Способ оценки подавляющего действия цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на активность цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, приводящей к нарастанию числа ядер в состоянии апоптоза

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к цитомегаловирусу, и при его значении 1:1600, снижении активности цитохрооксидазы в синцитиотрофобласте до 2,50±0,015 усл.ед. и увеличении числа ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,03% создается угроза гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода. Способ позволяет оценить угрозу гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода за счет подавления цепи окислительных процессов. 2 ил.

 

1. Цель исследования - выявить, что обострение цитомегаловирусной инфекции в период гестации подавляет в синцитиотрофобласте активность цитохромоксидазы, вызывая увеличение числа ядер в состоянии апоптоза.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к прогнозу состояния ядер в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении во время гестации цитомегаловирусной инфекции, под влиянием которой подавляется активность цитохромоксидазы.

3. Раскрытие изобретения

Цитохромы - гемопротеиды, основная функция которых заключается в переносе электронов, выполняя одну из важнейших ролей в тканевом дыхании. В зависимости от конфигурации простетической группы цитохромы можно подразделить на четыре типа: a, b с, d. Основная функция цитохромов - это их участие в цепи переносчиков электронов: b-c1-(с-а)-а3-O2 [4]. Окислительный цитохром С восстанавливается химическими реагентами, такими как цитохромредуктазы. Цитохром аз (цитохромоксидаза; цитохром - C; О2-оксидоредуктаза) - основной фермент, переносящий электроны от цитохрома C на О2 в процессе окислительного фосфорилирования [5]. Окисление цитохрома С сопровождается появлением мембранного протонного потенциала, который используется клеткой для обеспечения метаболических процессов, особенно для синтеза АТФ. Фермент располагается на внутренней мембране митохондрий [4]. Таким образом, цитохром С-оксидаза кодируется в митохондриальном геноме и синтезируется на митохондриальных рибосомах [8]. Перенос электрона сопровождается трансмембранным переносом двух протонов из матрикса в цитозольное пространство и сопровождается формированием протонного потенциала [7]. Цитохромоксидаза в клетках человека крайне необходима для обеспечения их жизнедеятельности. Нарушение биосинтеза цитохрома С оксидазы приводит к гибели клеток.

4. Новая техническая задача

Цитомегаловирусные белки, внедряясь в синцитиотрофобласт ворсинок плаценты, становятся ксенобиотиками на борьбу, с которыми вступают ферменты группы цитохромоксидазы. В случае высокой агрессивности возбудителя ферментативное противоборство против ксенобиотика не справляется и происходит снижение активности цитохромоксидазы, что при увеличении процента ядер переходящих в состояние апоптоза ставит под угрозу гибель ворсинок плаценты.

5. В доступной литературе анналов по данному вопросу не отмечено.

6. Осуществление изобретения

6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 15 беременных на третьем триместре гестации с обострением цитомегаловирусной инфекции с титром 1:1600. Контролем служили 15 беременных, не болевших цитомегаловирусной инфекцией в период гестации. У беременных симптоматически цитомегаповирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stst-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПЦР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.2. Определение цитохромоксидазы в плаценте выполнялось по методу Муг [1, 2]. Срезы изготовляли на замораживающем микротоме толщиной 7-10 микрон, помещая первоначально в физиологический раствор при pH 7,2, а затем переносили их в инкубационный раствор, который приготовляли при температуре 37°C следующего состава: смешивали в равном количестве 0,01 М (0,17%) диметил-p-фенилендиамин-HCl, растворенный в 0,066 М фосфатном буфере pH 5,8, содержащем 1% NaCl и 0,14% раствор α-нафтола. Контрольные срезы промывали в растворе азида натрия, изготовленного на физиологическом растворе поваренной соли в концентрации 0,005 М (0,019%). После инкубации в течение 10 мин споласкивали в физиологическом растворе. Срез покрывали 5% раствором ацетата калия, накрывали покровным стеклом, окантовывая расплавленным парафином. Препараты изучали под цифровым микроскопом МТ (Япония), связанным с компьютером по программе «Scion Corporation» (USA) с целью проведения цитофотометрической обработки продуктов реакции. Морфологическая классификация апоптоза на парафиновых срезах проводилась по метке концов фрагментов ДНК (in situ end labeling metod, ISEL) с инкубацией в смеси 4 нуклеотидов dATF, dGTF, dCTF biotin II dUTP, ДНК полимераза - E. Coli («Sigma», USA) [3].

7. В процессе исследования были получены следующие результаты

При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности отмечались функциональные нарушения в плаценте. У рожениц анализировалась активность цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты. В синцитиотрофобласте ворсинок плаценты рожениц, перенесших в третьем триместре обострение цитомегаловирусной инфекции с титром антител 1:1600, отмечалось снижение активности цитохромоксидазы до 2,50±0,015 усл. ед. (контроль - 7,50±0,03 усл. ед.) (фиг.1, 2). Анализируя содержание количества ядер в синцитиотрофобласте, находящихся в состоянии апоптоза отмечали, что при снижении активности цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте число ядер, находящихся в состоянии апоптоза резко увеличивалось: при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 - до 3,0±0,03% (контроль - 0,50±0,015%). Таким образом, белки цитомегаловирусной инфекции, проникая в синцитиотрофобласт, в качестве ксенобиотиков, вступают в противоборство с ферментными системами. Наиболее эффективным элементом, обеспечивающим детоксикацию ксенобиотиков, в частности в синцитиотрофобласте должна быть цитохромоксидаза. В этом случае происходит внедрение атома кислорода в органическое вещество (в данном случае в цитомегаловирусный белок - как ксенобиотик). При этом цитохром окисляется, чтобы затем быть восстановленным дыхательной цепью. Цепь эта сопряжена с генерацией протонного потенциала. Оксигенированный продукт затем подвергается либо дальнейшему окислению с участием цитохромоксидазы, либо удаляется из клетки. Цитомегаловирусный антиген при попадании в синцитиотрофобласт оказывает сильное токсическое действие и подавляет цепь окислительных процессов, вследствие чего наблюдается снижение в синцитиотрофобласте активности цитохромоксидазы и как следствие увеличивается число ядер в синцитиотрофобласте в состоянии апоптоза.

На фигуре 1 изображена гистохимическая реакция на активность цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении в третьем триместре цитомегаловирусной инфекции с титром антител к цитомегаловирусу 1:1600. Реакция на цитохромоксидазу снижается до 2,50±0,015 усл. ед. (контроль - 7,50±0,03 усл. ед.). Гистохимическая реакция по Муг. Увеличение - 10×100.

На фигуре 2 изображена гистохимическая реакция на активность цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты у роженицы, не болевшей в течение гестации. Интенсивность реакция на цитохромоксидазу- 7,50±0,03 усл. ед. Гистохимическая реакция по Муг. Увеличение - 10×100.

ЛИТЕРАТУРА

1. Кисели Д. Практическая микротехника и гистохимия. Будапешт, 1962; 400.

2. Лилли Р. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. М.: «Мир», 1969; 645.

3. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Морфология апоптоза при нормальном и злокачественном гемопоэзе // Гематология и трансфузиология. 1995:43(5); 21-24.

4. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран. М.: «Наука», 1989; 564.

5. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло // Соросовский образовательный журнал. 1996: №3; 4-16.

6. Скулачев В.П. Законы биоэнергетики // Соросовский образовательный журнал. 1997: №1; 9-14.

7. Филатов И.А. Биоорганическая химия. 1988: 14(6); 725-745.

8. Wilkstrom М., Krab K. Cytochrome oxidase. A. Synthesis. L. 1988.

Способ оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, включающий измерение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности цитохромоксидазы в синцитиотрофобласте до 2,50±0,015 усл.ед. и увеличении числа ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,03% создается угроза гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, может быть использовано для прогнозирования развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования развития кардиоваскулярных осложнений острого коронарного синдрома с подъемом сегмента ST.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и описывает способ прогнозирования лимфогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и предназначено для диагностики ранений ободочной кишки, в частности ранений ее забрюшинного отдела. Пострадавшему с подозрением на повреждение ободочной кишки выполняют первичную хирургическую обработку раны с ее ревизией.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики между туберкулезным плевритом, экссудативным плевритом при неспецифической пневмонии и плевритом на фоне рака легкого.
Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики начальной стадии хронической болезни почек. В крови больного определяют уровень липокалина-2 и альбумина, рассчитывают отношение липокалина-2 к альбумину и при значении больше 0,27 диагностируют хроническую болезнь почек.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики возникновения рестеноза в ранее стентированном сегменте. Сущность способа состоит в том, что исследуют кровь пациентов, определяют уровень циркулирующих СD45+ и при показателе, равном 0,91% и более от общего числа тромбоцитов, судят о наличии рестеноза.

Изобретение относится к области ветеринарии. Предложен способ подготовки биоматериала для ПЦР диагностики вируса лейкоза крупного рогатого скота (ВЛ КРС).
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки эффективности лечения острого герпетического стоматита. Сущность способа состоит в том, что в ротовой жидкости ребенка спектрофотометрически определяют величину содержания меди и кальция и при соотношении величины содержания меди к величине содержания кальция свыше 45 лечение считают эффективным.

Изобретение относится к способу получения многослойных покрытий на основе полиэлектролитных микрокапсул, содержащих биологически активные материалы, для применения в областях диагностики и медицины. Способ включает этап формирования полиэлектролитных микрокапсул, содержащих ядро из композиции по меньшей мере одного биологически активного вещества и формообразующего компонента. На следующем этапе наносят первый полиэлектролитного мультислой на стеклянную подложку, затем наносят промежуточный слой микрокапсул на первый мультислой. Затем наносят второй полиэлектролитный мультислой на поверхность микрокапсул, образующий вместе с первым мультислоем и промежуточным слоем микрокапсул многослойное покрытие. Для повышения максимальной активности используемых биологически активных материалов удаляют формообразующие компоненты из внутреннего объема микрокапсул, устанавливая положение подложки с нанесенным многослойным покрытием таким образом, чтобы подложка занимала верхнее положение по отношению к многослойному покрытию, что позволяет обеспечить возможность вывода молекул растворяемого формообразующего компонента из объема микрокапсул не только за счет диффузии, но и за счет действия сил тяжести. При этом наклон подложки, по отношению к горизонтальной поверхности, выбирают в пределах от 0 до 90 градусов. Указанные многослойные покрытия могут быть использованы для исследования и анализа биологических материалов, например крови, мочи, а также для определения биологически активных соединений в экологии, пищевой промышленности, сельском хозяйстве. 11 з.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности иммунологии, и предназначено для определения аутоантител к прогестерону в сыворотке и плазме крови человека. Изобретение раскрывает способ непрямого твердофазного иммуноферментного анализа, в котором в качестве антигена на поверхность полистирола иммобилизуют конъюгат прогестерона с гемоцианином: гемоцианин-11α-гидроксипрогестерон, гемоцианин-3α-гидроксипрогестерон. Предлагаемый способ технически прост, информативен, обладает высокой чувствительностью и специфичностью при определении антител к прогестерону в сыворотке и плазме крови больных с привычным невынашиванием беременности и бесплодием, его применение позволяет получить достоверные результаты при хранении готовых планшетов до 1 года. Изобретение может быть применено для обследования больных с различной акушерско-гинекологической патологией. 7 табл., 7 пр.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения глубины залегания липидных ядер, являющихся центром атеросклеротических бляшек. Изобретение представляет способ определения глубины залегания липидных ядер атеросклеротических бляшек методом ИК-Фурье спектроскопии, заключающийся в том, что подготавливаются срезы атеросклеротически измененного участка сосудистого русла, записываются инфракрасные спектры пропускания подготовленных срезов, идентифицируются характеристические пики поглощения, отличающийся тем, что определяется срез, имеющий максимальное поглощение в диапазоне 1720-1760 см-1, соответствующем валентным колебаниям связей C=O сложных эфиров холестерина, который отвечает глубине залегания липидного ядра. Изобретение обеспечивает определение качественного состава атеросклеротических бляшек и глубину залегания липидных ядер. 2 ил.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки эффективности антибактериальной терапии при диализном перитоните, включающий введение антибактериальных препаратов в пакет с диализным раствором с последующим введением в брюшную полость, морфологическое исследование диализата, отличающийся тем, что после проведения цикла обмена диализирующего раствора проводят исследование диализата методом клиновидной дегидратации, при этом диализат центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10-15 минут и отбирают 2 пробы - первую из верхней половины пробирки, вторую - из нижней, выявляют структуру кристаллов солей в диализате и при наличии линейных кристаллов в центральной зоне фаций обеих проб оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и не требующую ее продолжения, при наличии линейных кристаллов только в первой пробе оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и требующую ее продолжения, при их отсутствии - как неудовлетворительную. Применение способа позволяет ускорить оценку эффективности антибактериальной терапии и повысить точность оценки. 4 пр., 3 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ). У больных ХГС перед началом КПТ определяют уровень вирусной нагрузки (ВН, МЕ/мл). Определяют уровень фиброза по результатам непрямой фиброэластографии печени (F, кПа). Определяют количество тромбоцитов в крови перед началом КПТ (Трисходн, х109/л). На основании полученных данных проводят расчет прогнозируемой величины минимального количества тромбоцитов (Tpmin, х109/л) в крови с помощью метода множественной линейной регрессии. Значения Tpmin≤150,0х109/л свидетельствуют о наличии риска развития тромбоцитопении у больных ХГС, получающих КПТ. Причем значения Tpmin от 75,0х109/л до 150,0х109/л позволяют предполагать развитие легкой, от 50,0х109/л до 75,0х109/л - умеренной и <50,0х109/л - тяжелой степени тромбоцитопении. Способ позволяет точно, быстро и просто провести прогноз развития тромбоцитопении за счет комплексной оценки наиболее значимых факторов возникновения тромбоцитопении. 1 табл., 2 пр.
(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных. Способ включает отбор проб массой 50,0 г. Пробу измельчают на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм. Приготовливают искусственный желудочный сок по следующей прописи: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводят до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°С, добавляют 7,0 г пищевого свиного пепсина. ИЖС заливают в реактор аппарата «Гастрос» и прогревают до 41-42°С. Помещают стакан с измельченной пробой и аппарат устанавливают в режим переваривания 50 мин с активным перемешиванием и временем отстоя перевара 10 мин. Осадок сливают в объеме 20,0 см3. Наличие личинок определяют под лупой. Для концентрации применяют метод центрифугирования при 5000 об/мин в течение 10 мин. Далее из пробирки аспирируют 10,0 см3 верхнего слоя жидкости. Оставшийся осадок с личинками сохраняют для дальнейших исследований замораживанием при -20°С. Заявленный способ позволяет эффективно обнаруживать возбудителя токсокароза при посмертной диагностике данной болезни. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, и может быть использовано в гепатологии и гастроэнтерологии для диагностики фибротических процессов печени. Сущность неинвазивного способа диагностики степени фиброза печени: формируют группу условно здоровых обследуемых (F0), группу пациентов с установленной гистологически умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группу пациентов с установленной гистологически выраженной степенью фиброза (F3-F4), измеряют средние скорости движения суспензии эритроцитов и минимальные, средние и максимальные диаметры эритроцитов в период воздействия переменного электрического поля у группы условно здоровых обследуемых (F0) и у групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных данных определяют электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов, сравнивают электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов группы условно здоровых обследуемых (F0) с группой пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группой пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных результатов формируют массив данных для диагностики степени фиброза печени. Затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с неясной степенью фиброза с определением электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов с последующим их сравнением с соответствующими значениями, определенными для группы условно здоровых обследуемых (F0), группы пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группы пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и при наличии 60% и более отличающихся параметров от группы условно здоровых обследуемых (F0) и входящих в границы значений для групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) или с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и выявляют степень фиброза печени для данного пациента. Использование способа позволяет более точно определить степень фиброза печени у пациента на ранних стадиях заболевания независимо от этиологии возникновения заболевания. 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. Сущность способа состоит в том, что при выявлении уровня тканевого ингибитора матриксных металлопротеиназ-1 более 242,8 нг/мл и сердечно-сосудистого сопряжения более 1,29 риск развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий оценивается как высокий. Использование заявленного способа позволяет точно осуществить прогноз риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. 2 ил., 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарии и животноводства и может быть использовано при искусственном осеменении для выявления генетически неполноценных сперматозоидов. Способ включает добавление в пробы эякулята in vitro в среде для разбавления перекиси водорода в концентрации 0,5-1,0 мМоль с последующим выявлением и определением в сперматозоидах первичных морфологических признаков апоптоза, одноцепочечных разрывов и фрагментации ДНК, интенсивности процессов перекисного окисления липидов. При этом при выявлении низкого процента апоптотически гибнущих сперматозоидов до 10-15% достаточно яркого и выраженного свечения Гало, возрастания содержания ТБК-реактивных продуктов не более чем на 30-40% по отношению к контролю, оценивают сперматозоиды как генетически полноценные. Использование изобретения позволяет улучшить диагностику патологических нарушений в сперматозоидах на хроматиновом уровне.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для количественного определения оксима пиностробина в плазме крови. Для этого проводят определение оксима пиностробина в плазме крови методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии с использованием смеси плазмы крови с оксимом пиностробина и внутреннего стандарта - вещества, близкого по строению молекулы к анализируемому веществу. Разделение продуктов проводят методом обращенно-фазной хроматографии на колонке размером 4,6×100 мм, термостатируемой при 30°C, скорость элюирования 0,5 мл/мин. В качестве элюента используют смесь 10 мМ ацетата аммония и ацетонитрила в соотношении 10:90 соответственно. Пик оксима пиностробина детектируют по иону с m/z 269.10, образующемуся в результате фрагментации иона оксима пиностробина с m/z 286.10, а его концентрацию рассчитывают по формуле: Coxime=2,073299×RS, где Coxime - концентрация оксима пиностробина (мкг/мл); RS - отношение площади хроматографического пика оксима пиностробина к площади пика внутреннего стандарта. Изобретение обеспечивает метод количественного определения оксима пиностробина в плазме крови для использования в экспериментальной и клинической фармакокинетике. 2 табл., 6 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к цитомегаловирусу, и при его значении 1:1600, снижении активности цитохрооксидазы в синцитиотрофобласте до 2,50±0,015 усл.ед. и увеличении числа ядер в состоянии апоптоза до 3,0±0,03 создается угроза гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода. Способ позволяет оценить угрозу гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода за счет подавления цепи окислительных процессов. 2 ил.

Наверх