Способ выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии c57b1/6



Способ выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии c57b1/6
Способ выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии c57b1/6

 


Владельцы патента RU 2567275:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тверской государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Тверской ГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к нейрохимии, патофизиологии, неврологии и психиатрии, и касается выявления противосудорожного действия цитиколина. Выявление проводят на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии C57B1/6. Действие цитиколина оценивают после его введения в дозе 500 мг/кг за час до введения пентилентетразола. Введение проводят в разном режиме в разных группах животных, а именно: ежедневно в течение 24 дней, однократно на 14 день кидлинга или в течение 14 дней кидлинга. Способ обеспечивает возможность выявления спектра и степени выраженности противосудорожного действия препарата. 2 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохимии, патофизиологии, неврологии и психиатрии. Оно связано с повышением эффективности лечения эпилепсии. Эпилепсия - сложное по этиологии и патогенезу нервно-психическое заболевание, имеющее хронически-прогредиентное течение, полиморфность как пароксизмальных проявлений, так и нарушений психической деятельности. С одной стороны, классические и новые противоэпилептические лекарственные средства могут купировать повышенную судорожную активность мозга, но, как правило, не обладают защитными свойствами в отношении нейродегенерации. Таким образом, проблема предотвращения повреждения головного мозга в результате судорог остается нерешенной. С другой стороны, действие большинства противоэпилептических препаратов сопровождается рядом побочных эффектов, к числу которых можно отнести нарушение основных когнитивных функций - внимания, памяти, восприятия и др. В связи с изложенным представлялось целесообразным исследовать влияние цитиколина - аналога эндогенного цитиколина, который в настоящее время широко применяется в лечении когнитивных, чувствительных, двигательных неврологических нарушений дегенеративной и сосудистой этиологии, и обладает нейрорегенеративными и нейропротективными свойствами.

Известен способ активации каспазы-3 в головном мозге крыс на модели пентилентетразолового (ПТЗ) киндлинга [1]. При этом крысам самцам линии Вистер с массой 200-500 г вводили внутрибрюшинно пентилентетразол в дозе 37,5 мг/кг каждые 8 часов (с перерывом на выходные дни) в течении 5 недель (15 инъекций). Известно, что активация каспазы-3 является ключевым событием в апоптозе клеток головного мозга [2]. Показано, что ПТЗ киндлинг вызывает активацию каспазы-3 в мозга [2]. Показано, что ПТЗ киндлинг вызывает активацию каспазы-3 в коре больших полушарий, в гиппокампе и мозжечке крыс. Это является свидетельством как апоптотической, так и «неапоптотической» нейродегенерации в условиях ПТЗ киндлинга.

Недостатком данного способа является отсутствие сопоставительных данных с применением лекарственных веществ, предотвращающих гибель нейронов при активации каспазы-3 на модели ПТЗ киндлинга.

В качестве ближайшего аналога (прототипа) выбран способ диагностики предупреждения нейродегенерации нейронов у животных с помощью пирацетама в условиях ПТЗ киндлинга [3]. Известно, что пирацетам - это ноотропное средство, которое повышает устойчивость мозга к гипоксии, интегративной работе, положительно влияет на процессы памяти и обучения, улучшает кровообращение головного мозга и не оказывает седативного действия [4]. В условиях ПТЗ киндлинга у мышей показано, что применение пирацетама ведет к превенции нейрональных повреждений и снижению дефицита ранее полученных навыков при обучении у животных.

Недостатком данного способа является отсутствие оценки противосудорожного действия пирацетама в условиях, когда ПТЗ киндлинг вызывает нейродегенерацию мозговой ткани у мышей.

Задачей изобретения является разработка способа, который позволяет выявить противосудорожную активность цитиколина в условиях ПТЗ киндлинга у мышей самцов линии С57В 1/6.

Поставленная задача решается благодаря тому, что способ выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии С57В 1/6 предусматривает следующие отличия: было проведено 5 серий опытов с целью достоверной оценки спектра и степени противосудорожного действия цитиколина.

Сущность предложенного способа заключается в том, что мышам самцам линии С57В 1/6 ежедневно вводили цитиколин в течение 24 дней и за час до титрирования ПТЗ. При тяжести судорог 3-5 баллов и длительное введение цитиколина достоверно приводило к повышению судорожного порога, тем самым предотвращая появление как клонических, так и тонической фазы судорог с летальным исходом на 15,80% и 24,34% соответственно. У данных мышей с длительной терапией цитиколина в условиях ПТЗ киндлинга противосудорожный эффект более выражен.

Между совокупностью существенных признаков заявленного объекта и достигнутыми техническими результатами существует причинно-следственная связь: увеличение длительности введения цитиколина мышам расширяет его спектр и увеличивает степень его противосудорожного действия.

Новыми признаками заявленного способа выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии С57В 1/6 является:

1. Наличие противосудорожного действия после однократного введения цитиколина на 14 день ПТЗ киндлинга, повышение судорожных порогов (тяжесть судорог 2-3 балла).

2. Проявление противосудорожного действия цитиколина при ежедневном введении в течение 14 дней животным, что приводило к повышению на 16,83% порогов клонической фазы судорог, по сравнению с группой контроля животных, но не оказывало влияние на тоническую фазу судорог.

3. Выявление противосудорожного действия цитиколина при ежедневном введении в течение 24 дней животным, что повышает порог судорожной активности, о котором свидетельствует предотвращение появления как клонической, так и тонической фаз судорог с летальным исходом на 15,80% и 24,34% соответственно.

Способ разработан на основе следующих экспериментов:

1. Методика экспериментов.

Мышей самцов линии С57В 1/6 содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Все процедуры и эксперименты на животных проводили в соответствии с «Правилами лабораторной практики в Российской Федерации», утвержденными приказом Министерства здравоохранения РФ №267 от 19.06.2003 г.

Проведено 5 серий опытов. Во всех сериях цитиколин вводили внутрибрюшинно мышам самцам линии С57В 1/6 в дозе 500 мг/кг за час до введения (киндлинг) и титрования (острые судороги) конвульсанта пентилентетразола (ПТЗ).

В 1-й серии опытов (n=30) изучали возможное влияние цитиколина на развитие хронической эпилептизации мозга - киндлинга, который осуществляли путем ежедневного внутрибрюшинного введения ПТЗ в субконвульсивной дозе 30 мг/кг данным мышам в течение 24 дней. Как известно, феномен киндлинга заключается в том, что повторные введения субсудорожных доз конвульсанта вызывают постепенное повышение судорожной активности мозга, которое проявляется в возникновении судорог и увеличении их тяжести при последующих введениях конвульсанта. Феноменологически он проявляется в снижении судорожного порога в ответ на тестирующую дозу конвульсанта. Ежедневно у каждого животного оценивали тяжесть судорожной реакции в ответ на введение ПТЗ и выражали ее в баллах по 5-балльной шкале. Судорожную реакцию в ответ на введение конвульсанта оценивали по усредненному баллу у данных мышей каждой группы. Опытным животным этой серии цитиколин вводили внутрибрюшинно перед каждой инъекцией ПТЗ в течение 24 дней. Контрольным мышам самцам линии С57В 1/6 в аналогичных условиях опыта в том же объеме вводили физиологический раствор.

Во 2-5-й сериях опытов на модели острой генерализованной эпилептической активности определяли величину порогов судорожной реакции мышей самцов линии С57В 1/6, подвергшихся ПТЗ киндлингу. С этой целью животным внутривенно вводили 1% раствор ПТЗ со скоростью 0,01 мл/с и регистрировали пороги клонических судорог и тонической фазы судорог с летальным исходом. Пороговую дозу ПТЗ, необходимую для наступления указанных судорог, вычисляли для каждого животного в мг/кг. Величину порогов судорожной реакции мышей определяли через сутки после 14-й и 24-й инъекции ПТЗ.

Через сутки после 14-й и 24-й инъекции ПТЗ опытным животным 2-й и 3-й серий цитиколин вводили однократно за час до титрования ПТЗ, а опытным мышам 4-й и 5-й серий цитиколин вводили ежедневно в течение 14-и и 24-х дней и за час до титрования ПТЗ. Контрольным животным этих серий в тех же условиях опыта и в том же объеме вводили физиологический раствор.

Таким образом, изобретение позволяет выявить как спектр противосудорожного действия цитиколина, так и степень его выраженного противосудорожного действия на модели ПТЗ киндлинга у мышей, что связано с нейропротективным действием цитиколина, который предотвращает повреждение мозга животных в результате судорог.

Список используемой литературы

1. Павлова Т.Б., Яковлев А.А., Степаничев М.Ю., Менджерицкий A.M., Гуляева Н.В. «Пентилентетразоловый киндлинг вызывает активацию каспазы - 3 в мозге крыс». Журнал высшей нервной деятельности, 2003, том 53, №1, с. 110-112.

2. Nicotera P. Caspase requirement for neuronal apoptosis and neurodegeneration // International Union of Biochemistry and Molecular Biology Life. 2000. V. 49. №5. P. 421-425.

3. Pohle W., Becker A., Grecksch G. et al. «Piracetam prevents pentylenetetrazol kindling-unduced neuronal loss and learning defcits//Seizure. 1997. V. 6. P. 467-474.

4. А.А. Михайленко, В.И. Коненков, Г.А. Базанов, В.И. Покровский. Руководство по клинической иммунологии, аллергологии, иммуногенетике и иммунофармакологии (для врачей общеклинической практики) // Под ред. В.И. Покровского, Т. 2, Тверь: ООО «Издательство Триада», 2005, С. 450-451.

Способ выявления противосудорожного действия цитиколина на модели пентилентетразолового киндлинга у мышей самцов линии C57B1/6, заключающийся в том, что действие цитиколина оценивают после его введения в дозе 500 мг/кг за час до введения пентилентетразола в разном режиме в разных группах животных: при ежедневном введении в течение 24 дней, после однократного введения на 14 день кидлинга и при ежедневном введении в течение 14 дней кидлинга.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования кишечного иерсиниоза у мелких животных, для изучения влияния антигенов данного возбудителя на макроорганизм.

Изобретение относится к области медицины, а именно к стоматологии, и может быть использовано для обучения студентов и врачей-стоматологов. Модель корня зуба выполнена прозрачной и содержит разрушенную коронковую часть и заполненные по всей длине гуттаперчей корневые каналы корня зуба.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной токсикологии, и может быть использовано для моделирования хронического токсического поражения печени.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной биологии, токсикологии, и может быть использовано для изучения формирования и прогрессирования изменений печени, возникающих под действием токсико-химических повреждающих факторов.

Изобретение относится к медицине, экспериментальной хирургии и может быть использовано для лечения, коррекции и профилактики последствий ишемического воздействия на печень в условиях временного ее выключения из кровообращения.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано при ранней диагностике и лечении опухолей, индуцированных в эксперименте. Для раннего МРТ выявления опухолей, инвазий и метастазов животному вводят комбинации МРТ-негативных контрастных нанопрепаратов с позитивными МРТ контрастными препаратами.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной офтальмологии, и предназначено для получения модели пролиферативной витреоретинопатии. Для этого в полость стекловидного тела глаза крысы вводят 2 мкл изотонического раствора, содержащего 0,5 мкг - 0,5 мг конканавалина А.

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине и может быть использовано для определения степени устойчивости мелких лабораторных животных к острой гипобарической гипоксии.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной онкологии, и может быть использовано в качестве модели опухоли толстой кишки. Для этого крысе в просвет общего желчного протока вводят пикрилсульфоновую кислоту в дозе 0,03-0.05 мл.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной токсикологии. И может быть использовано при исследовании механизмов токсического действия урана на функциональное состояние почек и других органов и систем при комбинированном воздействии.

Изобретение относится к следующим новым соединениям: 1. N-(4-(5-хлор-2-метоксифенил)-2-(2-гидрокси-2-метилпропил)тиазол-5-ил)пиразоло[1,5-а]пиримидин-3-карбоксамиду; 2.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное антитело и его фрагмент, способные специфически связывать бета-амилоид, охарактеризованные фрагментами последовательностей на основе антитела мыши 8F5, и Fc-областью человеческого IgG1, содержащей аминокислотную замену D265A; а также кодирующая нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, продуцирующие антитело или его фрагмент клетки, способ продуцирования антитела или его фрагмента; композиция, применение антитела и его фрагмента для изготовления лекарственного средства, способ предупреждения, лечения или облегчения эффектов амилоидоза; способ диагностики амилоид-ассоциированных заболеваний или состояний, способ определения степени нагрузки амилоидогенных бляшек и тест-набор для выявления и диагностики амилоид-ассоциированных бляшек.

Изобретение относится к производным 1,2,4-триазолона и их фармацевтически приемлемым солям. Соединения изобретения обладают антагонистической активностью в отношении рецептора V1b аргинина-вазопрессина.

Изобретение относится к новому производному урацила - 1,3-бис[5-(орто-нитробензил-этиламино)пентил-1]-6-метилурацилу, соответствующему структурной формуле, указанной ниже.

Изобретение относится к соединениям формулы I, где А1 представляет собой CR13; А2 представляет собой CR14 или N; R1 и R2 независимо друг от друга выбраны из водорода, галогена, и галоген-C1-7-алкила; R13 и R14 независимо друг от друга выбраны из водорода, C1-7-алкила, галогена, галоген-C1-7-алкила и C1-7-алкокси; R3 выбран из водорода, C1-7-алкила, галогена, C1-7-алкокси, пиперидинила и -NR15R16, где R15 и R16 независимо друг от друга выбраны из водорода, C1-7-алкила и C3-7-циклоалкила; R4 выбран из водорода и C1-7-алкила; или R3 и R4 или R3 и R14 вместе представляют собой -X-(CR17R18)n- и образуют часть кольца, где X выбран из -CR19R20- и -NR21-; R17, R18, R19, R20 являются водородом; R21 выбран из водорода, C1-7-алкила, C3-7-циклоалкила или С3-7-циклоалкил-C1-7-алкила, где C3-7-циклоалкил не замещен или замещен C1-7-алкоксикарбонилом, и C1-7-алкилсульфонила; и n представляет собой 1, 2 или 3; B1 представляет собой N или N+-O-; B2 представляет собой CR7 или N; R5, R6 и R7 независимо друг от друга выбраны из водорода, галогена и C1-7-алкила; и R8, R9, R10, R11 и R12 являются такими, как указано в формуле изобретения.

Изобретение относится к применению производных 1-(2-фторбифенил-4-ил)-алкилкарбоновой кислоты в качестве средств, способных стабилизировать тетрамерное нативное состояние транстиретина для профилактики и лечения амилоидоза.
Изобретение относится к композиции для лечения нейродегенеративных заболеваний. Указанная композиция включает экстракт Andrographis paniculata, содержащий 35% андрографолидов, и экстракт Ginkgo biloba в комплексе с фосфолипидами, где экстракт Ginkgo biloba содержит от 20% до 30% флавонолгликозидов Гинкго и от 2% до 10% смеси из дитерпенов/сесквитерпенов, а фосфолипиды включают от 5% до 50% фосфатидилсерина.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к неврологии, и касается применения 4-аминопиридина для улучшения состояния при нейрокогнитивном и/или нейропсихиатрическом нарушении у пациентов с рассеянным склерозом.

Группа изобретений относится к фармацевтическому применению селективных негативных аллостерических модуляторов GABA A α5 для лечения, предупреждения и/или задержки развития состояний центральной нервной системы, относящихся к избыточному GABA-эргическому торможению в мозге.

Изобретение относится к соединению общей формулы (1): где X представляет собой атом галогена (который может представлять собой атом, выбранный из атома фтора, атома хлора, атома брома и атома йода).

Изобретение относится к производным 1,2,4-триазолона и их фармацевтически приемлемым солям. Соединения изобретения обладают антагонистической активностью в отношении рецептора V1b аргинина-вазопрессина.
Наверх