Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата



Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата
Новые противовирусные соединения, подходящие для лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивата

 


Владельцы патента RU 2565593:

Аденовир Фарма АБ (SE)

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), агрегатам и фармацевтической композиции на его основе для лечения и предотвращения глазных вирусных инфекций:

где R1 представляет собой метил или этил; R2 представляет собой R3 или R4; «X» является О или S; и «А» представляет собой С3-7алкандиил, если R2 представляет собой R3, и С2-7 алкандиил, если R2 представляет собой R4, где X и R2 связаны с разными наиболее удаленными друг от друга атомами углерода алкандиила; R3 выбран из N(C0-3алкила)С(О)R5, OC(O)R5, C(O)N(C0-3алкила)R5 и C(O)OR5, R5 представляет собой линейную углеродную цепь, содержащую от 14 до 30 атомов углерода, причем указанная углеродная цепь является насыщенной или содержит одну или более двойных и/или тройных связей, кроме того, указанная углеродная цепь является незамещенной или замещенной одним или более С1-С5 алкилами; R4 является заместителем формулы (II): D(CH2)m(OCH2CH2)n(CH2)pER7 (II),

где «D» связан с «А» и выбран из N(C0-3алкила)С(О), ОС(О), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; «m» и «р» равны от 0 до 3; «n» равен от 1 до 15; «Е» выбран из N(C0-3алкила)С(О), ОС(О), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; и R7 представляет собой R5, в виде кислоты в незаряженной протонированной форме, фармацевтически приемлемой соли или сольвата, в виде стереоизомера или аномерной смеси с преобладанием α-аномера. 3 н. и 21 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 3 пр.

 

Область техники

Настоящее изобретение относится к новым противовирусным соединениям, противовирусным агрегатам, содержащим такие соединения, фармацевтическим композициям, содержащим такие агрегаты, и способу лечения или предотвращения эпидемического кератоконъюнктивита и других глазных заболеваний, вызванных вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клеток, путем применения указанных соединений.

Уровень техники

Эпидемический кератоконъюнктивит (ЭКК) представляет собой серьезное и контагиозное инфекционное заболевание глаз (конъюнктивы и роговицы), вызываемое аденовирусами HAdV-8, HAdV-19 и HAdV-37 вида HAdV-D и HAdV-4 вида Е.

Кроме того, также сообщалось, что HAdV-53 вида D вызывает ЭКК (PLoS One, 2009, 4(6), 1-14, doi:10,1371/joumal.pone, 0005635.g001). Кроме того, у пациентов, страдающих ЭКК, был выделен аденовирус, обозначенный как HAdV-22,37/H8.

Недавно сообщалось также, что вирус, обозначенный как HAdV-54, вызывает ЭКК (British Journal of Ophthalmology (2010) Hisatoshi Kaneko et al, "Epidemiological and virological features of epidemic keratoconjunctivitis due to new human adenovirus type 54 in Japan" published online June 8,2010, doi: 10.1136/bjo.2009.178772).

Симптомами ЭКК являются воспаление конъюнктивы (конъюнктивит) и роговицы (кератит), боль, отек, снижение остроты зрения, слезотечение, чувствительность к свету, ощущение присутствия инородного тела в глазу и образование псевдомембран. Во время острой фазы заболевания (приблизительно от двух до трех недель) вирусы присутствуют и воспроизводятся. Обычно сначала инфицируется один глаз, а затем в течение двух-трех дней инфекция распространяется на другой глаз. Обычно инфекция в первом глазу является более серьезной. Приблизительно в 30% случаев помутнение роговицы у пациентов, приводящее к ухудшению зрения, сохраняется в течение недель, месяцев или даже лет.

Так как заболевание часто носит эпидемический характер, оно называется эпидемическим кератоконъюнктивитом (ЭКК).

Пациент не способен (или ему не рекомендуется врачом) ходить на работу или в школу из-за симптомов и высокой контагиозности заболевания. Приблизительно 45% людей из близкого окружения пациента, например, члены семьи, подвергаются инфицированию. Частота рецидивов составляет 25% (в течение пяти лет) после первой инфекции и 50% - после второй.

ЭКК передается от человека к человеку посредством физического контакта, например, из глаза на руку, с руки на дверную ручку, с дверной ручки на руку другого человека и затем в неинфицированный глаз. Вирусы, вызывающие ЭКК, могут выживать, например, на дверных ручках, полотенцах и т.д. в течение месяцев. Для предотвращения и снижения частоты вспышек эпидемий должны быть приняты соответствующие меры инфекционного контроля.

Широкое распространение получило лечение острой фазы инфекции местно применяемыми стероидами. Однако по результатам недавних исследований было сделано заключение о том, что стероиды могут продлевать персистирование в роговице, и их частое применение может привести к продолжительным симптомам сухого глаза. Рекомендуется избегать применения стероидов как при острой, так и при хронической фазе заболевания.

Указанное высоко контагиозное заболевание встречается по всему миру, но наиболее часто в густонаселенных странах Азии. Аденовирусный конъюнктивит представляет собой особенную проблему в Японии, где ежегодно сообщается о примерно одном миллионе случаев ЭКК.

ЭКК возникает по всему миру в виде единичных случаев заболевания и в виде эпидемий и является эндемичным в Восточной Азии, включая Японию, Корею и Тайвань. Данное заболевание признано серьезной проблемой в области здравоохранения в указанных регионах. Экономические и социальные затраты, обусловленные такой локализованной эпидемией, также высоки. Рабочие места, государственные учреждения, такие как школы и центры дневного ухода за детьми, должны закрываться при вспышке эпидемии. Данное заболевание приводит к потере большого количества рабочего времени ежегодно.

Несмотря на то, что выздоровление от ЭКК обычно наступает в течение 2-3 недель, затраты в социальной сфере, как с точки зрения затрат на здравоохранение, так и с точки зрения производственных потерь, обусловленных высокой контагиозностью заболевания, являются очень существенными. Заболевание также имеет долгосрочные последствия, связанные с влиянием на остроту зрения и рецидивами.

Аденовирусы, вызывающие ЭКК, взаимодействуют с соответствующими клеточными рецепторами через фибриллярные белки, исходящие от вирусной частицы. Каждая частица имеет 12 гомотримерных фибриллярных белков, и, таким образом, домен связывания рецептора на фибрилле (головка) предоставляет три отдельных сайта связывания.

Было обнаружено, что клеточный рецептор HAdV-37 представляет собой гликоконъюгат, содержащий по меньшей мере одну концевую группу сиаловой кислоты, присоединенную через α-2,3-гликозидную связь к соседней углеводной цепи. Таким образом, указанная способность аденовирусов HAdV-8, HAdV-19, HAdV-37 и предположительно также других аденовирусов, вызывающих тяжелые формы ЭКК, таких как HAdV-53, HAdV-54 и HAdV-22,37/H8, тесно связана с их способностью связываться с сиаловой кислотой на поверхности клеток. Следовательно, противовирусное лекарственное средство на основе сиаловой кислоты может быть способно блокировать прикрепление вируса. Соответственно, такое лекарственное средство вероятно может применяться для лечения пациентов, страдающих ЭКК. Кроме того, указанное лекарственное средство вероятно может применяться для предотвращения ЭКК.

В международной публикации WO 01/037846 описано, что аденовирусные инфекции и, в частности, аденовирусные инфекции глаз, например, кератоконъюнктивит, можно лечить или ослаблять путем введения вещества, препятствующего взаимодействию вируса с рецептором сиаловой кислоты, такого как сиаловая кислота, в терапевтически эффективном количестве.

К сожалению, слабые взаимодействия между углеводами и белками ограничивают применение углеводов в качестве лекарственных средств. В попытке преодолеть указанные ограничения использовали гликоконъюгаты с различными производными сиаловой кислоты, связанные с сывороточным альбумином человека (SA-HSA) (Johansson, S. М. С., et al. Antiviral Research 73 (2007) 92-100).

Однако такие поливалентные гликоконъюгаты по некоторым причинам не подходят в качестве фармацевтических средств.

Точная структура и состав SA-HSA различны для разных молекул. Соответственно, SA-HSA представляет собой тип структуры, с трудом поддающийся определению. Кроме того, состав производных SA-HSA в разных партиях различается даже при одинаковом процессе производства, что является значительным недостатком с точки зрения безопасности и контроля.

Кроме того, применение белка, т.е. HSA, выделенного из плазмы человека, является большим недостатком. Сама природа HSA делает затруднительным получение больших количеств фармацевтических средств на основе HSA. Кроме того, при применении HSA, выделенного из плазмы крови человека, нельзя исключать вероятность заражения инфекционными агентами, такими как вирусы или прионы.

Соответственно, продукты на основе HSA не подходят в качестве фармацевтических продуктов, и существует необходимость в альтернативных поливалентных продуктах.

В настоящее время не существует клинически применимой специфической противовирусной терапии для сокращения срока течения инфекции, ослабления мучительных клинических симптомов, остановки репликации вирусов или предотвращения развития помутнения роговицы.

Соответственно, ЭКК является заболеванием, для которого отсутствует эффективное лечение и существует большая нереализованная потребность в медикаментозных средствах. Следовательно, фармацевтические средства, которые могли бы использоваться для лечения и предотвращения распространения ЭКК, были бы очень востребованы.

Краткое описание изобретения

Настоящее изобретение направлено на снижение, ослабление, предотвращение или устранение по меньшей мере одного, например, одного или более, из вышеуказанных недостатков.

Соответственно, согласно одному аспекту изобретения, предложено соединение, которое может быть представлено общей формулой (I):

где R1 представляет собой метальную или этильную группу; R2 представляет собой R3, R4 или R8; Х представляет собой О, S или NH; и «А» представляет собой С3-7алкандиил, если R2 представляет собой R3, и С2-7алкандиил, если R2 представляет собой R4 или R8, где «X» и R2 связаны с разными атомами углерода указанного алкандиила, и где указанные разные атомы углерода представляют собой наиболее удаленные друг от друга атомы углерода в алкандииле; R3 выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкил)С(O)R5, OC(O)R5, C(O)N(C0-3алкила)R5 и C(O)OR5, где R5 представляет собой линейную углеродную цепь, содержащую от 14 до 30 атомов углерода; причем указанная углеродная цепь является насыщенной или содержит одну или более двойных и/или тройных связей; кроме того, указанная углеродная цепь является незамещенной или содержит в качестве заместителя одну или более С1-С5 алкильных групп; R4 представляет собой заместитель согласно формуле (II):

где «D» связан с «А» и выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; целое число «m» представляет собой число от 0 (нуля) до 3; целое число «n» представляет собой от 1 до 15; целое число «p» представляет собой от 0 (нуля) до 3; «Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; и

R7 выбран из группы, состоящей из R5, определенного выше, и R6, где R6 представляет собой заместитель согласно формуле (III):

где каждый R5 независимо является таким, как определено выше, и С2-5алкил присоединен к «Е»; a R8 выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(O)R9, OC(O)R9, C(O)N(C0-3алкила)R9 и C(O)OR9, где R9 представляет собой заместитель согласно формуле (IV):

где каждый R5 независимо является таким, как определено выше;

в виде кислоты в незаряженной протонированной форме, фармацевтически приемлемой соли присоединения, сольвата указанного соединения или сольвата соли указанного соединения.

Согласно другому аспекту изобретения, предложен агрегат, содержащий множество молекул соединения согласно формуле (I) и множество амфифильных молекул, отделенных от указанного соединения и способных образовывать двойные слои в воде.

Согласно другому аспекту изобретения, предложена фармацевтическая композиция, содержащая агрегат, описанный выше, и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно другому аспекту изобретения, соединение согласно формуле (I), агрегат, описанный выше, или фармацевтическая композиция, описанная выше, можно применять в терапии.

Согласно другому аспекту изобретения, соединение согласно формуле (I), агрегат, описанный выше, или фармацевтическую композицию, описанные выше, можно применять для лечения и/или предотвращения глазной инфекции, такой как эпидемический кератоконъюнктивит, вызванный вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом. Примеры указанных вирусов включают HAdV-8, HAdV-19, HAdV-37, HAdV-53. HAdV-54 и HAdV-22,37/H8.

Более того, предпочтительные признаки различных вариантов реализации изобретения определены в зависимых пунктах формулы изобретения и в подробном описании изобретения, приведенном ниже.

Краткое описание чертежей

На Фигуре 1 показана способность агрегатов согласно настоящему изобретению вызывать агрегацию HAdV37.

На Фигурах 2 и 3 показана способность агрегатов согласно настоящему изобретению подавлять инфицирование вирусом HAdV37 клеток НСЕ при различных концентрациях.

Подробное описание предпочтительных вариантов реализации изобретения

Термин «соль присоединения» означает соли, образованные путем присоединения фармацевтически приемлемой кислоты, такой как органические или неорганические кислоты, или фармацевтически приемлемого основания. Органическая кислота может представлять собой (но не ограничивается указанными) уксусную, пропановую, метансульфоновую, бензолсульфоновую, молочную, яблочную, лимонную, винную, янтарную или малеиновую кислоту. Неорганическая кислота может представлять собой (но не ограничивается указанными) соляную, бромистоводородную, серную, азотную кислоту или фосфорную кислоту. Основание может представлять собой (но не ограничивается указанными) аммиак и гидроксиды щелочных и щелочноземельных металлов. Термин «соль присоединения» также включает гидраты и соли присоединения растворителя, такие как гидраты и алкоголяты.

При использовании в настоящей заявке отдельно или в качестве суффикса или префикса, термин «алкил» включает насыщенные алифатические углеводородные группы, как разветвленные, так и с прямой цепью, содержащие определенное количество атомов углерода. Например, «С1-6алкил» означает алкил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода.

При использовании в настоящей заявке отдельно или в качестве суффикса или префикса, термин «алкандиил», включает насыщенные алифатические углеводородные группы, как разветвленные, так и с прямой цепью, содержащие определенное количество атомов углерода.

Например, «С1-6алкандиил» означает алкандиил, содержащий 1, 2, 3, 4, 5 или 6 атомов углерода.

В настоящем описании группы, присоединенные через алкандиильную группу, если не указано иное, могут быть присоединены к любому из атомов углерода алкандиильной группы.

Примеры алкила включают, но не ограничиваются указанными, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, пентил и гексил.

Примеры алкандиила включают, но не ограничиваются ими, метилен, этилен (этандиил), пропилен (пропандиил) и бутилен (бутандиил).

Соединения Один вариант реализации изобретения относится к соединению согласно формуле (I):

где R1 представляет собой метальную или этильную группу; R2 представляет собой R3, R4 или R8; Х представляет собой О, S или NH; и «А» представляет собой С3-7алкандиил, если R2 представляет собой R3, и С2-7алкандиил, если R2 представляет собой R4 или R8; где «X» и R2 связаны с разными атомами углерода указанного алкандиила, и где указанные разные атомы углерода представляют собой наиболее удаленные друг от друга атомы углерода в указанном алкандииле; R3 выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(O)R5, OC(O)R5, C(O)N(C0-3алкила)R5 и C(O)OR5, где R5 представляет собой линейную углеродную цепь, содержащую от 14 до 30 атомов углерода; причем указанная углеродная цепь является насыщенной или содержит одну или более двойных и/или тройных связей; кроме того, указанная углеродная цепь является незамещенной или содержит в качестве заместителя одну или более С1-С5 алкильных групп; R4 представляет собой заместитель согласно формуле (II):

где «D» связан с «А» и выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; целое число «m» представляет собой от 0 (нуля) до 3; целое число «n» представляет собой от 1 до 15; целое число «p» представляет собой от 0 (нуля) до 3; «Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; и R7 выбран из группы, состоящей из R5, определенного выше, и R6, где R6 представляет собой заместитель согласно формуле (III):

где каждый R5 независимо является таким, как определено выше, и С2-5алкил присоединен к Е; и R8 выбран из группы, состоящей из N(CO-3алкила)С(O)R9, OC(O)R9, C(O)N(C0-3алкила)R9 и C(O)OR9, где R9 представляет собой заместитель согласно формуле (IV):

где каждый R5 независимо является таким, как определено выше; в виде кислоты в незаряженной протонированной форме, фармацевтически приемлемой соли присоединения, сольвата или сольвата соли указанного соединения. Более того, указанное соединение может находиться в виде чистого стереоизомера или в виде рацемической, диастереомерной, скалемической или аномерной смеси, содержащей указанное соединение. Предпочтительно указанное соединение находится в виде стереоизомера или в виде аномерной смеси.

Как описано выше, R1 формулы (I) представляет собой метальную или этильную группу. Предпочтительно R1 представляет собой метальную группу. Кроме того, «X» формулы (I), как описано выше, может быть выбран из О, S или NH. Предпочтительно «X» представляет собой О. «А» в формуле (I), как описано выше, представляет собой С3-7 алкандиил, если R2 представляет собой R3, или С2-7 алкандиил, если R2 представляет собой R4 или R8. Предпочтительно указанный С3-7алкандиил и указанный С2-7алкандиил представляют собой неразветвленные алкандиилы с линейной цепью, например, представляют собой пентан-1,5-диил.

Один вариант реализации изобретения относится к соединению согласно формуле (I), где «А» представляет собой неразветвленный С3-5алкандиил с прямой цепью, такой как пентан-1,5-диил, R1 представляет собой метил, Х представляет собой О и R5 представляет собой незамещенную прямую углеродную цепь.

Один вариант реализации изобретения относится к соединению согласно формуле (I), где R1 представляет собой метил, «X» представляет собой О, R5 представляет собой незамещенную прямую углеродную цепь, R2 представляет собой R4 или R8, и «А» представляет собой неразветвленный С2-5алкандиил с прямой цепью, такой как этан-1,2-диил или пентан-1,5-диил.

Как описано выше, R2 формулы (I) представляет собой R3, R4 или R8. Предпочтительно R2 представляет собой R4 или R8, и наиболее предпочтительно R2 представляет собой R4. Однако R2 может также представлять собой R3.

Как описано выше, R5 формулы (I) представляет собой линейную углеродную цепь, содержащую от 14 до 30 атомов углерода. Углеродная цепь может необязательно содержать одну или более двойных и/или тройных связей. Кроме того, указанная углеродная цепь может необязательно содержать в качестве заместителя одну или более, например, от 1 до 3, С1-С5 алкильных групп, таких как метальные группы. Предпочтительно R5 содержит от 20 до 30 атомов углерода, например, от 24 до 26 атомов углерода. Несмотря на то, что R5 может быть замещенным, предпочтительно R5 является незамещенным.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R5 содержит по меньшей мере одну двойную или тройную связь. Предпочтительно R5 содержит по меньшей мере одну тройную связь и более предпочтительно содержит две сопряженные тройные связи. Таким образом, R5 может представлять собой, например, 9,11-тетракозадиинильную группу.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R5 представляет собой прямую углеродную цепь, содержащую от 20 до 30 атомов углерода и две сопряженные тройные связи, например, R5 представляет собой 9,11-тетракозадиинильную группу.

Как описано выше, R4 представляет собой заместитель согласно формуле (II). Несмотря на то, что целое число «p» может представлять собой от 0 (нуля) до 3, предпочтительно «p» представляет собой 0 (ноль). Целое число «m», которое может представлять собой от 0 (нуля) до 3, представляет собой предпочтительно 2 или 3. Несмотря на то, что целое число «n» может представлять собой от 1 до 15, предпочтительно «n» представляет собой 3, или более, например, 4 или 5, или более. Кроме того, несмотря на то, что целое число «n» может принимать значения до 15, предпочтительно «n» представляет собой 12, или менее.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R2 представляет собой R4, и целое число «n» представляет собой от 4 до 15. Присутствие указанного полиэтиленгликолиевого линкера усиливает противовирусное действие (которое также обсуждается ниже) агрегата, содержащего соединение согласно формуле (I).

В соединениях, где «n» представляет собой 4, или более, R5 предпочтительно содержит 20 атомов углерода, или более.

Как описано выше, «D» формулы (II) выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O. Предпочтительно «D» выбран из группы, состоящей из N(C0-1алкила)С(О) и C(O)N(C0-1алкила). Наиболее предпочтительно «D» представляет собой NHC(O).

Как описано выше, «Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(O), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O. Предпочтительно «Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-1алкила)С(О) и ОС(O). Если «Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-1алкила)С(О) и ОС(O), то R5 представляет собой часть остатка карбоновой кислоты. Наиболее предпочтительно «Е» представляет собой NHC(O).

Несмотря на то, что R7 может быть выбран из R5 и R6, R7 предпочтительно представляет собой R5.

Если R2 представляет собой R4, и R7 представляет собой R6, то С2-5алкандиил R6 представляет собой предпочтительно этан-1,2-диил (этилен), и «Е» представляет собой предпочтительно C(O)NH.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R2 представляет собой R4, «D» представляет собой NHC(O) или ОС(0), целое число «т» представляет собой 2, целое число «p» представляет собой 0 (ноль), «Е» представляет собой NHC(O) или ОС(O), и R7 представляет собой R5. Согласно указанному варианту реализации изобретения, предпочтительно R1 представляет собой метил, и Х представляет собой О. Кроме того, «А» предпочтительно представляет собой С2-С5алкандиил с прямой цепью, такой как этан-1,2-диил или пентан-1,2-диил. Кроме того, целое число «n» предпочтительно представляет собой 3, или более, согласно указанному варианту реализации изобретения.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R2 представляет собой R4, «D» представляет собой C(O)NH или С(O)O, целое число «m» представляет собой 2, целое число «p» представляет собой 0 (ноль), «Е» представляет собой NHC(O) или ОС(O), и R7 представляет собой R5. Согласно указанному варианту реализации изобретения, предпочтительно R1 представляет собой метил, и Х представляет собой О. Кроме того, предпочтительно А представляет собой С2-С5алкандиил с прямой цепью, такой как Этан-1,2-диил или пентан-1,2-диил. Кроме того, предпочтительно целое число «n» представляет собой 3, или более, согласно указанному варианту реализации изобретения.

Несмотря на то, что предпочтительно R2 представляет собой R4 или R8, как описано выше, один вариант реализации изобретения относится к соединению согласно формуле (I), где R2 представляет собой R3, и R3 представляет собой NHC(O)R5 или OC(O)R5. Предпочтительно R3 представляет собой NHC(O)R5 согласно указанному варианту реализации изобретения.

Согласно одному варианту реализации изобретения, соединение согласно формуле (I) может быть выбрано из группы, состоящей из 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-тритетраконтанил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-нонатетраконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-тетрагексаконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-29,31-тетратетраконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-35,37-пентаконтадиинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты и 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-56,58-генгептаконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты. Соединение согласно формуле (I) может быть выбрано из группы, состоящей из 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-29,31-тетратетраконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-35,37-пентаконтадиинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты и 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-56,58-генгептаконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты.

Как описано выше, некоторые варианты реализации настоящего изобретения относятся к соединению согласно формуле (I) в виде кислоты в незаряженной протонированной форме, фармацевтически приемлемой соли присоединения, в виде кислоты в депротонированной форме, сольвата указанного соединения или сольвата соли указанного соединения. Более того, соединение согласно формуле (I) может находиться в виде чистого стереоизомера или аномерной смеси.

Если указанное соединение находится в виде аномерной смеси, предпочтительно преобладает α-аномер. Соответственно, предпочтительно 75% соединения, или более, например, более 90%, 95%, 99% или даже более 99,9% соединения, находится в виде α-аномера.

Агрегаты

Поскольку часть клеточной мембраны, содержащая клеточный рецептор, которую вызывающий ЭКК вирус использует для прикрепления к клетке, содержит концевые остатки сиаловой кислоты, множество молекул соединения, описанного в настоящей заявке, встраивали в амфифильный агрегат, содержащий множество амфифильных молекул, способных образовывать в воде двойные слои и отделенных от указанного соединения. Указанные агрегаты, как было обнаружено, подавляют связывание HAdV-37 с клетками роговицы человека более эффективно, чем указанное соединение в моновалентной форме.

Агрегат, содержащий амифифильную молекулу, способную образовывать двойные слои в воде, может присутствовать в виде двойного слоя с липофильным внутренним слоем.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают, что указанный агрегат может быть описан как поливалентный агрегат с точки зрения количества остатков сиаловой кислоты в одном агрегате, доступных для связывания с аденовирусом. Таким образом, применение указанных агрегатов для лечения и/или предотвращения ЭКК может быть более эффективным по сравнению с соответствующими остатками сиаловой кислоты или самой сиаловой кислотой.

Таким образом, указанный агрегат позволяет преодолеть некоторые недостатки, связанные с применением SA-HSA. В частности, компоненты агрегата являются точно определенными молекулами, и агрегат не содержит каких-либо инфекционных агентов.

Соответственно, один вариант реализации настоящего изобретения относится к агрегату, содержащему множество молекул соединения, описанного в настоящей заявке, и множество молекул, отделенных от указанного соединения. Указанные молекулы могут представлять собой амфифильные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде. Агрегат может содержать двойной слой, образованный указанными молекулами. Так как агрегат содержит амфифильные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде, он может быть подобен клеточной мембране. Следовательно, соединения, имеющие большую липофильную часть, такие как соединения, описанные в настоящей заявке, могут быть встроены в агрегат.

Если указанное соединение встроено в указанный агрегат в водном растворе, то остаток сиаловой кислоты в соединении, описанном в настоящей заявке, обращен к окружающей водной среде. Липофильная часть соединений, содержащая R5 формулы (I), находится внутри агрегата.

Указанный агрегат может содержать по меньшей мере 40 мол.% амфифильных молекул, способных образовывать двойные слои в воде. Предпочтительно указанный агрегат содержит 50 мол.%, или более, например, 65, 75 или даже 85 мол.% указанных молекул, или более.

Подобным образом, содержание указанных амфифильных молекул может также определяться на массовой основе. Соответственно, агрегат, описанный в настоящей заявке, может содержать 40 масс.%, или более амфифильных молекул, способных образовывать двойные слои в воде. Предпочтительно он содержит 50 масс.%, или более, например, 65,75 или даже 85 масс.% или более, указанных амфифильных молекул.

Агрегаты, описанные в настоящей заявке, могут содержать 50 мол.%, или менее, соединения, описанного в настоящей заявке. Содержание указанного соединения может составлять 25, 15, 10 или 5 мол.%, или менее.

Слишком высокое содержание указанного соединения может влиять на стабильность агрегата. Кроме того, при слишком высоком содержании отдельные молекулы соединения, остатки сиаловой кислоты которых обращены к окружающей водной среде, могут быть расположены слишком близко друг к другу. Напротив, слишком низкое содержание может привести к неудовлетворительному связыванию с вирусом. Соответственно, содержание указанного соединения, согласно одному варианту реализации изобретения, может составлять 0,1-25 мол.%, например от 5 до 15 мол.%. Согласно другому варианту реализации изобретения, содержание составляет примерно 10 мол.%.

Подобным образом, содержание указанного соединения, согласно одному варианту реализации изобретения, может составлять 0,1-25 масс.%, например, от 1 до 15 масс.% или от 5 до 15 масс.%. Согласно другому варианту реализации изобретения, содержание составляет примерно 10 масс.%.

Как правило, амфифильные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде, содержат по меньшей мере одну, например, одну или две, липофильную углеродную цепь (цепи). Указанная цепь (цепи) может являться насыщенной. Кроме того, указанная цепь (цепи) может являться ненасыщенной и, следовательно, содержать одну или нескольку двойных и/или тройных связей. Несмотря на то, что указанная углеродная цепь (цепи) может быть разветвленной, предпочтительно указанная углеродная цепь (цепи) является/являются линейной. Углеродная цепь (цепи), как правило, составляет большую часть липофильной части указанных амфифильных молекул. Она может содержать более 12 атомов углерода. Согласно одному варианту реализации изобретения, углеродная цепь содержит 16 атомов углерода, или более, например, 20 атомов углерода, или более.

Несмотря на то, что могут применяться любые молекулы, способные образовывать двойной слой в воде, предпочтительным может являться применение молекулы, содержащей линейную углеродную цепь, где указанная углеродная цепь содержит по меньшей мере одну тройную связь, например, две сопряженные тройные связи.

Согласно одному варианту реализации изобретения, указанные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде, могут быть выбраны из молекул, содержащих 9,11-тетракозадиинильную группу. Одним примером указанных молекул является 10,12-пентакозадииноевая кислота.

Если компоненты агрегата содержат сопряженные тройные связи, как, например, 10,12-пентакозадииноевая кислота, то компоненты агрегата могут быть полимеризованы путем его обработки УФ-излучением. Один вариант реализации изобретения, таким образом, относится к указанному агрегату, где указанный агрегат обработан УФ-излучением для его полимеризации.

Соединение согласно формуле (I), присутствующее в агрегате, описанном в настоящей заявке, содержащее сопряженные тройные связи, например, в котором R5 формулы (I) представляет собой 9,11-тетракозадиинил, может представлять собой часть такой полимерной сетчатой структуры, образованной при обработке УФ-излучением.

Степень полимеризации в указанных агрегатах, согласно одному варианту реализации изобретения, может составлять по меньшей мере 50%, или более, например, 60, 70 или даже 80%, или более. В данном контексте степень полимеризации относится к процентному содержанию тройных связей, которые стали частью полимеризованной сетчатой структуры полимера.

Согласно другому варианту реализации изобретения, агрегаты, которые могут быть полимеризованы, например, путем обработки УФ-излучением, с осторожностью обрабатывали для избежания их полимеризации, например, путем исключения воздействия УФ-излучения. Согласно одному варианту реализации изобретения, были полимеризованы 10%, или менее, например, 5, 1 или даже 0,1%, или менее компонентов агрегата, которые могли быть полимеризованы.

Согласно одному варианту реализации изобретения, R5 в формуле (I) выбран из группы, также присутствующей в амфифильных молекулах, являющихся частью агрегата. Например, если R5 представляет собой 9,11-тетракозадиинил, то указанные молекулы могут представлять собой 10,12-пентакозадииноевую кислоту. Кроме того, если указанная молекула представляет собой фосфолипид, являющийся сложным диэфиром глицерина, то R5 может быть выбран из углеродной цепи одного из остатков жирных кислот в указанном сложном эфире.

Как правило, амфифильные молекулы, способные образовывать двойной бислой в воде, содержат гидрофильную группу. Примеры указанных гидрофильных групп включают карбоксигруппу, фосфатную группу, сложные эфиры фосфатов, например, сложные эфиры холина, серина и глицерина, сульфатные группы, амины, углеводы, например моносахариды и дисахариды, и гидроксигруппы.

Как описано выше, агрегаты должны содержать амфифильные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде. Указанные молекулы могут быть выбраны из карбоновой кислоты, содержащей более 12 атомов углерода, фосфоглицеридов, таких как фосфатидилхолины, фосфатидилсерины и фосфатидилэтаноламины и сфингомиелины.

Согласно одному варианту реализации изобретения, амфифильные молекулы, способные образовывать двойные слои в воде, могут быть выбраны из амфифильных молекул, имеющих температуру перехода более 40°С, например, более 50 или 60°С.Как хорошо известно специалисту в данной области техники, температура перехода в данном контексте означает температуру, при которой происходит переход от упорядоченной фазы (также известной как гелевая фаза) к неупорядоченной жидкой кристаллической фазе двойного слоя, образованной амфифильными молекулами в воде.

Агрегаты амфифильных молекул, способные образовывать двойные слои в воде, могут находиться в виде липосом, т.е. в виде одного или более сферических двойных слоев, охватывающих часть водного раствора, в котором указанные липосомы были образованы. Указанные агрегаты могут также находиться в виде двойного слоя в форме пластин. Кроме того, амфифильные молекулы могут также образовывать мицеллы в воде. Однако мицеллы не содержат двойных слоев.

Согласно одному варианту реализации изобретения, агрегат, описанный в настоящей заявке, представляет собой пластину, содержащую один или более двойных слоев, например, от 1 до 5.

В отличие от липосом, обе стороны двойного слоя в пластине с одним двойным слоем обращены к окружающей водной среде. Таким образом, все остатки сиаловой кислоты соединения в пластине доступны для связывания вируса.

Кроме того, по всей видимости, применение агрегатов в форме пластин, содержащих один или несколько двойных слоев, приводит к более эффективному подавлению связывания HAdV-37 с клетками роговицы человека.

Размер указанных пластин может варьироваться в зависимости способа получения.

Согласно одному варианту реализации изобретения, средняя толщина пластин может составлять до нескольких микрометров, например, от 10 до 100 мкм.

Размер агрегатов, которые могут присутствовать в виде пластин, может быть уменьшен путем обработки ультразвуком. Указанная обработка ультразвуком может иметь место до приготовления агрегата в виде лекарственного средства. Согласно одному варианту реализации изобретения, средняя толщина указанных пластин с уменьшенным размером может составлять 1 мкм или менее.

Уменьшенный размер агрегата является предпочтительным с точки зрения устойчивости коллоида, так как агрегаты меньшего размера имеют меньшую тенденцию к агломерации и седиментации по сравнению с большими. Уменьшение размера может осуществляться, в частности, путем обработки агрегатов ультразвуком, экструзии или гомогенизации при высоком давлении, например, с использованием гомогенизатора высокого давления Emulsifix C50 (F160). Предпочтительно указанные процедуры осуществляются при температуре выше температуры перехода амфифильных молекул, образующих двойные слои.

Температура перехода амфифильных молекул, образующих агрегат, может не только влиять на текучесть двойного слоя, но также на фактическую форму агрегата. Амфифильные молекулы, имеющие температуру перехода выше температуры окружающей среды, будут более склонны к образованию пластин, тогда как амфифильные молекулы, имеющие температуру перехода ниже температуры окружающей среды, будут более склонны к образованию липосом.

Соответственно, амфифильные молекулы для включения в агрегат, описанный в настоящей заявке, согласно одному варианту реализации изобретения могут быть выбраны из амфифильных молекул, имеющих температуру перехода выше комнатной температуры, например, имеющих температуру перехода 40, 50 или даже 60°C, или выше.

На температуру перехода амфифильных молекул влияет не только длина углеродной цепи, но также присутствие двойных и/или тройных связей. Известно, что двойные связи снижают температуру перехода, так как указанные связи нарушают в остальном регулярную периодическую структуру и, таким образом, негативно влияют на Вандер-Ваальсовы взаимодействия. О влиянии тройной связи и, в частности, влияния сопряженных тройных связей известно мало.

Не ограничиваясь какой-либо теорией, полагают что возможно хорошая активность при использовании агрегатов, содержащих 10,12-пентакозадииноевую кислоту, достигается, по крайней мере отчасти, благодаря тому, что указанные агрегаты находятся в виде пластин, а не липосом. Возможно, сопряженные тройные связи способствуют образованию указанной формы.

Согласно одному варианту реализации изобретения, агрегаты, описанные в настоящей заявке, могут также содержать дополнительные компоненты. Например, могут применяться компоненты, влияющие на текучесть и стабильность агрегата. Одним примером указанного компонента является холестерин. Как правило, указанные дополнительные компоненты находятся в количестве, меньшем или равном количеству амфифильных молекул. Согласно одному варианту реализации изобретения, содержание указанного дополнительного компонента, такого как холестерин, может составлять 1:1-1:10 (дополнительный компонент, такой как холестерин: амфифильные молекулы).

Образование агрегатов

Агрегаты, описанные в настоящей заявке, могут быть получены с помощью способов, известных специалистам в данной области техники. Указанные способы включают обработку ультразвуком и/или экструзию водных растворов или суспензий, содержащих соединения, предложенные в настоящей заявке, и амфифильные молекулы, предложенные в настоящей заявке.

Кроме того, примеры указанных способов включают растворение высушенных пленок в водных растворах.

Согласно одному варианту реализации изобретения, агрегат, описанный в настоящей заявке, может быть получен путем:

- растворения соединения, описанного в настоящей заявке, и амфифильных молекул, описанных в настоящей заявке, в органическом растворителе, таком как хлороформ, дихлорметан, метанол, этанол, углеводороды, например, гексан и гептан или их смеси;

- нанесения указанного раствора на поверхность;

- выпаривания органического растворителя; и

- диспергирования полученной пленки в водном растворе; причем указанный раствор можно затем необязательно обработать ультразвуком. Указанный этап обработки ультразвуком предпочтительно проводят при температуре выше комнатной температуры, например, при 40°С, или выше.

Приготовление композиций

Другой вариант реализации изобретения относится к фармацевтической композиции, например, лекарственному средству для лечения и/или предотвращения ЭКК, содержащему агрегат, причем указанный агрегат, как было описано в настоящей заявке, содержит соединение согласно формуле (I). Указанная фармацевтическая композиция может дополнительно содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как носители, разбавители и/или стабилизаторы.

Термин «фармацевтически приемлемый» относится к вспомогательному веществу, которое при используемой дозе и концентрации не вызывает каких-либо нежелательных явлений у пациентов, которым его вводят. Указанные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества хорошо известны в данной области техники.

Согласно одному варианту реализации изобретения, указанная фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, представляет собой фармацевтическую композицию, подходящие для введения в глаз.

Примеры фармацевтических композиций, подходящих для введения в глаз, включают, но не ограничиваются указанными, глазные капли, мази, спреи, повязки и гели.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, содержит 0,001-10 мг/мл, например, 0,01-5 мг/мл или 0,01-1 мг/мл, агрегата, где указанный агрегат, как было описано в настоящей заявке выше, содержит вещество согласно формуле (I).

Более того, фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, может содержать 0,001-10 мМ, например, 0,01-1 мМ вещества согласно формуле (I).

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, может представлять собой водную композицию. Содержание воды в указанной водной композиции может составлять 90 масс.%, или более, например, от 90 до 99,9, от 95 до 99 или от 95 до 98 масс.%.

Кроме того, водная композиция может содержать агент для получения изотонического раствора. Соответственно, водная композиция может содержать агент, выбранный из группы, состоящей из хлорида натрия, глицерина, полиэтиленгликоля, сахаридов, например, моносахаридов, например, глюкозы и маннита, и дисахаридов, например, сахарозы.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, описанная в настоящей заявке, представляет собой водную композицию, содержащую электролит, такой как хлорид натрия. Предпочтительно содержание указанного электролита должно быть близко к изоосмотической концентрации, например, примерно 0,9 масс.%.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, представляет собой водную композицию, содержащую глицерин. Содержание глицерина может составлять от 2 до 3 масс.%, например, от 2,3 до 2,3 или от 2,5 до 2,7 масс.%. Предпочтительно указанное содержание должно быть близко к изоосмотической концентрации, например, примерно 2,6 масс.%.

Согласно одному варианту реализации изобретения, водная фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, имеет pH примерно от 6,5 до 8. Предпочтительно указанный pH близок к физиологическому pH, такому как примерно от 7,2 до 7,8.

Так как соединения согласно формуле (I) содержат группу карбоновой кислоты, указанные фармацевтические композиции могут содержать фармацевтически приемлемую кислоту и/или основание для доведения pH до желаемого значения. Подобным образом, фармацевтическая композиция может также содержать буферные вещества, такие как HCO3-/CO32- или H2PO4-/HPO42-

Согласно другому варианту реализации изобретения, pH фармацевтической композиции не регулируют после добавления агрегата, предложенного в настоящей заявке. Соответственно, такой вариант реализации изобретения относится к водной фармацевтической композиции, предложенной в настоящей заявке, которая имеет pH примерно от 5 до 7. Композиция с кислым pH, т.е. ниже 7, может являться предпочтительной, так как она является менее благоприятной для роста микроорганизмов.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать консервант. Примерами указанных консервантов являются хлорид бензалкония, бензойная кислота, бутилированный гидроксианизол, парабены, например, бутилпарабен, пропилпарабен, этилпарабен, метилпарабен и их смеси, феноксиэтанол, фенилэтиловый спирт или сорбиновая кислота. Фармацевтическая композиция, содержащая консервант, может являться более подходящей для хранения.

Более того, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может быть стерелизованной, например, путем горячей стерилизации или стерильной фильтрации.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может также содержать другие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как консерванты, антиоксиданты, дополнительные агенты для придания изотоничности, красители и т.п.

Согласно вариантам реализации изобретения, относящимся к водным суспензиям, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать суспендирующие и стабилизирующие агенты, такие как неионные поверхностно-активные вещества, гидрофильные полимеры и т.д.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать загуститель. Загустители могут использоваться для получения загущенного раствора, геля, сиропа, крема или мази. Для получения загущенного раствора или геля может использоваться образующий гидрогель материал. Указанный образующий гидрогель материал может быть выбран из группы, состоящей из синтетических полимеров, полусинтетических полимеров и природных камедей.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, представляет собой загущенный водный раствор. Обычно вязкость указанного раствора составляет в пределах 1-100 мПас, чаще от 5 до 50 или от 10 до 25 мПас.

Примеры синтетических полимеров включают поливинилспирт, поливинилпиролидон, полиакриловую кислоту, полиэтиленгликоль, блок-сополимеры типа полоксамеров.

Примеры полусинтетических полимеров включают сложные эфиры целлюлозы, например карбоксиметилцеллюлозу, гидроксиэтилцеллюлозу, гидроксипропилцеллюлозу, метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и этилгидроксиэтилцеллюлозу.

Примеры природных камедей включают гуммиарабик, альгинат, каррагинан, хитозан, пектин, крахмал, ксантановую камедь.

Для придания загущенному раствору или гелю мукоадгезивных свойств могут использоваться материалы, такие как гиалуроновая кислота и ее производные, поперечно сшитые карбомеры типа полиакриловых кислот и типы поликарбофилов и полимеров, легко образующие гели, которые, как известно, плотно прикрепляются к слизистым оболочкам.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать блок-сополимер типа полоксамера. Предпочтительно использовать блок-сополимер типа полоксамера, такой как полимеры, содержащие блоки полиэтиленгликоля и полипропиленгликоля, так как определенные полоксамеры, диспергированные в воде, являются термообратимыми. Примерами термообратимых полоксамеров являются полоксамер 188 и полоксамер 407.

Термообратимые полоксамеры, диспергированные в воде, имеют низкую вязкость, но их вязкость значительно повышается при повышенных температурах, что приводит к образованию геля при температуре тела. Таким образом, можно увеличивать время контакта фармацевтической лекарственной формы, наносимой на сравнительно теплую роговицу. Соответственно, один вариант реализации изобретения относится к фармацевтической композиции, предложенной в настоящей заявке, которая является термообратимой.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтические композиции, предложенные в настоящей заявке, могут содержать дополнительное противовирусное соединение. Примеры указанных соединений включают N-хлортаурин и повидон-йод (PVP-I).

N-хлортаурин (Cl-HN-CH2-CH2-SO3H) является эндогенным противомикробным агентом. Он представляет собой слабо активное хлорсодержащее соединение, которое производится гранулоцитами и моноцитами во время окислительного стресса. Благодаря неспецифическому механизму реакции, т.е. окисления аминогрупп, тио- и ароматических соединений, он обладает бактерицидным действием широкого спектра, подобно антисептикам. Раствор натриевой соли N-хлортаурина (Cl-HN-CH2-CH2-SO3Na), как было показано, убивает бактерии и грибы in vitro. Кроме того, было продемонстрировано его вируцидное действие. Повидон-йод представляет собой стабильный химический комплекс поливинилпирролидодина (повидона, PVP) и элементарного йода.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать дополнительное противовирусное соединение, причем указанное противовирусное соединение представляет собой соединение, применимое для местного лечения инфекций, вызванных герпесом. Примеры указанных соединений включают аналоги гуанозина ацикловир, валацикловир, пенцикловир и фамцикловир и фоскарнет (натрия фосфоноформат гексагидрат).

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, может содержать местный анестетик. Так как ЭКК может являться очень болезненным заболеванием, включение местного анестетика для обезболивания может являться предпочтительным. Кроме того, указанное обезболивание может иметь преимущество с точки зрения готовности пациента продолжить лечение, несмотря на то, что введение само по себе может быть болезненным. Кроме того, использование местного анестетика быстрого действия может позволить пациенту фактически держать глаз открытым для возможности введения композиции непосредственно в роговицу. Примеры подходящих местных анестетиков включают лидокаин, прилокаин и ропивакаин.

Терапия

Согласно другому варианту реализации изобретения, соединение, агрегат или фармацевтическую композицию, предложенные в настоящей заявке, можно применять в терапии.

Лечение глазных инфекций

Как описано выше, было обнаружено, что агрегат, предложенный в настоящей заявке, подавляет связывание HAdV-37 с клетками роговицы человека.

Соответственно, один вариант реализации изобретения относится к соединению, агрегату или фармацевтической композиции, предложенной в настоящей заявке, для применения в лечении и/или предотвращении глазной инфекции, вызванной вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом.

Подобным образом, один вариант реализации изобретения относится к применению соединения, агрегата или фармацевтической композиции, предложенной в настоящей заявке, для приготовления лекарственного средства для применения в лечении и/или предотвращении глазной инфекции, вызванной вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом.

Согласно одному варианту реализации изобретения, указанный вирус может быть выбран из группы, состоящей из HAdV-8, HAdV-19, HAdV-37, HAdV-53, HAdV-54 и HAdV-22,37/H8. Указанный вирус может также быть выбран из HAdV-8, HAdV-19 и HAdV-37, например, представлять собой HAdV-37.

Согласно одному варианту реализации изобретения, глазная инфекция, подвергаемая лечению и/или предотвращению, может представлять собой эпидемический кератоконъюнктивит (ЭКК).

Согласно одному варианту реализации изобретения, глазная инфекция, подвергаемая лечению и/или предотвращению, может представлять собой острый геморрагический конъюнктивит. Острый геморрагический конъюнктивит вызывают такие вирусы, как вариант вируса Коксаки А 24 (CVA24v) и энтеровирус типа 70 (EV70).

Другой вариант реализации изобретения относится к способу предотвращения и/или лечения глазной инфекции, вызванной вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом, такой как ЭКК, включающему введение млекопитающему, включая человека, нуждающемуся в указанном предотвращении и/или лечении, терапевтически эффективного количества соединения или агрегата, предложенного в настоящей заявке, или фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество соединения, предложенного в настоящей заявке. Предпочтительно указанное соединение, агрегат или фармацевтическая композиция вводят в глаз согласно указанному способу.

Фармацевтическая композиция, согласно вариантам реализации изобретения, предложенным в настоящей заявке, может вводиться пациенту в фармацевтически эффективной дозе. Термин «фармацевтически эффективная доза» означает дозу, которая является достаточной для обеспечения желаемых эффектов в отношении состояния, требующего введения указанной композиции. Точная доза может зависеть от активности соединения, способа введения, природы и тяжести нарушения и/или заболевания и общего состояния, например, возраста и массы тела пациента.

Согласно одному варианту реализации изобретения, фармацевтическая композиция, предложенная в настоящей заявке, вводится один или несколько раз в день. Как правило, указанная фармацевтическая композиция вводится три раза в день.

При использовании в настоящей заявке термин «предотвращать/предотвращение» не подразумевает, что состояние и/или заболевание не может возникать заново после применения соединения или фармацевтической композиции согласно вариантам реализации изобретения, предложенным в настоящей заявке для достижения указанного предотвращения. Более того, термин не подразумевает, что состояние не должно возникать по меньшей мере в некоторой степени после указанного применения для предотвращения указанного состояния. Скорее термин «предотвращать/предотвращение» означает, что предотвращаемое состояние, в случае его возникновения несмотря на указанное применение, будет менее острым, чем в отсутствие указанного применения.

Согласно одному варианту реализации изобретения, лечение также включает предварительное лечение, т.е. профилактическое лечение.

Общие положения

Несмотря на то, что настоящее изобретение было описано выше на примере конкретных иллюстративных вариантов реализации, оно не ограничивается конкретными формами, описанными в настоящей заявке. Любую комбинацию вышеперечисленных вариантов реализации изобретения следует рассматривать как находящуюся в рамках изобретения. Точнее, изобретение ограничивается только прилагаемой формулой изобретения, а другие варианты реализации изобретения, отличающиеся от конкретных указанных выше вариантов реализации, являются одинаково возможными в рамках указанной прилагаемой формулы изобретения.

В формуле изобретения термин «содержит/содержащий» не исключает присутствия других соединений или этапов. Кроме того, несмотря на то, что отдельные признаки могут быть включены в различные пункты формулы изобретения, их можно комбинировать, возможно предпочтительным образом, и включение признаков в различные пункты не означает, что комбинация признаков не является возможной и/или предпочтительной. Кроме того, употребление форм единственного числа не исключает множественное число. Употребление существительных в единственном числе, а также с терминами «первый», «второй» и т.д., не исключает множественное число.

Экспериментальная часть

Соединения

Соединения A-K (см. схему 1) синтезировали путем блок-синтеза. Так, из сиаловой кислоты 1 (Johansson, S. М. С.; Nilsson, E.С.; Elofsson, M.; Ahlskog, N.; Kihiberg, J.; Amberg, N.Antiviral Res. 2007, 73, 92-100), соединенной с содержащим в качестве защитной группы Fmoc аминопентанолом, удаляли защитные группы с использованием пиперидина в ДМФА. Неочищенный продукт с использованием EDOHC1 соединяли с любым содержащим в качестве защитной группы Fmoc полиэтиленгликолиевым линкером (PEG 2, 4 или 11) с получением соединений 2-4 или с PDA (10,12-пентакозадииновой кислотой) или гексадеканоевой кислотой с получением соединений 14 и 15, соответственно. Защитные группы из соединений 2-4 удаляли с помощью пиперидина в ДМФА. Затем неочищенные соединения с использованием EDC·HCl соединяли со стеариновой кислотой (для получения соединений 5-7), с тетракозаноевой кислотой (для получения соединений 8-10) или с 10,12-пентакозадииновой кислотой (для получения соединений 11-13). Защитные группы из соединений 5-15 затем удаляли путем обработки NaOMe (0,05 М в МеОН) в течение 1 ч с последующей обработки с добавлением 5 экв. NaOH в течение дополнительных 18 ч. Конечные соединения (А-К) очищали с помощью колоночной хроматографии на SiO2 с использованием системы CH2Cl2:МеОН:H2O. Блок-синтез дает возможность синтеза новых соединений просто путем вариации линкеров (например, длины линкера, типа линкера, типа связи) и кислоты.

Схема 1 Синтез соединений A-K

Подробное описание экспериментальной части для соединений A-K предложено ниже.

В целом:

i. Операции проводили при температуре окружающей среды, т.е. в диапазоне от 17 до 25°C, если иное не указано;

ii. Выпаривание осуществляли путем ротационного выпаривания в вакууме;

iii. Колоночную хроматографию (с помощью флэш-метода) осуществляли с использованием стандартных стеклянных колонок, заполненных силикагелем (35-70 нм, 60Å);

iv. Выходы (если представлены) не обязательно представляют собой максимально достижимые выходы;

v. В целом структуры конечных продуктов подтверждали с помощью ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и/или методов масс-спектрометрии (МС); данные масс-спектрометрии получали с использованием масс-спектрометра Micromass Q-Tof (ИЭР); значения химического сдвига для ЯМР измеряли по «дельта»-шкале [спектры протонного магнитного резонанса определяли с использованием спектрометра Bruker DRX 400, работающего при интенсивности поля 400 МГц]; использовали следующее аббревиатуры: s, синглет; d, дуплет; t, триплет; m, мультиплет;

vi. Промежуточные продукты не обязательно очищали полностью, но их структуру и чистоту оценивали с помощью тонкослойной хроматографии и/или ЯМР анализа;

vii. Использовали следующие аббревиатуры:

aq водный
С Цельсий
d дуплет
дхм дихлорметан
CDCl3 дейтерированный хлороформ
DIPEA N,N-диизопропилэтиламин
ДМФА N,N-диметилформамид
ДМСО диметилсульфоксид
EDC·HCl гидрохлорид N-этил-N'-3-диметиламинопропил)карбодиимида
ИЭР ионизация электрораспылением
EtOAc этилацетат
ч час (часы)
МСВР масс-спектрометрия с высоким разрешением
H2O вода
m мультиплет
MeOD дейтерированный метанол
МеОН метанол
MgSO4 сульфат магния
мг миллиграмм
МГц мегагерц
мл миллилитр
ммоль миллимоль
NaOH гидроксид натрия
NaOMe метокид натрия
ЯМР ядерный магнитный резонанс
s синглет
t триплет
мкл микролитр

Соединение 2 - 6,19-диаза-22-(9Н-флуорен-9-ил)-10,13,16,21-тетраокса-7,20-диоксо-докозанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

1 (150,9 мг, 0,189 ммоль) растворяли в безводном ДМФА (5 мл) и затем к раствору добавляли пиперидин (706 мкл, 7,14 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 часов, после чего растворитель и оставшийся пиперидин выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного промежуточного продукта. Указанный неочищенный промежуточный продукт (36,3 мг, 0,063 ммоль) и Fmoc-NH-(PEG)2-COOH растворяли в ДХМ (1 мл) и раствор охлаждали до 0°C. К раствору добавляли EDC·HCl (18,2 мг, 0,095 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 18 часов. Неочищенный продукт подвергали колоночной флэш-хроматографии (ДХМ/МеОН 25:1) с получением указанного в заголовке соединения (45,0 мг, 71%).

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,28-1,57 (m), 1,87 (s, 3H), 1,90-1,96 (m), 2,01 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,13 (s, 3H), 2,42 (t, 2H), 2,53-2,58 (m, 1H), 3,17-3,27 (m, 3H), 3,38-3,40 (m), 3,55-3,62 (m), 3,68-3,78 (m), 4,02-4,10 (m, 3H) 4,21 (t, 1H), 4,29-4,33 (m, 1H), 4,40 (d, 2H), 4,79-4,86 (m, 1H), 5,19-5,22 (m, 1H), 5,29-5,32 (m, 1H), 5,37-5,44 (m, 2H), 6,37 (t, 1H), 7,28-7,32 (m, 2H), 7,39 (t, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,76 (d, 2H).

МСВР: рассчитано: C49H67N3O19 (M+Na)+ 1024,4266, обнаружено: 1024,4921.

Соединение 3 - 6,25-диаза-28-(9Н-флуорен-9-ил)-10,13,16,19,22,28-гексаокса-7,26-диоксо-октаэйкозанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 2 с использованием Fmoc-NH-(PEG)4-COOH вместо Fmoc-NH-(PEG)2-COOH.

Выход: 83,4 мг (61%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,27-1,57 (m), 1,86-2,04 (m), 2,13 (s, 6H), 2,43 (t, 2H), 2,53-2,58 (m, 1H), 3,17-3,24 (m, 3H), 3,36-3,40 (m), 3,55-3,62 (m), 3,68-3,77 (m), 4,02-4,11 (m, 3H), 4,21 (t, 1H), 4,29-4,32 (m, 1H), 4,39 (d, 2H), 4,79-4,85 (m, 1H), 5,23-5,25 (m, 1H), 5,29-5,32 (m, 1H), 5,36-5,40 (m, 1H), 5,48 (t, 1H), 6,47 (t, 1H), 7,28-7,32 (m, 2H), 7,37-7,41 (m, 2H), 7,60 (d, 2H), 7,75 (d, 2H).

MCBP: рассчитано: C53H75N3O21 (M+Na)+ 1112,4791, обнаружено: 1112,5548.

Соединение 4 - 6,46-диаза-49-(9Н-флуорен-9-ил)-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,48-тридекаокса-7,47-диоксо-нонатетраконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 2 с использованием Fmoc-NH-(PEG)11-COOH вместо Fmoc-NH-(PEG)2-COOH.

Выход: 45,8 мг (60%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 1,23-1,57 (m), 1,86 (s, 3H), 1,88-1,98 (m), 2,01 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,12 (s, 6H), 2,43 (t, 2H), 2,53-2,57 (m, 1H), 3,16-3,27 (m, ЗН), 3,37-3,43 (m, 2H), 3,54-3,62 (m), 3,69-3,75 (m), 3,75-3,77 (m), 4,01-4,10 (m), 4,20 (t, 1H), 4,28-4,32 (m, 1H), 4,34-4,39 (m, 2H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,24-5,31 (m, 2H), 5,35-5,39 (m, 1H), 5,43 (t, 1H), 6,50 (t, 1H), 7,27-7,31 (m, 2H), 7,36-7,40 (m, 2H), 7,58-7,63 (m, 2H), 7,74 (d, 2H).

MCBP: рассчитано: C67H103N3O28 (M+Na)+ 1420,6626, обнаружено: 1420,7222.

Соединение 5 - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-гептатриконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат.2 (43,3 мг, 0,043 ммоль) растворяли в ДМФА (2 мл) и затем добавляли пиперидин (162 мкл, 1,63 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч. Растворитель выпаривали с получением неочищенного промежуточного продукта. Указанный неочищенный промежуточный продукт разделяли на 2 равные порции. Неочищенный промежуточный продукт из одной порции растворяли в ДХМ (1 мл) и затем к раствору добавляли стеариновую кислоту (9,1 мг, 0,032 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. К раствору добавляли EDC·HCl (6,1 мг, 0,032 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч. Реакционную смесь промывали водой (2×5 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт подвергали колоночной флэш-хроматографии (ДХМ/МеОН 25:1→20:1) с получением указанного в заголовке соединения (6,3 мг, 28%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (t, 3H), 1,23-1,31 (m), 1,32-1,63 (m), 1,87 (s, 3H), 1,92-1,96 (m), 2,02 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,14-2,18 (m), 2,45 (t, 2H), 2,54-2,58 (m, 1H), 3,20-3,24 (m, 3H), 3,43-3,46 (m, 2H), 3,53-3,56 (m, 2H), 3,59-3,64 (m), 3,71-3,77 (m), 3,79 (s, 3H), 4,02-4,11 (m), 4,30-4,34 (m, 1H), 4,79-4,86 (m, 1H), 5,20-5,22 (m, 1H), 5,29-5,32 (m, 1H), 5,36-5,41 (m, 1H), 6,13 (t, 1H), 6,42 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C52H91N3O18 (M+Na)+ 1068,6195, обнаружено: 1068,6290.

Соединение 6 - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-тритетраконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 3 вместо 2.

Выход: 14,2 мг (52%).

1H ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,88 (t), 1,25-1-42 (m), 1,46-1,67 (m), 1,79-1,83 (m), 1,88 (s, 3H), 1,91-1,97 (m), 2,03, (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,10-2,19 (m), 2,44-2,47 (t, 2H), 2,54-2,60 (m), 3,18-3,33 (m), 3,42-3,46 (m, 2H), 3,54-3,56 (m, 2H), 3,61-3,65 (m), 3,71-3,77 (m), 3,79 (s, 3H), 4,02-4,11 (m, 3H), 4,30-4,33 (m, 1H), 4,80-4,87 (m, 1H), 5,15,5,17 (m, 1H), 5,30-5,33 (m, 1H), 5,37-5,41 (m, 1H), 6,18 (t, 1H), 6,51 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C56H99N3O20 (M+Na)+ 1156,6720, обнаружено: 1156,7217.

Соединение 7 - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-гептаконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 4 вместо 2.

Выход: 6,0 мг (42%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,88 (t, 3H), 1,25-1,42 (m), 1,46-1,63 (m), 1,88 (s, 3H), 1,90-2,00 (m), 2,03 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,10-2,18 (m), 2,45 (t, 2H), 2,54-2,59 (m), 3,18-3,33 (m), 3,40-3,46 (m, 2H), 3,54-3,56 (m, 2H), 3,61-3,65 (m), 3,71-3,79 (m), 4,02-4,11 (m), 4,29-4,36 (m, 1H), 4,80-4,87 (m, 1H), 5,14-5,17 (m, 1H), 5,30-5,32 (m, 1H), 5,37-5,41 (m, 1H), 6,18 (t, 1H), 6,50 (t, 1H),

MCBP: рассчитано: C70H127N3O27 (M+Na)+ 1464,8555, обнаружено: 1464,8711.

Соединение 8 - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-тритетраконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием тетракозаноевой кислоты вместо стеариновой кислоты.

Выход: 15,9 мг (65%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,85-0,89 (m), 1,15-1,41 (m), 1,46-1,63 (m), 1,88-1,89 (m), 1,90-1,97 (m), 2,02 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,10-2,18 (m), 2,38-2,46 (m), 2,54-2,58 (m), 3,19-3,32 (m), 3,42-3,48 (m, 2H), 3,53-3,56 (m, 2H), 3,60-3,63 (m), 3,71-3,79 (m), 4,03-4,11 (m, 3H), 4,30-4,34 (m, 1H), 4,80-4,86 (m, 1H), 5,19-5,21 (m, 1H), 5,30-5,32 (m, 1H), 5,37-5,41 (m, 1H), 6,14 (t, 1H), 6,42 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C58H103N3O18 (M+Na)+ 1152,7134, обнаружено: 1152,7108.

Соединение 9 - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-нонатетраконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 3 и тетракозаноевой кислоты вместо 2 и стеариновой кислоты.

Выход: 18,3 мг (63%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (t, 3H), 1,24-1,40 (m), 1,46-1,62 (m), 1,87 (s, 3H), 1,90-1,96 (m), 2,02 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,10-2,18 (m), 2,43-2,46 (t, 2H), 2,54-2,59 (m), 3,17-3,30 (m), 3,41-3,45 (m, 2H), 3,53-3,56 (m, 2H), 3,60-3,64 (m), 3,70-3,76 (m), 3,78 (s, ЗН), 4,02-4,11 (m), 4,29-4,33 (m, 1H), 4,79-4,86 (m, 1H), 5,22-5,24 (m, 1H), 5,29-5,32 (m, 1H), 5,36-5,40 (m, 1H), 6,15 (t, 1H), 6,51 (t, 1H),

MCBP: рассчитано: C62H111N3O20 (M+H)+ 1218,7839, обнаружено: 1218,7875.

Соединение 10 - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-тетрагексаконтанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 4 и тетракозаноевой кислоты вместо 2 и стеариновой кислоты.

Выход: 6,2 мг (41%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,86-0,89 (m), 1,25-1,44 (m), 1,46-1,63 (m), 1,88 (s, 3H), 1,90-1,99 (m), 2,02 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,10-2,18 (m), 2,41-2,47 (m), 2,54-2,58 (m, 2H), 3,18-3,33 (m), 3,42-3,48 (m), 3,54-3,56 (m), 3,61-3,65 (m), 3,71-3,79 (m), 4,02-4,11 (m), 4,29-4,35 (m, 1H), 4,80-4,87 (m, 1H), 5,16-5,18 (m, 1H), 5,30-5,32 (m, 1H), 5,37-5,41 (m, 1H), 6,20 (t, 1H),6,51(t, 1H).

MCBP: рассчитано: C76H139N3O27 (M+Na)+ 1548,9494, обнаружено: 1548,9514.

Соединение 11 - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-29,31-тетратетраконта-диинилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 10,12-пентакозадииноевой кислоты вместо стеариновой кислоты.

Выход: 36,3 мг (73%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,86 (t, 3H), 1,23-1,41 (m), 1,42-1,61 (m), 1,86 (s, 3H), 1,89-1,97 (m), 2,01 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,08-2,18 (m), 2,20-2,23 (m), 2,43 (t, 2H), 2,53-2,59 (m, 1H), 3,18-3,31 (m), 3,4-3,44 (m, 2H), 3,52-3,55 (m, 2H), 3,59-3,62 (m), 3,69-3,75 (m), 3,77 (s, 3H), 4,01-4,10 (m), 4,28-4,32 (m, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,28-5,39 (m, 3H), 6,11 (t, 1H), 6,43 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C59H97N3O18 (M+Na)+ 1158,6665, обнаружено: 1158,6655.

Соединение 12 - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-35,37-пентаконтадиинилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 3 и 10,12-пентакозадииноевой кислоты вместо 2 и стеариновой кислоты.

Выход: 21,9 мг (62%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,86 (t, 3H), 1,24-1,39 (m), 1,45-1,62 (m), 1,86 (s, 3H), 1,92-1,95 (m), 2,01 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,10-2,17 (m), 2,20-2,24 (m), 2,45 (t, 2H), 2,53-2,59 (m), 3,17-3,31 (m), 3,41-3,45 (m, 2H), 3,53-3,55 (m, 2H), 3,61-3,64 (m), 3,70-3,76 (m), 3,78 (s, ЗН), 4,01-4,10 (m), 4,28-4,35 (m, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,26-5,31 (m, 2H), 5,35-5,40 (m, 1H), 6,19 (t, 1H), 6,52 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C63H105N3O20 (M+Na)+ 1246,7189, обнаружено: 1246,7118.

Соединение 13 - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-56,58-генгептаконта-диинилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 5 с использованием 4 и 10,12-пентакозадииноевой кислоты вместо 2 и стеариновой кислоты.

Выход: 25,2 мг (50%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (t, 3H), 1,24-1,41 (m), 1,46-1,62 (m), 1,87 (s, 3H), 1,90-2,02 (m), 2,03 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,13-2,18 (m), 2,21-2,24 (m), 2,46 (t, 2H), 2,54-2,58 (m, 1H), 3,17-3,26 (m), 3,42-3,49 (m), 3,54-3,56 (m), 3,62-3,65 (m), 3,70-3,75 (m), 3,79 (s, 3H), 4,02-4,11 (m), 4,29-4,32 (m, 1H), 4,79-4,86 (m, 1H), 5,17-5,20 (m, 1H), 5,29-5,32 (m, 1H), 5,36-5,40 (m, 1H), 6,17 (s, 1H), 6,58 (s, 1H).

MCBP: рассчитано: C77H133N3O27 (M+Na)+ 1554,9024, обнаружено: 1554,9325.

Соединение 14 - 6-аза-7-оксо-16,18-гентриаконта-диинилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

1 (121,9 мг, 0,153 ммоль) растворяли в ДМФА (5 мл) и затем добавляли пиперидин. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере азота в течение 2 ч. Растворитель выпаривали с получением неочищенного промежуточного продукта. Указанный неочищенный промежуточный продукт разделяли на 2 равные порции. Неочищенный промежуточный продукт из 1 порции растворяли в ДХМ (1 мл) и затем к раствору добавляли 10,12-пентакозадииноевую кислоту (37,1 мг, 0,099 ммоль) и реакционную смесь охлаждали до 0°C. К раствору добавляли EDC·HCl (14,6 мг, 0,076 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 20 ч. Реакционную смесь разводили ДХМ и промывали водой (3×5 мл), сушили над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт подвергали колоночной флэш-хроматографии (ДХМ/МеОН 25:1) с получением указанного в заголовке соединения (47,8 мг, 67%), загрязненного 10,12-пентакозадииноевой кислотой, согласно данным ЯМР.

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,86 (t), 1,23-1,35 (m), 1,45-1,58 (m), 1,86 (s, 3H), 1,90-1,93 (m), 2,01 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,11-2,15 (m), 2,22 (t), 2,30 (t, 1H), 2,52-2,58 (m, 1H), 3,18-3,28 (m), 3,70-3,73 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 4,00-4,08 (m), 4,31-4,34 (m, 1H), 4,78-4,85 (m, 1H), 5,28-5,30 (m, 1H), 5,33-5,38 (m, 2H), 5,85 (t, 1H).

MCBP: рассчитано: C50H81N2O14 (M+Na)+ 933,5688, обнаружено: 933,5718.

Соединение 15 - 6-аза-7-оксо-докозанилметил(5-ацетамидо-4,7,8,9-тетра-O-ацетил-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозил)онат

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению 14 с использованием 1 и гексадеканоевой кислоты вместо 10,12-пентакозадииноевой кислоты.

Выход: 37 мг (48%).

1Н ЯМР (400 МГц, CDCl3) δ 0,87 (t, 3H), 1,20-1,30 (m), 1,32-1,65 (m), 1,86 (s, 3H), 1,94 (t, 1H), 2,00-2,05 (m), 2,10-2,16 (m), 2,55 (dd, 1H), 3,15-3,30 (m), 3,72 (dt, 1H), 3,79 (s, 3H), 4,00-4,10 (m), 4,33 (dd, 1H), 4,79-4,87 (m), 5,15-5,20 (m)5,30 (dd, 1H), 5,39 (ddd, 1H), 5,79 (bt, 1H).

Соединение А - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-гептатриконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

5 (6,0 мг, 0,006 ммоль) растворяли в NaOMe (600 мкл, 0,05 М, в МеОН). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч и затем к реакционной смеси добавляли NaOH (30 мкл, 1 М, в воде). Реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч и затем гасили с помощью дуолита С436 (Duolite C436) до достижения нейтрального pH. Реакционную смесь фильтровали, промывали с помощью МеОН и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт подвергали колоночной флэш-хроматографии (ДХМ/MeOH/H2O 80:15:5) с получением указанного в заголовке соединения с количественным выходом.

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,29 (m), 1,36-1,42 (m), 1,48-1,60 (m), 1,89 (m) 2,01 (s, 3H), 2,20 (t, 2H), 2,43-2,46 (m, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,17 (t, 2H), 3,35-3,37 (m), 3,45-3,89 (m).

МСВР: рассчитано: C43H81N3O14 (M+Na)+ 886,5616, обнаружено: 886,5621.

Соединение В - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-тритетраконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 6 вместо 5.

Выход: 3,1 мг(27%).

1H ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,29-1,42 (m), 1,48-1,62 (m), 2,00 (s, 3H), 2,19 (t, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,18 (t, 2H), 3,35-3,38 (m), 3,45-3,89 (m).

МСВР: рассчитано: C47H89N3O16 (M+Na)+ 951,6243, обнаружено:.

Соединение С - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-гептаконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 7 вместо 5.

Выход: количественный.

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,29-1,42 (m), 1,48-1,60 (m), 2,01 (s, 3H), 2,19 (t, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,18 (t, 2H), 3,33-3,37 (m), 3,45-3,89 (m).

МСВР рассчитано: C61H117N3O23 (M+Na)+ 1282,7976, обнаружено: 1282,8201.

Соединение D - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-тритетраконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 8 вместо 5.

Выход: количественный.

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t), 1,29-1,42 (m), 1,48-1,60 (m), 2,01 (s, 3H), 2,19 (t, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,17 (t, 2H), 3,35-3,37 (m), 3,45-3,89 (m).

МСВР: рассчитано: C49H93N3O14 (M+Na)+ 970,6555, обнаружено: 970,6328.

Соединение Е - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-нонатетраконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 9 вместо 5.

Выход: 14,8 мг (95%).

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t), 1,29-1,60 (m), 2,01 (s, 3H), 2,19 (t, 2H), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,84 (m, 1H), 3,12-3,19 (m), 3,35-3,37 (m), 3,47-3,87 (m).

МСВР: рассчитано: C53H101N3O16 (M+Na)+ 1058,7080, обнаружено: 1058,6575.

Соединение F - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-тетрагексаконтанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 10 вместо 5.

Выход: количественный.

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t), 1,29-1,40 (m), 1,49-1,59 (m), 2,00-2,01 (s, 3Н), 2,13-2,21 (m), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,12-3,19 (m), 3,35-3,37 (m), 3,45-3,88 (m).

МСВР: рассчитано: C67H129N3O23 (M+Na)+ 1366,8915, обнаружено: 1388,9717.

Соединение G - 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-29,31-тетратетраконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 11 вместо 5.

Выход: 22,4 мг (73%).

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (m), 1,30-1,40 (m), 1,47-1,63 (m), 2,01 (s, 3H), 2,18-2,26 (m), 2,45 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3.17 (t, 2H), 3,36 (t, 2H), 4,45-3,88 (m).

MCBP: рассчитано: C50H87N3O14 (M+Na)+ 976,6086, обнаружено: 976,5989.

Соединение Н - 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-35,37-пентаконтадиинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 12 вместо 5.

Выход: 16,6 мг (84%).

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,27-1,40 (m), 1,47-1,63 (m), 2,01 (s, 3H), 2,12-2,26 (m), 2,45-2,48 (m, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,10-3,23 (m, 2H), 3,35-3,38 (m, 2H), 3,45-3,88 (m).

MCBP: рассчитано: C54H95N3O16 (M+Na)+ 1064,6610, обнаружено: 1064,6732.

Соединение I - 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-56,58-генгептаконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 13 вместо 5.

Выход: 17,2 мг (98%).

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,30-1,40 (m), 1,49-1,63 (m), 2,01 (s, 3H), 2,18-2,26 (m), 2,46 (t, 2H), 2,81-2,85 (m, 1H), 3,18 (t, 2H), 3,35-3,38 (m, 2H), 3,45-3,88 (m)

MCBP: рассчитано: C68H123N3O23 (M+Na)+ 1372,8445, обнаружено: 1372,8213.

Соединение J - 6-аза-7-оксо-16,18-гентриаконта-диинил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 14 вместо 5.

Выход: 24,2 мг (63%).

1Н ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3Н), 1,30-1,41 (m), 1,47-1,62 (m), 2,03 (s, 3H), 2,18 (t), 2,24(t). 2,80-2,84 (m, 1H), 3,14-3,18 (m, 2H), 3,45-3,90 (m).

MCBP: рассчитано: C41H70N2O10 (M+H)+ 751,5103, обнаружено: 751,4911.

Соединение K - 6-аза-7-оксо-16,18-докозанил 5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновая кислота

Следующее соединение синтезировали аналогично Соединению А с использованием 15 вместо 5.

Выход: 29 мг (количественный %).

1H ЯМР (400 МГц, MeOD) δ 0,90 (t, 3H), 1,25-1,41 (m), 1,46-1,63 (m), 1,85-1,95 (m), 2,02 (s, 3H), 2,17 (t, 2H), 2,83 (dd, 1H), 3,15 (t, 2H), 3,45-3,90 (m).

Образование агрегатов и их последующее приготовление в виде водного раствора Составы готовили либо с помощью ультразвукового аппарата с датчиком (выход 50%, наконечник Microtip), либо экструдера, изготовленного компанией Northern Lipids (Ванкувер, Британская Колумбия, Канада) с использованием поликарбонатных мембранных фильтров с размером пор 100 нм или 200 нм;

ДХМ Дихлорметан
ДПФХ Дипальмитоилфосфатидилхолин
СЦТ Среднецепочечный триглицерид
СФХ Соевый фосфатидилхолин
Tm Температура плавления

Состав 13 (контроль без каких-либо остатков сиаловой кислоты) 10,12-пентакозадииноевую кислоту (3,7 мг, 10 мкмоль) смешивали с ДХМ и помещали в стеклянную пробирку. Растворитель выпаривали и добавляли дистиллированную воду (10 мл). Смесь обрабатывали ультразвуком до получения чистого раствора приблизительно в течение 15 минут. Теплый раствор фильтровали через нейлоновый фильтр (0,8 мкм) для удаления любых недиспергированных липидов и следов титановых частиц из пробы.

Состав 14Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 13 с использованием соединения Н (0,1 мг, 0,1 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,7 мг, 9,9 мкмоль).

Состав 15Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 13 с использованием соединения Н (0,5 мг, 0,5 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,6 мг, 9,5 мкмоль).

Состав 16Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 13 с использованием соединения Н (1,0 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль).

Состав 20J

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 13 с использованием соединения J (0,75 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль).

Состав 24Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 13 с использованием соединения Н (1,0 мг, 1,0 мкмоль), ДПФХ (3,3 мг, 4,5 мкмоль) и холестерина (1,7 мг, 4,5 мкмоль).

Состав 41Н

Соединение Н (2,1 мг, 2,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевую кислоту (3,0 мг, 8,0 мкмоль) смешивали в СНС1з и помещали в стеклянную пробирку. Смесь перемешивали на вортексе и растворитель выпаривали с использованием азота с получением тонкой пленки липидов на поверхности стекла. Добавляли воду Milli-Q (10 мл) и смесь гидратировали при 65°C при перемешивании в течение ночи. Далее дисперсию липосом последовательно (10 циклов) пропускали через поликарбонатный мембранный фильтр (с размером пор 200 нм) при температуре выше Tm (65°C) с помощью экструдера.

Состав 42D

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 41Н с использованием соединения D (1,0 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 44F

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 41Н с использованием соединения F (1,3 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 47Е

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 41Н с использованием соединения Е (1,0 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 48В

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 41Н с использованием соединения В (1,0 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 49G

Состав готовили по аналогии со способом приготовления Состава 41Н с использованием соединения G (1,0 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 50I

Состав готовили по аналогии со способом приготовления состава 41Н с использованием соединения I (1,4 мг, 1,0 мкмоль) и 10,12-пентакозадииноевой кислоты (3,4 мг, 9,0 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 56Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления состава 41Н с использованием соединения Н (1,0 мг, 1,0 мкмоль), s-PC/MCT (1,0 мг/3,4 мг). После обработки ультразвуком в течение 2 минут осуществляли экструдирование с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Состав 59Н

Состав готовили по аналогии со способом приготовления состава 41Н с использованием соединения Н (1,0 мг, 1,0 мкмоль), s-PC (7,2 мг, ~9 мкмоль). Экструдирование осуществляли с использованием поликарбонатного мембранного фильтра (с размером пор 100 нм).

Пример состава 1

Соединение Н и PDA растворяли в хлороформе в концентрации 10,1 мг/мл и 3,41 мг/мл, соответственно. Полученные в результате растворы хранили в холодильнике. В круглодонную колбу на 10 мл добавляли 100 мкл раствора соединения А и 1 мл раствора PDA. Смесь выпаривали до высыхания при 35°C на ротационном испарителе (Heidolph Laborota 4001, Германия). К полученной в результате сухой пленке добавляли 10 мл очищенной путем мембранной фильтрации воды (Milli-Q). Колбу ставили на ультразвуковую ванну (Bandelin Sonora Digitech, Германия) и обрабатывали ультразвуком в течение 10 мин при 50°C и в течение 5 мин при примерно 70°C. В результате получали непрозрачную гомогенную дисперсию розоватого цвета.

Пример состава 2

Дисперсию из Примера состава 1 нагревали примерно до 80°C на водяной бане и экструдировали 11 раз через поликарбонатную мембрану с размером пор 100 нм (Avestin LiposoFast, Канада). Полученную в результате тонкую дисперсию переносили в кварцевую кювету и облучали УФ в течение 5 мин при комнатной температуре (ICT Beam Boost Photoreactor, Германия). В результате получали дисперсию темно-синего цвета.

Пример состава 3

Сухую липидную пленку готовили, как описано в примере состава 1. К пленке добавляли 10 мл водного раствора, состоящего из 2,6% (по массе) глицерина и 0,50% (по массе) гипромеллозы (Sigma-Aldrich, H-3785). После гидратирования в течение 15 мин примерно при 45°C на ультразвуковой бане получали слегка вязкий препарат, подходящий для закапывания в глаз.

Биологическое тестирование

Биологическую активность соединений, агрегатов и лекарственных форм, описанных в настоящей заявке, оценивали с помощью различных анализов, описанных ниже.

Клетки

Клетки НСЕ (эпителия роговицы человека) и клетки А549 культивировали, как описано ранее (Araki-Sasaki, K., Ohasi, K.Y., Sasabe, Т., Hayashi, K., Watanabe, H., Tano, Y., Handa, H., 1995. "An SV-40-immortalized human comeal epithelial cell line and its characterization." Invest. Ophtahlmol. 36, 614-621 and Amberg, N., Ediund, K., Kidd, A.H., Wadell, G., 2000a. Adenovirus type 37 uses sialic acid as a cellular receptor. J. Virol. 74, 42-48.).

Вирусы

Вирионы HAdV37 (штамм 1477) получали следующим образом: 0,3 мл материала HAdV37 для инокуляции (полученного из инфицированных клеток А549) добавляли к клеткам А549 (флаконы 175 см2) и инкубировали в течение 2 часов при 37°C. Не интернализованные вирусы удаляли путем отмывки и клетки далее инкубировали при 37°С в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (DMEM; Sigma-Aldrich) с добавлением 1% эмбриональной бычьей сыворотки (ЭБС; Sigma-Aldrich). Примерно через 72 часа клетки осаждали центрифугированием, ресуспендировали в растворе трис-HCl, pH 7,4, и трижды замораживали-размораживали. После дополнительного цикла центрифугирования супернатант наносили на дискретный градиент плотности CsCl (плотность: 1,27 г/мл, 1,32 г/мл и 1,37 г/мл в 20 мМ трис-HCl, pH 8,0; Sigma-Aldrich) и центрифугировали при 25,000 об/мин (ультрацентрифуга Beckman Optima L-80 ХР с ротором SW41; Beckman Coulter Inc.) в течение 2,5 ч при +4°C. Зону, содержащую вирион, собирали и обессаливали на колонке NAP (Amersham Biosciences АВ, Упсала, Швеция) в стерильном буфере ФСБ с добавлением 10% глицерина (Sigma-Aldrich). Аликвотированные вирионы затем хранили при -80°С до момента их дальнейшего использования, 35S-меченные вирионы Ad37 готовили, как описано выше, за исключением следующего: через 20 часов после инфицирования клетки инкубировали в течение 2 ч в среде DMEM (Sigma-Aldrich) в отсутсвии метионина и цистеина. После этого добавляли изотоп (1,4 мКи/флакон; раствор для мечения белков NEG-772 Easytag Express; Perkin-Elmer). L-цистеин (конечная концентрация 2 мМ; Sigma-Aldrich;) добавляли через 23 часа и 48 часов после инфицирования и 1-метионин (конечная концентрация 1 мМ; Sigma-Aldrich) добавляли через 37,5 часа и 48 часов после инфицирования. Было определено, что удельная радиоактивность меченных вирионов составляла 4×10-6 импульсов в минуту на вирион. HAdV-37 идентифицировали путем переваривания вирусной ДНК с помощью рестрикционных ферментов и сравнения с фрагментами, определенными для штамма, являющегося прототипом HAdV-37 (Wadell, G., Sundell, G., de Jong, J.C., 1981. Characterization of candidate adenovirus 37 by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis of virion polypeptides and DNA restriction site mapping. J. Med. Virol. 7, 119-125.).

Антитела

Кроличью поликлональную антисыворотку против HAdV-37 готовили, как описано ранее (Wadell, G., Allard, A., Hierholzer, J.C., 1999. Adenoviruses. In: Murray, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F.C., Yolken, R.H. (Eds.), Manual of Clinical Microbiology, 7th ed. ASM Press, Washington, pp.970-982.).

Анализ связывания

Прикрепленные клетки НСЕ снимали с помощью ФСБ, содержащего 0,05% ЭДТА (ФСБ-ЭДТА; Merck, Дармштадт, Германия) и позволяли им восстанавливаться в ростовой среде в течение одного часа при 37°C. После отмывки 2×105 клетки НСЕ предварительно осаждали центрифугированием в 96-луночных микропланшетах с V-образным дном, затем ресуспендировали и инкубировали с 358-меченными HAdV-37 вирионами (104 вирионов на клетку) с добавлением различных концентраций анализируемого соединения в 50 мкл буферного раствора (ВВ: среда DMEM, содержащая 1% бычьего сывороточного альбумина [Roche АВ, Стокгольм, Швеция], пенициллин/стрептомицин [Gibco, Карлсбад, Калифорния, США] и HEPES [EuroClone, Милан, Италия]), pH 7,4, при температуре 4°C при легком перемешивании.

Таким образом, вирионы HAdV-37 до момента их добавления к клеткам предварительно обрабатывали различными концентрациями агрегата для анализирования в 96-луночных планшетах в течение 1 ч при 4°C при осторожном перемешивании.

Еще через один час несвязанные вирионы удаляли путем отмывки и ассоциированную с клетками радиоактивность измеряли с помощью сцинтилляционного счетчика Wallac 1409 (Perkin-Elmer).

IC50 могло быть определено путем сравнения ассоциированной с клетками радиоактивности для клеток, обработанных разными концентрациями тестируемого агрегата.

Ниже в Таблице 1 представлены результаты для некоторых составов, описанных в настоящей заявке.

Таблица 1
Подавление связывания вирионов HAdV-37 с клетками НСЕ с помощью составов, описанных в настоящей заявке
Состав IC50 Состав IC50
13 (контроль) 42D +++
14Н +++ 44F +++
15Н +++ 47Е +++
16Н ++++ 48В +
20J ++/+++ 49G +
24Н + 501 +++
41Н ++ 56Н +
- отсутствие подавления
+ более 0%, но менее 50% подавления при концентрации 50-100 мкМ
++ 50% подавление при концентрации 25-50 мкМ
+++ 50% подавление при концентрации 5-25 мкМ
++++ 50% подавление при концентрации 5 мкМ или менее

Как видно из Таблицы 1, различные соединения и агрегаты, описанные в настоящей заявке, способны подавлять связывание вирионов HAdV-37 с клетками НСЕ. В данном контексте необходимо отметить, что IC50 для сиаловой кислоты составляет примерно 2-5 мМ. Кроме того, следует отметить, что IC50, при ссылке на составы, относится к содержанию остатков сиаловой кислоты в составе.

Анализ агрегации

35S-меченые HAdV37 вирионы (5×108 на лунку) инкубировали в присутствии или в отсутствие Состава 16Н (содержащей 0,05 мМ остатков сиаловой кислоты) в ВВ при +4°С. Через один час образцы центрифугировали при различных скоростях (1000 об/мин, 4000 об/мин, 7000 об/мин, 10,000 об/мин, 13,000 об/мин) с использованием центрифуги Beckman Coulter Microfuge 22R (Beckman Coulter Inc., Фуллертон, Калифорния, США). Радиоактивность в супернатанте (до 90 мкл) и в осадке (ниже 10 мкл) измеряли с использованием жидкостного сцинтилляционного счетчика, как описано выше.

Как видно из Фигуры 1, Состав 16Н вызывает агрегацию HAdV37. «S» означает супернатант, и «Р» означает осадок. Соответственно, соединение Н является поливалентным соединением с точки зрения его остатков сиаловой кислоты.

Анализ инфекционности

Немеченые вирионы HAdV-37 (4×108 на лунку в 300 мкл ВВ) инкубировали при +4°С в 24-луночных планшетах вместе с различными концентрациями состава 16Н. Через 1 ч смесь добавляли к клеткам НСЕ, растущим в виде монослоя на стеклах в 24-луночных планшетах (2×105 клетки/на лунку) и инкубировали на льду. Через один час лунки промывали три раза 1% SHEM (средой для культивирования эпителиальных клеток с добавлением гормонов) при+4 С (Araki-Sasaki, K., Ohasi, K.Y., Sasabe, Т., Hayashi, K., Watanabe, Н., Tano, Y., Handa, Н., "An SV-40-immortalized human comeal epithelial cell line and its characterization " Invest. Ophtahlmol. 1995, 36, 614-621)) для удаления несвязанных вирионов и инкубировали в течение 44 ч при 37°C для возможности инфицирования. Стекла промывали с помощью фосфатно-солевого буфера (ФСБ, pH 7,4), фиксировали метанолом (99%) и инкубировали с кроличьими поликлональной антисывороткой против HAdV37 (разведение 1:200 на ФСБ) при комнатной температуре (RT). Через один час стекла промывали три раза с помощью ФСБ и инкубировали со свиными антикроличьими меченными FITC антителами (DakoCytomation, Глоструп, Дания) при RT (разведение 1:200 на ФСБ). Стекла заключали во флуоресцентную заключающую среду (DakoCytomation) и анализировали с помощью иммунофлуоресцентного микроскопа (Axioskop2, Carl Zeiss, Германия; увеличение 10х).

Как видно из Фигур 2 и 3, состав 16Н существенно подавляет инфицирование клеток НСЕ вирусом HAdV-37 (IC50 составляет приблизительно 0,7 мкМ с учетом остатков сиаловой кислоты, присутствующих в агрегатах).

1. Соединение согласно формуле (I):

где
R1 представляет собой метальную или этильную группу;
R2 представляет собой R3 или R4;
«X» представляет собой О или S; и
«А» представляет собой С3-7 алкандиил, если R2 представляет собой R3, и С2-7 алкандиил, если R2 представляет собой R4, где X и R2 связаны с разными атомами углерода указанного алкандиила, и где указанные разные атомы углерода представляют собой наиболее удаленные друг от друга атомы углерода в указанном алкандииле;
R3 выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О)R5, OC(O)R5, C(O)N(C0-3алкила)R5 и C(O)OR5, где R5 представляет собой линейную углеродную цепь, содержащую от 14 до 30 атомов углерода; причем указанная углеродная цепь является насыщенной или содержит одну или более двойных и/или тройных связей; кроме того, указанная углеродная цепь является незамещенной или замещенной одной или более С1-С5 алкильными группами;
R4 представляет собой заместитель согласно формуле (II):

D(CH2)m(OCH2CH2)n(CH2)pER7 (II)

где
«D» связан с «А»;
«D» выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(О), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O;
целое число «m» представляет собой от 0 (нуля) до 3;
целое число «n» представляет собой от 1 до 15;
целое число «р» представляет собой от 0 (нуля) до 3;
«Е» выбран из группы, состоящей из N(C0-3алкила)С(О), ОС(О), C(O)N(C0-3алкила) и С(O)O; и
R7 представляет собой группу R5, определенную выше,
в виде кислоты в незаряженной протонированной форме, фармацевтически приемлемой соли присоединения или сольвата,
при этом указанное соединение находится в виде чистого стереоизомера или в виде аномерной смеси, содержащей указанное соединение, причем в указанной аномерной смеси преобладает α-аномер.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что «А» представляет собой неразветвленный С2-5алкандиил с прямой цепью; R1 представляет собой метил; «X» представляет собой О; R2 представляет собой R4; и R5 представляет собой незамещенную прямую углеродную цепь.

3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что R2 представляет собой R4; и R7 представляет собой R5, при этом R5 представляет собой незамещенную прямую углеродную цепь, содержащую от 20 до 30 атомов углерода.

4. Соединение по п. 3, отличающееся тем, что R5 содержит по меньшей мере одну двойную или тройную связь.

5. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что R5 содержит две сопряженные тройные связи.

6. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R2 представляет собой R4; R7 представляет собой R5; целое число «n» представляет собой от 4 до 15; D представляет собой NHC(O) или ОС(О); целое число «m» представляет собой 2; целое число «р» представляет собой 0 (ноль); и Е представляет собой NHC(O) или ОС(О); или
R2 представляет собой R4; R7 представляет собой R5; целое число «n» представляет собой от 4 до 15; D представляет собой C(O)NH или С(O)O; целое число «m» представляет собой 2; целое число «р» представляет собой 0 (ноль); и Е представляет собой NHC(O) или ОС(О).

7. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что R2 представляет собой R3, a R3 представляет собой NHC(O)R5.

8. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что указанное соединение выбрано из группы, состоящей из 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-тритетраконтанил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-нонатетраконтанил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-тетрагексаконтанил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,19-диаза-10,13,16-триокса-7,20-диоксо-29,31-тетратетраконта-диинил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты, 6,25-диаза-10,13,16,19,22-пентаокса-7,26-диоксо-35,37-пентаконтадиинил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты и 6,46-диаза-10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46-додекаокса-7,47-диоксо-56,58-генгептаконта-диинил-5-ацетамидо-3,5-дидеокси-D-глицеро-α-D-галакто-2-нонилопиранозилоновой кислоты.

9. Соединение по любому из пп. 1-8 для применения для лечения и/или предотвращения глазной инфекции, вызванной вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом.

10. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что указанная инфекция вызвана вирусом, выбранным из группы, состоящей из HAdV-8, HAdV-19, HAdV-37, HAdV-53, HAdV-54 и HAdV-22,37/H8.

11. Соединение по п. 9, отличающееся тем, что указанная инфекция представляет собой эпидемический кератоконъюнктивит.

12. Агрегат для лечения и/или предотвращения глазной инфекции, вызываемой вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, инфицируемой указанным вирусом, содержащий множество молекул соединения по любому из пп. 1-8 в количестве от 0,1 до 25 мол. % и множество амфифильных молекул, отделенных от указанного соединения и способных образовывать двойные слои в воде, где амфифильная молекула представляет собой карбоновую кислоту, фосфоглицерид или сфингомиелин, причем указанная амфифильная молекула содержит линейную углеродную цепь, содержащую по меньшей мере 12, например по меньшей мере 16 или по меньшей мере 20, атомов углерода.

13. Агрегат по п. 12, отличающийся тем, что указанный агрегат содержит от 5 до 15 мол. % указанного соединения.

14. Агрегат по п. 12, отличающийся тем, что указанный агрегат содержит по меньшей мере 40 мол. % указанных амфифильных молекул и необязательно холестерин в количестве, меньшем или равном количеству амфифильных молекул.

15. Агрегат по п. 12, отличающийся тем, что указанная амфифильная молекула содержит по меньшей мере одну тройную связь.

16. Агрегат по п. 12, отличающийся тем, что указанная амфифильная молекула содержит карбоксильную группу.

17. Агрегат по п. 12, отличающийся тем, что указанная амфифильная молекула представляет собой 10,12-пентакозадииноевую кислоту.

18. Фармацевтическая композиция для применения для лечения и/или предотвращения глазной инфекции, вызванной вирусом, который связывается с концевыми остатками сиаловой кислоты, присутствующими на поверхности клетки, подвергаемой инфицированию указанным вирусом, где указанная композиция содержит агрегат по любому из пп. 12-17 и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель, при этом указанная композиция представляет собой водную композицию, содержащую от 0,001 до 10 мМ, например от 0,01 до 1 мМ, соединения по любому из пп. 1-8.

19. Фармацевтическая композиция по п. 18, отличающаяся тем, что содержание воды в указанной композиции составляет по меньшей мере 90 масс. %.

20. Фармацевтическая композиция по п. 18, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит агент, такой как глицерин, для получения изотонического раствора, загуститель, дополнительное противовирусное соединение и/или местный анестетик.

21. Фармацевтическая композиция по п. 20, отличающаяся тем, что указанная композиция содержит от 2 до 3 масс. % глицерина.

22. Фармацевтическая композиция по п. 18, отличающаяся тем, что указанная композиция предназначена для введения в глаз.

23. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 18-22, отличающаяся тем, что указанная инфекция вызвана вирусом, выбранным из группы, состоящей из HAdV-8, HAdV-19, HAdV-37, HAdV-53, HAdV-54 и HAdV-22,37/H8.

24. Фармацевтическая композиция по любому из пп. 18-22, отличающаяся тем, что указанная инфекция представляет собой эпидемический кератоконъюнктивит.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу определения и количественной оценки необычно модифицированных гликанов, который может использоваться при анализе гликанов. Предложенный способ включает стадии: a) обеспечения препарата гликана, содержащего необычно модифицированные гликаны, выбранные из группы, содержащей сульфатированные гликаны, фосфорилированные гликаны, полиацетилированные сиалированные гликаны и их комбинации, где указанные необычно модифицированные гликаны являются отрицательно заряженными, и где препарат гликана получен путем выделения гликанов и сиаловых кислот из терапевтической композиции гликопротеина, где сиаловые кислоты выделяют путем воздействия на терапевтическую композицию гликопротеина по меньшей мере одного агента, который расщепляет остатки сиаловых кислот, в условиях, обеспечивающих расщепление сиаловых кислот; b) подвергания препарата гликана хроматографическому методу разделения, который разделяет гликаны на основании отношения заряда к массе, посредством чего происходит разделение указанных необычно модифицированных гликанов; и c) количественного определения, по меньшей мере, одного отделенного необычно модифицированного гликана, используя, по меньшей мере, один стандарт количественной оценки.

Изобретение относится к новому классу нуклеиново-кислотных лигандов с высокой степенью сродства, которые специфически связываются с нужной молекулой-мишенью. .

Изобретение относится к способу получения пента-1,2,3,4,6-(2-глицидилоксиэтокси)-этилового эфира глюкозы и использованию его в композиции для химической сшивки коллагенсодержащих эндопротезов биологического происхождения, что может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к средству для профилактики и/или лечения аллергического заболевания, выбранного из поллиноза, аллергического ринита, аллергического конъюнктивита, атопического дерматита и астмы, и представляет собой низкомолекулярное полисульфатированное производное гиалуроновой кислоты.

Изобретение относится к новым омега-3 липидным соединениям общей формулы (I) или к их любой фармацевтически приемлемой соли, где в формуле (I): R1 и R2 являются одинаковыми или разными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, гидроксигруппы, С1-С7алкильной группы, атома галогена, C1-С7алкоксигруппы, С1-С7алкилтиогруппы, С1-С7алкоксикарбонильной группы, карбоксигруппы, аминогруппы и С1-С7алкиламиногруппы; Х представляет собой карбоновую кислоту или ее карбоксилат, выбранный из этилкарбоксилата, метилкарбоксилата, н-пропилкарбоксилата, изопропилкарбоксилата, н-бутилкарбоксилата, втор-бутилкарбоксилата или н-гексилкарбоксилата, карбоновую кислоту в форме триглицерида, диглицерида, 1-моноглицерида или 2-моноглицерида, или карбоксамид, выбранный из первичного карбоксамида, N-метилкарбоксамида, N,N-диметилкарбоксамида, N-этилкарбоксамида или N,N-диэтилкарбоксамида; и Y является С16-С22 алкеном с двумя или более двойными связями, имеющими Е- и/или Z-конфигурацию.
Данное изобретение касается порошковой композиции кристаллического мальтита, отличающейся тем, что имеет среднеобъемный диаметр частиц по результатам лазерной дифракции от 10 до 150 мкм; имеет содержание мальтита от 80 до 99,9 вес.%; по меньшей мере, 50 вес.% ее частиц проходит через сито, имеющее порог задержания 2000 мкм согласно тесту А1; по меньшей мере, 35 вес.% ее частиц проходит через сито, имеющее порог задержания 2000 мкм согласно тесту А2; и включает от 0,1 до 20 вес.%, по меньшей мере, одного нерастворимого в воде средства против слеживания, причем указанное средство против слеживания обладает гигроскопичностью, определенной согласно тесту В, от 2,5 до 25% и указанное средство против слеживания выбирают из группы, включающей пирогенный диоксид кремния, алюмосиликат натрия, безводный трикальция фосфат и обезвоженный картофельный крахмал (особенно обезвоженный картофельный крахмал, имеющий менее 12% остаточной воды, предпочтительно имеющий менее 10% остаточной воды, предпочтительно имеющий менее 8% остаточной воды, предпочтительно имеющий 6% остаточной воды) и их смеси.
Изобретение относится к органической химии, а именно к способу получения алкилполиглюкозидов (АПГ), являющихся неионогенными поверхностно-активными веществами, изготовляемыми из растительного сырья.

Изобретение относится к группе соединений общей формулы (I), где R1, R2, R3, R4, R5 и R6 независимо друг от друга означают C1-4 алкил, -SO3H, полисульфатированную -гликозильную или полисульфатированную дигликозильную группу, при условии, что, по меньшей мере, один из R1-R 6 представляет собой полисульфатированную -гликозильную или полисульфатированную дигликозильную группу, или их фармацевтически приемлемым солям, где гликозильная группа содержит молекулу пентопиранозы или гексопиранозы с конфигурацией по выбору, а дигликозильная группа содержит молекулу пентопиранозы или гексопиранозы с конфигурацией по выбору, одна гидроксильная группа которой гликозилирована другой молекулой пентопиранозы или гексопиранозы с конфигурацией по выбору.

Изобретение относится к олигосахариду, пригодному для вакцины против менингита А, включающему первую маннозную единицу, имеющую спейсер в альфа-конфигурации в С-1, где указанный спейсер способен к конъюгации с белком, и соединенную со второй маннозной единицей посредством 1,6-связи, которая соединяет С-6 первой единицы с С-1 второй единицы, при этом 1,6-связь включает фосфонат.

Изобретение относится к области биологии, медицины и ветеринарии. Предложено применение рекомбинантного гистонного белка Н1.3 в качестве ингибитора аденовирусной трансдукции эукариотических клеток.

Группа изобретений относится к медицине и касается иммуногенной композиции, которая содержит комбинацию следующих частей: (i) полимеразной части, содержащей по меньшей мере 450 аминокислотных остатков полимеразного белка, полученного из первого HBV-вируса; (ii) сердцевинной части, содержащей по меньшей мере 100 аминокислотных остатков сердцевинного белка, полученного из второго HBV-вируса; и (iii) оболочечной части, содержащей одну или более иммуногенную область из 20-100 последовательных аминокислотных остатков белка HBsAg, полученного из третьего HBV-вируса; или комбинацию нуклеиновокислотных молекул, кодирующих указанную полимеразную часть, указанную сердцевинную часть и указанную оболочечную часть.

Изобретение относится к противовирусным средствам, а именно к синтетическим биологически активным производным, и может быть использовано в фармацевтической промышленности, медицине, растениеводстве и в биотехнологиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой применение в качестве дополнения к стандартным методам терапии комплекса антиоксидантных витаминов и аминокислот, состоящего из альфа-токоферола, L-метионина, убихинона, селена, фосфолипидов и омега 3,6 жирных кислот для лечения папилломавирус-ассоциированных предраковых заболеваний шейки матки и профилактики канцерогенеза при папилломавирусной инфекции.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой фармацевтическую композицию для лечения папилломатоза различной локализации, содержащую рекомбинантный интерферон, выбранный из группы: рекомбинантный интерферон-альфа, рекомбинантный интерферон-бета, рекомбинантный интерферон-гамма, а также дополнительно цистеин и витамин А или бета-каротин и фармацевтически приемлемую основу, причем компоненты в композиции находятся в определенном соотношении в г на 1 г.
Изобретение относится к медицинской вирусологии и микробиологии. Способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов включает введение в организм модельных животных контрольной и испытуемой групп по заданной схеме суспензии исследуемого противовирусного препарата.
Наверх