Способ подготовки биоматериала для пцр диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (вл крс)



Способ подготовки биоматериала для пцр диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (вл крс)
Способ подготовки биоматериала для пцр диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (вл крс)

 


Владельцы патента RU 2566071:

Государственное науное учреждение Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт (УрНИВИ) (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС). Осуществляют взятие образцов крови животного. Для подготовки к ПЦР диагностике используют образцы биоматериала в виде клеточной культуры СС81, культивированной на среде Игла MEM в виде многоядерных клеточных образований - синтициев. В качестве отрицательного контроля используют лейкоциты от животного, отрицательного по ВЛ КРС, а также незараженную культуру. Достигается повышение точности выявления ВЛ КРС с помощью ПЦР за счет особенностей клеточной линии фибробластов легкого кошки СС81 формировать синцитий при наличии в образцах вируса. 2 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и вирусологии, в частности к методам лабораторной диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС).

Лейкоз КРС - злокачественное вирусное лимфопролиферативное заболевание. Ретровирус ВЛ КРС, относящийся к семейству Retroviridae, роду Deltaretrovirus, интегрируется в ДНК лейкоцитов хозяина и пребывает в латентном состоянии в большом количестве клеток в течение длительного периода времени, что затрудняет его определение и выявление заболевших животных.

Известны различные диагностические методы для тестирования образцов крови КРС на наличие вируса ВЛ КРС, в частности и серологические методы (РИД, ИФА), и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Однако с помощью серологических методов невозможно выявить ВЛ КРС на ранних стадиях инфекции, что особенно важно для своевременной изоляции здоровых телят от ВЛ КРС инфицированных животных. ПЦР является более чувствительным методом, но при низкой нагрузке провируса ВЛ КРС на начальных стадиях заболевания этот метод не всегда эффективен (см. патенты РФ №2377962; 2379683; 2445370).

Известен также синцитиальный тест, который используется для исследований вируса лейкоза крупного рогатого скота (КРС) в Научно-исследовательском Ветеринарном Институте в Пулавы, Польша (Jan Stec, Leokadia Bicka, Bozenna Kozaczynska, Jacek Kuzmak. Lymphoproliferation assay in cattle naturally infected with bovine leukemia virus (BLV) and bovine immunodeficiency virus (BIV). Bulletin of Veterinary Institute. Pulawy 45, 117-123, 2001). Однако данный метод имеет ряд недостатков. Во-первых, при малейшем нарушении стерильности возможна контаминация образцов, тем более, если в одном культуральном планшете их находится несколько. Кроме того, в связи с тем, что культура клеток СС81 чувствительна к нескольким вирусам семейства Retroviridae, для подтверждения диагноза на ВЛ КРС инфекцию по методике необходимо проводить контрольный иммунопероксидазный тест, что требует дополнительных манипуляций, времени и дорогостоящих расходных материалов и растворов (при общем времени диагностики 10-11 суток).

Задачей изобретения является создание способа подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота, позволяющего определить наличие ВЛ КРС в образцах крови телят на ранних стадиях инфекции и проводить диагностику с использованием существующей серийной аппаратуры и тест-систем и не требующего дополнительного специального обучения и стажировки сотрудников диагностических лабораторий при сокращении общего времени постановки диагноза, способного выявлять заболевание у телят с 15-30 дневного возраста.

Поставленная задача решается за счет особенностей клеточной линии фибробластов легкого кошки СС81 формировать синцитий при наличии в образцах вируса ВЛ КРС, увеличивая копийность вируса за счет репликации вириона в исследуемых образцах для повышения точности выявления вируса с помощью ПЦР, при этом способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС), включающий взятие образцов крови животного, подготовку образца для исследований и диагностику подготовленного образца, характеризуется тем, что для подготовки к ПЦР диагностике используют образцы биоматериала в виде клеточной культуры СС81, культивированной на среде Игла MEM в виде многоядерных клеточных образований - синтициев, при этом для культивирования клеток СС81 используют питательную среду Игла MEM с L-глутамином и двойным набором аминокислот с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки, причем концентрация сыворотки в питательной среде равна 10%, а для стерилизации сыворотки используют прогревание при температуре 56°C в течение 30 минут, причем культуру культивируют в пластиковых флаконах при температуре 37°C с полной сменой среды 3 раза в неделю, а при заражении СС81 в среду Игла MEM с 10% эмбриональной сывороткой КРС вместе с лейкоцитами добавляют три антибиотика: пенициллин 100 ЕД/см3, стрептомицин 100 мкг/см3, амфотерицин 5 ЕД/мл, а также глутамин, при этом в качестве отрицательного контроля используют лейкоциты от животного, отрицательного по ВЛ КРС, а также незараженную культуру.

Предложенный способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота основан на известных наблюдениях аргентинского ученого Ferrer J.F., который описал способность культуры клеток к образованию синцития под воздействием вируса ВЛ КРС (см. Ferrer J.F., Piper С.Е., Abt D.A., Marshak R.R. Diagnosis of bovine leukemia virus infection: evaluation of serologic and hematologic tests by a direct infectivity detection assay. American Journal of Veterinary Research, 1997; Dec. 38(12): 1977-81).

Разработанный способ выявления ВЛ КРС с помощью культуры клеток СС81 в отличие от прототипа включает ряд существенных изменений, что и является новизной изобретения.

В отличие от методики, которая послужила прототипом для данного изобретения, последующую концентрацию эмбриональной сыворотки КРС в среде снижают до 6% и 2%, вместо 8% и 6% (через 2 и 4 дня после заражения соответственно). По наблюдениям используемые концентрации сыворотки положительно влияют на заражение клеточной культуры вирусом, предположительно содержащимся в лейкоцитах ВЛ КРС положительного животного.

Также новизной является то, что вместо затратного по времени и экономически невыгодного пероксидазного теста для подтверждения наличия вируса ВЛ КРС в образцах с образованием синцития в способе используется дополнительный уточняющий тест клеточной культуры в 7-й день после заражения методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Более подробно проведение синцитиального теста описывается в следующей последовательности в приведенном примере:

Предварительно готовят клеточную культуру СС81, раскапывают по 2 мл на лунку в 12-луночную плашку и инкубируют в течение 2-х дней при 37°C в СО2-термостате. Через 2 суток в сформировавшийся монослой СС81 добавляют лейкоцитарную взвесь, полученную из образцов крови исследуемых КРС следующим образом:

Параллельно с подготовкой клеточной культуры СС81 у животных с подозрением на лейкоз проводят забор крови в вакуумные пробирки с ЭДТА объемом 10 мл. Взятую кровь центрифугируют при 2600 об/мин в течение 30 мин. Далее нужно удалить пипеткой супернатант и собрать интерфазу светлого цвета на границе плазмы и эритроцитов, содержащую лейкоциты. В данную жидкость добавляют 4 мл стерильной дистиллированной холодной воды, охлажденной до температуры 4-8°C, перемешивают в течение 30 сек и добавляют 1 мл стерильного 4,5% хлорида натрия с последующим перемешиванием. После этого повторяют центрифугирование при 2600 об/мин в течение 30 мин. Пипеткой удаляют супернатант и ресуспендируют осадок в 8 мл стерильного фосфатного буфера. Проводят центрифугирование при 1500 об/мин в течение 15 мин. Удаляют супернатант и повторно промывают осадок путем добавления 8 мл фосфатного буфера, сильно взбалтывают. Еще раз центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Полученную лейкоцитарную взвесь ресуспендируют в 6 мл 10% среды с добавлением 3-х антибиотиков: пенициллин, стрептомицин (по 100 ЕД (мкг/см3), амфотерицин (5 ЕД/мл) и глутамина. Все этапы центрифугирования проводят при комнатной температуре. В качестве положительного контроля используют лейкоциты от животного, положительного по ВЛ КРС. В качестве отрицательного контроля используют лейкоциты от животного, отрицательного по ВЛ КРС, а также незараженную культуру. Лейкоцитарную взвесь, ресуспендированную в 10% среде с антибиотиками, раскапывают в лунки планшета, содержащие 2-дневный монослой (по три лунки на каждую пробу) (фиг. 1).

Приготовление фосфатного буфера (без Са++ и Mg++), который используется для получения лейкоцитарной взвеси, проводят следующим образом:

NaCl - 4 гр

KCl - 0.1 гр

Na2HPO4 × 12Н2О - 1.45 гр

КН2РО4 - 0.1 гр

Вода редистиллят - до 500 мл

Подсчет количества лейкоцитов производят в камере Горяева. Для заражения монослоя СС81 необходимо наличие не менее 5×106 клеток в 1 мл среды.

Через 2 и 4 дня после заражения культуры среду из лунок удаляют и добавляют свежую среду с концентрацией сыворотки 6% и 2% соответственно. На фиг. 2А изображен монослой СС81 через 2 дня после добавления питательной среды, содержащей лейкоциты от ВЛ КРС положительного барана. В 7-й день после заражения культуры клетки трехкратно промывают фосфатным буфером и окрашивают по методу Грунвальда-Гимза следующим образом:

Раствор Грунвальда добавляют на 3 минуты, при этом лунки должны быть полностью покрыты жидкостью. Далее раствор Грунвальда аккуратно удаляют дозатором и несколько раз промывают клетки дистиллированной водой. Затем добавляют на 15 минут свежий раствор Гимза (готовят из расчета 1,5 мл раствора и 23,5 мл дистиллированной воды). После этого планшет осторожно промывают водой. Окрашенную клеточную культуру исследуют с помощью микроскопа. ЦПД, вызванное ВЛ КРС, наблюдают в виде синцитиев - многоядерных клеточных образований (фиг. 2, В, Г). Монослой интактной клеточной культуры СС81 в качестве отрицательного контроля изображен на фиг. 2Б. Далее полученную клеточную культуру направляют на ПЦР диагностику.

На фиг. 1. Представлено схематическое изображение 12-луночного культурального планшета, содержащего 2-дневный монослой СС81 после добавления 10% среды Игла MEM (смотрите выше) в виде 12 розовых кружков. Маленькие желтые кружки изображают лейкоциты. Лунки A1, В1, С1: в среду добавлена лейкоцитарная взвесь от отрицательного животного по ВЛКРС (отрицательный контроль); лунки А2, В2, С2: в среду добавлена лейкоцитарная взвесь от исследуемого животного; лунки A3, В3, С3: в среду добавлена лейкоцитарная взвесь от положительного по ВЛ КРС животного (положительный контроль); лунки А4, В4, С4: незаряженный монослой в качестве дополнительного отрицательного контроля.

На фиг. 2 представлены изображения клеточной культуры СС81, полученные на инвертированном микроскопе Карл Цейс Axio Observer A1. А: монослой клеточной культуры СС81 через 2 суток после добавления 10% среды (смотрите выше), содержащей лейкоциты, полученные из крови барана, положительного по ВЛ КРС. Лейкоциты отмечены стрелками; Б: монослой незараженной культуры СС81 в 7-й день синцитиального теста. В, Г: примеры образования синцитиев в монослое клеточной культуры СС81 на 7-й день после заражения лейкоцитами от ВЛ КРС положительного барана. Стрелки указывают на образование синцитиев, содержащих 4 ядра (В) и 5 ядер (Г) соответственно. Клеточную культуру окрашивали по методу Грунвальда-Гимза. Ядра и цитоплазма окрашены в розовый и фиолетовый цвет соответственно.

Опыты по отработке параметров предложенного способа проводили на базе отдела мониторинга и прогнозирования инфекционных заболеваний животных ФГБНУ «Уральский научно-исследовательский ветеринарный институт» г. Екатеринбург. Предложенный способ апробирован с положительными результатами и регулярной воспроизводимостью на пробах и образцах крови, полученных из неблагополучных хозяйств Свердловской, Курганской и Тюменской областей Уральского федерального округа, включая диагностику образцов крови телят в возрасте от 15 дней до 3 месяцев, что путем других диагностических методик ранее было сделать практически невозможно.

Вторичные признаки способа, - как использование в качестве добавки вместе с лейкоцитами пенициллина, стрептомицина (по 100 ЕД (мкг/см3)), амфотерицина (5 ЕД/мл) и глутамина, концентрация эмбриональной сыворотки в питательной среде 10%, а также другие признаки, определены и обоснованы практически опытным путем и обеспечивают заявленный конечный результат.

Внедрение предложенного способа, который можно считать ранней диагностикой возбудителя лейкоза на основе ПЦР, позволит определить вирусоносителей у молодняка крупного рогатого скота уже с возраста 15-20 дней.

Разработанная ранняя диагностика лейкоза позволит повысить эффективность оздоровления сельскохозяйственных предприятий от инфекции.

Неочевидным эффектом предложенного способа является то, что за счет подготовки биоматериала для ПЦР диагностики по предложенной схеме с выращиванием культуры клеток СС81 на среде Игла MEM при заданных параметрах увеличивается копийность вируса, что повышает эффективность ПЦР диагностики и позволяет выявлять вирусоносителей среди телят эмбрионального заражения в возрасте 15-30 дней, снижая затраты на оздоровление стада.

Способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС), включающий взятие образцов крови животного, подготовку образца для исследований и диагностику подготовленного образца, характеризующийся тем, что для подготовки к ПЦР диагностике используют образцы биоматериала в виде клеточной культуры СС81, культивированной на среде Игла MEM в виде многоядерных клеточных образований - синтициев, при этом для культивирования клеток СС81 используют питательную среду Игла MEM с L-глутамином и двойным набором аминокислот с добавлением эмбриональной телячьей сыворотки, причем концентрация сыворотки в питательной среде равна 10%, а для стерилизации сыворотки используют прогревание при температуре 56°C в течение 30 минут, причем культуру культивируют в пластиковых флаконах при температуре 37°C с полной сменой среды 3 раза в неделю, а при заражении СС81 в среду Игла MEM с 10% эмбриональной сывороткой КРС вместе с лейкоцитами добавляют три антибиотика: пенициллин 100 ЕД/см3, стрептомицин 100 мкг/см3, амфотерицин 5 ЕД/мл, а также глутамин, при этом в качестве отрицательного контроля используют лейкоциты от животного, отрицательного по ВЛ КРС, а также незараженную культуру.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения острого герпетического стоматита. Сущность способа состоит в том, что в ротовой жидкости ребенка спектрофотометрически определяют величину содержания меди и кальция и при соотношении величины содержания меди к величине содержания кальция свыше 45 лечение считают эффективным.

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано при выборе тактики лечения гипертрофии глоточной миндалины и хронического аденоидита.

Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для оценки степени нарушения рубцового пищеварения у жвачных животных. Определяют в содержимом рубца количество веществ, имеющих «средний» (500-5000 D) диапазон молекулярной массы.

Изобретение относится к медицине, а именно кардиологии. Оценивают обширность поражения миокарда, нарушение сердечной проводимости, признаки хронической сердечной недостаточности, уровень гликемии, мочевины в крови и артериальное систолическое давление при поступлении, и рассчитывают вероятность благоприятного или неблагоприятного прогноза (Р) по формуле.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования эффективности комбинированной терапии ХГС у детей, включающий исследование абсолютного количества нейтрофилов крови, отличающийся тем, что до начала терапии определяют исходный уровень абсолютного количества нейтрофилов, при этом уровень 2000-3400/мкл считают положительным предиктором получения первичной вирусологической ремиссии, а уровень, превышающий 3500/мкл, расценивают как отрицательный предиктор получения ремиссии; в динамике через 12 и 24 недели от начала комбинированной терапии определяют уровень абсолютного количества нейтрофилов, и при уровне нейтрофилов ≤1400/мкл делают вывод о положительном прогнозе эффективности терапии, а при уровне абсолютного числа нейтрофилов ≥2500/мкл достижение первичной вирусологической ремиссии маловероятно.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и предназначено для прогнозирования органоспецифической аутоиммунизации при воспалительных заболеваниях глаз.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики функциональной задержки полового развития у мальчиков-подростков. Сущность способа состоит в том, что предварительно у ребенка определяют росто-весовой индекс (РВИ), если его значение менее 340 отн.ед., дополнительно атомно-абсорбционным методом определяют в суточной моче концентрации цинка, селена, свинца и вычисляют соотношения концентраций пар свинец/цинк, свинец/селен.

Изобретение относится к медицине и описывает способы для определения концентрации аналита в пробе, приборы и системы, используемые в связи с ними. В одном из вариантов осуществления изобретения способ включает обнаружение содержащей аналит пробы, введенной в электрохимический сенсор, содержащий два электрода в разнесенной конфигурации; реагирование аналита с вызыванием физического превращения аналита между двумя электродами; измерение выходов тока на дискретных интервалах для выведения времени заполнения сенсора пробой и емкости сенсора с пробой; определение первого значения концентрации аналита по выходам тока; расчет второго значения концентрации аналита по выходам тока и первому значению концентрации аналита; корректировку второго значения концентрации аналита на влияния температуры для обеспечения третьего значения концентрации аналита; корректировку третьего значения концентрации аналита как функции времени заполнения сенсора для обеспечения четвертого значения концентрации аналита; и корректировку четвертого значения концентрации аналита как функции емкости для обеспечения конечного значения концентрации аналита.

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для изготовления гистологических образцов биологических тканей с элементами имплантированных металлических и/или полимерных конструкций для изучения с помощью световой микроскопии.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для оценки повышенной чувствительности крупного рогатого скота к лейкозной инфекции. Способ включает выделение нейтрофильных гранулоцитов из венозной крови крупного рогатого скота путем центрифугирования в градиенте плотности фиколл-урографина (плотностью 1,077 г/см3), внесение по 100 мкл клеточной взвеси в две параллельные лунки 96 луночного плоскодонного планшета для иммуноферментного анализа.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики возникновения рестеноза в ранее стентированном сегменте. Сущность способа состоит в том, что исследуют кровь пациентов, определяют уровень циркулирующих СD45+ и при показателе, равном 0,91% и более от общего числа тромбоцитов, судят о наличии рестеноза. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики возникновения рестеноза. 2 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики начальной стадии хронической болезни почек. В крови больного определяют уровень липокалина-2 и альбумина, рассчитывают отношение липокалина-2 к альбумину и при значении больше 0,27 диагностируют хроническую болезнь почек. Способ позволяет диагностировать поражение почек на ранней стадии, не подвергая больных дополнительному забору крови и инвазивным методам диагностики. 2 пр., 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики между туберкулезным плевритом, экссудативным плевритом при неспецифической пневмонии и плевритом на фоне рака легкого. Сущность способа состоит в том, что изготовляют кристаллическую фацию плевральной жидкости путем раскапывания на чистое сухое обезжиренное предметное стекло плевральной жидкости в количестве 10 мкл, с последующим высушиванием в течение 24 часов, микрофотографированием и морфометрическим исследованием. При морфометрическом исследовании проводят измерение общего диаметра кристаллической фации, толщины периферической зоны и радиуса центральной зоны фации, степени ветвления кристаллов и вычисляют интегральный коэффициент плевральной жидкости К по формуле. При этом в случае колебания К между 0,49-1,81 диагностируют экссудативный плеврит на фоне рака легкого, при К 1,82-4,5 диагностируют туберкулезный плеврит, при К 4,51-12,4 диагностируют экссудативный плеврит на фоне неспецифической пневмонии. Использование заявленного способа позволяет с высокой достоверностью проводить дифференциальную диагностику между туберкулезным плевритом, экссудативным плевритом при неспецифической пневмонии и плевритом на фоне рака легкого. 2 ил., 5 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и предназначено для диагностики ранений ободочной кишки, в частности ранений ее забрюшинного отдела. Пострадавшему с подозрением на повреждение ободочной кишки выполняют первичную хирургическую обработку раны с ее ревизией. Если раневой канал по данным хирургической обработки не проникает в брюшную полость, при стабильной гемодинамике и отсутствии перитонеальной симптоматики выполняют очистительную клизму. Затем промывные воды после клизмы подвергают химическому исследованию на наличие пигментов крови, для чего выполняют бензидиновую пробу. При положительном результате анализа диагностируют ранение ободочной кишки. Способ позволяет повысить точность диагностики и уменьшить ее травматичность. 1 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и описывает способ прогнозирования лимфогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы. Способ характеризуется тем, что проводят иммуногистохимическое исследование препаратов ткани первичной опухоли, при котором определяют процент экспрессии нефосфорилированной формы молекулярного шаперона Hsp27 в ядре опухолевых клеток, также учитывают состояние менструальной функции пациентки, размер первичной опухоли и степень ее злокачественности, рассчитывают значение уравнения регрессии и далее рассчитывают значение вероятности развития лимфогенных метастазов Р. При Р≥50% прогнозируют высокий, а при Р<50% низкий риск развития лимфогенных метастазов. Предложенный способ позволяет с высокой точностью и информативностью прогнозировать развитие лимфогенных метастазов при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы и оптимизировать тактику ведения больных. 2 пр., 5 табл., 1 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования развития кардиоваскулярных осложнений острого коронарного синдрома с подъемом сегмента ST. Для этого осуществляют подсчет баллов по шкале GRACE при поступлении, определение в 1-3 сутки госпитализации содержания липокалина, ассоциированного с желатиназой нейтрофилов (s-NGAL) в крови и фракции выброса по ЭхоКГ. Затем определяют показатель GRACE-NGAL-ФВ = 3,6462 + (0,028388 × баллы по шкале GRACE) + (0,0035581 × величина s-NGAL) + (-0,16614 × величина ФВ). При величине показателя «GRACE-NGAL-ФВ» более 0,5298 прогнозируют развитие кардиоваскулярных осложнений в госпитальном периоде острого коронарного синдрома с подъемом сегмента ST. Способ обеспечивает возможность прогнозирования кардиоваскулярных осложнений независимо от стратегии лечения. 3 пр., 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание в гомогенате плаценты иммуноферментным методом содержание S-фосфолипазы А2 и в синцитиотрофобласте количество ядер в состоянии апоптоза. При нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержании в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2 до 12,0 нг/мл и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте до 3,0% создается угроза повреждения фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты. Способ позволяет оценить угрозу повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации за счет нарастания в нем содержания S-фосфолипазы А2 и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, может быть использовано для прогнозирования развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных. Способ заключается в том, что в результате анамнестического, клинического, лабораторного, эхографического обследования беременных женщин получают результаты, которые оценивают по балльной системе с учетом их информативности. Обращается внимание в анамнезе: на наличие или отсутствие самопроизвольных выкидышей, неразвивающихся беременностей, хронических заболеваний женских половых органов, мочевыделительной системы, верхних дыхательных путей; в клинико-лабораторных исследованиях: на воспалительные заболевания вульвы и влагалища, вирусные инфекции во время беременности, дисбиоза влагалища, рецидивирующие угрозы прерывания беременности, ассоциации микроорганизмов в бак. посевах из цервикального канала, в общем анализе крови лейкоцитоза >12×109/л, СРБ>6 мг/л, ПАМГ - 1≥30 мг/мл, кол-во микроорганизмов более 10; клинико-эхографические: маркеров ВУИ: синдром инфицирования плода, синдром инфицирования околоплодных вод, синдром инфицирования плаценты, нарушения плодово-плацентарного кровотока, повышение тонуса миометрия в сочетании с укорочением и дилатацией шейки матки. Сумма набранных баллов укажет на степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных, рожденных от матерей с ВУИ. Количество баллов 50 свидетельствует о 100% прогнозировании внутриутробной инфекции. Сумма баллов 1-20 указывает на низкую степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных, 21-39 - на среднюю степень риска, 40-50 соответствует высокой степени риска. Использование способа позволяет с высокой точностью прогнозировать формирование ВУИ у беременных женщин, степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных в короткий срок с малыми экономическими затратами и может быть использован в качестве динамической оценки в процессе лечения внутриутробной инфекции и подготовки к родам с целью рождения здоровых детей. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к цитомегаловирусу, и при его значении 1:1600, снижении активности цитохрооксидазы в синцитиотрофобласте до 2,50±0,015 усл.ед. и увеличении числа ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,03% создается угроза гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода. Способ позволяет оценить угрозу гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода за счет подавления цепи окислительных процессов. 2 ил.

Изобретение относится к способу получения многослойных покрытий на основе полиэлектролитных микрокапсул, содержащих биологически активные материалы, для применения в областях диагностики и медицины. Способ включает этап формирования полиэлектролитных микрокапсул, содержащих ядро из композиции по меньшей мере одного биологически активного вещества и формообразующего компонента. На следующем этапе наносят первый полиэлектролитного мультислой на стеклянную подложку, затем наносят промежуточный слой микрокапсул на первый мультислой. Затем наносят второй полиэлектролитный мультислой на поверхность микрокапсул, образующий вместе с первым мультислоем и промежуточным слоем микрокапсул многослойное покрытие. Для повышения максимальной активности используемых биологически активных материалов удаляют формообразующие компоненты из внутреннего объема микрокапсул, устанавливая положение подложки с нанесенным многослойным покрытием таким образом, чтобы подложка занимала верхнее положение по отношению к многослойному покрытию, что позволяет обеспечить возможность вывода молекул растворяемого формообразующего компонента из объема микрокапсул не только за счет диффузии, но и за счет действия сил тяжести. При этом наклон подложки, по отношению к горизонтальной поверхности, выбирают в пределах от 0 до 90 градусов. Указанные многослойные покрытия могут быть использованы для исследования и анализа биологических материалов, например крови, мочи, а также для определения биологически активных соединений в экологии, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.
Наверх