Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание s-фосфолипазы a2 в гомогенате плаценты в третьем триместре гестации

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание в гомогенате плаценты иммуноферментным методом содержание S-фосфолипазы А2 и в синцитиотрофобласте количество ядер в состоянии апоптоза. При нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержании в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2 до 12,0 нг/мл и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте до 3,0% создается угроза повреждения фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты. Способ позволяет оценить угрозу повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации за счет нарастания в нем содержания S-фосфолипазы А2 и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза.

 

1. Цель изобретения - выявить, что при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации повышается активность S-фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты, что создает угрозу повреждения фетоплацентарного барьера в период гестации.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке способа диагностики повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции, ведущей к увеличению содержания S-фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты.

3. Раскрытие изобретения

S-фосфолипаза А2 находится большей частью в тромбоцитах, а также в местах воспаления различных органов, особенно в синовиальных оболочках суставов, в миокарде при ишемической болезни [8, 11, 12]. Наличие в фосфолипазах окисленных форм жирных кислот увеличивает активность секреторных фосфолипаз, что предполагает их участие в регуляции вязкости мембран при окислительном стрессе. S-фосфолипаза А2 принимает участие при различных воспалительных заболеваниях [5, 6]. В большом количестве при воспалительных процессах в организме S-фосфолипаз А2 можно найти в моноцитах, макрофагах, фибробластах [2, 3, 10]. Активность фермента регулируется интерлейкинами 1 и 6, TNFα, интерфероном-α [4]. Под влиянием S-фосфолипазы А2 арахидоновая кислота выполняет синтез простаноидов [9], а также может стимулировать экспрессию циклооксигеназы-2 [1]. Окисленные фосфолипиды увеличивают активность S-фосфолипаз А2 [7].

4. Новая техническая задача

Определяя уровень содержания S-фосфолипазы А2 в гомогенате плаценты на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции, диагностируют повреждение фетоплацентарного барьера.

5. В доступной литературе аналогов по данному вопросу не отмечено.

6. Осуществление изобретения

6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 20 рожениц в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 10 беременных без патологии (контрольная группа). Диагноз обострения хронической цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности (65%), а также наличия ДНК к ЦМВ.

6.2. Исследования проводились с учетом требований Хельсинкской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.3. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПЦР на аппарате ДТ-96 (Россия) с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.4. S-фосфолипаза А2 выявлялась в гомогенате плаценты методом иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA) с использованием набора Cayman Chemical sPLA2 (human Type II A) EIA.

6.5. Для получения гомогената плодовая часть плаценты (ворсинчатый хорион) срезалась скальпелем небольшими пластинками площадью до 2-3 см и толщиной 1 мм. Кусочки ткани помещали в химические стаканы, содержащие 200 мл физиологического раствора, отмывали от клеток крови, перемешивая на магнитной мешалке в течение 15 мин и подсушивали на фильтровальной бумаге. Затем ткань растирали пестиком в фарфоровой ступке и гомогенизировали до однородной массы. К полученному гомогенату добавляли физиологический раствор в объеме, равном изначальному весу ткани (на 1 г - 1 мл физиологического раствора). Гомогенат замораживали при -20°С в течение суток. Затем его размораживали и центрифугировали при 1500 g при температуре +4°С в течение 15 минут. Надосадочную жидкость разливали мелкими аликвотами и хранили при -20°С до проведения иммуноферментного анализа.

7. На гистологических срезах плаценты подсчитывали количество ядер в синцитиотрофобласте, находящихся в состоянии апоптоза с помощью иммуногистохимического ISEL-метода. Морфологическая классификация апоптоза на парафиновых срезах проводилась по метке концов фрагментов ДНК (in situ end labeling metod, ISEL) с инкубацией в смеси 4 нуклеотидов dATF, dGTF, dCTF biotin II dUTP, ДНК полимераза - E.Coli («Sigma», USA).

8. Статистическая обработка проводилась непарным параметрическим критерием Стьюдента и методом Фишера.

В процессе исследования установлено, что обострение хронической цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации связано с нарастанием в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2.

При нарастании в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2 до 12,0±0,95 нг/мл (контроль 9,6±0,85 нг/мл) отмечается у беременной на третьем триместре гестации обострение цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 к цитомегаловирусу, что приводит к увеличению содержания ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,15% (контроль - 0,5±0,02%).

Литература

1. Aarsman A., Neys F. Sera of patients suffering from inflammatory diseases contain group II A but not group V phospholipase A2 // Biochem Biophys. Acta. 2000. 1502; 257-263.

2. Altken M.A., Thomas T. Localization of type II phospholipase A2 messenger RNA and immunoactivity in human placenta and fetal membranes//Placenta. 1999. 17(7). 423-439.

3. Aviram M., Maori Phospholipase A2 - modified LDL is taken up at enhanced rate by macrophages // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1992. 185(1). 465-472.

4. Blascucei L.M., Vitelli A. Elevated, levels of interleukin-6 in unstable angina // Circulation. 1997. 96. 2099.

5. Boyanovsky В., Webb N.R. Biology of secretory Phospholipase A2 // Cardiovasc. Drugs. Ther. 2009. 23. 61-72.

6. Burk J.E., Dennis E.A. Phospholioase A2 Bichemistry. Cardiovase. Drugs Ther. 2009. 23. 49-59.

7. Chai Y.C., Binion D.G. Relationship of molecular structure to the mechanism of lysophospholipid-induced smooth muscule cell proliferation // Am. J. Physiol. Heart. Circ. Physiol. 2000. 279. H1830-38.

8. Elinder L.S., Dumitrescu A. Expression of phospholipase A2 isoforms in human normal and atherosclerotic arterial wall // Ateriscler. Thromb. Vase Biol. 1997. 17.2257-2263.

9. Fonteh A.N., Bass D.A., Marshall L.A. Evidence that secretory phospholipase A2 plays a role in arachidonic acid release and eicosanoid biosynthesis by mast cells // J. Immunol. 1994. 152(11). 5438-5446.

10. Jacobson P.S., Schrier D.J. Regulation of CD-I ib/CD18 expression in human neutrophils by phospholipase A2 // J. Immunol. 1993. 151. 5639-5652.

11. Menshikowski M., Hagelgans A., Siegert G. Secretory phospholipase A2 of II A is it an offensive or a defensive player during atherosclerosis other inflammatory diseases? // Prostaglandins. Other Lipid Medial. 2006. 79(1-2). 1-33.

12. Piek J., Winter R. Type II secretory phospholipase A2. The emerging role of biochemical markers of plaque inflammation // J. Eur Heart 2002. 24. 1804-1806.

Способ оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, включающий определение S-фосфолипазы А2, титра антител к цитомегаловирусу, процент ядер в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза, и при нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержании в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2 до 12,0 нг/мл и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте до 3,0% создается угроза повреждения фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования развития кардиоваскулярных осложнений острого коронарного синдрома с подъемом сегмента ST.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и описывает способ прогнозирования лимфогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и предназначено для диагностики ранений ободочной кишки, в частности ранений ее забрюшинного отдела. Пострадавшему с подозрением на повреждение ободочной кишки выполняют первичную хирургическую обработку раны с ее ревизией.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики между туберкулезным плевритом, экссудативным плевритом при неспецифической пневмонии и плевритом на фоне рака легкого.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики начальной стадии хронической болезни почек. В крови больного определяют уровень липокалина-2 и альбумина, рассчитывают отношение липокалина-2 к альбумину и при значении больше 0,27 диагностируют хроническую болезнь почек.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики возникновения рестеноза в ранее стентированном сегменте. Сущность способа состоит в том, что исследуют кровь пациентов, определяют уровень циркулирующих СD45+ и при показателе, равном 0,91% и более от общего числа тромбоцитов, судят о наличии рестеноза.

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС).
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения острого герпетического стоматита. Сущность способа состоит в том, что в ротовой жидкости ребенка спектрофотометрически определяют величину содержания меди и кальция и при соотношении величины содержания меди к величине содержания кальция свыше 45 лечение считают эффективным.

Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано при выборе тактики лечения гипертрофии глоточной миндалины и хронического аденоидита.

Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для оценки степени нарушения рубцового пищеварения у жвачных животных. Определяют в содержимом рубца количество веществ, имеющих «средний» (500-5000 D) диапазон молекулярной массы.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, может быть использовано для прогнозирования развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных. Способ заключается в том, что в результате анамнестического, клинического, лабораторного, эхографического обследования беременных женщин получают результаты, которые оценивают по балльной системе с учетом их информативности. Обращается внимание в анамнезе: на наличие или отсутствие самопроизвольных выкидышей, неразвивающихся беременностей, хронических заболеваний женских половых органов, мочевыделительной системы, верхних дыхательных путей; в клинико-лабораторных исследованиях: на воспалительные заболевания вульвы и влагалища, вирусные инфекции во время беременности, дисбиоза влагалища, рецидивирующие угрозы прерывания беременности, ассоциации микроорганизмов в бак. посевах из цервикального канала, в общем анализе крови лейкоцитоза >12×109/л, СРБ>6 мг/л, ПАМГ - 1≥30 мг/мл, кол-во микроорганизмов более 10; клинико-эхографические: маркеров ВУИ: синдром инфицирования плода, синдром инфицирования околоплодных вод, синдром инфицирования плаценты, нарушения плодово-плацентарного кровотока, повышение тонуса миометрия в сочетании с укорочением и дилатацией шейки матки. Сумма набранных баллов укажет на степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных, рожденных от матерей с ВУИ. Количество баллов 50 свидетельствует о 100% прогнозировании внутриутробной инфекции. Сумма баллов 1-20 указывает на низкую степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных, 21-39 - на среднюю степень риска, 40-50 соответствует высокой степени риска. Использование способа позволяет с высокой точностью прогнозировать формирование ВУИ у беременных женщин, степень риска развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных в короткий срок с малыми экономическими затратами и может быть использован в качестве динамической оценки в процессе лечения внутриутробной инфекции и подготовки к родам с целью рождения здоровых детей. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к цитомегаловирусу, и при его значении 1:1600, снижении активности цитохрооксидазы в синцитиотрофобласте до 2,50±0,015 усл.ед. и увеличении числа ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,03% создается угроза гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода. Способ позволяет оценить угрозу гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода за счет подавления цепи окислительных процессов. 2 ил.

Изобретение относится к способу получения многослойных покрытий на основе полиэлектролитных микрокапсул, содержащих биологически активные материалы, для применения в областях диагностики и медицины. Способ включает этап формирования полиэлектролитных микрокапсул, содержащих ядро из композиции по меньшей мере одного биологически активного вещества и формообразующего компонента. На следующем этапе наносят первый полиэлектролитного мультислой на стеклянную подложку, затем наносят промежуточный слой микрокапсул на первый мультислой. Затем наносят второй полиэлектролитный мультислой на поверхность микрокапсул, образующий вместе с первым мультислоем и промежуточным слоем микрокапсул многослойное покрытие. Для повышения максимальной активности используемых биологически активных материалов удаляют формообразующие компоненты из внутреннего объема микрокапсул, устанавливая положение подложки с нанесенным многослойным покрытием таким образом, чтобы подложка занимала верхнее положение по отношению к многослойному покрытию, что позволяет обеспечить возможность вывода молекул растворяемого формообразующего компонента из объема микрокапсул не только за счет диффузии, но и за счет действия сил тяжести. При этом наклон подложки, по отношению к горизонтальной поверхности, выбирают в пределах от 0 до 90 градусов. Указанные многослойные покрытия могут быть использованы для исследования и анализа биологических материалов, например крови, мочи, а также для определения биологически активных соединений в экологии, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности иммунологии, и предназначено для определения аутоантител к прогестерону в сыворотке и плазме крови человека. Изобретение раскрывает способ непрямого твердофазного иммуноферментного анализа, в котором в качестве антигена на поверхность полистирола иммобилизуют конъюгат прогестерона с гемоцианином: гемоцианин-11α-гидроксипрогестерон, гемоцианин-3α-гидроксипрогестерон. Предлагаемый способ технически прост, информативен, обладает высокой чувствительностью и специфичностью при определении антител к прогестерону в сыворотке и плазме крови больных с привычным невынашиванием беременности и бесплодием, его применение позволяет получить достоверные результаты при хранении готовых планшетов до 1 года. Изобретение может быть применено для обследования больных с различной акушерско-гинекологической патологией. 7 табл., 7 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения глубины залегания липидных ядер, являющихся центром атеросклеротических бляшек. Изобретение представляет способ определения глубины залегания липидных ядер атеросклеротических бляшек методом ИК-Фурье спектроскопии, заключающийся в том, что подготавливаются срезы атеросклеротически измененного участка сосудистого русла, записываются инфракрасные спектры пропускания подготовленных срезов, идентифицируются характеристические пики поглощения, отличающийся тем, что определяется срез, имеющий максимальное поглощение в диапазоне 1720-1760 см-1, соответствующем валентным колебаниям связей C=O сложных эфиров холестерина, который отвечает глубине залегания липидного ядра. Изобретение обеспечивает определение качественного состава атеросклеротических бляшек и глубину залегания липидных ядер. 2 ил.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки эффективности антибактериальной терапии при диализном перитоните, включающий введение антибактериальных препаратов в пакет с диализным раствором с последующим введением в брюшную полость, морфологическое исследование диализата, отличающийся тем, что после проведения цикла обмена диализирующего раствора проводят исследование диализата методом клиновидной дегидратации, при этом диализат центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10-15 минут и отбирают 2 пробы - первую из верхней половины пробирки, вторую - из нижней, выявляют структуру кристаллов солей в диализате и при наличии линейных кристаллов в центральной зоне фаций обеих проб оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и не требующую ее продолжения, при наличии линейных кристаллов только в первой пробе оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и требующую ее продолжения, при их отсутствии - как неудовлетворительную. Применение способа позволяет ускорить оценку эффективности антибактериальной терапии и повысить точность оценки. 4 пр., 3 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ). У больных ХГС перед началом КПТ определяют уровень вирусной нагрузки (ВН, МЕ/мл). Определяют уровень фиброза по результатам непрямой фиброэластографии печени (F, кПа). Определяют количество тромбоцитов в крови перед началом КПТ (Трисходн, х109/л). На основании полученных данных проводят расчет прогнозируемой величины минимального количества тромбоцитов (Tpmin, х109/л) в крови с помощью метода множественной линейной регрессии. Значения Tpmin≤150,0х109/л свидетельствуют о наличии риска развития тромбоцитопении у больных ХГС, получающих КПТ. Причем значения Tpmin от 75,0х109/л до 150,0х109/л позволяют предполагать развитие легкой, от 50,0х109/л до 75,0х109/л - умеренной и <50,0х109/л - тяжелой степени тромбоцитопении. Способ позволяет точно, быстро и просто провести прогноз развития тромбоцитопении за счет комплексной оценки наиболее значимых факторов возникновения тромбоцитопении. 1 табл., 2 пр.
(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных. Способ включает отбор проб массой 50,0 г. Пробу измельчают на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм. Приготовливают искусственный желудочный сок по следующей прописи: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводят до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°С, добавляют 7,0 г пищевого свиного пепсина. ИЖС заливают в реактор аппарата «Гастрос» и прогревают до 41-42°С. Помещают стакан с измельченной пробой и аппарат устанавливают в режим переваривания 50 мин с активным перемешиванием и временем отстоя перевара 10 мин. Осадок сливают в объеме 20,0 см3. Наличие личинок определяют под лупой. Для концентрации применяют метод центрифугирования при 5000 об/мин в течение 10 мин. Далее из пробирки аспирируют 10,0 см3 верхнего слоя жидкости. Оставшийся осадок с личинками сохраняют для дальнейших исследований замораживанием при -20°С. Заявленный способ позволяет эффективно обнаруживать возбудителя токсокароза при посмертной диагностике данной болезни. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, и может быть использовано в гепатологии и гастроэнтерологии для диагностики фибротических процессов печени. Сущность неинвазивного способа диагностики степени фиброза печени: формируют группу условно здоровых обследуемых (F0), группу пациентов с установленной гистологически умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группу пациентов с установленной гистологически выраженной степенью фиброза (F3-F4), измеряют средние скорости движения суспензии эритроцитов и минимальные, средние и максимальные диаметры эритроцитов в период воздействия переменного электрического поля у группы условно здоровых обследуемых (F0) и у групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных данных определяют электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов, сравнивают электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов группы условно здоровых обследуемых (F0) с группой пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группой пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных результатов формируют массив данных для диагностики степени фиброза печени. Затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с неясной степенью фиброза с определением электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов с последующим их сравнением с соответствующими значениями, определенными для группы условно здоровых обследуемых (F0), группы пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группы пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и при наличии 60% и более отличающихся параметров от группы условно здоровых обследуемых (F0) и входящих в границы значений для групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) или с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и выявляют степень фиброза печени для данного пациента. Использование способа позволяет более точно определить степень фиброза печени у пациента на ранних стадиях заболевания независимо от этиологии возникновения заболевания. 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. Сущность способа состоит в том, что при выявлении уровня тканевого ингибитора матриксных металлопротеиназ-1 более 242,8 нг/мл и сердечно-сосудистого сопряжения более 1,29 риск развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий оценивается как высокий. Использование заявленного способа позволяет точно осуществить прогноз риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. 2 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание в гомогенате плаценты иммуноферментным методом содержание S-фосфолипазы А2 и в синцитиотрофобласте количество ядер в состоянии апоптоза. При нарастании титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600, содержании в гомогенате плаценты S-фосфолипазы А2 до 12,0 нгмл и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте до 3,0 создается угроза повреждения фетоплацентарного барьера ворсинок плаценты. Способ позволяет оценить угрозу повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации за счет нарастания в нем содержания S-фосфолипазы А2 и увеличении числа ядер в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза.

Наверх