 мм/ч; по данным биохимического анализа крови наблюдался синдром цитолиза (АЛТ - 285 ЕД/л, ACT - 148 ЕД/л), белок-синтетическая функция печени сохранена (протромбиновый индекс - 113%, альбумин 46 г/л). По данным УЗИ органов брюшной полости - деформация желчного пузыря. Выполнена пункционная гепатобиопсия, по результатам которой гистологическая картина соответствует хроническому вирусному гепатиту C с умеренной гистологической активностью (METAVIR A2), стадия фиброза по METAVIR - 2. В дальнейшем пациентке выполнено комплексное иммунологическое обследование с определением абсолютного количества Т-киллеров периферической крови, которое составило 306/л, полученный результат выше порогового значения 295/л, что может свидетельствовать об отсутствии цирротической стадии ХГС (F IV по METAVIR).

Данный пример демонстрирует соответствие полученных результатов по данным гепатобиопсии и заявляемого способа.

Клинический пример №4. И/б №12398/5. Пациентка Н., 52 года, находилась на плановой госпитализации в клинике внутренних болезней и нефрологии СЗГМУ им. И.И. Мечникова в 2013 г. по поводу хронического вирусного гепатита C, хронического панкреатита. Особенностью пациентки явилось астеническое телосложение с узкими межреберным промежутками, ИМТ составил 20,5 кг/м2. Из клинических проявлений беспокоил астеновегетативный синдром, умеренно выраженный диспепсический синдром. Из анамнеза заболевания известно, что впервые положительные антитела к HCV выявлены в 2009 г. По данным молекулярно-биологических методов исследования выявлена PCR RNA HCV в сыворотке крови - 1,54*105 МЕ/мл, генотип HCV - 1в. На момент госпитализации по данным клинического анализа крови: гемоглобин 140 г/л, эритроциты - 4,67*109/л, лейкоциты - 6,4*109/л, СОЭ - 8 мм/ч; по данным биохимического анализа крови наблюдался выраженный синдром цитолиза (АЛТ 408 ЕД/л, ACT - 316 ЕД/л), холестаза (ГТТП 158 ЕД/л). По данным УЗИ органов брюшной полости выявлены УЗ-признаки диффузных изменений поджелудочной железы, деформации желчного пузыря, данных за портальную гипертензию не получено. В 2012 г. при плановом обследовании пациентке выполнена эластометрия печени с определением эластичности печени, которая составила 9,6 кПа, что соответствует тяжелому фиброзу. Для подтверждения полученных данных за наличие тяжелого фиброза печени пациентке выполнена пункционная биопсия печени, по результатам которой установлена умеренная гистологическая активность (METAVIR A2) с нерезко выраженными явлениями фиброза (METAVIR FI). В это же время больной проведено комплексное иммунологическое обследование с исследованием субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови методом лазерной проточной цитофлуориметрии и определением абсолютного количества Т-киллеров CD3+CD8+ периферической крови, которое составило 704/л, что превышает пороговые значения данного показателя 295/л для верификации цирротической стадии заболевания. Полученные данные иммунологического обследования соответствовали результатам гепатобиопсии, свидетельствовавшей об отсутствии цирротической стадии заболевания.

Таким образом, по результатам комплексного лабораторно-интрументального обследования пациентки данных за цирроз печени не получено, что соответствовало диагнозу. Погрешность полученных результатов при проведении эластометрии, вероятно, связана с антропометрическими особенностями пациентки (астеник с узкими межреберными промежутками).

Нами было обследовано 40 пациентов с ХГС. Из них у 16 больных выявлена цирротическая стадия (F IV по METAVIR) хронического гепатита С, у 24 больных диагностирован ХГС на доцирротических стадиях заболевания (F I-III по METAVIR). Чувствительность заявляемого способа для определения цирротической стадии (F IV по METAVIR) ХГС составляет 94%, что на 7% превышает чувствительность эластометрии печени для стадии F IV по METAVIR, описанную по данным литературы. Чувствительность способа была рассчитана по формуле:

ЧС=ИПР/(ИПР+ЛОР)×100%=15/(15+1)*100=15/16=93,7%, где

ЧС - чувствительность способа;

ИПР - истинно-положительные результаты;

ЛОР - ложноотрицательные результаты.

Стоимость одного исследования по способу-прототипу в различных медицинских учреждениях составляет 3500-4000 руб. Стоимость одного исследования по заявляемому способу составляет 1890 руб.

Таким образом, чувствительность способа определения цирротической стадии хронического вирусного гепатита С по сравнению с прототипом повышается на 7%, стоимость способа снижается с 3500-4000 руб. до 1890 руб., а также расширяется контингент пациентов при выполнении способа за счет пациентов с индексом массы тела более 30 кг/м2, с наличием узких межреберных промежутков, асцита и желчнокаменной болезни.

Способ определения цирротической стадии хронического вирусного гепатита С путем клинико-лабораторного исследования, отличающийся тем, что у пациента определяют в периферической крови абсолютное количество клеток Т-киллеров с фенотипом CD3+CD8+ и при их значении, равном или ниже 295/л, диагностируют цирротическую стадию хронического вирусного гепатита С, F IV по METAVIR.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области иммунологии и медицины. Предложено пептидное производное для выработки в организме специфических антител, взаимодействующих с изоформой 2 фактора элонгации трансляции 1A (eEF1A2), но не взаимодействующих с изоформой 1 фактора элонгации трансляции 1A (eEF1A1), содержащее фрагмент аминокислотной последовательности eEF1A2 с 330 по 343 положения.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для диагностических исследований. Группа изобретений характеризует автоматическую систему количественной амплификации в реальном времени, способ автоматической очистки нуклеиновой кислоты и количественного определения амплификации гена с использованием указанной системы, способ автоматического измерения количества жизнеспособных клеток патогенных бактерий, анализа патогенных бактерий на чувствительность к антибиотикам и автоматического получения антигенной плотности с использованием указанной системы, а также способ очистки связывающей нуклеиновой кислоты-мишени, которой мечен антиген-мишень, содержащийся в биологическом образце, с использованием указанной автоматической системы.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития иммунных нарушений у пациентов, проживающих на территориях с повышенным содержанием стронция в окружающей среде.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Изобретение представляет способ прогнозирования исхода беременности при угрожающих преждевременных родах путем определения в периферической венозной крови иммунокомпетентных клеток в сроке беременности 22-33 недели, отличающийся тем, что определяют относительное содержание CD46+ моноцитов, и при его значении равном или менее 51,7%, прогнозируют преждевременные роды.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для диагностики преэклампсии у беременных с хронической артериальной гипертензией в сроки 24-37 недель.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для оценки риска развития атрофического гастрита у европеоидов Хакасии. Для этого определяют концентрацию IL-2, уровень ФГА-индуцированной продукции IL-8, фагоцитарное число нейтрофилов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии и эндокринологии, и описывает способ диагностики воспаления в жировой ткани при ожирении. Способ характеризуется тем, что в сыворотке венозной крови пациентов с помощью твердофазного иммуноферментного метода (ELISA) определяют концентрацию неоптерина и при концентрации неоптерина более либо равной 10 нмоль/л диагностируют воспаление жировой ткани.
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и может быть использовано для выявления дисплазии эпителия слизистой оболочки желудка у пациентов с атрофическим гастритом или с аденомой желудка.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и предназначено для прогнозирования эффективности терапии детей с хроническим вирусным гепатитом В. Для этого до начала лечения производят забор периферической венозной крови.
Изобретение относится к медицине, кардиологии, аритмологии и предназначено для прогнозирования развития нарушений ритма сердца у пациентов с синдромами предэкзитации желудочков.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, и может быть использовано для прогнозирования течения иммунной тромбоцитопении (ИТП) после спленэктомии. Для этого после удаления селезенки определяют ее массу, морфометрически в гистологических срезах лимфоидного органа после ИГХ окрашивания подсчитывают количество CD8+ T-лимфоцитов. Вычисляют их массу по формуле: M=m × D/100%, где M - масса CD8+ T-лимфоцитов (г), m - масса селезенки (г), D - количество CD8+ T-лимфоцитов, %. При значениях CD8+ T-лимфоцитов ≥9,75 г прогнозируют рефрактерную форму течения ИТП, а при <9,75 г констатируют вариант ИТП с благоприятным течением заболевания после спленэктомии. Использование данного способа позволяет прогнозировать течение ИТП после спленэктомии и проводить дифференцированный подход при назначении терапии. 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному антителу, которое специфически связывается с TAT211, или его функциональному фрагменту. Также раскрыты конъюгат, содержащий указанное антитело и который специфически связывает TAT211, нуклеиновая кислота, кодирующая заявленное антитело, и клетка, которая продуцирует заявленное антитело. Раскрыты способ идентификации антитела, способ ингибирования роста клетки, которая экспрессирует полипептид TAT211, способ терапевтического лечения млекопитающего, имеющего раковую опухоль, содержащую клетки, которые экспрессируют полипептид TAT211, способ определения присутствия TAT211 белка в образце и способ диагностики присутствия опухоли у млекопитающего. Изобретение обладает способностью специфически связываться с TAT211, что позволяет эффективно лечить заболевания, ассоциированные с экспрессией полипептида TAT211. 15 н. и 22 з.п. ф-лы, 19 ил., 1 табл., 16 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности гепатологии, и может быть использовано для прогнозирования быстрого вирусологического ответа на терапию пегилированным интерфероном α и рибавирином у больных хроническим гепатитом C. Для этого определяют аллельный вариант гена ИЛ-28В и проводят иммунологическое исследование. При наличии аллели rs12979860CC/rs8099917TT рассчитывают коэффициент иммунопрогнозирования 1 (КИП-1) по формуле: КИП-1=2,774-0,833*[CD3+]-0,016*[CD4+]-0,063*[CD8+]-0,525*[CD19+], где [CD3+] - абсолютное содержание CD3+ клеток в 1 л крови, [CD4+] - абсолютное содержание CD3+/CD4+ клеток в 1 л крови, [CD8+] - абсолютное содержание CD3+/CD8+ клеток в 1 л крови, [CD19+] - абсолютное содержание CD19+ клеток в 1 л крови. При величине КИП-1 ≤1,5 прогнозируют развитие быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию, а >1,5 - его отсутствие. При наличии любого другого аллельного варианта рассчитывают КИП-2 по формуле: КИП2=3,994+0,014*[CD56+/ki-67+]-0,408*[CD25hi]-0,69*[CD25hi/FoxP3+], где [CD56+/ki-67+] - % CD16+/CD56+/ki-67+ клеток среди лимфоцитов крови, [CD25hi] - % CD3+/CD25high клеток среди лимфоцитов крови, [CD25hi/FoxP3+] - % CD3+/CD25high/FoxP3+ клеток среди лимфоцитов крови. При величине КИП-2 ≤3,0 прогнозируют развитие быстрого вирусологического ответа на стандартную терапию, а >3,0 - его отсутствие. Использование данного способа позволяет выявить по разным аллельным вариантам гена ИЛ-28В различные сдвиги иммунограмм и дает возможность прогнозировать наличие или отсутствие быстрого вирусологического ответа. 5 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицине и описывает способ удаления CO2 из содержащей мочевину пробы плазмы, содержащий следующие стадии: a) получение пробы плазмы, b) добавление кислоты, чтобы частично удалить CO2, c) лиофилизация пробы, чтобы дополнительно удалить CO2 и получить сухую пробу, d) повторное растворение высушенной пробы и нейтрализация буферным раствором до значения pH 4-7. Данный способ позволяет более точно определить долю изотопа 13С в мочевине в первой пробе плазмы для дальнейшей диагностики мочевинного обмена. 3 н. и 7 з.п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.

Изобретение относится к ветеринарной медицине, а именно к определению наличия антител к бактериальным антигенам в сыворотке крови животных. Для этого антиген смешивают с тестируемой сывороткой крови в различных разведениях в лунках микропланшета с V-образным дном с последующей визуализацией результатов реакции агглютинации с использованием источника ультрафиолетового излучения, преимущественно трансиллюминатора. В качестве антигена используют флюоресцентно-меченую суспензию инактивированных бактериальных клеток, которую получают при обработке бактериальных клеток 1,0% водным раствором флюоресцентного красителя, выбранного из группы: бромистый этидий, пропидия иодид, акридиновый оранжевый. Изобретение позволяет упростить проведение иммуноферментного анализа для определения наличия различных патогенных микроорганизмов и автоматизировать учет результатов. 2 з.п. ф-лы, 3 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ качественного определения адаптационной способности к мостовидным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области, причем, если определяют содержание в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТИМП 1) в количестве 118,9-145,7 нг/мл и тканевого ингибитора металлопротеиназы 2 (ТИМП 2) в количестве 42,4-56,9 нг/мл, то диагностируют низкую адаптационную способность пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов, а если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ТИМП 1 в количестве 68,2-77,4 нг/мл и ТИМП 2 в количестве 21,9-37,7 нг/мл, то диагностируют полную функциональную адаптацию пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности определения адаптационной способности и чувствительности дифференциальной диагностики адаптационной способности. 2 з.п. ф-лы, 6 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к нефрологии и гематологии, и может быть использовано для выявления и предотвращения нефротоксических эффектов на этапах полихимиотерапии у пациентов онкогематологического профиля. Предложен способ диагностики нефротоксичности химиотерапии на основе оценки уровня цистатина С в плазме крови и моче, при этом определяют индекс нефротоксичности как отношение концентраций цистатина С в сыворотке крови к концентрации цистатина С в моче, если это соотношение больше или равно 50,2, то судят о высоком риске токсического повреждения почки и незамедлительно начинают проведение профилактической терапии острого поражения почек. Способ позволяет с первых дней после окончания курса химиотерапии выявить признаки острого повреждения почек и провести профилактику развития почечной недостаточности. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике заболеваний почек, и может быть использовано при обследовании больных для диагностики начальной и последующих стадий хронической болезни почек. В крови больного определяют уровень липокалина-2 в нг/мл, уровень мочевины в крови в ммоль/л и рассчитывают отношение уровня липокалина-2 к уровню мочевины, и при его значении - 2,51-2,90 диагностируют 1 стадию хронической болезни почек; - 2,91-3,50 соответствует 2 стадии хронической болезни почек; - 3,51-3,80 - 3А стадия хронической болезни почек; - 3,81-4,00 диагностируют 3Б стадию хронической болезни почек; - 4,01-4,50 диагностируют 4 стадию хронической болезни почек; - >4,51 диагностируют 5 терминальную стадию хронической болезни почек. Авторами впервые определены нормативы показателя NGAL/мочевина у здоровых людей. Они составляют 1,20-2,50. Способ позволяет диагностировать стадии хронической болезни почек, используя исследование концентрации NGAL и коэффициента NGAL/мочевина в сыворотке крови. В отличие от существующих в настоящее время методов способ позволяет более точно диагностировать стадии ХБП, а также не подвергать больных дополнительному забору крови и инвазивным методам диагностики. Предлагаемый нами способ является количественным, а значит и точным и объективным, преимуществом его является быстрота и простота исполнения, отсутствие необходимости использования дорогостоящего оборудования, радиофармпрепарата, возможность выполнения в амбулаторных условиях. 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии и репродуктологии, и описывает способ отбора пациенток с синдромом слабого ответа яичников, нуждающихся в переводе на программу лечения с использованием донорских ооцитов. Способ характеризуется тем, что у пациентки исследуют гормоны крови, затем на 2-3-й дни менструального цикла, предшествующие проведению гонадотропной стимуляции, исследуют в сыворотке крови уровень антимюллерова гормона (АМГ), если уровень АМГ составит 0,1-0,5 нг/мл, дополнительно определяют концентрацию фолликулостимулирующего гормона (ФСГ), выраженную в мМЕ/мл, рассчитывают соотношение ФСГ/АМГ и, если величина полученного соотношения равна или превышает 51, производят коррекцию лечения и перевод пациентки на программу лечения с использованием донорских ооцитов. Предложенный способ позволяет избегать неэффективных дорогостоящих высокодозированных гонадотропных стимуляций и определяет объективные показания к переводу пациентки на программу лечения с использованием донорских ооцитов без ущерба для здоровья. Способ может быть использован в программах ЭКО и ПЭ. 3 пр.
Предлагаемое изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения иммуноферментной тест-системы для определения эпитопов оболочечного белка вируса Пуумала протективной направленности в вакцинных препаратах против геморрагической лихорадки с почечным синдромом (ГЛПС). Охарактеризованный способ включает получение мышиных моноклональных антител, обладающих нейтрализующей активностью по отношению к вирусу Пуумала. Сорбцию таких антител на поверхность иммунопанели. Выделение IgG из сывороток крови реконвалесцентов ГЛПС с высокими титрами специфических антител к вирусу Пуумала. Приготовление конъюгата специфических IgG с пероксидазой хрена. Представленное изобретение позволяет с одинаковой чувствительностью выявлять оболочечный белок как живого, так и инактивированного вируса Пуумала, посредством чего контролировать содержание в вакцинном препарате указанного вируса, являющегося возбудителем геморрагической лихорадки с почечным синдромом. 2 табл., 1 пр.
Наверх