Фактор фон виллебранда или фактор viii и фактор фон виллебранда для лечения коагулопатии, индуцированной ингибиторами тромбоцитов
Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается применения фактора фон Виллебранда в комбинации с фактором VIII для лечения и/или профилактики эпизода кровотечения, ассоциированного с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, где веществом, ингибирующим тромбоциты, является ингибитор рецептора АДФ или комбинация из ингибитора рецептора ФДФ и ингибитора циклооксигеназы. Изобретение относится также к композиции и способу лечения и/или профилактики расстройства, связанного с кровотечением, ассоциированным с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты. Группа изобретений обеспечивает уменьшение или предотвращение нежелательных явлений кровотечений после введения антикоагулянтов или фибринолитиков. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 2 пр.
Настоящее изобретение относится к фактору фон Виллебранда для применения в лечении и/или профилактике кровотечений, ассоциированных с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты. Более того, настоящее изобретение относится к способу лечения и/или профилактики расстройства, связанного с эпизодами кровотечения, ассоциированными с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, включающему введение фармацевтически эффективного количества фактора фон Виллебранда (vWF) пациенту, нуждающемуся в этом. Настоящее изобретение также относится к композиции, включающей vWF, и композиции, включающей FVIII, для одновременного, раздельного или последовательного применения для использования в лечении и/или профилактике эпизодов кровотечений, ассоциированных с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты.
В настоящем описании указаны документы, включая патентные заявки и руководства производителей. Описание таких документов в части, нерелевантной настоящему изобретению, включено в виде ссылки полностью. В частности, все цитированные документы включены в виде ссылок в той же степени, как если бы каждый отдельный документ был специально и отдельно показан для включения в виде ссылки.
Дисбаланс компонентов системы свертывания или фибринолиза будет проявляться клинически в виде или тромбоза, или кровотечения соответственно. Обе патологические ситуации могут быть угрожающими жизни. После тромботического события, например во время острого инфаркта миокарда, стараются вмешиваться в текущий лизис и баланс коагуляции. Фибринолитическая система поддерживается, например, путем введения стрептокиназы (SK) или активаторов плазминогена (t-PA, u-PA) для растворения существующего сгустка крови. Активация тромбоцитов ингибируется или подавляется ингибиторами тромбоцитов. Посредством этого реканализируются сосуды, закрытые тромбом, и предотвращается образование нового тромба. Ингибиторы функций тромбоцитов могут действовать в различных местах. Ингибиторы циклооксигеназы (например, ацетилсалициловая кислота) предотвращают образование тромбоксана А2 (TXA2), который является сильным активатором функции тромбоцитов. Антагонисты рецепторов АДФ на поверхности тромбоцитов (например, клопидогрель, тиклопидин) предотвращают связывание активатора тромбоцитов АДФ с его рецептором и предотвращают активацию тромбоцитов. Рецептор фибриногена на поверхности тромбоцитов, гликопротеин IIb/IIIa (GP IIb/IIIa), индуцирует агрегацию тромбоцитов после связывания своего агониста фибриногена (или vWF). Моноклональные антитела к GP IIb/IIIa (например, Абсиксимаб) или антагонисты рецепторов, как Эптифибатид или Тирофибан, также предотвращают агрегацию тромбоцитов.
С другой стороны, определенная возможность образовывать тромб после повреждения сосуда является необходимой для предотвращения кровотечения в таких местах. Терапия потенциально прогрессирующего угрожающего жизни кровотечения во время лечения ингибиторами тромбоцитов включает прекращение такого лечения и введение усилителей коагуляции. Такие усилители коагуляции состоят, среди остальных, из частично преактивированных факторов коагуляции, как в имеющемся на рынке продукте FEIBA® (Baxter) или рекомбинантном факторе коагуляции VIIa (NovoSeven®, Novo Nordisk). Главным образом такие усилители коагуляции приводят к уменьшению терапевтических эффектов ингибирования тромбоцитов. Dickneite et al. (Dickneite G., Friesen H.-J., Kumpe G., Reers M. 1996 Platelets 7, 283-290, Dickneite G., Nicolay U., Friesen H.-J., Reers M. 1998 thromb Haemost 80, 192-9) описывает применение vWF и Haemate® (CSL Behring) в качестве усилителя коагуляции во время эпизода кровотечения, индуцированного рекомбинантным ингибитором тромбина гирудином.
Количественным показателем для антикоагулянтных и фибринолитических эффектов в клинике являются различные диагностические процедуры, как тромбоэластография, исследование образования тромбина, активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ (aPTT)) или протромбиновое время (ПВ (PT)). Способом оценки профилактики тяжелых кровотечений в экспериментальных условиях является кровотечение в органах после травматического повреждения (Dickneite G., Doerr B., Kaspereit F. 2008 Anesth Analg 106, 1070-7).
В соответствии с механистическими исследованиями, касающимися развития гемостаза после повреждения сосудов, тромбоциты связываются преимущественно с субэндотелиальными волокнами коллагена посредством фактора фон Виллебранда (vWF). vWF является единственным фактором, способным связывать тромбоциты эффективно при низких (например, в венозных областях), а также при высоких скоростях сдвига (например, в артериальном, коронарном русле или вместе индуцированного бляшками сужения сосудов) путем связывания обнаженного коллагена (Ruggeri ZM, Seminars in Hematology, 1994, 31, 229-239). Последующая агрегация тромбоцитов и последующая ретракция и сокращение агрегированных тромбоцитов под действием тромбина индуцирует гемостатическую пробку во время вторичного гемостаза (Hemker HC, and Poliwoda H, 1993, 1-18, Barthels M and Poliwoda H, Thieme, Stuttgart, Germany).
В настоящее время vWF является самым крупным известным белком плазмы. Это мультимерный гликопротеин с двумя биологическими свойствами. В местах повреждений сосудов он опосредует адгезию тромбоцитов с последующим образованием тромбов и действует как носитель для прокоагулянтного фактора коагуляции VIII (Ruggeri ZM, 1993 Current Opinion in cell Biology, 5, 898-906). vWF обнаруживается в определенных количествах в форме, свободной от фактора VIII, в субэндотелиальных клетках и хранится в форме, свободной от фактора VIII, в α-гранулах тромбоцитов. Тромбоциты имеют два рецептора для vWF: первый GP Ib в комплексе GP Ib-IX-V и второй GP IIb-IIIa (Ruggeri ZM, 1994 Seminars in Hematology 31, 229-239). Посредством его первого рецептора vWF индуцирует адгезию тромбоцитов в месте повреждения сосуда, за чем следует связывание vWF и/или фибриногена с рецептором GP IIb/IIIa и поддержание последующей агрегации тромбоцитов. В соответствии с такими предпосылками в литературе обсуждают применение ингибиторов связывания vWF в качестве действующего вещества антикоагулянтного препарата (Alevriadou BR, Moake JL, Turner NA, Ruggeri ZM, Folie B, Phillips MD, Schreiber AB, Hrinda ME, McIntire IV, 1993, Blood 81, 1263-1276M; Grainick HR, Williams S, McKeown L, Kramer W, Krutzsch H, Gorecki M, Pinet A, Garfinkel LI, 1992 Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89, 7880-7884).
Все еще существует выраженная медицинская необходимость в уменьшении или предотвращении нежелательных явлений кровотечений после введения ингибиторов тромбоцитов. Следовательно, технической проблемой, лежащей в основе настоящего изобретения, является предоставление средств и способов для успешного лечения эпизода кровотечения, вызванного введением веществ, ингибирующих тромбоциты.
Решение такой технической проблемы достигают обеспечением вариантов осуществления изобретения, охарактеризованных в формуле изобретения.
Неожиданно обнаружили, что нежелательные явления кровотечения или геморрагии во время или после введения вещества, ингибирующего тромбоциты, уменьшались после введения фактора фон Виллебранда (vWF). Следовательно, подходящее введение vWF-содержащей фармацевтической композиции будет антагонизировать нежелательные явления усиленного кровотечения после антитромбоцитарной терапии. Нежелательные явления, возникающие в результате эффектов антикоагулянтов или фибринолитиков, следовательно, уменьшаются или предотвращаются. Для уменьшения риска кровотечения у пациентов vWF можно вводить или профилактически, или после антитромбоцитарного лечения.
Соответственно, настоящее изобретение относится к фактору фон Виллебранда (vWF) для лечения и/или профилактики кровотечения, ассоциированного с коагулопатией, особенно тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты.
Термин «тромбопатия» в соответствии с настоящим изобретением относится к дисфункции тромбоцитов, тогда как количество тромбоцитов является нормальным или незначительно измененным. Это считают отличительной характеристикой от тромбоцитопении, также известной как тромбопения, где в крови присутствует относительно небольшое количество тромбоцитов. Относительно тромбопатии существует ряд препаратов, ограничивающих функцию(и) тромбоцитов, например ацетилсалициловая кислота, диклофенак, гепарин, пенициллин и другие. Тромбопатия также известна как тромбоцитопатия, такой термин также используется в настоящем описании.
В отношении плазматической коагуляции тромбоциты имеют две важные характеристики или функции: адгезия к субэндотелию с одной стороны и агрегация друг с другом с другой стороны. В соответствии с настоящим изобретением термин «вещества, ингибирующие тромбоциты» относится к веществам, ингибирующим агрегацию тромбоцитов. В общем такие вещества также известны как ингибиторы тромбоцитов или антитромбоцитарные лекарственные препараты или ингибиторы агрегации тромбоцитов и их вводят пациентам для профилактики роста тромбов, особенно в артериях, т.е. их вводят для предотвращения, например, инсульта, инфаркта миокарда или другого связанного заболевания.
Следовательно, в соответствии с изобретением термин «тромбопатия, индуцированная веществами, ингибирующими тромбоциты» относится к дисфункции агрегации тромбоцитов, тогда как количество тромбоцитов является нормальным или незначительно измененным. Напротив тромбоцитопения связана со снижением количества тромбоцитов. Тромбопатия индуцируется одним, двумя или более веществами, которые ингибируют агрегацию тромбоцитов. Предпочтительно такие вещества ингибируют циклооксигеназу и/или рецептор АДФ.
Термин «тромбопатия», как используется в настоящем описании, предпочтительно не включает наследственные заболевания, как тромбастения, вызванная дефицитом гликопротеинов мембраны тромбоцитов (GP) IIb/IIIa (тромбастения Гланцманна), или синдром Бернарда-Сулье, вызванный дефицитом GP Ib. Тромбастения является наследственным нарушением тромбоцитов крови, характеризуемым особенно нарушенной ретракцией сгустка и часто удлиненным временем кровотечения.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу лечения и/или профилактики расстройства, связанного с эпизодом кровотечения, ассоциированным с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, включающему введение фармацевтически эффективного количества фактора фон Виллебранда (vWF) пациенту, нуждающемуся в этом.
В предпочтительном варианте осуществления применения фактора фон Виллебранда или способа по изобретению vWF используют или вводят в комбинации с фактором VIII в виде комбинации фактора VIII/фактора фон Виллебранда (FVIII/vWF).
Предпочтительно vWF или комбинацию FVIII/vWF рецептируют в фармацевтической композиции, необязательно включающей фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель.
Термин «фармацевтическая композиция», как используется в настоящем описании, относится к композиции для введения пациенту, предпочтительно пациенту человеку. Фармацевтическая композиция альтернативно предусматривает смеси vWF или комбинации vWF и FVIII. В случаях, когда в композиции содержится более чем одно соединение, понимают, что ни одно из этих соединений не обладает ингибирующим эффектом на другие соединения, также содержащиеся в композиции.
Предпочтительно, чтобы указанная фармацевтическая композиция включала фармацевтически приемлемый носитель, вспомогательное вещество и/или разбавитель. Примеры подходящих фармацевтических носителей, вспомогательных веществ и/или разбавителей хорошо известны в области техники и включают фосфатные буферные солевые растворы, эмульсии, такие как эмульсии типа масло-в-воде, различные типы увлажняющих средств, стерильные растворы и др. Композиции, включающие такие носители, могут быть рецептированы хорошо известными обычными методами. Такие фармацевтические композиции можно вводить пациенту в подходящей дозе. Введение подходящих композиций может быть осуществлено различными путями, например путем внутривенного, интраперитонеального, подкожного или внутримышечного введения. Особенно предпочтительно, чтобы указанное введение осуществляли путем инъекции и/или введения, например, на месте в кровоток. Схему введения определяет лечащий врач и клинические факторы. Как хорошо известно в области медицинской техники, дозировки для любого пациента зависят от множества факторов, включая размеры пациента, площадь поверхности тела, возраст, определенное вводимое соединение, пол, время и путь введения, общее состояние здоровья и другие лекарственные препараты, вводимые одновременно.
Фармацевтическую композицию по изобретению можно вводить пациенту в диапазоне доз от 10 до 1000 единиц vWF на кг массы тела. Альтернативно, если используют комбинацию FVIII/vWF, диапазон вводимой дозы составляет от 5 до 400 единиц FVIII на кг массы тела и от 10 до 1000 единиц vWF на кг массы тела.
Предпочтительный диапазон дозировки составляет между 30 и 500 единиц vWF на кг массы тела или альтернативно для комбинации FVIII/vWF вводят дозу от 20 до 200 единиц FVIII и от 30 до 500 единиц vWF на кг массы тела.
В качестве фармацевтической композиции, включающей vWF или vWF и FVIII соответственно, используемой в соответствии с изобретением, может быть использован любой имеющийся на рынке продукт, включающий vWF или vWF и FVIII, например, Haemate® и Humate® P (CSL Behring), который содержит кроме vWF также FVIII или другие продукты плазматического vWF или рекомбинантно производимые продукты vWF или vWF/FVIII.
Развитие можно отслеживать с помощью периодических исследований. Композиции по изобретению можно вводить местно или системно. Препараты для парентерального введения включают стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примеры неводных растворителей представляют собой пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъекционные органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают воду, водно/спиртовые растворы, эмульсии или суспензии, включая солевые и буферные среды. Парентеральные носители включают раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия, лактат Рингера или нелетучие масла. Внутривенные носители включают жидкие и питательные подкрепители, электролитные подкрепители (такие как на основе декстрозы Рингера) и подобные. Также могут присутствовать консерванты и другие добавки, такие как, например, антимикробные средства, антиоксиданты, комплексообразующие средства и инертные газы и подобные.
В другом предпочтительном варианте применения фактора фон Виллебранда или способа по изобретению vWF используют или вводят для действия в качестве антидота.
Термин «антидот», как используется в соответствии с настоящим изобретением, относится к веществу, которое усиливает ослабленную функцию тромбоцитов. Следовательно, антидот по изобретению не является предметом классической функции агонист/антагонист, но улучшает функцию тромбоцитов, которая была ослаблена веществами, ингибирующими тромбоциты.
В предпочтительном варианте осуществления изобретения vWF или FVIII/vWF используют или вводят в виде концентрата.
В другом предпочтительном варианте осуществления изобретения vWF или FVIII/vWF выделяют из плазмы человеческой крови или альтернативно вводят в виде рекомбинантного белка.
В предпочтительном варианте применения фактора фон Виллебранда или способа по изобретению вещество, ингибирующее тромбоциты, выбирают из группы, состоящей из ингибитора циклооксигеназы, ингибитора рецептора АДФ или их комбинации. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения ингибитором циклооксигеназы является ацетилсалициловая кислота и ингибитором рецептора АДФ является тиенопиридиновое производное, предпочтительно клопидогрель или тиклопидин. В наиболее предпочтительном варианте осуществления изобретения веществом, ингибирующим тромбоциты, является ацетилсалициловая кислота, клопидогрель или комбинация ацетилсалициловой кислоты и клопидогреля.
Настоящее изобретение дополнительно относится к композиции, включающей vWF, и композиции, включающей FVIII, для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении и/или профилактике эпизода кровотечения, вызванного введением веществ, ингибирующих тромбоциты. В соответствии с настоящим вариантом осуществления изобретения, следовательно, vWF и FVIII применяют или вводят в отдельных стандартных дозах.
На чертежах показано:
На фиг. 1 показаны столбчатые диаграммы общей кровопотери (статистическая значимость относительно группы 1 (контроль plavix®) в модели клопидогреля у крыс.
На фиг. 2 показан график Каплана-Майера общей кровопотери в модели клопидогреля у крыс.
На фиг. 3 показан эффект Haemate® 200 ЕД/кг и свежего концентрата тромбоцитов крыс (1,6 х 109 ТЦ/животное) на образование тромбина/тромбограмму в плазме, обогащенной тромбоцитами.
На фиг. 4 показаны столбчатые диаграммы кровопотери у свиней после введения Клопидогреля/Аспирина®.
На фиг. 5 показан график Каплана-Майера кровопотери у свиней после введения Клопидогреля/Аспирина®.
На фиг. 6 показан эффект введения Клопидогреля/Аспирина® на количество тромбоцитов у свиней.
Без ограничения настоящего изобретения примеры иллюстрируют изобретение.
Пример 1:
Влияние введенных тромбоцитов крыс в комбинации с концентратом vWF и FVIII (Haemate® P) на кровотечение в модели клопидогреля у крыс.
Исследовали, будет ли доза 120 и 200 ЕД/кг Haemate® P (в/в) в комбинации со свежеприготовленными крысиными тромбоцитами снижать кровотечение у крыс, получавших клопидогрель. Две группы крыс, получавших клопидогрель, получали Haemate® P (120 и 200 ЕД/кг) без тромбоцитов. Исследование было проведено как открытое исследование в семи группах с 115 крысами (+ 60 доноров тромбоцитов). Схема введения суммирована в таблице 1.
| Таблица 1 | |||
| Лечение групп | |||
| № | Лечение | Доза/объем/схема/путь | N (ж) |
| 1 | Изотонический солевой раствор | -/1,7-2,8 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 25 |
| Изотонический солевой раствор | -/1 мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 2 | Изотонический солевой раствор | -/1,67 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 25 |
| Свежие крысиные тромбоциты | 2,8-3х109/1мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 3 | Haemate® P | 120 ЕД/кг/1,67 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 10 |
| Свежие крысиные тромбоциты | 3х109 /1мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 4 | Haemate® P | 200 ЕД/кг/2,8 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 15 |
| Свежие крысиные тромбоциты | 2,8х109 /1мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 5 | Haemate® P | 120 ЕД/кг/1,67 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 10 |
| Изотонический солевой раствор | -/1 мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 6 | Haemate® P | 200 ЕД/кг/2,8 мл/кг 2 раза в нед/разовая инъекция (t=d2)/в/в | 25 |
| Изотонический солевой раствор | -/1 мл/животное/разовая инъекция (t=d2)/в/в | ||
| 7 | Отрицательный контроль для TGA, без введения клопидогреля Изотонический солевой раствор |
2,8 мл/кг 2 раза в неделю/в/в | 5 |
| Изотонический солевой раствор | 1 мл/животное/в/в |
Крысиные тромбоциты
Кровь для получения концентрата тромбоцитов получали аккуратно путем прокалывания нижней полой вены крыс доноров под глубоким наркозом. 3,2 мл крови смешивали с 0,8 мл цитрата тринатрия. Образцы крови собирали и центрифугировали при 900 об/мин в течение 30 минут. Плазму, обогащенную тромбоцитами, собирали в свежую пробирку и центрифугировали при 1800-2000 об/мин в течение 15-17 минут. Осадок аккуратно ресуспендировали в Tyrode HEPES+0,3% BSA. В зависимости от выхода тромбоцитов животные получали 1,6-3 х 109 отмытых тромбоцитов внутривенно в хвостовую вену.
Модель на животных
Ингибирование тромбоцитов/кровотечение индуцировали посредством 2,5 мг/кг клопидогреля (Plavix®) в день 0 и день 1. Таблетки растворяли в изотоническом солевом растворе и вводили через зонд. На 2 день свежеприготовленные крысиные тромбоциты вводили в хвостовую вену болюсно. Haemate® P вводили непосредственно перед введением тромбоцитов. Через 15 минут после введения тромбоцитов определяли кровопотерю. Общий объем кровопотери рассчитывали путем измерения гемоглобина, присутствующего в солевом растворе, используемом для погружения кончика хвоста. Надрез кончика хвоста осуществляли с помощью скальпеля под глубоким наркозом, удаляя около 3 мм кончика хвоста. Непосредственно после повреждения кончик хвоста погружали в солевой раствор, держали при физиологической температуре тела крыс с использованием водяной бани. Период наблюдения для наблюдения за кровотечением был 30 мин.
Кровотечение
Кровопотерю определяли как общую кровопотерю (t=0-30 мин) и анализировали с помощью двухстороннего точного теста Вилкоксона, столбчатой диаграммы и графика Каплана-Майера. Пероральное введение клопидогреля приводило к увеличению общей кровопотери (фиг. 1 и 2, таблица 2). На фиг. 1 проиллюстрировано, что общая кровопотеря была существенно снижена в группе, получавшей переливание тромбоцитов (статистику см. таблицу 3). Общая кровопотеря не снижалась комбинацией введения тромбоцитов и Haemate® P по сравнению с тромбоцитами отдельно. Однако монотерапия Haemate® P приводила к существенному снижению кровопотери в группе, которая получала дозу 200 ЕД/кг.
Никакого влияния на кровопотерю не наблюдали для 120 ЕД/кг.
| Таблица 2 | |||||||
| Общая кровопотеря (мкл) | |||||||
| Группа 0 | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 | Группа 4 | Группа 5 | Группа 6 | |
| Изотонический солевой раствор | Плавикс/ изотонический солевой раствор |
Плавикс/изотонический солевой раствор+свежие крысиные тромбоциты | Плавикс/ Haemate® P 120 ЕД/кг+ тромбоциты |
Плавикс/ Haemate® P 120 ЕД/кг |
Плавикс/ Haemate® P 200 ЕД/кг |
Плавикс/ Haemate® P 200 ЕД/кг+ тромбоциты |
|
| N | 18 | 20 | 20 | 10 | 10 | 19 | 10 |
| Среднее | 103,9 | 1404,2 | 974,4 | 914,0 | 1403,5 | 1025,6 | 865,9 |
| SD | 125,5 | 624,3 | 626,9 | 676,6 | 573,3 | 553,3 | 483,0 |
| Минимум | 11 | 265 | 189 | 42 | 372 | 81 | 165 |
| Медиана | 65 | 1466 | 960 | 830 | 1532 | 940 | 852 |
| Максимум | 507 | 2345 | 2716 | 2259 | 2193 | 2002 | 1613 |
| Таблица 3 | |||||||
| Статистика общей кровопотери (точный критерий Вилкоксона) | |||||||
| Группа 0 | Группа 1 | Группа 2 | Группа 3 | Группа 4 | Группа 5 | Группа 6 | |
| Изотонический солевой раствор | Плавикс/ изотонический солевой раствор | Плавикс/ изотонический солевой раствор+свежие крысиные тромбоциты | Плавикс/Haemate® P 120 ЕД/кг+тромбоциты | Плавикс/ Haemate® P 120 ЕД/кг |
Плавикс/ Haemate® P 200 ЕД/кг |
Плавикс/ Haemate® P 200 ЕД/кг+ тромбоциты |
|
| Группа 0 | - | <0,0001 | <0,0001 | 0,0003 | <0,0001 | <0,0001 | <0,0001 |
| Группа 1 | <0,0001 | - | 0,0231 | 0,0529 | 0,9649 | 0,0461 | 0,0278 |
| Группа 2 | <0,0001 | 0,0231 | - | 0,6284 | 0,0585 | 0,6940 | 0,7249 |
| Группа 3 | 0,0003 | 0,0529 | 0,6284 | - | 0,0821 | 0,4629 | 0,9397 |
| Группа 4 | <0,0001 | 0,9649 | 0,0585 | 0,0821 | - | 0,1083 | 0,0494 |
| Группа 5 | <0,0001 | 0,0461 | 0,6940 | 0,4629 | 0,1083 | - | 0,4629 |
| Группа 6 | <0,0001 | 0,0278 | 0,7249 | 0,9397 | 0,0494 | 0,4629 | - |
Образование тромбина
Лечение клопидогрелем приводило к более позднему началу образования тромбина и к снижению пика тромбина (фиг. 3). Когда Haemate® P вводили крысам, получавшим клопидогрель, наблюдали боле раннее образование тромбина, но отсутствие увеличения пика тромбина. Введение тромбоцитов приводило к увеличению пика тромбина. Дополнительные или даже синергические эффекты наблюдали, когда комбинировали тромбоциты и Haemate® P: пик увеличивался, и тромбин начинал образовываться быстрее.
Пример 2:
Время кровотечения у свиней после введения клопидогреля и аспирина и после дополнительного введения концентрата vWF и FVIII (Haemate® P).
Кастрированным самцам свиней вводили в течение периода трех дней 75 мг клопидогреля (Plavix®) ежедневно перорально посредством зонда. На третий день ацетилсалициловую кислоту (Aspirin®) вводили внутривенно в дозе 200 мг/кг. Через 15 минут давали внутривенный болюс концентрата, содержащего FVIII/vWF (60 единиц/кг FVIII и около 150 единиц/кг vWF) (группа лечения, группа 3, n=6). Контрольные животные получали соответствующий объем солевого раствора вместо концентрата vWF и FVIII (группа плацебо, группа 2, n=4). 5 животных не получали лечения ни ингибиторами тромбоцитов, ни Haemate® P (группа 1, отрицательный контроль). Во время эксперимента в плазме определяли ПВ и АЧТВ, оценивали тромбоэластографию и агрегацию тромбоцитов в цельной крови. Для образования тромбина использовали тест в плазме, обогащенной тромбоцитами.
Комбинированное введение клопидогреля и аспирина® приводило к тромбоцитопатии с нарушенной агрегацией тромбоцитов и образованием тромбина. После ранения селезенки тромбоцитопатией вызывалось существенное кровотечение. Наоборот, на плазматическую коагуляцию (ПВ, АЧТВ) не влияло лечение клопидогрелем/ацетилсалициловой кислотой. На фиг. 6 показано, что не наблюдали существенного снижения количества тромбоцитов после введения клопидогреля/аспирина®, следовательно, не была индуцирована тромбоцитопения.
В таблицах 4 и 5, а также на фиг. 4 и 5 может быть видно, что в настоящем исследовании лечение Haemate® P существенно снижало кровопотерю. Следовательно, было показано, что концентрат, содержащий сочетание vWF и фактора VIII, был способен частично преодолевать тромбоцитопатию, индуцированную ингибитором тромбоцитов.
| Таблица 4 | |||
| Кровопотеря (мл) после повреждения селезенки | |||
| Группа 1 отрицательный контроль | Группа 2 Группа плацебо (плавикс/ аспирин+солевой раствор) |
Группа 3 Группа лечения (плавикс/ аспирин+Haemate® P |
|
| N | 5 | 4 | 6 |
| Среднее | 83,2 | 811,3 | 387,7 |
| SD | 71,0 | 148,5 | 233,9 |
| Минимум | 19 | 616 | 50 |
| медиана | 40 | 827,5 | 440 |
| Максимум | 178 | 974 | 670 |
| Таблица 5 | |
| Статистика кровопотери (критерий Вилкоксона) | |
| Сравнение | Значение р |
| Отрицательный контроль (группа 1)-Группа плацебо (группа 2) | 0,0143 |
| Отрицательный контроль (группа 1)-Группа лечения (группа 3) | 0,0285 |
| Группа плацебо (группа 2)-Группа лечения (группа 3) | 0,0190 |
1. Применение фактора фон Виллебранда (vWF) в комбинации с фактором VIII в виде комбинации фактор VIII/фактор фон Виллебранда (FVIII/vWF) для лечения и/или профилактики эпизода кровотечения, ассоциированного с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, где веществом, ингибирующим тромбоциты, является ингибитор рецептора АДФ или комбинация из ингибитора рецептора АДФ и ингибитора циклооксигеназы.
2. Применение по п. 1, где FVIII/vWF вводят для действия в качестве антидота.
3. Применение по п. 1, где FVIII/vWF используют или вводят в виде концентрата.
4. Применение по п. 1, где FVIII/vWF выделяют из плазмы человеческой крови.
5. Применение по п. 1, где FVIII/vWF вводят в виде рекомбинантного белка.
6. Применение по п. 1, где FVIII/vWF вводят пациенту в дозе 5-400 единиц FVIII и 10-1000 единиц vWF на кг массы тела.
7. Применение по п. 6, где FVIII/vWF вводят пациенту в дозе 20-200 единиц FVIII и 30-500 единиц vWF на кг массы тела.
8. Применение по п. 1, где ингибитором циклооксигеназы является ацетилсалициловая кислота и где ингибитором рецептора АДФ является производное тиенопиридина, предпочтительно клопидогрель или тиклопидин.
9. Фармацевтическая композиция, включающая фармацевтически эффективное количество vWF и FVIII для лечения и/или профилактики эпизода кровотечения, ассоциированного с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, где веществом, ингибирующим тромбоциты, является ингибитор рецептора АДФ или комбинация из ингибитора рецептора АДФ и ингибитора циклооксигеназы.
10. Комбинация, включающая фармацевтически эффективное количество vWF и фактора VIII для лечения и/или профилактики эпизода кровотечения, ассоциированного с тромбопатией, индуцированной ингибитором рецептора АДФ или комбинацией из ингибитора рецептора АДФ и ингибитора циклооксигеназы.
11. Способ лечения и/или профилактики эпизода кровотечения, ассоциированного с тромбопатией, индуцированной веществами, ингибирующими тромбоциты, где веществом, ингибирующим тромбоциты, является ингибитор рецептора АДФ или комбинация из ингибитора рецептора АДФ и ингибитора циклооксигеназы, где способ включает введение фармацевтически эффективного количества фактора фон Виллебранда (vWF) в комбинации с фактором VIII.
12. Способ по п. 11, где введение осуществляют одновременно, раздельно или последовательно.
13. Способ по п. 11, где FVIII/vWF вводят для действия в качестве антидота.
14. Способ по п. 11, где FVIII/vWF используют или вводят в виде концентрата.
15. Способ по п. 11, где FVIII/vWF выделяют из плазмы человеческой крови.
16. Способ по п. 11, где FVIII и/или vWF вводят в виде рекомбинантного белка.
17. Способ по п. 11, где FVIII/vWF вводят пациенту в дозе 5-4 00 единиц FVIII и 10-1000 единиц vWF на кг массы тела.
18. Способ по п. 17, где FVIII/vWF вводят пациенту в дозе 20-200 единиц FVIII и 30-500 единиц vWF на кг массы тела.
19. Способ по п. 11, где ингибитором циклооксигеназы является ацетилсалициловая кислота и где ингибитором рецептора АДФ является производное тиенопиридина, предпочтительно клопидогрель или тиклопидин.
