Способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы, фармацевтическая композиция, полученная с помощью этого способа


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2564912:

Р-ТЕК УЕНО, ЛТД. (JP)

Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени, который включает приготовление кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы путем абразии эпителия роговицы и конъюнктивы инстилляцией раствора n-гептанола в глаз кролика; и введение испытуемого агента в глаз кролика модели и оценку эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента, в котором наносимый объем раствора n-гептанола составляет всего от 0,03 до 0,05 мл, который капают 2-4 раза, и в котором кролика заставляют моргать 2-4 раза, в котором стадия приготовления дополнительно включает принуждение кролика к закрытию глаза на период от около 1 до около 3 минут после инстилляции раствора n-гептанола в глаз. 3 н. и 5 з.п. ф-лы, 7 табл., 3 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

В данном изобретении предлагается способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести в соответствии с материалами международного симпозиума «Dry Eye Work Shop» (DEWSReport2007), и фармацевтическая композиция, содержащая данный агент. В изобретении предлагается также способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й степени и более тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport(2007), c помощью данного агента.

Уровень техники

DEWSReport (2007) - это обзор знаний, накопленных к настоящему времени по синдрому сухого глаза 70 международными экспертами по синдрому сухого глаза; подкомитеты DEWS дают подробную информацию по синдрому сухого глаза включая определение и классификацию, эпидемиологию, диагностику и мониторинг, уход за больными и лечение. Обзор опубликован в «The Ocular Surface (April 2007, Vol 5, No 2 pp.65-204)» (источник 1 в непатентной литературе, включенный в настоящее изобретение путем ссылки) и с ним можно ознакомиться на сайте .

В DEWSReport (2007) дается следующее определение синдрома сухого глаза (см. «The Definitionand Classificationof Dry Eye Disease» (c. 75-92)): «Синдром сухого глаза представляет собой многофакторное нарушение образования слезной жидкости и поражение поверхности глаза, которые вызывают неприятные ощущения, нарушение зрения и нестабильность слезной пленки, чреватой повреждением поверхности глаза. Эти изменения сопровождаются повышенной осмолярностью слезной пленки и воспалением поверхности глаза».

В связи с тем что синдром сухого глаза является многофакторным расстройством, как было сказано в приведенном выше определении, лечение его зависит от состояния глаза и симптомов. В DEWSReport (2007) приведена классификация, согласно которой выделяют четыре степени тяжести синдрома сухого глаза (см. «Management and Therapy of Dry Eye Disease» (c. 163-178) и таблицу 2 (с.173)), и даны рекомендации по лечению при каждой степени тяжести данного синдрома (см. «Management and Therapy of Dry Eye Disease» и таблицу 4 (с.174)).

В DEWSReport (2007) названо несколько агентов, рекомендуемых для лечения синдрома сухого глаза 1-й и 2-й степени тяжести. Однако для лечения синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести, особенно при поражении поверхности глаза, в частности роговицы и конъюнктивы, какие-либо агенты, помимо сыворотки, нерекомендованы. Кроме того, сыворотку надо получать из крови самого больного (то есть сыворотка аутологичная) и при применении разбавлять соответствующим образом. В настоящее время, согласно DEWSReport (2007), по существу нет эффективного агента для лечения синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести. Поэтому потребовалось создание модели синдрома сухого глаза на животных, соответствующей классификации DEWSReport (2007), в частности синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести, а именно синдрома сухого глаза с поражением поверхности глаза, в частности роговицы и конъюнктивы. При использовании модели, разработанной на животных для скрининга лекарств, понадобилось фармацевтическая композиция, пригодная для лечения синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2207), а именно синдрома сухого глаза с поражением поверхности глаза, в частности роговицы и конъюнктивы.

Ссылки на прототипы

(Непатентная литература) The Ocular Surface (April 2007, Vol 5, No 2pp. 65-204)

Раскрытие изобретения

Задача, которую призвано решить данное изобретение

Задача настоящего изобретения состоит в том, чтобы предоставить способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации DEWSReport (2007). Задачей настоящего изобретения также является получение фармацевтической композиции для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы, как было определено выше.

Средства решения задачи

В данной заявке предлагаются следующие изобретения:

(1) Способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007); который включает:

получение модели поражения роговицы и конъюнктивы у кролика, у которого вызывают повреждение эпителия роговицы и конъюнктивы путем инсталляции раствора n-гептанола в глаз кролика; и закапывание тестового агента в глаз кролика, на котором получена модель, для оценки эффекта восстановления ткани роговицы под влиянием данного агента.

(2) Фармацевтическая композиция для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007), содержащая агент, полученный способом (1).

(3) Фармацевтическая композиция (2), в которой агентом является человеческий альбумин.

(4) Фармацевтическая композиция для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007), содержащая в качестве активного агента человеческий альбумин.

(5) Фармацевтическая композиция (4), в которой человеческий альбумин - это человеческий сывороточный альбумин.

(6) Способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы, который состоит во введении эффективного количества агента, полученного способом (1), больному с синдромом сухого глаза и/или поражением конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

(7) Способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражение роговицы и конъюнктивы, который включает в себя закапывание эффективного количества человеческого альбумина больному с синдромом сухого глаза и/или поражением роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

(8) Применение агента, полученного способом (1), для производства фармацевтической композиции для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

(9) Применение человеческого альбумина для производства фармацевтической композиции для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

Эффект изобретения

В данной заявке предлагается способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007). Агент, который при скрининге способом по изобретению проявил свойство восстанавливать ткань роговицы, пригоден для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007). Далее, в данной заявке предлагается способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007), используя данный агент.

Описание вариантов осуществления изобретения

В DEWSReport (2007) синдром сухого глаза по степени тяжести классифицируют следующим образом (см. «Management and Treatment of Dry Eye Disease» (c. 163-178) и таблица 2 (с.173)).

Таблица 1
Схема градации синдрома сухого глаза по степени тяжести
Степень тяжести синдрома сухого глаза 1-я 2-я 3-я 4-я
Неприятные ощущения в глазу, степень выраженности их и частота появления Незначительные и/или эпизодически появляются под воздействием неблагоприятных факторов окружающей среды Умеренные эпизодические или хронические; появляются спонтанно или под действием неблагоприятных факторов Выраженные, частые или постоянные, появляются спонтанно Выраженные и/или ограничивают активность больного и постоянные
Нарушение зрения Отсутствует или эпизодически появляется легкое утомление зрения Отсутствует или эпизодически появляется легкое утомление зрения Мешает больному, хроническое и/или постоянное и ограничивает активность Постоянно и/или ограничивает активность больного
Инъекция сосудов конъюнктивы Отсутствует или незначительная Отсутствует или незначительная +/- +/++
Окрашивание конъюнктивы Отсутствует или незначительное Варьируется От умеренной до значительной Выраженное
Окрашивание роговицы (интенсивность/ локализация) Отсутствует или незначительное Варьируется Выраженное, центральное Многочисленные точечные эрозии
Изменение в роговице, повреждение Отсутствует или незначительное Незначительное количество детрита, высота слезного мениска↓ Нитчатый кератит, глыбки слизи, детрит ↑ Нитчатый кератит, глыбки слизи, детрит ↑, изъязвление
Степень тяжести синдрома сухого глаза 1-я 2-я 3-я 4-я
Веки/мейбомиевы железы Выраженная в той или иной степени дисфункция мейбомиевых желез Выраженная в той или иной степени дисфункция мейбомиевых желез Часто выраженная дисфункция мейбомиевых желез Трихиаз, кератинизация, симблефарон
Время разрыва слезной пленки (с) Результат вариабельный ≤10 ≤5 Разрывает сразу
Проба Ширмера (мм/5 мин) Результат вариабельный ≤10 ≤5 ≤2

Понятие «синдром сухого глаза и/или поражение роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007)», используемое в описании данного изобретения, относится к синдрому сухого глаза, который соответствует 3-й и более степени тяжести по приведенной выше классификации, и/или поражению роговицы и конъюнктивы, проявляющемуся любым из субъективных или объективных признаков синдрома сухого глаза.

Слово «около» в данном описании при использовании с числом означает +/- 30% и +/-20% и предпочтительно +/- 10%.

Модель поражения роговицы и конъюнктивы, использованную в данном способе скрининга, создают путем инсталляции раствора n-гептанола в глаз кролика. Обычно для создания такой модели кролику внутримышечно вводят общий анестетик, затем в глаз закапывают местный анестетик, после чего в один глаз инсталлируют раствор n-гептанола, с тем чтобы этот раствор распространился по роговице и бульбарной конъюнктиве, и вызывают у кролика мигательный рефлекс.

В описанных здесь экспериментах использованы кролики породы новозеландский белый, японский белый, голландский, но могут быть использованы и кролики других пород, однако предпочтительны новозеландские белые кролики. Для общей анестезии внутримышечно вводился кетамин, ксилазин имедетомидин, но предпочтительно использовать сочетание кетамина и ксилазина. В качестве местного анестетика для закапывания в глаз можно использовать оксибупрокаин, лидокаин и бупивакаин, но предпочтительно использовать оксибупрокаин.

Раствор n-гептанола, который инсталлировали в глаз, состоит только из n-гептанола или смеси n-гептанола и этанола. Предпочтительна смесь n-гептанола и этанола, так как она обладает более высокой гидрофильностью и может легко проникать через поверхность глаза, вызывая эффективное ее поражение. Соотношение n-гептанола и этанола в смеси составляет от около 9:1 до около 7:3, предпочтительно около 8:2. Объем закапываемого n-гептанола составляет от около 0,01 до около 0,1 мл, предпочтительно от около 0,03 до около 0,05 мл, и его предпочтительно инсталлировать дробно (2-4 раза), чтобы раствор n-гептанола эффективно распространился по роговице и бульбарной конъюнктиве.

После инстилляции раствора n-гептанола в глаз веки несколько раз вызывают мигательный рефлекс (1-5 раз, предпочтительно 2-4 раза) и закрывают глаз на несколько минут (от около 0,5 до около 5 мин, предпочтительно от около 1 до около 3 мин). В результате происходит абразия эпителия роговицы и конъюнктивы. По предложенному способу можно получить стабильную модель поражения роговицы и конъюнктивы.

Оценивая влияние испытуемого агента на восстановление ткани роговицы на предложенной модели поражения роговицы и конъюнктивы у кролика, можно осуществить скрининг агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, описанной в DEWSReport (2007).

В предложенном способе скрининга частота закапывания испытуемого агента обычно составляет 1-6 раз в день, но необязательно ограничивается этим диапазоном. Для оценки эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента предпочтительно, чтобы частота его закапывания в глаз была низкой, предпочтительно два раза в день. Длительность применения испытуемого агента варьируется в зависимости от ряда факторов, таких как частота закапывания и порода, к которой принадлежит подопытный кролик. Обычно эффект испытуемого агента можно определить в течение 10 дней после начала закапывания его в глаз.

Обычно эффект восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента можно оценить следующим образом. Отмечают состояние роговицы и конъюнктивы путем окрашивания глаза красителем до и после инстилляции раствора n-гептанола; ежедневно перед первым закапыванием испытуемого агента; после второго закапывания испытуемого агента на 4-й, 5-й и 6-й день; и через день после последнего закапывания испытуемого агента. Красители для оценки состояния роговицы и конъюнктивы включают флуоресцеин, бенгальский розовый и лиссаминовый зеленый, из которых предпочтителен флуоресцеин. Степень поражения роговицы оценивают по фотографиям окрашенной роговицы. Чем интенсивнее окрашивание, тем больше степень поражения и чем менее интенсивно окрашивание, тем меньше поражение. Для оценки можно использовать любой из обычных способов. Например, роговицу делят условно на 5 участков (центральный, верхний, височный, назальный и нижний). Оценка каждого из участков осуществляется по трехбалльной системе, а всей роговицы в целом - по 15-балльной. Отсутствие окрашивания оценивают в 0 баллов, частичное окрашивание - 1 балл, окрашивание около двух третей участка - 2 балла, и окрашивание всего участка - 3 балла.

В данном изобретении эффект восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента считается значимым, если имеется достоверная разница между количеством баллов, соответствующим степени поражения роговицы после закапывания испытуемого агента, и количеством баллов после закапывания физиологического раствора в каждом из наблюдений и уровень значимости меньше 5%. Достоверность разницы можно определить каким-либо из способов, например с помощью парного t-критерия Стьюдента.

Для каждого из агентов, рекомендованных для лечения синдрома сухого глаза 1-й, 2-й или 3-й степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007), эффект восстановления ткани роговицы был подтвержден на предложенной кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы по изобретению. Агенты, рекомендованные в DEWSReport (2007) для лечения синдрома сухого глаза 1-й и 2-й степени тяжести, не оказывают существенного восстановительного эффекта на ткань роговицы. Это, в частности, композиция, содержащая вязкий компонент (0,3% глазной раствор Hyalein®Mini:Santen Pharmaceutical (Япония): разрешен для применения в Японии) или композиция, содержащая электролит (Cationorm®: Novagali Pharma (France): разрешена для применения в странах Европейского союза для лечения синдрома сухого глаза 1-й степени тяжести), и композиция, содержащая противовоспалительный агент (Restasis®: Allergan (США): разрешена в США для лечения синдрома сухого глаза 2-й степени тяжести). А вот сыворотка, которая рекомендуется для лечения синдрома сухого глаза 3-й степени тяжести (человеческая сыворотка: Kohjin Bio (Япония)), оказывает значительный восстановительный эффект на ткань роговицы. Способ по изобретению, предложенный для оценки эффекта восстановления ткани роговицы при использовании кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы, считается применимым для скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

Далее, с помощью предлагаемого способа скрининга было выявлено, что альбумин человеческой сыворотки оказывает достоверный восстанавливающий эффект на ткань роговицы, на предлагаемой кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы по изобретению, причем этот эффект сравним с эффектом, оказываемым агентом (сывороткой), который рекомендован в DEWSReport (2007) для лечения синдрома сухого глаза 3-й степени тяжести. Следовательно, человеческий альбумин применим для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

В изобретении предлагается, чтобы человеческий альбумин был предпочтительно сывороточным альбумином. Может быть использован любой человеческий сывороточный альбумин при условии, что его чистота позволяет его применять в обычной медицинской практике. В частности, предпочтительно, чтобы он содержал 80% и более альбумина при определении с помощью электрофореза. Кроме того, предпочтительно, чтобы он был термообработанным для инактивации вирусов или других инфекционных агентов. В частности, предпочтителен поступающий в продажу в качестве препарата человеческий сывороточный альбумин. В изобретении предлагается предпочтительно использовать также рекомбинантные человеческие сывороточные альбумины, продуцируемые микроорганизмами. Способы получения рекомбинантных человеческих сывороточных альбуминов с помощью генно-инженерной технологии хорошо известны. Например, готовят вектор, содержащий ген, который кодирует человеческий сывороточный альбумин, и внедряют его в клетку-хозяина, вызывая их трансформацию. Затем трансформированные клетки, продуцирующие человеческий сывороточный альбумин, подвергают селекции и культивируют. Из культивируемых клеток или их культуральной жидкости изолируют человеческий сывороточный альбумин и очищают его. В качестве клетки-хозяина могут быть микроорганизмы, широко используемые в качестве продуцента белка, например дрожжи и Е. coli. Примером дрожжей могут быть представители родов Kluyveromyces, Saccharomyces и Pichia и, в частности, предпочтительно виды Kluyveromyceslactis, Saccharomycescerevisiae и Pichiapastoris. Предпочтительно также использовать штамм Kluyveromyceslactis CBS2360, штамм Saccharomycescerevisiae АН22 (a, his 4, leu 2, can 1) и штамм Pichiapasroris GTS 115 (his 4) в качестве дрожжевой клетки-хозяина.

Под «лечением» здесь понимается всякое средство, позволяющее контролировать состояние, в том числе профилактическое, исцеляющее или облегчающее состояние, а под «обработкой» - средства и действия облегчения развития состояния.

Фармацевтическую композицию по изобретению можно применять местно в любой дозировке. Особенно предпочтительно применять в виде глазных растворов или капель.

В тех случаях, когда предлагаемая композиция готовится в виде глазного раствора, содержащего в качестве активного агента человеческий альбумин, композиция может содержать человеческий альбумин в количестве около 1-1000 мг/мл (0,1-100 мас./об.%), более предпочтительно от около 10 до 1000 мг/мл (1-100 мас./об.%), особенно от около 10 до 250 мг/мл (1-25 мас./об.%). Композиция может также содержать фармацевтически приемлемый растворитель.

«Фармацевтически приемлемым растворителем» может быть любой растворитель, который используют для глазных композиций, известных специалистам, например вода, физиологический раствор, искусственная слезная жидкость и т.п. Фармацевтическая композиция по изобретению может содержать различные компоненты, которые обычно используются в глазных композициях, такие как стабилизаторы, стерилизующие и буферные вещества, изотонические агенты, хелатообразующие агенты, регуляторы рН, сурфактанты и т.п. Когда композиция готовится в виде глазного раствора или глазных капель, предпочтительно, чтобы ее рН был от 5 до 8.

Фармацевтическую композицию по изобретению можно вводить в количестве от около 1 до около 100 мкл/глаз, предпочтительно от около 10 до около 50 мкл/глаз, более предпочтительно от около 30 до 50 мкл/глаз при одном закапывании.

В другом варианте настоящего изобретения предлагается использовать человеческий альбумин для производства фармацевтической композиции для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007).

В другом варианте настоящего изобретения предлагается способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й или более степени тяжести по классификации, приведенной в DEWSReport (2007), который состоит во введении индивидууму, который в этом нуждается, эффективного количества человеческого альбумина.

При указанных способах по изобретению «эффективное количество» человеческого альбумина - это количество, необходимое для достижения желаемого лечебного эффекта и оптимально подбираемое с учетом симптомов больного, его возраста, пола, массы тела, диеты, других принимаемых препаратов и других факторов, известных специалистам в области медицины. Эффективное количество зависит также, помимо других факторов, от активности человеческого альбумина. При предложенных способах по изобретению фармацевтическую композицию можно вводить в количестве от около 1 до около 100 мкл/глаз, предпочтительно от около 10 до около 50 мкл/глаз, более предпочтительно около 30-50 мкл/глаз, от около 1 до около 20 раз в день и более, предпочтительно от 1 до 10 раз в день, но объем изобретения допускает и иное количество раз.

Фармацевтическую композицию по изобретению можно применять и в сочетании с другим фармацевтически активным соединением, если оно не влияет на эффект композиции по изобретению. Термин «сочетанное применение» может включать введение других фармацевтически активных соединений до введения фармацевтической композиции по изобретению, одновременно с ней или после ее введения. При одновременном введении фармацевтически активных соединений и фармацевтической композиции по изобретению композиция по изобретению и другие активные соединения можно готовить вместе в одной дозе и в виде отдельных доз. Например, искусственная слезная жидкость, полисахаридсульфат, каковым являются гиалуроновая кислота и хондроитинсульфат, циклоспорин, глутатион, натриевая соль флавинадениннуклеотида, кортикостероиды тетрациклин, витамин А (ретинол) и его производные, например сложные эфиры витамина А включая ретинола пальмитат и ретинола ацетат и факторы роста клеток, такие как фактор роста гепатоцитов (HGF), эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор роста нервов (NGF), фактор роста тромбоцитов (PDGF), трансформирующий фактор роста (TGF-a и TGF-p) и фактор роста кератиноцитов (KGF) можно применять в сочетании с фармацевтической композицией по изобретению.

Дальнейшие пояснения настоящего изобретения дают приведенные далее примеры. Эти примеры никак неограничивают объем данной заявки.

Примеры

Пример 1

Приготовление модели поражения роговицы и конъюнктивы

Кроликам (std:NZW) внутримышечно вводили общий анестетик кетамин (10 мг/кг) и ксилазин (4 мг/кг) и затем в глаз закапывали 0,4% раствор оксибупрокаина (2 капли на глаз). Кроликов удерживали в лежачем положении и инсталлировали в один глаз 0,04 мл (0,01 мл 4 раза) раствор n-гептанола с этанолом в соотношении 8:2, приготовляемый непосредственно перед использованием, так, чтобы раствор распространился по роговице и бульбарной конъюнктиве. Затем трижды вызывали у кролика мигательный рефлекс и после последнего мигания закрывали глаз на 2 мин. Такой процедуре подвергали оба глаза. Таким образом готовили модель повреждения роговицы и конъюнктивы.

Введение испытуемого агента

Начиная со дня приготовления модели поражения роговицы и конъюнктивы, в глаз закапывали сыворотку или 0,3% гиалуронат натрия по 2 раза в день в течение 10 дней. В здоровый глаз таким же образом закапывали физиологический раствор. Количество закапываемого раствора во всех случаях составляло 50 мкл/глаз за 1 раз.

Для использования сыворотки человеческую сыворотку (Kohjin Bio (Япония)) стерилизовали путем фильтрации (фильтры Millex GV, PVDF, 0,22 µm, Millipore) и разбавляли в соотношении 1:5 физиологическим раствором по способу, известному при приготовлении глазного раствора аутологичной сыворотки, применяемой при лечении синдрома сухого глаза.

0,3% раствор гиалуроната натрия представлял собой 0,3% глазной раствор Hyalein®mini (Santen Pharmaceutical (Япония)).

Опытные группы

Таблица 2
Группа Испытуемый агент Число глаз (число случаев)
1 Сыворотка 6 глаз (6 животных)
2 0,3% гиалуронат натрия 6 глаз (6 животных)

Включение кроликов в опытные группы осуществлялся рандомизированно по массе тела.

Оценка поражения роговицы

Состояние роговицы и конъюнктивы оценивали до закапывания раствора n-гептанола (за день до закапывания испытуемого агента), сразу после закапывания раствора n-гептанола, ежедневно перед первым закапыванием испытуемого агента, после второго закапывания испытуемого агента на 4-й, 5-й и 6-й день и через день после последнего закапывания испытуемого агента.

Два микролитра 1% раствора флуоресцеина инсталлировали в глаза. Через 2 мин фотографировали окрашиваемые роговицу и конъюнктиву и изучали фотографии под цифровым микроскопом (VHX-900, Keyence Corporation (Япония)) с кобальтовым синим фильтром (FUJIFILTERBPB45), насаженным в область эмиссии света, и желтым фильтром (FUJIFILTERSC52), насаженным на переднюю линзу, и оценивали степень окрашивания роговицы. Для оценки каждую роговицу условно делили на 5 участков (центральный, верхний, височный, назальный и нижний). Степень окрашивания каждого из участков оценивали по трехбалльной шкале, степень окрашивания всей роговицы - по 15-балльной. Отсутствие окрашивания оценивали в 0 баллов, частичное окрашивание - 1 балл, окрашивание около двух третей участка - 2 балла и окрашивание всего участка - 3 балла.

1% раствор флуоресцеина готовили путем растворения натриевой соли флуоресцеина в физиологическом растворе.

Результат

Оценки степени окрашивания роговицы после обработки глаза раствором n-гептанола приведены в таблице 3. У всех животных оценка окрашивания роговицы флуоресцеином до обработки раствором n-гептанола составила 0 баллов.

Как показано в таблице 3, в глазах, в которые закапывали сыворотку, на 4-й день лечения был отмечен значимый эффект восстановления эпителия роговицы (Р<0,05).

Однако восстановления эпителия роговицы при закапывании 0,3% раствора гиалуроната натрия не отмечено.

Таблица 3
Оценка степени окрашивания роговицы кролика в баллах при поражении роговицы и конъюнктивы, вызванном обработкой раствором n-гептанола, после многократного закапывания сыворотки или 0,03% раствора гиалуроната натрия в один глаз и физиологического раствора в другой глаз по 2 раза в день в течение 10 дней
Опытная группа Оценка степени окрашивания флуоресцеином в баллах (среднее арифметическое и стандартное отклонение по 6 случаям)
Дни 0 1 2 3 3,5 4 5 5,5 6 7 8 9 10
1 Сыворотка Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,17 13,33* 10,00 8,67 6,33 5,17 3,50 2,17 1,50
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,48 0,76 1,00 0,85 0,88 1,01 1,18 0,87 0,43
Физиол. раствор Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,83 14,67 11,00 9,17 7,50 5,83 4,50 2,50 1,83
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,17 0,33 1,13 1,05 0,89 0,87 0,56 0,62 0,40
2 0,3% р-р гиалуроната натрия Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,67 14,17 10,17 7,50 6,83 4,50 2,50 2,00 1,33
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,21 0,48 1,25 1,23 1,08 0,89 0,56 0,86 0,85
Физиол. раствор Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 15,00 13,83 11,17 7,67 6,33 4,67 2,83 1,33 1,17
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,54 0,70 0,92 0,71 0,85 0,17 0,42 0,40

День 0: день обработки роговицы и конъюнктивы раствором n-гептанола (день начала закапывания испытуемого агента)

Каждую роговицу условно делили на 5 участков, степень окрашивания каждого из участков оценивали по трехбалльной шкале, а степень окрашивания роговицы в целом - по 15-балльной.

Чем меньше оценка, тем больше степень восстановления эпителия роговицы.

*, **: Парный t-критерий Стьюдента, р<0,05 (*), 0,01 (**).

Пример 2

Приготовление модели поражения роговицы и конъюнктивы, введение испытуемого агента и оценку степени поражения роговицы осуществляли так, как описано в тестовом примере 1.

Испытуемый агент представлял собой 0,05% композицию циклоспорина или катионную эмульсию. В качестве 0,05% композиции циклоспорина использовали Restasis® (Allergan, Inc (US)). В качестве катионной эмульсии использован Cationorm® (Novagali Pharma SA (Франция)).

Опытные группы

Таблица 4
Группа Испытуемый агент Число глаз (число случаев)
1 0,05% циклоспорин 6 глаз (6 животных)
2 Катионная эмульсия 6 глаз (6 животных)

Включение кроликов в опытные группы осуществлялся рандомизированно по массе тела.

Результаты

Оценка степени окрашивания роговицы после обработки глаза раствором n-гептанола показана в таблице 5. У всех животных до обработки глаза раствором n-гептанола степень окрашивания роговицы составила 0 баллов.

Как видно из таблицы 5, закапывание 0,05% раствора циклоспорина и катионной эмульсии не вызывало восстановления эпителия роговицы.

Результаты примеров 1 и 2 подтвердили, что на кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы по изобретению агент, рекомендуемый в DEWSReport (2007) для лечения синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести, оказывает достоверный восстанавливающий эффект на ткань роговицы, в то время как агенты, рекомендуемые в DEWSReport (2007) для лечения синдрома сухого глаза 1-й и 2-й степени тяжести, на эту же модель такого эффекта не оказывают. Следовательно, кролика, на котором разработана модель поражения роговицы и конъюнктивы по изобретению, можно считать пригодным в качестве животного для моделирования поражений роговицы и конъюнктивы в соответствии с классификацией, приведенной в DEWSReport (2007), в частности синдрома сухого глаза 3-й и более степени тяжести, особенно поражения поверхности глаза - роговицы и конъюнктивы.

Таблица 5
Оценка степени окрашивания роговицы кролика в баллах при поражении роговицы и конъюнктивы, вызванном обработкой раствором n-гептанола, после многократного закапывания 0,05% композиции циклоспорина или катионной эмульсии в один глаз, физиологического раствора в другой глаз по 2 раза в день в течение 10 дней
Опытная группа Оценка степени окрашивания флуоресцеином в баллах (среднее арифметическое и стандартное отклонение по 6 случаям)
День 0 1 2 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 7 8 9 10
1 0,05% циклоспорин Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,50 13,17 11,67 10,17 9,17 7,17 5,67 5,00 3,33 3,67
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,22 0,70 1,05 0,98 0,83 0,87 0,76 0,86 1,02 0,92
Физиол. раствор Среднее 15,00 15,00 14,83 14,50 14,33 13,50 12,00 9,83 8,50 7,00 3,83 3,00 1,83 1,67
SE 0,00 0,00 0,17 0,50 0,49 0,96 1,07 1,35 1,43 1,55 0,98 1,34 1,11 0,62
2 Катионная эмульсия Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,50 14,17 12,67 10,17 9,33 7,50 5,33 4,33 2,33 2,67
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,34 0,40 0,96 1,35 1,11 0,99 1,23 1,14 1,11 1,31
Физиол. раствор Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 15,00 14,50 13,50 11,00 9,67 8,67 5,50 4,17 2,50 2,17
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,34 0,56 1,07 1,11 1,54 1,41 1,45 1,36 1,28

День 0: день обработки глаза n-гептанолом (день начала закапывания испытуемого агента)

Каждую роговицу условно делили на 5 участков и оценивали степень окрашивания каждого из участков по трехбалльной шкале и роговицы в целом - по 15-балльной шкале.

Чем ниже оценка в баллах, тем более выражен эффект восстановления эпителия роговицы.

Пример 3

Приготовление модели поражения роговицы и конъюнктивы, введение испытуемого агента и оценку степени поражения роговицы осуществляли так, как описано в тестовом примере 1.

Испытуемым агентом был 10% nHSA.

Для использования 10% nHSA альбумин-WF Кенкецу (25% композиция человеческого сывороточного альбумина, Mitsubishi Tanabe Pharma) разбавляли раствором хлорида натрия таким образом, чтобы осмотическое давление полученного раствора было почти равным осмотическому давлению физиологического раствора.

Опытные группы

Таблица 6
Группа Испытуемый агент Число глаз (число случаев)
1 10% nHSA 6 глаз (6 животных)

Результат

Оценка степени окрашивания роговицы флуоресцеином после обработки глаз раствором n-гептанола приведена в таблице 7. Во всех случаях степень окрашивания роговицы перед обработкой глаз раствором n-гептанола составила 0 баллов.

Как видно из таблицы 7, оценка степени окрашивания роговицы флуоресцеином при лечении 10% nHSA была достоверно ниже по сравнению с оценкой, соответствующей случаям, когда закапывали физиологический раствор (на 4-й, 4,5-й, 5-й, 5,5-й, 6-й и 10-й дни лечения), что указывает на восстановление эпителия роговицы под действием 10% nHSA (на 4-й, 5-й, 5,5-й, 6-й и 10-й дни: р<0,05; на 4,5-й день р<0,01).

Приведенные выше результаты говорят о том, что человеческий сывороточный альбумин оказывает восстанавливающий эффект на ткань роговицы, равный или превышающий эффект, оказываемый сывороткой, которую в DEWSReport (2007) рекомендуют применять для лечения синдрома сухого глаза 3-й степени тяжести (пример 1).

Таблица 7
Оценка степени окрашивания флуоресцеином роговицы кролика в баллах при поражении роговицы и конъюнктивы, вызванном обработкой глаза n-гептанолом, после многократного закапывания 10% nHSA в один глаз и физиологического раствора в другой по 2 раза в день в течение 10 дней
Опытная группа Оценка степени окрашивания флуоресцеином в баллах (среднее арифметическое и стандартное отклонение по 6 случаям)
День 0 1 2 3 3,5 4 4,5 5 5,5 6 7 8 9 10
1 10% nHSA Среднее 15,00 15,00 15,00 14,83 13,83 12,83* 11,00** 7,17* 6,17* 4,83* 3,17 1,83 1,50 1,50*
SE 0,00 0,00 0,00 0,17 0,54 0,70 1,03 0,83 0,95 0,48 0,87 0,48 0,43 0,50
Физиол. раствор Среднее 15,00 15,00 15,00 15,00 14,67 14,33 13,17 10,50 8,67 6,67 4,50 2,83 2,00 2,50
SE 0,00 0,00 0,00 0,00 0,33 0,49 0,95 1,20 1,36 0,80 0,85 0,79 0,51 0,43

День 0: день обработки глаза раствором n-гептанола (день закапывания испытуемых агентов)

Каждую роговицу условно делили на пять участков, степень окрашивания каждого из участков оценивали по трехбалльной школе, а роговицы в целом - по 15-балльной.

Чем ниже оценка в баллах, тем более выраженным был восстанавливающий эффект.

1. Способ скрининга агента, пригодного для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени, который включает приготовление кроличьей модели поражения роговицы и конъюнктивы путем абразии эпителия роговицы и конъюнктивы инстилляцией раствора n-гептанола в глаз кролика; и введение испытуемого агента в глаз кролика модели и оценку эффекта восстановления ткани роговицы под действием испытуемого агента, в котором наносимый объем раствора n-гептанола составляет всего от 0,03 до 0,05 мл, который капают 2-4 раза, и в котором кролика заставляют моргать 2-4 раза, в котором стадия приготовления дополнительно включает принуждение кролика к закрытию глаза на период от около 1 до около 3 минут после инстилляции раствора n-гептанола в глаз.

2. Способ по п. 1, в котором раствор n-гептанола является смесью n-гептанола и этанола.

3. Способ по п. 2, в котором n-гептанол и этанол находятся в соотношении n-гептанол:этанол от 9:1 до 7:3.

4. Способ по п. 3, в котором указанное соотношение составляет 8:2.

5. Способ по п. 1, в котором испытуемый агент вводят в глаз кролика модели дважды в день, и состояния роговицы и конъюктивы наблюдают окрашиванием глаза красителем перед и после инстилляции раствора n-гептанола; перед первым введением испытуемого агента в каждый день; после второго введения испытуемого агента каждые из дней 3, 4 и 5; и через один день после последнего введения испытуемого агента, где днем 0 является день обработки n-гексанолом и день начала введения испытуемого агента.

6. Способ по п. 5, в котором красителем является флуоресцеин.

7. Способ лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы, включающий введение эффективного количества агента, выбранного способом по любому из пп. 1-6, больному с синдромом сухого глаза и/или поражением роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени.

8. Применение агента, выбранного способом по любому из пп. 1-6, для производства фармацевтической композиции для лечения синдрома сухого глаза и/или поражения роговицы и конъюнктивы при синдроме сухого глаза 3-й и более степени.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ качественного определения адаптационной способности к мостовидным конструкциям ортопедических протезов по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области, причем, если определяют содержание в ротовой жидкости тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (ТИМП 1) в количестве 118,9-145,7 нг/мл и тканевого ингибитора металлопротеиназы 2 (ТИМП 2) в количестве 42,4-56,9 нг/мл, то диагностируют низкую адаптационную способность пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов, а если определяют содержание в ротовой жидкости пациента ТИМП 1 в количестве 68,2-77,4 нг/мл и ТИМП 2 в количестве 21,9-37,7 нг/мл, то диагностируют полную функциональную адаптацию пациента с новообразованиями челюстно-лицевой области к мостовидным конструкциям ортопедических протезов.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ диагностики наличия гломерулонефрита у кошки предусматривает измерение уровня экспрессии одного или нескольких биомаркеров, выбранных из группы, состоящей из люмикана; цепи коллагена альфа 1 (III), варианта 12; декорина; секретируемого родственного frizzled белка 2; ретинол-связывающего белка 5; MMP-2; MMP-7 и MMP-19, в биологическом образце, полученном от кошки.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к способу определения неизвестной концентрации клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к известной концентрации клостридиального нейротоксина во втором образце и к способу определения относительной активности клостридиального нейротоксина в первом образце по отношению к активности клостридиального нейротоксина во втором образце, где способ включает следующие этапы: (а) контактирование клеточной культуры с указанным вторым образцом, содержащим клостридиальный нейротоксин в известной концентрации; (c) измерение второго эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным клостридиальным нейротоксином в известной концентрации; (d) повторение этапов (а)-(с) при различных концентрациях указанного клостридиального нейротоксина; (e) регистрацию измеренного второго эффекта этапа (d) в зависимости от концентрации клостридиального нейротоксина с регистрацией, таким образом, второго набора данных; (f) контактирование клеточной культуры с указанным первым образцом, содержащим указанный клостридиальный нейротоксин в неизвестной концентрации; (h) измерение первого эффекта, вызванного в указанной клеточной культуре указанным клостридиальным нейротоксином в неизвестной концентрации; (k) определение концентрации клостридиального нейротоксина, при которой указанный первый и указанный второй эффекты идентичны; и (l) сравнение концентрации клостридиального токсина, определенной в (k), с указанной неизвестной концентрацией клостридиального нейротоксина; где до указанного измерения в этапе (с) и этапе (h), и после контакта в этапе (а) и этапе (f), указанную клеточную культуру подвергают контакту в течение от 0,5 до 100 ч с водной средой, которая не содержит клостридиальный нейротоксин, и где этап (с) выполняют при отсутствии указанного второго образца, а этап (h) выполняют при отсутствии указанного первого образца.
Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии и гастроэнтерологии, и описывает способ оценки риска развития язвенной болезни у хакасов на основе генетического анализа.

Изобретение касается способа выявления ионов кальция в эритроцитах периферической крови беременных. Способ включает выполнение гистохимической реакции на монослойных мазках периферической крови с помощью их последовательной обработки растворами, состоящими из 5% нитрата серебра, промывки 5% тиосульфатом натрия и дистиллированной водой с последующей докраской 1% раствором сафранина на 96% этиловом спирте, дифференцировки в 96% этиловом спирте, обезвоживание в спиртах возрастающей концентрации, просветление в кислоте и заключение в бальзам.

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии, иммунологии и медицины и предназначена для идентификации популяций аутореактивных Т-клеток у индивидуумов с аутоиммунными заболеваниями.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения иммуностимулятора из нервной ткани головоногих моллюсков, мозга морских млекопитающих и рыб.
Изобретение относится к медицине и описывает способ оценки эффективности диализно-фильтрационной очистки крови, заключающийся в том, что в сыворотке крови больного определяют суммарную концентрацию фенилуксусной (ФУК), пара-гидроксифенилуксусной (п-ГФУК), фенилмолочной (ФМК) и пара-гидроксифенилмолочной (п-ГФМК) кислот до и после очистки крови и при снижении ее в 2 и более раз очистку крови оценивают как эффективную.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования депрессии тяжелой степени у мужчин с ишемической болезнью сердца (ИБС). Сущность способа состоит в том, что у мужчин с ИБС устанавливают временную и структурную связь между ИБС и признаками депрессии, измеряют уровень личностной тревожности с помощью теста Спилбергера-Ханина.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина.

Изобретение относится к медицине и описывает способ идентификации водорастворимого лекарственного вещества путем сравнения с эталоном. Способ характеризуется проведением ионометрии, титрометрии и спектрофотометрии, при этом ионометрические исследования проводят с использованием различных концентраций лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации идентифицируемого вещества в каждом последующем растворе кратно по сравнению с предыдущим, титрометрические зависимости измеряют в различных концентрациях идентифицируемого лекарственного вещества, начиная от насыщенного раствора с уменьшением концентрации в каждом последующем титруемом растворе ниже, чем в предыдущем, в кратное число раз, титрующий раствор вводят равномерно в течение всего процесса титрования, дополнительное измерение спектрофотометрических зависимостей проводят не менее чем в двух разных концентрациях: насыщенного раствора и разбавленного в 10-20 раз, а измерения спектрофотометрических зависимостей проводят в двух растворителях: бидистиллированной воде и ином растворителе из ряда спиртов.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в центрах контроля качества лекарственных средств и контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа антоцианов в таком лекарственном растительном сырье, как плоды черники обыкновенной, аронии черноплодной, смородины черной и т.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению ингибиторов адгезии и/или агрегации тромбоцитов, и может быть использовано в медицине. Рекомбинантным путем с использованием матрицы кДНК слюнной железы Anopheles stephensi получают полипептид, который используют в составе фармацевтической композиции и в наборах для скрининга ингибиторов адгезии или агрегации тромбоцитов.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и может быть использовано в контрольно-аналитических лабораториях при проведении анализа флавоноидов в лекарственном растительном сборе «Желчегонный сбор №3».

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано при анализе остаточного содержания новокаина в водных средах. Способ извлечения новокаина из водных растворов включает приготовление водно-солевого раствора новокаина путем его растворения в насыщенном растворе высаливателя, экстракцию и анализ равновесной водной фазы, при этом в качестве экстрагента применяют раствор сольвотропного реагента в хлороформе с концентрацией 10 мас.%, для чего готовят водно-солевой раствор новокаина с pH 8,0±0,5 вследствие применения в качестве высаливателя насыщенного раствора сульфата аммония и добавления аммонийного буферного раствора, экстрагируют новокаин в течение 5-7 мин раствором сольвотропного реагента в хлороформе при соотношении объемов водно-солевого раствора новокаина и экстрагента 5:1, далее отделяют водно-солевую фазу от органической и анализируют методом УФ-спектрофотометрии при длине волны 291 нм, по градуировочному графику находят концентрацию новокаина в водном растворе; рассчитывают коэффициент распределения (D) и степень извлечения (R, %) новокаина по формулам.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано в системе контроля за содержанием тиосульфата натрия в растворах. Способ определения тиосульфата натрия в растворах характеризуется введением анализируемой пробы в реакционный сосуд, содержащий соответствующее количество фотогенерированного йода, полученного путем продувания 1-2 минуты воздухом и облучения стабилизированным источником света реакционной смеси, состоящей из 0,5 М раствора йодида калия, ацетатного буферного раствора с pH 5,6 и сенсибилизатора эозината натрия, фиксированием изменения тока в ячейке и по достижении его постоянства повторным продуванием реакционной смеси воздухом в течение 2-3 минут и повторным ее облучением стабилизированным источником света до достижения исходного количества йода в сосуде, фиксированием времени генерации йода, затраченного на восполнение его убыли, определением количества тиосульфата натрия по градуировочному графику по изменению силы тока и времени генерации.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения липоевой кислоты в биологически активных добавках методом катодной вольтамперометрии, включающий перевод вещества из пробы в раствор и вольтамперометрическое определение, при этом проводят катодную вольтамперометрию на ртутно-пленочном электроде при потенциале -0.373 В относительно насыщенного хлорид-серебряного электрода на фоне боратного буферного раствора pH 9,18 при постоянно токовой форме развертки потенциала со скоростью 0,06 В/с с областью определяемых содержаний липоевой кислоты от 4.5·106 до 1.1·10-3 моль/л.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано при определении фунгицидной активности химических препаратов в отношении грибов рода Fusarium - возбудителей болезней растений.

Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и представляет собой способ доклинических исследований кардиотропных антиаритмических средств, включающий определение биоэлектрических параметров в изолированных многоклеточных перфузируемых препаратах и оценку изменения длительности потенциалов действия, отличающийся тем, что в качестве изолированных многоклеточных перфузируемых препаратов используют миокард легочных вен крысы, причем изменения параметров получают в трех режимах работы многоклеточных препаратов, дополнительно оценивают потенциал покоя и по изменениям ДПД 90%, отношения ДПД 50%/ДПД 90%, скорости спонтанного сдвига потенциала покоя, наиболее положительного значения мембранного потенциала в покоящемся препарате, частоты следования пачек спонтанной активности, частоты и вариабельности следования спонтанных ПД в пачке, количества и интенсивности постдеполяризаций, а также по смещению мембранного потенциала, соответствующего началу пачечной активности, оценивают признаки антиаритмического или аритмогенного действия.

Изобретение относится к соединению, представленному формулой (1), где каждый из заместителей R1 и R2 независимо представляет собой атом водорода или линейную алкильную группу, включающую 1-3 атома углерода, R3 означает алкильную группу, включающую 1-4 атома углерода, или его фармацевтически приемлемой соли, а также изобретение относится к лекарственному средству, включающему это соединение в качестве антагониста EP4, применимое для профилактики и/или лечения иммунных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний, сердечных заболеваний, респираторных заболеваний, глазных заболеваний, почечных заболеваний, заболеваний печени, заболеваний костей, язвенного заболеваний пищеварительного тракта, язвенного колита или болезни Крона, а также неврологических заболеваний, кожных заболеваний и т.п.
Наверх