Среда для разбавления, длительного хранения и криоконсервации спермы индюков "вниигрж-5"

Авторы патента:

Целютин Константин Владимирович (RU)

A61D19/02 - для искусственного осеменения

Владельцы патента RU 2566656:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения сельскохозяйственных животных" (RU)

Изобретение относится к птицеводству, в частности к среде для разбавления и длительного хранения спермы индюков. Среда характеризуется тем, что она содержит растворенные в дистиллированной воде глутамат натрия, глутаминовую кислоту, инозитол, калий фосфорнокислый двузамещенный, глюкозу и магния сульфат. Все компоненты взяты в определенном соотношении. При этом при криоконсервации спермы среда дополнительно содержит N,N-диметилацетамид в концентрации 8%. Использование изобретения позволит повысить биологическую полноценность спермиев индюков при длительном хранении и криоконсервации. 1 з.п. ф-лы, 3 табл.

Изобретение относится к птицеводству и может применяться в биотехнологиях искусственного осеменения индеек.

С развитием методов искусственного осеменения сельскохозяйственной птицы актуальными стали разработки сред для разбавления, длительного хранения и криоконсервации спермы самцов с целью повышения оплодотворенности яиц. При этом составы сред различны для разных видов птицы.

Одной из задач является длительное хранение и криоконсервация спермы индюков. Для ее решения среди прочих была предложена среда, содержащая растворенные в дистилированной воде: инозитол, лактозу, фосфорнокислый калий двузамещенный и однозамещенный, тиосульфат натрия и цинковый комплекс этилендиаминтетраацетата двунатриевого двуводного [1]. Главным недостатком этой среды являются относительно невысокие показатели оплодотворенности яиц (63,3%) и вывода молодняка (49,9%), получаемые после осеменения спермой, прошедшей криоконсерацию.

В качестве прототипа была выбрана среда «ВИРГЖ-4», имеющая наиболее близкий к заявляемому объекту изобретения состав компонентов [2], используемая для криоконсервации спермы петухов и индюков.

Задачей предлагаемого изобретения было существенное повышение биологической полноценности спермиев индюков при длительном хранении при плюсовых температурах и криоконсервации и, как следствие, - повышение оплодотворенности яиц.

По итогам многочисленных экспериментов установлено, что для решения этой задачи целесообразно в качестве источников ионов магния вместо взятого в прототипе ацетата использовать сульфат и привести соотношение растворенных в 100 мл дистиллированной воды компонентов до следующих диапазонов: глутамат натрия - 1,60-2,00 г; глутаминовая кислота - 0,04-0,05 г; инозитол - 0,24-0,26 г; калий фосфорнокислый двузамещенный - 0,32-0,36 г; глюкоза - 1,00-1,14 г; магния сульфат 0,22-0,23.

При использовании этой среды для криоконсервации спермы индюков в качестве криопротектора добавляют к объему разбавленной спермы N,N-диметилацетамид в концентрации 8%.

Для проверки диапазонов содержания компонентов в сравнении с прототипом были испытаны 4 варианта новой среды, получившей название «ВНИИРГЖ-5», составы которых показаны в таблице 1.

Степень разбавления: 1 часть спермы и 3 части среды. Частота осеменения индеек при хранении спермы при плюсовых температурах - 1 раз в 14 дней; при использовании замороженно-оттаянной спермы - 1 раз в 7 дней.

В таблице 2 приведены результаты сравнительных испытаний различных вариантов среды после замораживания, хранения в течение года при температуре жидкого азота и последующего оттаивания, из которой видно, что объект изобретения имеет значительное преимущество перед прототипом, особенно заметное в вариантах II и III.

В таблице 3 показаны результаты сравнительных испытаний прототипа и состава предлагаемой среды по варианту III (оба без N,N-диметилацетамида) при разных сроках хранения при температуре: +1…+3°С. Здесь также наблюдается преимущество объекта изобретения.

Среду «ВНИИГРЖ-5» готовят следующим образом: в первую емкость наливают 50 мл дистиллированной воды, в которой растворяют: глутамат натрия и фосфорнокислый калий двузамещенный. Во второй емкости в 50 мл дистиллированной воды растворяют глюкозу, инозитол, магния сульфат и глутаминовую кислоту. После полного растворения компонентов оба раствора соединяют в одной емкости.

Технический результат предлагаемого изобретения состоит в существенном повышении биологической полноценности спермиев индюков при длительном хранении и криоконсервации.

Таблица 1
Компоненты среды	Ед. измерения	Среда «ВНИИГРЖ-5»	Прототип «ВИРГЖ-4»
		Вариант I	Вариант II	Вариант III	Вариант IV
Глутамат натрия	г	1,26	1,60	2,00	2,40	2,40
Глутаминовая кислота	г	0,03	0,04	0,05	0,06	0,14
Инозитол	г	0,23	0,24	0,26	0,30	0,20
Калий фосфорнокислый двузамещенный	г	0,29	0,32	0,36	0,40	0,35
Глюкоза	г	0,87	1,00	1,14	1,35	0,80
Магния сульфат	г	0,20	0,22	0,23	0,25	-
Магния ацетат	г	-	-	-	-	0,10
Глицин	г	-	-	-	-	0,10
N,N-диметилацетамида	%	8,00	8,00	8,00	8,00	8,00
Вода дистиллированная	мл	100	100	100	100	100

Таблица 2
Среда	Варианты	Проинкубировано яиц, шт.	Оплодотворенность яиц, %	Вывод молодняка, %
Объект изобретения «ВНИИГРЖ-5»	I	200	67,2	60,0
	II	213	81,2	72,5
	III	198	86,9	79,6
IV	385	70,2	61,3
Прототип «ВИРГЖ-4»	328	79,1	72,9

Таблица 3
Среда	Время хранения спермы, час	Проинкубировано яиц, шт	Оплодотворенность яиц, %	Вывод молодняка, %
Объект изобретения «ВНИИГРЖ-5», вариант III	1	1378	97,0	83,8
Объект изобретения «ВНИИГРЖ-5», вариант III	24	831	95,2	82,8
48	284	89,1	71,1
Прототип «ВИРГЖ-4»	24	1324	85,6	73,0

Источники информации

1. Осташко Ф.И., Бесулин В.И., Каркач П.М. Среда для разбавления и замораживания спермы индюков: Авт. св. СССР №1477397, А61Д 7/02, 1987.

2. Целютин К.В., Тур Б.К. Искусственное осеменение и криоконсервация спермы сельскохозяйственной птицы (петухи, индюки, гусаки и селезни). - СПб - Пушкин. - 2013. - С. 29.

1. Среда для разбавления и длительного хранения спермы индюков, характеризующаяся тем, что она содержит растворенные в дистиллированной воде глутамат натрия, глутаминовую кислоту, инозитол, калий фосфорнокислый двузамещенный, глюкозу и магния сульфат при следующем соотношении компонентов:
Глутамат натрия - 1.60-2.00 г
Глутаминовая кислота - 0.04-0.05 г
Инозитол - 0.24-0.26 г
Калий фосфорнокислый двузамещенный - 0.32-0.36 г
Глюкоза - 1.00-1.14 г
Магния сульфат - 0.22-0.23 г
Вода дистиллированная - 100 мл

2. Среда для разбавления и длительного хранения спермы индюков по п. 1, отличающаяся тем, что при криоконсервации спермы она дополнительно содержит N,N-диметилацетамид в концентрации 8%.

Изобретение относится к области искусственного осеменения животных и может применяться в сельскохозяйственном производстве. Способ забора криоконсервированного семени быков-производителей из сосуда Дьюара включает предварительное охлаждение корнцанга перед забором спермадоз в жидком азоте до температуры -196°C, при этом предварительному охлаждению подвергают только бранши корнцанга.

Станок для проведения искусственного осеменения телок и коров // 2558215

Изобретение относится к ветеринарной медицине. Предложенный станок для проведения искусственного осеменения телок и коров состоит из соединенных аркой боковых стоек с опорами, несущими перекрывающие створки.

Способ повышения воспроизводства животных // 2557779

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к способу повышения воспроизводства косулей. Способ включает внутримышечное введение самкам стимулирующих овуляцию препаратов, при этом при воспроизводстве содержащихся в полувольных условиях косулей, отбирают самок с увеличенным числом приплода.

Способ лечения и подготовки самцов-пробников // 2551946

Изобретение относится к ветеринарии. Осуществляют одновременную ампутацию пениса и препуция.

Вагиноскоп для искусственного осеменения коров и телок // 2541410

Заявленное изобретение относится к ветеринарии, а именно к искусственному осеменению коров и телок. Вагиноскоп для искусственного осеменения коров и телок включает полипропиленовую трубку с защитным вкладышем, ручку, осветитель, в качестве которого используется фонарик с тремя светодиодами, и направляющую трубку из жести для фиксации осветителя и его прикрепления к стенке трубки вагиноскопа, при этом наружный конец полипропиленовой трубки имеет скос под углом 45-50 градусов и снабжен защитным вкладышем, прикрепленным к трубке.

Способ криоконсервации семени петухов // 2517848

Изобретение относится к области птицеводства, в частности к способам длительного хранения семени петухов в функциональном состоянии. Способ криоконсервации семени петухов характеризуется тем, что семя петухов разбавляют в 5 раз в среде, которая содержит 100 см3 дистиллированной воды, 6 г лактозы, 0,58 г лимонной кислоты, 1 г трис-оксиметил-аминометана, 10 см3 желтка куриного яйца, 5 см3 глицерина, при этом температура семени и среды 18-20º С.

Устройство и способ введения и отбора жидкости, содержащей гаметы, эмбрионы или раствор иного типа, в яйцевод свиньи // 2514297

Изобретение относится к устройству для введения и/или отбора жидкостей в яйцевод свиньи лапароскопическим путем и способу введения и/или отбора жидкостей с помощью указанного устройства.

Способ получения спермы у баранов-производителей // 2510253

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано в искусственном осеменении. Сперму от барана получают путем применения искусственной вагины, выполненной в виде единой цельнолитой двустенной резиновой трубки, имеющей эластичное овальное кольцо.

Способ витальной иммобилизации сперматозоидов человека и животных // 2504581

Изобретение относится к медицине, андрологии, репродуктологии, ветеринарии. Предложены среда и способ витальной иммобилизации сперматозоидов человека и животных, где сперматозоиды из нативной или размороженной спермы, полученные путем центрифугирования эякулята в градиенте плотности или отобранные в результате флотации, переносятся в среду для иммобилизации с пониженным осмотическим давлением 100-170 мОсм/кг на время от 1 мин до 2 часов при составе газовой среды от 0,1 до 8% углекислого газа и температуре среды от 0 до 39°C.

Усовершенствования, относящиеся к размножению млекопитающих // 2470610

Способ определения функционального состояния яичников у коров в условиях первой лактации (первотелок) // 2572715

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения функционального состояния яичников у самок сельскохозяйственных животных в условиях первой лактации. Способ включает забор крови из яремной вены, исследование содержания общего холестерина и показателя альбумино-глобулинового коэффициента и суждение о функциональном состоянии яичников у коров-первотелок. При значениях общего холестерина 5,2-7,8 ммоль/л и показателя альбумино-глобулинового коэффициента в пределах 1,0-1,8 дополнительно исследуют содержание общего белка, калия и магния. При достижении значений содержания общего белка более 65,6 г/л, концентраций калия 4,2-4,8 ммоль/л и магния 1,0-1,2 ммоль/л диагностируют активно функционирующие яичники с возможностью последующего оплодотворения. Когда величины указанных показателей не достигают вышеуказанных оптимальных значений общего белка, калия и магния, делают заключение о снижении функциональной активности яичников с прохождением неполноценных циклов у коров-первотелок. Способ позволяет доступно в условиях животноводческих и фермерских хозяйств на основе исследования в сыворотке крови общего белка, альбумино-глобулинового коэффициента, общего холестерина, калия и магния более точно определять функциональное состояние яичников и условия для формирования полноценных эстральных циклов у молодых коров в период первой лактации. 1 табл., 1 пр.

Среда для криоконсервации семени быка и способ её приготовления // 2577882

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к искусственному осеменению крупного рогатого скота. Среда для консервирования семени быка составлена с использованием следующих компонентов (мас.%): трис-(гидроксиметил)-аминометан 1,9, фруктоза 0,9, лимонная кислота 0,7, сахароза 2, глицерин 4,5-6,5, фосфолипиды сои 0,04-2,00, высокомолекулярное поверхностно-активное вещество 0,01-1, вода бидистиллированная остальное. Способ приготовления среды для криоконсервации семени быка включает приготовление безлипидной основы среды для криоконсервации семени быка путем разведения в горячей бидистилированной воде с температурой 80-90°C трис-(гидроксиметил)-аминометана, лимонной кислоты, фруктозы, добавления глицерина и охлаждения до комнатной температуры, доведения pH раствора до 6,8. При этом отдельно готовят липосомальный концентрат посредством добавления в 10%-ный раствор сахарозы 0,2-20,0 мас.% фосфолипидов сои, вносят поверхностно-активное вещество, выдерживают при комнатной температуре, периодически помешивая 4-24 часа, затем обрабатывают суспензию на ультразвуковом дезинтеграторе в течение 5-30 минут и смешивают безлипидную основу среды для криоконсервации семени быка и липосомальный концентрат в соотношении 4:1, стерилизуют автоклавированием при температуре 115°C и давлении 1,4 атмосферы в течение 1 часа или стерилизуют фильтрацией через фильтр с порами 0,22 мкм. Предлагаемая среда для криоконсервирования имеет повышенную биологическую безопасность, обладает оптической прозрачностью и имеет длительный срок использования. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 2 ил., 4 пр.

Способ экстракорпорального культивирования ооцитов коров // 2602448

Изобретение относится к области репродуктивной биотехнологии, а именно к способу экстракорпорального культивирования ооцитов коров. Способ включает оценку фазы роста ооцитов, выделенных стандартными методами из яичников коров после убоя, методом окрашивания бриллиантовым кристаллическим голубым, отделение не завершивших рост ооцитов и культивирование их в среде ТС-199, содержащей 20% бычьей сыворотки, 50 нг/мл бычьего пролактина, 0.55 мг/мл лактата кальция, 0.23 мг/мл пирувата натрия, 1.27 мг/мл HEPES, 50 мкг/мл гентамицина и клетки гранулезы в концентрации 1 млн/мл. Культивирование проводят в течение 15 ч, затем ооциты перемещают в среду, дополнительно содержащую хорионический гонадотропин человека в количестве 10 м.ед/мл и культивируют еще 15 ч. Использование изобретения позволит повысить доли ооцитов, созревших в процессе экстракорпорального культивирования. 1 табл.

Способ определения вероятной овуляции у коров // 2609906

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к ветеринарному акушерству, и может быть использовано в целях экспресс-диагностики по слюне полового цикла в репродуктивной системе коров. Способ определения оптимального срока овуляции у коров включает исследование слизи, при этом забор слизи осуществляют ватной палочкой из ротовой полости, делают мазок и размещают его на предметном стекле, высушивают на воздухе, рассматривают под микроскопом при 100-кратном увеличении, диагностируют овуляцию по наличию кристаллического папоротникообразного рисунка. Использование изобретения позволит определить овуляцию у коров. 1 табл., 2 ил.

Разбавитель (среда) вниигрж для хранения спермы жеребцов при 4-5ос // 2610554

Изобретение относится к коневодству, а именно к среде для разбавления и хранения спермы жеребцов при 4-5°C. Среда содержит растворенные в дистиллированной воде сухое молоко 4-7 г, лактозу - 4-7 г, двунатриевую соль этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилон Б, хелатон-3) - 0,1 г, натрий двууглекислый - 0,008 г, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный - 0,089 г, желток куриных яиц 1,6-2 мл, гентамицин 0,005 г. Использование изобретения позволит повысить биологическую полноценность спермиев при хранении спермы при 4-5°C. 3 табл.

Состав среды для разбавления и хранения спермы кобелей // 2611822

Изобретение относится к ветеринарии и биологии, в частности к составу среды для разбавления и хранения спермы кобелей. Среда содержит ТРИС - 6.06 г, лимонную кислоту - 3.4 г, фруктозу - 2.5 г, глицерин - 16 мл, альбумин человека 10% - 40 мл, сыворотку крови собаки 0,1-0,2 мкг, энроген - 25 мг, воду для инъекций - 184 мл. Использование изобретения позволит сохранить жизнеспособность половых гамет кобелей на протяжении продолжительного периода времени и защитить их от температурного шока.

Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации // 2620004

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к воспроизводству крупного рогатого скота. Способ повышения выживаемости сперматозоидов быков при криоконсервации предусматривает выдерживание сперматозоидов в течение 4 часов при температуре 38,5°С в среде, содержащей индукторы капацитации. Затем охлаждают до 18-22°С, проводят окончательное разбавление и фасовку, выдерживают при 4°С в течение 3-4 часов, охлаждают в течение 7,5 мин до -145°С и помещают в жидкий азот. Предлагаемый способ обеспечивает резкое увеличение выживаемости сперматозоидов.

Способ получения половых феромонов самцов домашних животных // 2623085

Изобретение относится к области ветеринарной медицины, в частности к получению биологически активных препаратов для стимуляции половой функции у самок домашних животных. Способ получения половых феромонов самцов домашних животных включает измельчение семенников, их гомогенизацию, добавление фермента протосубтилина, инкубирование, центрифугирование, смешивание с мочой и перегонку с водяным паром. При этом в гомогенизат добавляют в количестве 0,5-1,0% от общей массы полисорбат ТВИН-8. Затем смесь инкубируют в течение 50-60 мин при 37-39°С, смешивают с мочой самца в соотношении 1:3-3,5 и перегоняют с водяным паром. Вышеописанный способ позволяет повысить биологическую активность препарата и увеличить его выход. 3 табл., 3 пр.

Неорганический пирофосфат и его применение // 2626932

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии. Добавка для стимулирования спермы содержит неорганический пирофосфат (PPi) в количестве примерно между 1 мкМ и примерно 200 мкМ. Добавление PPi в среды для оплодотворения in vitro людей/животных (IVF) улучшает долю оплодотворения; добавление PPi в разбавитель семени для искусственного осеменения (AI) сельскохозяйственных животных может улучшить долю забеременевших; кроме того, ооциты млекопитающих, созревающие in vitro в среде, содержащей PPi, приобретают улучшенный потенциал оплодотворения и развития, в то время как эмбрионы, культивируемые в среде, дополненной PPi, имеют улучшенное развитие до бластоцистов. 9 н. и 11 з.п. ф-лы, 25 ил., 10 пр.

Среда для разбавления спермы сельскохозяйственной птицы // 2637774

Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к средам для искусственного осеменения сельскохозяйственной птицы. Среда для разбавления спермы птицы изготовлена путем растворения в 100 мл бидистиллированной воды сухих компонентов, взятых при следующем соотношении (г): сахароза - 4,0-5,0, глюкоза - 0,3-0,5, уксуснокислый натрий - 1,1-1,6, углекислый кислый натрий - 0,1-0,2, щавелевая кислота - 0,02-0,04, при этом среда обеспечивает время хранения разбавленной спермы при сохранении оплодотворяющей способности для кур 24 часа, цесарок и индеек - 7 часов, уток - 4 часа, гусей - 3 часа. Предлагаемая среда эффективна при разбавлении спермы для искусственного осеменения кур, индеек, цесарок, гусей, уток, в сухом виде среда может храниться без доступа воздуха до 2-х месяцев при температуре +6-8°C без изменения первоначальных свойств. 3 табл.