Способ предифференцировки стромальных стволовых клеток костного мозга в тирозингидроксилаза-позитивные клетки

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ предифференцировки стромальных стволовых клеток костного мозга. Способ предусматривает получение монослойной культуры стромы костного мозга человека, получение культурального супернатанта ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации и использование этой среды для обогащения популяции тирозингидроксилаза-позитивными клетками культуры стромы костного мозга путем инкубации его в среде, содержащей 50% супернатанта трехдневной культуры ножек мозга эмбриона свиньи. Полученные аутологичные клетки стромы костного мозга могут быть использованы для терапии нейродегенеративных заболеваний. Изобретение может быть использовано в медицине. 2 ил., 1 пр.

 

Изобретение относится к области клеточной биологии и биотехнологии, конкретно к предифференцировке некоммитированных стволовых клеток стромы костного мозга в тирозингидроксилаза - позитивные клетки.

Стромальные клетки костного мозга выделяют из образцов красного костного мозга, полученных из гребня подвздошной кости. Образцы измельчают, культивируют в среде, содержащей культуральные среды RPMI 1640, F12, эмбриональную сыворотку теленка в соотношении 4:4:2 (среда 1). После образования монослоя прикрепленных клеток их рассевают на культуральные сосуды, содержащие среду следующего состава: среда 1-50%, супернатант культуры ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации - 50% (среда 2). В процессе культивирования популяция клеток костного мозга обогащалась клетками, несущими тирозингидроксилазу. Как известно, такие клетки могут быть предшественниками дофамин-продуцирующих нейронов, локализующихся в нигростриальной системе мозга. Уменьшение количества или активности этих нейронов приводит к снижению синтеза дофамина, что влечет за собой серьезное поражение нервной системы, носящее название болезнь Паркинсона. Таким образом, настоящее изобретение позволяет получить аутологичную культуру клеток стромы костного мозга, обогащенную прекоммитированными стволовыми клетками, несущими тирозингидроксилазный маркер. Эти клетки могут найти применение в клеточной терапии болезни Паркинсона.

Изобретение относится к области клеточной биологии, биотехнологии и трансплантационной терапии, конкретно к предифференцировке некоммитированных стволовых клеток стромы костного мозга в тирозингидроксилаза-позитивные клетки.

В последние годы появились многочисленные данные, свидетельствующие о высокой пластичности клеток высших животных, наличии скрытых резервов обновления соматических клеток в постнатальном онтогенезе благодаря поддержанию пула стволовых клеток - предшественниц различных ветвей клеточной дифференцировки. На сегодня сформулировано понятие как о тотипотентной (зиготе), так и мультипотентной стволовой клетке. Мультипотентная стволовая клетка наделена неизменной способностью к самообновлению, поддерживаемой на протяжении всей жизни организма. Эти клетки превосходят все другие клетки организма по пролиферативному потенциалу. К хорошо изученным представлениям о гематопоэтической стволовой клетке добавились многочисленные исседования, посвященные свойствам мезенхимальных и эпидермальных стволовых клеток. В дальнейшем было показано наличие нейральной стволовой клетки в головном мозге млекопитающих как у эмбрионов, так и у взрослых организмов. Активно пролиферирующие нейральные предшественники персистируют в специфических зонах центральной нервной системы взрослых млекопитающих. Они локализованы в субэпендимальной зоне, зубчатой извилине гиппокампа и обонятельной луковице головного мозга. Эти клетки дают начало нейронам и глии и способны поддерживать локальный нейрогенез в течение всей жизни. Не так давно такие зоны были обнаружены в других областях ЦНС. Нейральные предшественники включают в себя гетерогенную популяцию клеток, включающую мультипотентные стволовые клетки и их олиго- и унипотентных потомков.

Известно, что доступным источником аутологичных стволовых клеток для трансплантации является костный мозг пациента. Также известно, что возможна предифференцировка этих клеток в нестин-позитивные клетки, по многим данным, являющиеся предшественниками нейральных клеток разных стадий дифференцировки.

Мы предположили, что факторы, выделяемые клетками определенной стадии развития эмбрионального мозга, могут предифференцировать мезинхимально-подобные клетки стромы костного мозга в прогенитальные клетки, могущие в дальнейшем дифференцироваться в дофамин-продуцируюшие нейроны или клетки, производящие тирозингидроксилазу. Этот фермент, который является ключевым ферментом синтеза дофамина, производится в аркуатном ядре недофаминергическими нейронами. Показано, что эти нейроны участвуют в кооперативном синтезе дофамина, что рассматривается, с одной стороны, как новый уровень химической интеграции мозга, а с другой - как адаптивная реакция при функциональной недостаточности дофаминергической системы. Известно, что маркером таких клеток является фермент тирозингидроксилаза.

Уровень техники

Известен способ нейральной предифференцировки мезенхимальных стволовых клеток костного мозга в нейроны in vivo под действием 27-суточного культивирования в среде ,содержащей эпидермальный ростовой фактор (EGF) в концентрации 2 нг/мл (Земчихина В., Цитология, т. 47, 2005, № 7, с. 644-648). Однако этот способ не приводит к образованию тирозинкиназа-позитивных клеток.

Наиболее близким способом, использованным нами как прототип, является способ нейральной предифференцировки стромы костного мозга для лечения болезни Паркинсона под действием ретиноевой кислоты (Щегельская Е. и др. Дифференцировка in vitro клеток стромы костного мозга мыши в клетки-предшественники нейронов и гепатоцитов. Экспериментальная и клиническая медицина, № 1, с. 16-20, Валошина и др. Аутотерапия стромальными клетками костного мозга (КСКМ), индуцированными в нервные, у больных с хроническими заболеваниями ЦНС (рассеянный склероз, болезнь Паркинсона). 2003, Украiнський нейрохiрургiчний журнал, № 3, с. 54-61). Строму костного мозга индуцировали в предифференцировку добавлением различных количеств низкомолекулярного гидрофобного агента - ретиноевой кислоты. Однако данный способ не приводит к образованию тирозингидроксилаза-позитивных клеток.

Поэтому нами предложен способ обогащения культуры стромы костного мозга тирозингидроксилаза-позитивными клетками. Известно, что дофамин в мозгу продуцируют клетки Пуркинье, локализованные в нигростриальной системе ножек мозга. Там же локализованы и тирозинкиназа-продуцирующие клетки. Поэтому нами была получена первичная культура ножек мозга свиньи. Свинья была использована, как одно из животных, мозг которого наиболее близок к человеческому по многим параметрам. Кроме того, в связи с тем, что человек употребляет в пищу мясо и субпродукты свиньи, в том числе мозг, человеческий организм адаптирован к большей части вирусов свиньи. Так как для получения препарата мозга использовали эмбрион свиньи, полученный в стерильных условиях, и культура проверялась на бактериальный пророст, то возможность бактериального заражения при получении препаратов исключалась.

Препарат ножек мозга, содержащего нигростриальную систему, эмбрионов шестинедельных поросят переводили в культуру путем их коллагеназной обработки и дальнейшего культивирования в монослойной культуре. Супернатант монослойной культуры на разных сроках культивирования использовали для попыток предифференцировки костного мозга человека. Строму костного мозга человека получали следующим образом: 1 мл красного костного мозга из подвздошной кости измельчали и культивировали в течение 3-6 недель в плоскодонных флаконах до образования монослойной культуры. Культура имела вид фибробласто-подобного монослоя с незначительной гетерогенностью (фиг. 1). Полученные клетки переносили для опыта в плоскодонные культуральные флаконы и подвергали обработке средой, содержащей супернатант от культуры ножек мозга эмбриона свиньи. После семидневной инкубации клетки фиксировали, проводили иммуноцитохимию на наличие тирозингидроксилазы. Для этого фиксированные метанолом клетки монослоя стромы костного мозга обрабатывали моноклональными антителами к тирозингидроксилазе, а затем коньюгатом кроличьих антител против иммуноглобулинов мыши, меченных флуоресцеином. Реакцию учитывали под люминесцентным микроскопом при увеличении ×400.

В результате использования супернатанта от недельной культуры клеток ножек мозга шестинедельного эмбриона свиньи была получена культура стромы костного мозга, часть клеток которой давала позитивную окраску на тирозингидроксилазу (фиг. 2). Это свидетельствует о прошедшей предифференцировке в направлении клеток, обладающих потенцией стимулировать продукцию дофамина клетками Пуркинье. Супернатант от 3-4-недельной культуры ножек мозга эмбриона свиньи не обладал свойством предифференцировать клетки костного мозга человека в тирозинкиназа-позитивные клетки.

Сущность изобретения

Предложенный нами способ получения культура аутологичных клеток стромы костного мозга может в дальнейшем быть использован для попыток терапии нейродегенеративных заболеваний, в первую очередь болезни Паркинсона, путем их трансплантации в мозг пациентов с дисбалансом в синтезе тирозингидроксилазы и дофамина. Ранее показано на моделях животных с паркинсонизмом, что инъекция векторов на основе аденоассоциированных вирусов, несущих ген тирозингидроксилазы в стриатум, удается получить синтез этого фермента de novo и опосредованное повышение синтеза дофамина (Haque N., Isacson O. (1997). Exp. Neurol. 144(1). Р. 139-146). При этом снимаются проблемы, связанные с аллогенной и ксеногенной трансплантацией аналогичных клеток.

Пример

Культуру стромы костного мозга человека получали следующим образом.

Пример 1. Фрагменты костного мозга получили трепанацией гребня подвздошной кости пациента 65-летнего возраста. На надкостнице был произведен п-образный надрез размером 1,5×1,5×1,5 см. Надкостницу отогнули и ложкой Фольксмана извлекли 1,5 мл красного костного мозга. Затем надкостницу вернули в исходное положение и заклеили медицинским клеем. Образец был помещен в транспортную среду следующего состава: RPMI 1640 - 97%, фетальная сыворотка теленка - 3%, гентамицин - 200 мг на мл. В течение не более 120 мин фрагменты костного мозга транспортировали в ламинарный бокс для дальнейшей обработки в стерильных условиях. Затем фрагменты извлекли и поместили в стерильную чашку Петри, содержащую среду следующего состава среда RPMI 1640 97%, фетальная бычья сыворотка 3%, гентамицин 100 мг/мл, а также фунгизон и глютамин. Транспортную среду с вымытыми в нее отдельными клетками центрифугировали 10 минут при 1000 оборотах в минуту. Супернатант удалили и ресуспендировали осадок в свежей порции среды того же состава для отмывки. После третьего центрифугирования осадок ресуспендировали в среде для культивирования следующего состава: RPMI 1640, DMEM и фетальную сыворотку в соотношении 4:4:2, пенициллин 100 ед./мл, стрептомицин 100 мг/мл, амфотерицин 0,25 мг/мл, L-глутамина 2 мМ из расчета 250-500 тысяч ядросодержащих клеток в мл. Фрагменты измельчили и интенсивно промыли, отделяя от свободных клеток. Затем фрагменты и предварительно отцентрифугированные свободные клетки поместили в отдельные культуральные сосуды в среде для культивирования, описанной выше. После суточного культивирования неприкрепившиеся клетки удалили, центрифугировали и поместили для культивирования в отдельные флаконы со средой, описанной выше. Клетки культивировали 6 недель до образования монослоя. Смену среды проводили каждые двое суток. Монослойные культуры объединяли и использовали для опытов.

Культуру ножек мозга получали следующим образом. Эмбрионы, не вскрывая матки, доставляли в стерильный бокс в течение часа после извлечения из матери. Затем рога матки вскрывали и извлекали эмбрионы. После удаления свода черепа и вышележащей части мозга извлекали ножки мозга и помещали в среду следующего состава: RPMI 1640 - 97%, фетальная сыворотка теленка - 3%, гентамицин - 200 мг/мл. Затем ткань ножек мозга измельчали на фрагменты диаметром 1-2 мм и подвергали коллагеназному расщеплению в течение 20-120 минут при температуре +37°С в атмосфере, содержащей 6% СО2. Клетки однократно отмывали средой того же состава и помещали для культивирования в плоскодонные культуральные сосуды, содержащие среду следующего состава: RPMI 1640, DMEM и фетальная сыворотка теленка в соотношении 4:4:2, пенициллин 100 ед./мл, стрептомицин 100 мг/мл, амфотерицин 0,25 мг/мл, L-глутамина 2 мМ из расчета 250-500 тысяч ядросодержаших клеток в мл. Среду меняли каждые два-три дня. Супернатант с культуры замораживали при температуре -40°С и в дальнейшем использовали для опытов, предварительно фильтруя его через фильтр с диаметром пор 0,22 мкм для стерилизации и удаления детрита.

Для опытов по предифференцировке клетки стромы костного мозга рассевали из расчета 200 тыс. клеток в мл на 12-луночные полистироловые плашки. После образования монослоя прикрепленных клеток их рассевали на культуральные сосуды, содержащие среду следующего состава: среда 1-50%, супернатант культуры ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации - 50% (среда 2). Окраску на тирозингидроксилазу производили с помощью моноклональных антител против тирозинкиназы методом непрямой иммунофлюоресценции.

Способ предифференцировки стромальных стволовых клеток костного мозга, отличающийся тем, что для обогащения популяции тирозингидроксилаза-позитивными клетками монослой инкубируют в среде, содержащей 50% супернатанта трехдневной культуры ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Способ выделения ганглиозида GM1 предусматривает получение тканей не бычьего и не свиного происхождения, содержащих клетки, продуцирующие GM1; выделение из указанных тканей клеток, продуцирующих ганглиозид GM1; экспансию указанных клеток, продуцирующих GM1, в культуре при подходящих условиях, способствующих экспансии указанных клеток; экспрессию ганглиозида GM1 в культуре при подходящих условиях; выделение указанного ганглиозида GM1 из указанной культуры, который может быть использован для лечения болезни Паркинсона и других неврологических заболеваний.

Изобретение относится к медицине и биотехнологии, в том числе к медицинской и косметической трансплантологии, и представляет собой микротрансплантат (MKT), состоящий из клеток человека, прикрепившихся на поверхности микроносителя, состоящего из полигликолидных волокон, или их группы, диаметром до 20 мкм и длиной от 100 до 1000 мкм.
Группа изобретений относится к области биотехнологии и предназначена для получения биологического референтного материала для производства стандартных образцов состава мочи, содержащих ртуть, кадмий, свинец.
Группа изобретений относится к получению стандартных образцов состава крови, содержащих ртуть, кадмий и свинец, и может быть использована в токсикологии, медицине и ветеринарии при определении содержания указанных токсичных металлов в крови.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть применено для регенерации тканей мезодермального происхождения с использованием фибробластов взрослого организма.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения плюрипотентных стволовых клеток, включающий процесс дедифференцировки соматических клеток, культивирование индуцированных плюрипотентных стволовых клеток в присутствии агента, изменяющего эпигенетический статус клетки, и культивирование стволовых клеток в отсутствие указанного агента.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стимулированных дендритных клеток (ДК), и может быть использовано в медицине для иммунотерапии рака.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения дезинфицированного препарата клеток из ткани млекопитающего.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения композиций, содержащих стволовые плацентарные клетки. Способ включает: (a) получение адгезивных плацентарных клеток в растворе, включающем от 2% до 10% декстрана, от 2,5% до 10% ДМСО и от 4% до 10% HSA, (b) фильтрацию полученного раствора через 70 мкм - 100 мкм фильтр; (c) разбавление указанных клеток до содержания не более 10±3·106 клеток на миллилитр раствором, включающим от 2% до 5% декстрана, от 2,5% до 10% ДМСО и от 4% до 10% HSA, и (d) криоконсервацию раствора, содержащего клетки.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению популяции Tr1-клеток, направленных против коллагена типа II, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к биотехнологии и трансплантологии (клеточной терапии). Описан способ получения пациент (донор)-специфических фибробластоподобных клеток из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека. Кластеры ИПС клеток механически диссоциируют до моноклеточной культуры в присутствии диспазы. Клеточную суспензию помещают в среду, состоящую из среды для культивирования недифференцированных ЭС клеток (mTeSr) + среды для культивирования эмбриоидных тел (ЭТ) (ЭТ среда) в соотношении 1:1. Далее получают эмбриоидные тела методом висячей капли или помещением клеток в 96-луночный круглодонный планшет. Потом переносят трехдневные ЭТ на 24-луночную плашку, покрытую 0.1% желатином, по 1 телу на лунку в 1 мл среды для ЭТ. Культивируют до появления монослоя фибробластоподобных клеток через 8-10 суток с предварительным удалением остатков эмбриоидного тела. Изобретение позволяет получать донор- и пациент-специфические фибробластоподобные клетки для использования их в трансплантологии и в качестве аутологичного фидерного слоя для культивирования индуцированных плюрипотентных стволовых клеток человека и поддержания их в недифференцированном состоянии. 10 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложен способ получения постоянной линии клеток-амниоцитов человека, включающий трансфекцию зародышевых клеток-амниоцитов человека молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую продукты генов аденовирусов Е1А и Е1В, причем указанную последовательность нуклеиновой кислоты получают из серотипа 5 аденовируса человека, и последующую трансфекцию постоянной линии клеток-амниоцитов человека, полученной на первом этапе, молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую большой SV40 Т-антиген. 3 з.п. ф-лы, 7 ил., 9 пр.

Изобретение относится к медицине. Для получения культуры клеток ретинального пигментного эпителия (РПЭ) взрослого донора-трупа производят удаление из глазного яблока донора-трупа роговично-склерального диска. При целостности всех частей сосудистой оболочки, глазное яблоко без роговично-склерального диска полностью погружают в емкость с фосфатно-солевым буфером с pH 7,4, производят полное отделение склеры от собственно сосудистой оболочки глаза (ССО) путем рассечения склеры меридиональными разрезами спереди назад на 2, 3 или 4 «лепестка» и пересечения со стороны супрахориоидального пространства вортикозных вен и внутрисклеральной части зрительного нерва, после чего производят три разреза хороидально-пигментного комплекса (ХПК), состоящего из ССО и РПЭ: первый круговой разрез на расстоянии 1 мм от зубчатой линии, один меридиональный в любом меридиане в направлении от первого кругового разреза спереди назад к культе диска зрительного нерва и второй круговой разрез на расстоянии 1 мм от культи зрительного нерва. Далее ХПК аккуратно отделяют от нейральной сетчатки пинцетом и укладывают на дно стерильной чашки Петри в положении клетками РПЭ вверх, заливают 3 мл смеси раствора 0,25% трипсина и раствора Версена в соотношении 1:1 по объему, инкубируют при 37°C и 5% концентрации CO2 в течение 25 минут, после чего РПЭ отделяют с поверхности ССО струей фосфатно-солевого буфера с pH 7,4. Полученную взвесь клеток собирают в пробирку, центрифугируют, сливают надосадочную жидкость, к полученному осадку добавляют питательную среду следующего состава: среда Игла в модификации Дульбекко со средой Хэма F12 - 89%, эмбриональная телячья сыворотка - 10%, смесь антибиотиков, включающая пенициллин 10000 МЕ/мл, стрептомицин 10000 мкг/мл, амфотерицин 25 мкг/мл - 1%. При этом культуру клеток инкубируют при 37°C и при 5% концентрации CO2, питательную среду заменяют каждые 3-4 дня. Изобретение позволяет снизить степень загрязнения культуры клеток. 2 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Предложено применение терапевтически эффективного количества плацентарных стволовых клеток в получении фармацевтической композиции для использования в лечении индивидуума, имеющего заболевание, расстройство или патологическое состояние легких, причем терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для того, чтобы вызвать детектируемое улучшение одного или нескольких симптомов указанного заболевания, расстройства или патологического состояния; где указанное заболевание, расстройство или патологическое состояние легкого представляет собой легочный саркоидоз, астму, бронхит или острый респираторный дистресс-синдром, и при этом плацентарные стволовые клетки являются CD10+, CD34-, CD105+ и CD200+, что определяется с помощью проточной цитометрии. 11 з.п. ф-лы, 4 пр., 2 табл.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к выделенному пептиду, который имеет индуцибельность цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), а также к его применению. Предложенный пептид может использоваться в противораковой иммунотерапии, более конкретно, в противораковых вакцинах. Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью лечить рак. 15 н. и 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, регенеративной медицине и может быть использовано в цитологии, гистологии, трансплантологии, микробиологии, биомедицинских исследованиях. Предложена матрица для культивирования клеток. Матрица содержит гиалуроновую кислоту, стабилизированную десмозином при УФ-фотополимеризации в условиях постепенной лиофилизации. Матрица также содержит коллаген I типа и адгезивный пептид Arg-Gly-Asp. Матрица обладает устойчивостью структуры во влажной среде более 7 суток, стимулирует клеточную адгезию и миграцию при клеточном культивировании. 12 ил., 1 пр.

Представленная группа изобретений относится к области биотехнологии и касается способов сбора функциональных клеток (варианты). Охарактеризованные решения заключаются в имплантации имплантируемой медицинской емкости под кожу на срок не более двух недель, где популяция клеток мобилизована в емкость с помощью любого из белков HMGB1, HMGB2, HMGB3, S100A8, S100A9 или гиалуроновой кислоты или смеси любых двух или более из указанных. Указанные факторы обладают активностью привлечения конкретных функциональных клеток в организм. Представленные изобретения позволяют эффективно и безопасно собирать биологически функциональные клетки, в частности, такие как стволовые клетки. 6 н. и 1 з.п. ф-лы, 37 ил., 1 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной онкологии, и касается создания подкожных ксенографтов меланомы кожи человека для доклинического изучения противоопухолевых таргетных средств. Способ получения подкожных ксенографтов клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF для доклинического изучения противоопухолевых таргетных средств включает адаптацию клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher к росту у иммунодефицитных мышей Balb/c nude путем многократного пассирования до девяти пассажей взвеси опухолевых клеток по 50-60 мг на мышь со стабильной кинетикой роста и тестирование на наличие мутации V600E BRAF. Получены подкожные ксенографты клеточной линии меланомы кожи человека mel Cher с мутацией V600E BRAF для доклинического изучения противоопухолевых таргетных средств. 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу криоконсервации клеток животных. Способ основан на применении коллагенового клеточного носителя, имеющего особый состав, а также специфическую толщину и соответствующие механические свойства, которые сохраняются после размораживания. Применение такого коллагенового клеточного носителя создает удобную основу для криоконсервации, что проявляется в очень высокой выживаемости после размораживания. Изобретение также относится к замороженному комплексу коллагенового носителя-клеток, получаемому с помощью указанного способа, а также к его применению после размораживания, в частности, для фундаментальных исследований или для in vitro тест-систем. Изобретение позволяет достичь очень высокой выживаемости клеток после размораживания и получать клетки и комплексы тканей, которые уже прикреплены к механически прочному и биологически совместимому каркасу. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 6 ил., 4 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложены стволовые клетки, полученные культивированием моноцитов человека в присутствии (i) M-CSF с концентрацией от 5 до 100 нг/мл и (ii) по меньшей мере одного представителя, выбранного из группы, состоящей из ганглиозида с концентрацией от 1 до 100 мкг/мл и растворимого в воде растительного экстракта, экстрагированного методом экстракции Folch, с концентрацией от 0,1 до 100 мкг/мл, посредством этого дедифференцируя моноциты, где экспрессия гена CSCR4 указанных стволовых клеток более чем в три или четыре раза больше по сравнению с экспрессией стволовыми клетками, полученными путем культивирования моноцитов человека в присутствии M-CSF и IL-3, и экспрессия гена CSCR4 указанных стволовых клеток более чем в два или три раза больше по сравнению с экспрессией мезенхимальными стволовыми клетками, полученными из костного мозга, для лечения заболеваний, связанных с клеточными повреждениями, повреждениями тканей или органов. 4 н. и 11 з.п. ф-лы, 7 ил., 3 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Описан способ предифференцировки стромальных стволовых клеток костного мозга. Способ предусматривает получение монослойной культуры стромы костного мозга человека, получение культурального супернатанта ножек мозга эмбриона свиньи шестой недели гестации и использование этой среды для обогащения популяции тирозингидроксилаза-позитивными клетками культуры стромы костного мозга путем инкубации его в среде, содержащей 50 супернатанта трехдневной культуры ножек мозга эмбриона свиньи. Полученные аутологичные клетки стромы костного мозга могут быть использованы для терапии нейродегенеративных заболеваний. Изобретение может быть использовано в медицине. 2 ил., 1 пр.

Наверх