Способ получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих токсичный металл, и материал, полученный этим способом

Группа изобретений относится к области биотехнологии и предназначена для получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть, кадмий, свинец. Способ включает использование мочи донора, содержащей токсичный металл. Используют мочу крыс. Осуществляют парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца. После этого осуществляют сбор мочи после анализа на содержание в ней токсичного металла, замораживание собранной мочи и ее лиофилизацию. Заявлен также биологический референтный материал, характеризующийся тем, что он получен заявленным способом. Заявленная группа изобретений позволяет получить референтный материал, содержащий тяжелые металлы в формах, соответствующих естественному спектру его форм в живом организме, и имеющий матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых нативных образцов мочи. 2н. и 2 з.п. ф-лы, 3 пр.

 

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть, кадмий, свинец, а также к материалу, полученному предлагаемым способом, и может быть использовано в токсикологии, медицине, ветеринарии при определении содержания указанных токсичных металлов в моче.

В изобретении используется следующая терминология.

Биоматериал - часть органов, тканей, клеточных или субклеточных структур организма.

Затравка - введение токсичного металла тем или иным способом в организм животного.

Парентерально - введение вещества в организм, при котором оно минует желудочно-кишечный тракт.

Референтный материал - «в качестве материала (вещества) стандартного образца может быть использован референтный материал, т.е. материал (вещество) достаточно однородный и стабильный по отношению к одному или нескольким определенным свойствам, применяемый в соответствии с назначением в измерительном процессе [Р.50.2.056-2007. ГСИ. Образцы материалов и веществ стандартные. Термины и определения; ISO VIM: 1993»].

Стандартный образец (состава) - [термин указан с учетом его определений, приведенных в ГОСТ 8.315-97, а также в международных нормативных документах] образец вещества или материала, химический состав или физические свойства которых:

- типичны для конкретной группы веществ или материалов;

- определены с необходимой точностью;

- отличаются высоким постоянством;

- удостоверены сертификатом.

Токсичный - ядовитый, вызывающий негативные изменения в структурах и/или функциях молекулярных, надмолекулярных, клеточных образований, тканях, органах и организме в целом.

Токсичные металлы (далее - ТМ) - условная группа металлов, не несущих биологической функции в организме, но склонных к бионакоплению, токсичные даже в небольших количествах [Загрязнение Арктики 2002. Программа по мониторингу и оценке окружающей среды Арктики. АМАП. Осло. - 2002-110 с.], к которым относят свинец, ртуть, кадмий, мышьяк, таллий, ванадий, никель, хром, уран и иногда другие металлы.

Для определения содержания ТМ в различного вида материалах используются методы анализа, в частности, такие как нейтронно-активационный, атомно-эмисионный с дугой постоянного тока, атомно-эмисионный с индуктивно-связанной плазмой, масс-спектрометрический с индуктивно-связанной плазмой, атомно-абсорбционный с электротермической атомизацией, атомно-абсорбционный с атомизацией в пламени, инверсионный вольтамперометрический, которые требуют применения соответствующих материалов сравнения - стандартных образцов, содержащих анализируемый ТМ (аналит) в определенных количествах.

Для определения содержания ТМ известны стандартные образцы (далее СО), изготовленные на основе растворов солей ТМ.

Так, в частности, известен СО [см. Стандартный Образец Состава Раствора Ионов Ртути (II) - ГСО РР) 7343-96], который представляет собой раствор ионов ртути (II) в водном растворе азотной кислоты с концентрацией 1 моль/дм3.

Рассматриваемый стандартный образец может обеспечить надежность результатов анализа в тех случаях, когда исследуемый материал также представляет собой водный раствор ТМ или близок к таковому по своим свойствам.

Однако указанные стандартные образцы мало пригодны для анализа биоматериалов таких, как моча, которые далеки по свойствам от водных растворов и имеют характерную молекулярную структуру (матрицу).

Крайне важным для получения точных результатов анализа является обеспечение максимально возможного подобия матрицы стандартного образца и исследуемого биоматериала, за счет чего достигается сходство условий (химические связи, валентности, молекулярные структуры и пр.), в которых находится ТМ (аналит) в стандартном образце и в исследуемом биоматериале.

С этой точки зрения более надежными и перспективными являются референтные материалы для производства СО состава мочи, содержащих ТМ, изготовленные на основе мочи животного или человека.

Известен референтный материал на основе мочи человека, производства США, содержащий ртуть, и способ получения указанного материала, которые выбраны в качестве ближайших аналогов заявляемых изобретений [см. http:nist.gov/srm - SRM 3668 NIST].

Рассматриваемый референтный материал представляет замороженную мочу человека с заданным содержанием в ней ртути.

Способ получения данного материала (in vitro) включает добавление необходимого количества водорастворимой неорганической соли ртути в мочу человека с последующим ее замораживанием.

В ходе приготовления референтного материала исходная моча подвергается центрифугированию, при этом из нее удаляют часть естественных компонентов матрицы. Кроме того, в исходную мочу добавляют несвойственные этому биоматериалу компоненты, например азотную кислоту.

Таким образом, хотя рассматриваемый референтный материал изготавливают на основе человеческой мочи, вышеуказанные факторы не позволяют добиться высокой степени адекватности матрицы референтного материала и исследуемых образцов мочи, что может негативно сказаться на результатах определения содержания ТМ в моче. При этом нужно учесть, что по российским нормативам моча человека, донора, является условно инфицированным материалом, что налагает значительные ограничения на работу с ней так же как на импорт биологических материалов [Письмо Центра государственного санитарно-эпидемиологического надзора в Санкт-Петербурге от 05.01.2001. №13-10-3-1].

Задачей заявляемых изобретений является разработка референтного материала для производства СО состава мочи и способа его получения, обеспечивающих повышение надежности и точности результатов определения содержания ТМ в моче.

Сущность изобретения заключается в том, что в способе получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, включающем использование мочи донора, содержащей токсичный металл, согласно изобретению используют мочу крыс, при этом осуществляют парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, сбор мочи после анализа на содержание в ней токсичного металла, замораживание собранной мочи и ее лиофилизацию.

В частном случае реализации способа парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 13 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3.

Сущность изобретения в отношении биологического референтного материала заключается в том, что он получен заявляемым способом.

В частном случае реализации изобретения биологический референтный материал получен из мочи крыс, в организм которых парентеральное введение токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, при этом содержание ртути, или кадмия, или свинца в референтном материале составляет соответственно от 0,33 мкг до 1,67 мкг, от 0,10 мкг до 1,0 мкг и от 5,0 мкг до 20,0 мкг на один грамм лиофилизата.

Принципиально важным в заявляемом способе является то, что для получения референтного материала используют мочу крыс, содержащую токсичный металл, внедренный в матрицу мочи в результате его естественной ассимиляции организмом крыс (in vivo).

Тем самым обеспечивается высокая степень адекватности матрицы получаемого референтного материала и матрицы исследуемых образцов мочи, при этом внедренный в матрицу референтного материала ТМ, в частности ртуть, приобретает естественное многообразие форм, в которых ТМ может находиться в живом организме.

Согласно заявляемому способу введение ТМ в организм крыс осуществляют парентерально путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или кадмия, или свинца.

Как показали исследования динамики бионакопления ТМ в моче крыс, при инъекционном методе введения ртути, или кадмия, или свинца в организм крыс происходит достаточно быстрое (в течение 5-8 дней) накопление указанных ТМ в моче крыс с выходом на необходимый уровень концентраций.

Парентеральное введение указанного инъекционного раствора может осуществляться, в частности, с помощью внутримышечных или внутрибрюшинных инъекций.

Конкретное требуемое содержание ТМ в референтном материале обеспечивается дозированным введением животному инъекционного раствора, содержащего определенное количество ТМ, и отбором мочи по достижении содержания в ней ТМ, обеспечивающего требуемую концентрацию ТМ в референтном материале. Содержание ТМ в моче крыс определяют путем анализа собираемой мочи.

Операция замораживания собранной мочи с последующей ее лиофилизацией обеспечивает получение референтного материала в форме, удобной для хранения, транспортировки и для производства получаемых из референтного материала СО.

Таким образом, техническим результатом, достигаемым при реализации изобретения в отношении заявляемого способа, является получение референтного материала, содержащего ТМ в формах, соответствующих естественному спектру его форм в живом организме, и имеющего матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых нативных образцов мочи.

Это позволяет при использовании СО, изготавливаемых из референтого материала, получаемого по заявляемому способу, обеспечить надежность и точность результатов определения содержания ТМ в моче.

В случае введения в организм крыс инъекционного водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 13 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, заявляемый способ обеспечивает получение референтного материала с содержанием в нем указанных ТМ, пригодного для изготовления СО состава мочи, используемых при диагностике отравлений ртутью, кадмием или свинцом.

Заявляемый биологический референтный материал представляет собой органо-минеральную матрицу (лиофилизат) мочи в виде пористой массы серого цвета с внедренными в нее ртутью, или кадмием, или свинцом и характеризуется тем, что он получен в соответствии с заявляемым способом.

Заявляемый референтный материал может иметь различное содержание ТМ, которое обеспечивает изготовление СО состава мочи с требуемой концентрацией ТМ.

Техническим результатом, достигаемым при реализации заявляемого изобретения в отношении материала, является получение предназначенного для приготовления СО состава мочи референтного материала, содержащего ртуть, или кадмий, или свинец в формах, соответствующих естественному спектру форм ТМ в живом организме, имеющего матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых образцов мочи.

В случае, когда биологический референтный материал получен из мочи крыс, в организм которых парентеральное введение токсичного металла осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, обеспечивается содержание ртути, или кадмия, или свинца в референтном материале соответственно от 0,33 мкг до 1,67 мкг, от 0,10 мкг до 1,0 мкг и от 5,0 мкг до 20,0 мкг на один грамм лиофилизата.

Это позволяет использовать такой референтный материал для производства СО состава мочи, используемых при проведении анализа мочи для диагностики интоксикаций указанными ТМ.

Заявляемый способ осуществляют следующим образом.

Проводят подготовку крыс к процессу получения биологического референтного материала, выдерживая крыс в виварии в течение времени, необходимого для их адаптации к условиям содержания.

Осуществляют дезинфекцию и промывку клеток, поилок, весов, емкостей для сбора мочи.

Выбирают суточную затравочную дозу - количество вводимого в течение суток ТМ на 1 кг массы животного. При этом величина затравочной дозы должна обеспечить требуемое содержание ТМ в референтном материале и определяется на основании опытных данных по изучению влияния величины дозы на содержание ТМ в моче экспериментального животного.

Готовят инъекционный раствор, содержащий водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца.

В качестве водорастворимых солей ртути, кадмия, свинца могут быть использованы, в частности, ацетаты или нитраты указанных ТМ, характеризующиеся достаточно высокой стойкостью и растворимостью в воде.

Чтобы избежать инфильтрации тканей при инъекции, в качестве основы для инъекционного раствора используют физиологический раствор, в частности,раствор, полученный из расчета растворения одной таблетки реактива Рингера-Локка в 100 см3 теплой дистиллированной воды (физиологический раствор Рингера-Локка).

Концентрацию водорастворимой соли ТМ в инъекционном растворе выбирают, исходя из величины суточной затравочной дозы с учетом обеспечения физиологически приемлемого объема инъекционного раствора для одной инъекции. Указанный объем для крыс составляет 0,1 см3 на 1 кг массы животного.

Осуществляют парентеральное введение в организм крыс ТМ путем внутримышечных инъекций водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца.

Проводят анализ проб мочи на содержание в ней токсичного металла.

По достижении требуемого содержания ТМ в моче отсаживают крыс в обменные клетки и осуществляют сбор мочи в течение 24 часов.

Собранную мочу расфасовывают по 5,0 см3 во флаконы и добавляют в каждый флакон по 0,1 см3 пеногасителя, в качестве которого используют, в частности, изопропанол.

Замораживают мочу с последующей ее лиофилизацией при режимах, обычно применяемых для указанных операций.

В частности, замораживают мочу в течение не менее 4-х часов при температуре не выше -15°С, а затем осуществляют ее лиофилизацию при температуре ниже -50°С в условиях вакуума при давлении менее 0,20 mBar до постоянного веса.

В результате осуществления способа получают биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с требуемым содержанием ртути, или кадмия, или свинца.

Материал хранят и транспортируют в укупоренной стеклянной таре при температуре +4±2°С.

Ниже приведены примеры осуществления группы изобретений.

Пример 1

Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть.

Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 32 особей. Средняя масса крыс составляла 237±32 г.

Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,10 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата ртути.

Концентрация ртути в инъекционном растворе соответствовала затравочной дозе 0,5 мг/кг при введении 0,1 см3 инъекционного раствора на 1 кг массы крысы.

В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысы.

На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу, при этом получали по 14,7±6,1 см3 мочи от каждой крысы.

Моча крыс была подвергнута анализу на содержание ртути, которое составляло около 50 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи. В этой моче были выявлены три формы ртути - органическая (73%), неорганическая (25%) и металлическая (2%).

Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.

Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).

Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием ртути 1,67 мкг на один грамм лиофилизата.

Пример 2

Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих кадмий.

Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 25 особей. Средняя масса крыс составляла 223±26 г.

Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,10 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата кадмия.

Концентрация кадмия в инъекционном растворе соответствовала затравочной дозе 0,5 мг/кг при введении 0,1 см3 инъекционного раствора на 1 кг массы крысы.

В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора из расчета из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысы

На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу. Было получено по 15,3±10,3 см3 мочи от каждой крысы.

Моча крыс была подвергнута анализу на содержание кадмия, которое составляло около 13 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи.

Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.

Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).

Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием кадмия 0,43 мкг на один грамм лиофилизата.

Пример 3

Получали биологический референтный материал для приготовления стандартных образцов состава мочи, содержащих свинец.

Использовали беспородных белых крыс линии Vistar в количестве 16 особей. Средняя масса крыс составляла 205±15 г.

Для парентерального введения готовили инъекционный раствор на основе физиологического раствора Рингера-Локка, для чего к 100 см3 теплого (40-50°С) физиологического раствора добавляли 0,1 см3 уксусной кислоты и навеску ацетата свинца.

В течение 3-х дней осуществляли ежесуточное парентеральное внутримышечное введение в мышцы задних лап крысы инъекционного раствора в дозе 45 мг/кг из расчета 0,1 см3 на 1 кг массы крысы.

На 8-е сутки крыс отсаживали в обменные клетки и в течение 24 часов собирали мочу. Было получено по 12,6±3,2 см3 мочи от каждой крысы.

Моча крыс была подвергнута анализу на содержание свинца, которое составляло около 315 мкг/дм3. Вся моча крыс была объединена, таким образом был получен банк крысиной мочи.

Собранную мочу по 5,0 см3 расфасовывали во флаконы и в каждый флакон добавляли по 0,1 см3 пеногасителя - изопропанола.

Замораживали мочу в течение не менее 4-х часов при температуре -20°С, а затем осуществляли ее лиофилизацию при температуре -50°С при давлении 0,20 mBar в течение 10 часов (до постоянного веса).

Получили биологический референтный материал, представляющий собой лиофилизат мочи крыс в виде пористой массы серого цвета с содержанием свинца 10,5 мкг на один грамм лиофилизата.

1. Способ получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих токсичный металл, включающий использование мочи донора, содержащей токсичный металл, отличающийся тем, что используют мочу крыс, при этом осуществляют парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, сбор мочи после анализа на содержание в ней токсичного металла, замораживание собранной мочи и ее лиофилизацию.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3.

3. Биологический референтный материал, характеризующийся тем, что он получен способом по п. 1.

4. Биологический референтный материал по п. 3, отличающийся тем, что он получен из мочи крыс, в организм которых парентеральное введение токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца, осуществляют до достижения содержания в моче ртути от 10 мкг/дм3 до 50 мкг/дм3, или кадмия от 3 мкг/дм3 до 30 мкг/дм3, или свинца от 150 мкг/дм3 до 600 мкг/дм3, при этом содержание ртути, или кадмия, или свинца в референтном материале составляет соответственно от 0,33 мкг до 1,67 мкг, от 0,10 мкг до 1,0 мкг и от 5,0 мкг до 20,0 мкг на один грамм лиофилизата.



 

Похожие патенты:
Группа изобретений относится к получению стандартных образцов состава крови, содержащих ртуть, кадмий и свинец, и может быть использована в токсикологии, медицине и ветеринарии при определении содержания указанных токсичных металлов в крови.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть применено для регенерации тканей мезодермального происхождения с использованием фибробластов взрослого организма.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения плюрипотентных стволовых клеток, включающий процесс дедифференцировки соматических клеток, культивирование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в присутствии агента, изменяющего эпигенетический статус клетки, и культивирование стволовых клеток в отсутствие указанного агента.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стимулированных дендритных клеток (ДК), и может быть использовано в медицине для иммунотерапии рака.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения дезинфицированного препарата клеток из ткани млекопитающего.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения композиций, содержащих стволовые плацентарные клетки. Способ включает: (a) получение адгезивных плацентарных клеток в растворе, включающем от 2% до 10% декстрана, от 2,5% до 10% ДМСО и от 4% до 10% HSA, (b) фильтрацию полученного раствора через 70 мкм - 100 мкм фильтр; (c) разбавление указанных клеток до содержания не более 10±3·106 клеток на миллилитр раствором, включающим от 2% до 5% декстрана, от 2,5% до 10% ДМСО и от 4% до 10% HSA, и (d) криоконсервацию раствора, содержащего клетки.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению популяции Tr1-клеток, направленных против коллагена типа II, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к культивированию клеток и их применению для получения полипептидов. Способ получения рекомбинантного посттрансляционно модифицированного полипептида предусматривает стадию продукции.

Изобретения относятся к области клеточной биологии, фармакологии и медицины. Описан способ культивирования стволовых клеток, исключающий их спонтанную дифференцировку.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложен выделенный пептид, представляющий собой фрагмент белка CDC45L и обладающий способностью индуцировать цитотоксические Т-лимфоциты в форме комплекса с молекулой HLA-A*2402 или HLA-A*0201.

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в том числе к медицинской и косметической трансплантологии, и представляет собой микротрансплантат (MKT), состоящий из клеток человека, прикрепившихся на поверхности микроносителя, состоящего из полигликолидных волокон, или их группы, диаметром до 20 мкм и длиной от 100 до 1000 мкм. При посеве клеток на тонкие полигликолидные волокна происходит селекция против стареющих и поврежденных клеток. Поэтому в состав MKT входят только сравнительно молодые клетки, что увеличивает их терапевтическую эффективность. Введение прикрепленных клеток позволяет им сохранять это прикрепленное состояние в новом микроокружении, что существенно влияет на профиль генной экспрессии, который соответствует нормально функционирующим клеткам, а не изменяется в сторону воспалительных изменений, что происходит при введении неприкрепленных клеток. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ выделения ганглиозида GM1 предусматривает получение тканей не бычьего и не свиного происхождения, содержащих клетки, продуцирующие GM1; выделение из указанных тканей клеток, продуцирующих ганглиозид GM1; экспансию указанных клеток, продуцирующих GM1, в культуре при подходящих условиях, способствующих экспансии указанных клеток; экспрессию ганглиозида GM1 в культуре при подходящих условиях; выделение указанного ганглиозида GM1 из указанной культуры, который может быть использован для лечения болезни Паркинсона и других неврологических заболеваний. Получение ганглиозида данным способом позволяет избежать возникновения прионных заболеваний при его дальнейшем использовании. 2 н. и 14 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ предифференцировки стромальных стволовых клеток костного мозга. Способ предусматривает получение монослойной культуры стромы костного мозга человека, получение культурального супернатанта ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации и использование этой среды для обогащения популяции тирозингидроксилаза-позитивными клетками культуры стромы костного мозга путем инкубации его в среде, содержащей 50% супернатанта трехдневной культуры ножек мозга эмбриона свиньи. Полученные аутологичные клетки стромы костного мозга могут быть использованы для терапии нейродегенеративных заболеваний. Изобретение может быть использовано в медицине. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и трансплантологии (клеточной терапии). Описан способ получения пациент (донор)-специфических фибробластоподобных клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека. Кластеры ИПС клеток механически диссоциируют до моноклеточной культуры в присутствии диспазы. Клеточную суспензию помещают в среду, состоящую из среды для культивирования недифференцированных ЭС клеток (mTeSr) + среды для культивирования эмбриоидных тел (ЭТ) (ЭТ среда) в соотношении 1:1. Далее получают эмбриоидные тела методом висячей капли или помещением клеток в 96-луночный круглодонный планшет. Потом переносят трехдневные ЭТ на 24-луночную плашку, покрытую 0.1% желатином, по 1 телу на лунку в 1 мл среды для ЭТ. Культивируют до появления монослоя фибробластоподобных клеток через 8-10 суток с предварительным удалением остатков эмбриоидного тела. Изобретение позволяет получать донор- и пациент-специфические фибробластоподобные клетки для использования их в трансплантологии и в качестве аутологичного фидерного слоя для культивирования индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека и поддержания их в недифференцированном состоянии. 10 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ получения постоянной линии клеток-амниоцитов человека, включающий трансфекцию зародышевых клеток-амниоцитов человека молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую продукты генов аденовирусов Е1А и Е1В, причем указанную последовательность нуклеиновой кислоты получают из серотипа 5 аденовируса человека, и последующую трансфекцию постоянной линии клеток-амниоцитов человека, полученной на первом этапе, молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую большой SV40 Т-антиген. 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 пр.

Изобретение относится к медицине. Для получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ) взрослого донора-трупа производят удаление из глазного яблока донора-трупа роговично-склерального диска. При целостности всех частей сосудистой оболочки, глазное яблоко без роговично-склерального диска полностью погружают в емкость с фосфатно-солевым буфером с pH 7,4, производят полное отделение склеры от собственно сосудистой оболочки глаза (ССО) путем рассечения склеры меридиональными разрезами спереди назад на 2, 3 или 4 «лепестка» и пересечения со стороны супрахориоидального пространства вортикозных вен и внутрисклеральной части зрительного нерва, после чего производят три разреза хороидально-пигментного комплекса (ХПК), состоящего из ССО и РПЭ: первый круговой разрез на расстоянии 1 мм от зубчатой линии, один меридиональный в любом меридиане в направлении от первого кругового разреза спереди назад к культе диска зрительного нерва и второй круговой разрез на расстоянии 1 мм от культи зрительного нерва. Далее ХПК аккуратно отделяют от нейральной сетчатки пинцетом и укладывают на дно стерильной чашки Петри в положении клетками РПЭ вверх, заливают 3 мл смеси раствора 0,25% трипсина и раствора Версена в соотношении 1:1 по объему, инкубируют при 37°C и 5% концентрации CO2 в течение 25 минут, после чего РПЭ отделяют с поверхности ССО струей фосфатно-солевого буфера с pH 7,4. Полученную взвесь клеток собирают в пробирку, центрифугируют, сливают надосадочную жидкость, к полученному осадку добавляют питательную среду следующего состава: среда Игла в модификации Дульбекко со средой Хэма F12 - 89%, эмбриональная телячья сыворотка - 10%, смесь антибиотиков, включающая пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл - 1%. При этом культуру клеток инкубируют при 37°C и при 5% концентрации CO2, питательную среду заменяют каждые 3-4 дня. Изобретение позволяет снизить степень загрязнения культуры клеток. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложено применение терапевтически эффективного количества плацентарных стволовых клеток в получении фармацевтической композиции для использования в лечении индивидуума, имеющего заболевание, расстройство или патологическое состояние легких, причем терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для того, чтобы вызвать детектируемое улучшение одного или нескольких симптомов указанного заболевания, расстройства или патологического состояния; где указанное заболевание, расстройство или патологическое состояние легкого представляет собой легочный саркоидоз, астму, бронхит или острый респираторный дистресс-синдром, и при этом плацентарные стволовые клетки являются CD10+, CD34-, CD105+ и CD200+, что определяется с помощью проточной цитометрии. 11 з.п. ф-лы, 4 пр., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к выделенному пептиду, который имеет индуцибельность цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), а также к его применению. Предложенный пептид может использоваться в противораковой иммунотерапии, более конкретно, в противораковых вакцинах. Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью лечить рак. 15 н. и 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, регенеративной медицине и может быть использовано в цитологии, гистологии, трансплантологии, микробиологии, биомедицинских исследованиях. Предложена матрица для культивирования клеток. Матрица содержит гиалуроновую кислоту, стабилизированную десмозином при УФ-фотополимеризации в условиях постепенной лиофилизации. Матрица также содержит коллаген I типа и адгезивный пептид Arg-Gly-Asp. Матрица обладает устойчивостью структуры во влажной среде более 7 суток, стимулирует клеточную адгезию и миграцию при клеточном культивировании. 12 ил., 1 пр.

Представленная группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способов сбора функциональных клеток (варианты). Охарактеризованные решения заключаются в имплантации имплантируемой медицинской емкости под кожу на срок не более двух недель, где популяция клеток мобилизована в емкость с помощью любого из белков HMGB1, HMGB2, HMGB3, S100A8, S100A9 или гиалуроновой кислоты или смеси любых двух или более из указанных. Указанные факторы обладают активностью привлечения конкретных функциональных клеток в организм. Представленные изобретения позволяют эффективно и безопасно собирать биологически функциональные клетки, в частности, такие как стволовые клетки. 6 н. и 1 з.п. ф-лы, 37 ил., 1 табл., 12 пр.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и предназначена для получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть, кадмий, свинец. Способ включает использование мочи донора, содержащей токсичный металл. Используют мочу крыс. Осуществляют парентеральное введение в организм крыс токсичного металла в виде его водорастворимой соли путем инъекций крысам водного раствора, содержащего водорастворимую соль ртути, или водорастворимую соль кадмия, или водорастворимую соль свинца. После этого осуществляют сбор мочи после анализа на содержание в ней токсичного металла, замораживание собранной мочи и ее лиофилизацию. Заявлен также биологический референтный материал, характеризующийся тем, что он получен заявленным способом. Заявленная группа изобретений позволяет получить референтный материал, содержащий тяжелые металлы в формах, соответствующих естественному спектру его форм в живом организме, и имеющий матрицу, близкую по свойствам к матрице исследуемых нативных образцов мочи. 2н. и 2 з.п. ф-лы, 3 пр.

Наверх