Способ выделения личинок t.canis методом переваривания паренхимы легких и печени плотоядных животных


 


Владельцы патента RU 2567845:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования специалистов "Российская академия кадрового обеспечения агропромышленного комплекса" ФГБОУ ДПОС РАКО АПК (RU)

(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных. Способ включает отбор проб массой 50,0 г. Пробу измельчают на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм. Приготовливают искусственный желудочный сок по следующей прописи: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводят до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°С, добавляют 7,0 г пищевого свиного пепсина. ИЖС заливают в реактор аппарата «Гастрос» и прогревают до 41-42°С. Помещают стакан с измельченной пробой и аппарат устанавливают в режим переваривания 50 мин с активным перемешиванием и временем отстоя перевара 10 мин. Осадок сливают в объеме 20,0 см3. Наличие личинок определяют под лупой. Для концентрации применяют метод центрифугирования при 5000 об/мин в течение 10 мин. Далее из пробирки аспирируют 10,0 см3 верхнего слоя жидкости. Оставшийся осадок с личинками сохраняют для дальнейших исследований замораживанием при -20°С. Заявленный способ позволяет эффективно обнаруживать возбудителя токсокароза при посмертной диагностике данной болезни. 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии (паразитологии) и может быть использовано для посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных и выделения мигрирующих личинок токсокар II-й стадии из паренхимы легких или печени с целью получения паразитарных белков, обладающих антигенными свойствами.

Применение данного метода в практической ветеринарии позволит существенно уточнить эпизоотологическую обстановку по токсокарозу плотоядных и оценить риск заражения людей этими гельминтами, обосновать необходимость контроля над развитием популяции паразита в городах, получить специфический материал для создания тест-систем или вакцин.

Токсокароз-инвазионная зоонозная болезнь, имеющая важное эпидемиолого-эпизоотическое и большое социальное значение, возбудителем которого является нематода семейства Anisakidae, рода Toxocara, вид Toxocara canis (Werner, 1782) - паразит псовых. Значительное скопление собак в городских поселениях, частая их инвазированность гельминтами, отсутствие средств дезинвазии конкрементов создает высокий уровень обсемененности почвы яйцами нематод, что делает их одним из важных эпидемиологических компонентов урбанистической среды. Поражения человека в этих условиях мигрирующими личинками токсокар (т.н. «larva migrans») нередки, а для некоторых групп населения, например детей, несут существенную угрозу здоровью.

Наиболее интенсивно заражаются молодые собаки, а щенки от рождения до 30 дней заражены токсокарами на 90-100%, что обусловлено способностью личинок в период беременности животных и повышения гормонального фона при лактации возобновить свою активность и продолжить миграцию, при этом они попадают в органы и ткани плода. Большинство личинок, вышедшие из яиц в желудочно-кишечном тракте совершают законченную гепато-пульмональную миграцию и достигают половозрелой стадии в кишечнике. Впоследствии начинается выделение яиц токсокар во внешнюю среду. Одна самка токсокары способна выделить 200.000 яиц в день с калом, поэтому контаминация окружающей среды растет очень быстро. У собак старше года личинки обычно накапливаются в соматических тканях и остаются жизнеспособными на протяжении 2-3 лет [1]. Высокий процент зараженности собак токсокарами является следствием пожизненного бессимптомного носительства личинок [2].

В связи с этим актуальным является разработка и совершенствование способов диагностики, позволяющих повысить эффективность обнаружения тканевых, мигрирующих личинок токсокар до попадания гельминтов в кишечник и достижения ими половой зрелости (пока еще не происходит выделение инвазионных элементов во внешнюю среду). С другой стороны, представленный метод позволяет уточнять диагноз в случаях внезапной гибели щенков при низкой степени инвазирования или при патологии неясной этиологии.

Известен метод получения культуры личинок Toxocara canis, разработанный П.А. Солоповым (2009) [2] из оплодотворенных яиц. Суспензию яиц токсокар выдерживают в помещении лаборатории при температуре +22°C, относительной влажности воздуха 85% и естественном освещении. Культивирование яиц токсокар выполняют в среде, содержащей 1% глютамин. При культивировании в физиологическом растворе по истечении десяти суток с начала опыта 97,5% яиц разрушилось. К созревшим яйцам добавляли искусственный желудочный сок, состоящий из панкреатина, свиной желчи и 1% соляной кислоты. Обработка яиц токсокар искусственным желудочным соком проводилась в термостате при температуре 37,5°C в течение 8-10 часов. После освобождения личинок нематод из яйцевых оболочек их отделяли от жидкости путем центрифугирования при 2500 об/мин в течение 15 минут. При микроскопическом исследовании после центрифугирования в осадке содержались подвижные личинки токсокар второй стадии.

Автор делает вывод, что оптимальными параметрами культивирования яиц Toxocara canis являются: температура +23-25°C, влажность 82-85%. Завершение формирования личинок и проявление активности наблюдается через 25-30 дней при культивировании яиц, выделенных из матки токсокар, в 1% растворе глютамина с добавлением стрептомицина и нистатина [2].

Метод получения культуры личинок Т.canis 2-й стадии П.А. Солопова требует затраты длительного временного промежутка (30 суток) и является трудоемким. Также для проведения данной работы необходимо иметь половозрелых самок Т. canis, выделить культуру оплодотворенных яиц из матки, подготовить питательную среду и подобрать оптимальные условия культивирования. Необходимо отметить, что полученные личинки не проходили миграцию в организме хозяина и могут не иметь в своем белковом составе необходимых антигенных белков и ферментов проникновения. К тому же метод, предложенный П.А. Солоповым, не может являться инструментом для посмертной диагностики токсокароза при отсутствии гельминтов в кишечнике животного, а исследователь имеет постоянный контакт с инвазионным материалом, обладающим гипераллергенными свойствами.

Попытки разработать способы переваривания мышечной ткани предпринимались более 100 лет назад. Для изучения патологии, вызванной трихинеллами, и выделения личинок Ströbel (1911) [3] впервые применил переваривание мышечной ткани в искусственном желудочном соке (ИЖС) с содержанием 0,5%-ной соляной кислоты и 0,7%-ного пепсина (5,0 мл концентрированной HCl и 7,0 г пепсина на 1 литр раствора). Переваривание проводилось при 38°C. Данный метод искусственного переваривания мышц получил широкое распространение и постоянно совершенствовался [4, 5].

Впервые для диагностики трихинеллеза свиней метод искусственного переваривания мышц был применен Ransom (1916) [6], который 50,0 г измельченных мышц заливал 600,0 мл желудочного сока (1% соляной кислоты и 0,25% пепсина или 10,0 мл и 2,5 г на 1 литр раствора, соответственно), а смесь инкубировал в мензурке при 37-40°C в течение 18-24 часов.

Оригинальную методику ускоренного переваривания мышц, ставшую классической и позволяющую получать результат исследования через 3,5-4,5 часа, разработала П.А. Владимирова (1963, 1965, 1968, 1969, 1972) [7, 8, 9, 10, 11]. 10,0 г измельченных мышц она вносила в колбу и заливала 15-20-кратным (к весу фарша) количеством ИЖС, составленного из расчета 1% соляной кислоты и 3% пепсина (10,0 мл HCl и 30,0 г пепсина на 1 литр раствора). Инкубирование проводили при температуре 37-42°C при периодическом перемешивании, осадок после окончания переваривания исследовала в чашке Петри.

Данными методами проводилось исследование мышечной ткани, преимущественно для диагностики трихинеллеза.

Наиболее близким к заявленному способу является способ обнаружения трофозоитов саркоцист [12]. Способ обнаружения трофозоитов саркоцист, включающий отбор проб мышечной ткани, измельчение, раскладку в колбы, внесение искусственного желудочного сока, инкубирование, центрифугирование, исследование осадка, отличается тем, что искусственный желудочный сок составляют по прописи: вода дистиллированная температуры 41-42°C до 1000,0 мл, кислота соляная концентрированная удельной массой 1,2 12,0-15,0 мл, пепсин пищевой свиной 20,0-30,0 г, а инкубирование проводят в аппарате «Гастрос» при температуре 41-42°C, перевар отстаивают, после чего осадок подвергают центрифугированию, из пробирки аспирируют 8,0 мл верхнего слоя жидкости, из нижнего слоя берут каплю и делают мазок на предметном стекле, а оставшуюся часть наносят пипеткой на предметные стекла и высушивают, далее приготовленные препараты окрашивают по Романовскому-Гимза в течение 10 мин и исследуют под микроскопом при увеличении ×400 и ×1250 с иммерсией.

Данный способ применяется для диагностики тканевых форм простейших в мышечной ткани крупного рогатого скота.

Технической задачей заявляемого изобретения является разработка способа посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных и выделения мигрирующих личинок токсокар II-й стадии из паренхимы легких и/или печени.

Технический результат решается тем, что для выделения личинок токсокар применили метод переваривания в ИЖС паренхимы легких и печени плотоядных животных. Для этого отбирали пробы легочной ткани и ткани печени, измельчали, искусственный желудочный сок готовили по следующей прописи: кислоту соляную концентрированную удельной массой 1,2 11,0 см3 доводили водой водопроводной температуры 41-42°C до 1000,0 см3 и добавляли пепсин пищевой свиной 7,0 г. Измельченную пробу с ИЖС помещали в реактор аппарата «Гастрос», инкубировали 50 минут, перевар отстаивался 10 минут, исследовали осадок в объеме 20,0 см3. Для концентрации и сохранения личинок полученный материал центрифугировали при 5000 об/мин 10 мин, далее из пробирки аспирировали 10,0 см3 верхнего слоя жидкости, оставшийся осадок с личинками сохраняли для дальнейших исследований замораживанием при -20°C.

Преимущество метода искусственного переваривания заключается в том, что этим методом можно исследовать сразу большую массу проб и обнаружить очень слабое заражение. Аппарат «Гастрос» предназначен разработчиком для выделения личинок червей (трихинелл), которые локализуются в поперечнополосатой мускулатуре свиньи. Нами разработан способ с использованием аппарата «Гастрос» для выделения личинок токсокар, которые локализуются в паренхиме легких и печени плотоядных животных в процессе миграции.

Известные методы направлены на переваривание мышечной ткани, нашей целью было переварить легочную и печеночную ткань, для которых необходимо увеличение концентрации кислоты и пепсина для ускорения и лучшего переваривания.

Для выделения личинок нами предложена пропись искусственного желудочного сока: кислоту соляную концентрированную (уд. масса 1,2) 11,0 см3 доводить до 1000,0 см3 водой водопроводной температуры 41-42°C и добавлять пепсина пищевого свиного 7,0 г.

Предложенный метод позволяет эффективно обнаруживать возбудителя токсокароза при посмертной диагностике данной болезни, в случаях, если инвазия незначительная и когда в кишечнике еще нет половозрелых гельминтов, с другой стороны, таким образом можно получать чистую культуру личинок, что будет служить материалом для дальнейших генетических исследований, а также для получения белков с хорошими диагностическими или протективными свойствами. Результаты проведенных исследований позволят разрабатывать и совершенствовать методы диагностики токсокароза плотоядных на стадии миграции паразитов и эффективнее проводить противоэпизоотические мероприятия, направленные на борьбу с зоонозами.

Способ осуществляют следующим образом.

Отобранные пробы паренхимы легких и/или печени массой 50,0 г тщательно измельчают на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм. Искусственный желудочный сок готовят предварительно отдельно по следующей прописи: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводят до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°C, добавляют 7,0 г пищевого свиного пепсина. ИЖС заливают в реактор аппарата «Гастрос» НПО «Петролайзер» (Санкт-Петербург), после прогрева до 41-42°C в него помещают стакан с измельченной пробой, и аппарат устанавливают в режим работы продолжительностью 60 минут при 41-42°C (время переваривания 50 минут, время отстоя перевара 10 минут), при этом автоматически осуществляется перемешивание пробы и поддержание выбранной температуры. После отстаивания из реактора осадок сливают в объеме 20,0 см3. Наличие личинок определяют под лупой. Для концентрации применяют метод центрифугирования при 5000 об/мин 10 мин, далее из пробирки аспирируют 10,0 см3 верхнего слоя жидкости, оставшийся осадок с личинками сохраняют для дальнейших исследований замораживанием при -20°C.

Способ выделения личинок T.canis методом переваривания паренхимы легких и печени плотоядных животных иллюстрируется следующим примером.

Пример.

В клинику были доставлены 3 трупа беспородных уличных щенка, 1,5-месячного возраста, погибшие внезапно без ярко-выраженных клинических признаков. Всего в помете 8 щенков, 5 других остались клинически здоровы, погибшие были ослабленными и менее развитыми. По результатам проведенного вскрытия гельминты в кишечнике обнаружены не были.

У щенков были отобраны пробы паренхимы легочной ткани и печени. Пробу массой 50 г измельчали на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм. ИЖС готовили отдельно: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводили до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°C, и добавляли 7,0 г пепсина свиного. Полученную смесь тщательно перемешивали и заливали в аппарат «Гастрос» для переваривания, в реактор помещали стакан с измельченной пробой. Параметры культивирования: температура 41-42°C, время переваривания 50 минут, время отстоя перевара 10 минут. Степень переваривания определяли визуально. Полученный перевар представляет собой мутный бульон без крупных оформленных частиц ткани, на дне реактора остался тонкий коричневатый осадок.

После этого 20,0 см3 осадка сливали в чашку Петри и под лупой определяли наличие личинок, после чего переливали в центрифужную пробирку и центрифугировали при 5000 об/мин 10 мин, далее из пробирки аспирировали 10,0 см3 верхнего слоя жидкости, оставшийся осадок с личинками сохраняли для дальнейших исследований замораживанием при -20°C.

В результате методом переваривания легочной и печеночной ткани была установлена инвазия мигрирующими личинками токсокар II-й стадии у двух из трех погибших щенков.

Выводы

1. Установлено, что разработанный метод выделения личинок T.canis методом переваривания паренхимы легких и печени плотоядных животных является легко выполнимым, высокоэффективным и не имеет аналогов.

2. Время выделения личинок токсокар методом переваривания в ИЖС, включающий подготовку проб и оценку результат, 80 минут.

3. Установлено, что в предложенных режимах выделяется чистая без примесей паренхимы органов культура личинок токсокар II-й стадии.

Список литературы

1. Тумольская Н.И., Сергиев В.П., Лебедева М.Н., Мазманян М.В., Полетаева О.Г. и др. Токсокароз. Клиника. Диагностика. Лечение. Профилактика - Новосибирск, 2004. - 48 с.

2. Солопов П.А. Иммуноферментный метод диагностики токсокароза собак, сероэпизоотологический мониторинг и терапия. Дисс. канд. вет. наук. Рязань, 2009. - 114 с.

3. Ströbel Н., 1911. - "Münchener med. Wochenschr.", 58, 6, S. 121-125.

4. Бессонов А.С., 1970. Эпизоотология (эпидемиология), диагностика и профилактика трихинеллеза (монографический анализ и собственные исследования). Докторская дисс., Москва.

5. Бессонов А.С. Диагностика трихинеллеза (часть вторая). Вильнюс, «Минтис», 1975, 383 с.

6. Ransom В.Н., 1916. - " J. Agric. Res.", 5, 18, p. 819-854.

7. Владимирова П.А., 1963. Мат. докладов Всесоюзной научной конференцииБ посвященной 90-летию Казанского ветеринарного института. Казань, с. 134-135.

8. Владимирова П.А., 1965. Влияние различных факторов на ускорение процесса переваривания мышц в искусственном желудочном соке для выявления личинок трихинелл в свинине. - Кандидатская дисс., Москва.

9. Владимирова П.А., 1968. Работы молодых ученых. Животноводство и ветеринария. - В кн.: мат. конференций, состоявшихся в 1965 и 1966 гг. М., с. 337-340.

10. Vladimirova Р.А., 1969. - In: II International Conference on Trichinellosis, Wroclaw, June 26-29, 1969. Abstract of Papers. Wroclaw, p. 173-174.

11. Владимирова П.А. Перспективы использования в практике метода переваривания проб мышц в искусственном желудочном соке для диагностики трихинеллеза. // Мат. докл. Всес. конф. по проблеме трихинеллеза человека и животных. - Вильнюс. - 1972, - с. 124.

12. Уша Б.В., Гламаздин И.Г., Давыдов Е.В. Способ обнаружения трофозоитов саркоцист. Патент РФ 2415416 C1, 11.08.2009.

Способ обнаружения личинок T.canis методом переваривания паренхимы легких и печени плотоядных животных, включающий отбор проб массой 50,0 г, измельчение на мясорубке с диаметром решетки 3-4 мм; приготовление искусственного желудочного сока по следующей прописи: 11,0 см3 концентрированной соляной кислоты (удельная масса 1,2) доводят до 1000,0 см3 водопроводной водой, подогретой до 41-42°С, добавляют 7,0 г пищевого свиного пепсина ИЖС, заливают в реактор аппарата «Гастрос», прогревают до 41-42°С, помещают стакан с измельченной пробой и аппарат устанавливают в режим переваривания 50 мин с активным перемешиванием, и время отстоя перевара 10 мин, осадок сливают в объеме 20,0 см3, наличие личинок определяют под лупой, для концентрации применяют метод центрифугирования при 5000 об/мин в течение 10 мин, далее из пробирки аспирируют 10,0 см3 верхнего слоя жидкости, оставшийся осадок с личинками сохраняют для дальнейших исследований замораживанием при -20°С.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ).

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки эффективности антибактериальной терапии при диализном перитоните, включающий введение антибактериальных препаратов в пакет с диализным раствором с последующим введением в брюшную полость, морфологическое исследование диализата, отличающийся тем, что после проведения цикла обмена диализирующего раствора проводят исследование диализата методом клиновидной дегидратации, при этом диализат центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10-15 минут и отбирают 2 пробы - первую из верхней половины пробирки, вторую - из нижней, выявляют структуру кристаллов солей в диализате и при наличии линейных кристаллов в центральной зоне фаций обеих проб оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и не требующую ее продолжения, при наличии линейных кристаллов только в первой пробе оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и требующую ее продолжения, при их отсутствии - как неудовлетворительную.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения глубины залегания липидных ядер, являющихся центром атеросклеротических бляшек. Изобретение представляет способ определения глубины залегания липидных ядер атеросклеротических бляшек методом ИК-Фурье спектроскопии, заключающийся в том, что подготавливаются срезы атеросклеротически измененного участка сосудистого русла, записываются инфракрасные спектры пропускания подготовленных срезов, идентифицируются характеристические пики поглощения, отличающийся тем, что определяется срез, имеющий максимальное поглощение в диапазоне 1720-1760 см-1, соответствующем валентным колебаниям связей C=O сложных эфиров холестерина, который отвечает глубине залегания липидного ядра.

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, в частности иммунологии, и предназначено для определения аутоантител к прогестерону в сыворотке и плазме крови человека.

Изобретение относится к способу получения многослойных покрытий на основе полиэлектролитных микрокапсул, содержащих биологически активные материалы, для применения в областях диагностики и медицины.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки угрозы гибели ворсинок плаценты и неполноценного развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, может быть использовано для прогнозирования развития инфекционно-воспалительных заболеваний у новорожденных.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы повреждения фетоплацентарного барьера при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается прогнозирования развития кардиоваскулярных осложнений острого коронарного синдрома с подъемом сегмента ST.

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и описывает способ прогнозирования лимфогенного метастазирования при инвазивной карциноме неспецифического типа молочной железы.

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, и может быть использовано в гепатологии и гастроэнтерологии для диагностики фибротических процессов печени. Сущность неинвазивного способа диагностики степени фиброза печени: формируют группу условно здоровых обследуемых (F0), группу пациентов с установленной гистологически умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группу пациентов с установленной гистологически выраженной степенью фиброза (F3-F4), измеряют средние скорости движения суспензии эритроцитов и минимальные, средние и максимальные диаметры эритроцитов в период воздействия переменного электрического поля у группы условно здоровых обследуемых (F0) и у групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных данных определяют электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов, сравнивают электрические и вязкоупругие параметры эритроцитов группы условно здоровых обследуемых (F0) с группой пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группой пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4). На основании полученных результатов формируют массив данных для диагностики степени фиброза печени. Затем проводят аналогичные измерения образцов проб эритроцитов пациента с неясной степенью фиброза с определением электрических и вязкоупругих параметров эритроцитов с последующим их сравнением с соответствующими значениями, определенными для группы условно здоровых обследуемых (F0), группы пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) и группы пациентов с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и при наличии 60% и более отличающихся параметров от группы условно здоровых обследуемых (F0) и входящих в границы значений для групп пациентов с умеренной степенью фиброза (F1-F2) или с выраженной степенью фиброза (F3-F4) и выявляют степень фиброза печени для данного пациента. Использование способа позволяет более точно определить степень фиброза печени у пациента на ранних стадиях заболевания независимо от этиологии возникновения заболевания. 3 ил., 3 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. Сущность способа состоит в том, что при выявлении уровня тканевого ингибитора матриксных металлопротеиназ-1 более 242,8 нг/мл и сердечно-сосудистого сопряжения более 1,29 риск развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий оценивается как высокий. Использование заявленного способа позволяет точно осуществить прогноз риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности. 2 ил., 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарии и животноводства и может быть использовано при искусственном осеменении для выявления генетически неполноценных сперматозоидов. Способ включает добавление в пробы эякулята in vitro в среде для разбавления перекиси водорода в концентрации 0,5-1,0 мМоль с последующим выявлением и определением в сперматозоидах первичных морфологических признаков апоптоза, одноцепочечных разрывов и фрагментации ДНК, интенсивности процессов перекисного окисления липидов. При этом при выявлении низкого процента апоптотически гибнущих сперматозоидов до 10-15% достаточно яркого и выраженного свечения Гало, возрастания содержания ТБК-реактивных продуктов не более чем на 30-40% по отношению к контролю, оценивают сперматозоиды как генетически полноценные. Использование изобретения позволяет улучшить диагностику патологических нарушений в сперматозоидах на хроматиновом уровне.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для количественного определения оксима пиностробина в плазме крови. Для этого проводят определение оксима пиностробина в плазме крови методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии с использованием смеси плазмы крови с оксимом пиностробина и внутреннего стандарта - вещества, близкого по строению молекулы к анализируемому веществу. Разделение продуктов проводят методом обращенно-фазной хроматографии на колонке размером 4,6×100 мм, термостатируемой при 30°C, скорость элюирования 0,5 мл/мин. В качестве элюента используют смесь 10 мМ ацетата аммония и ацетонитрила в соотношении 10:90 соответственно. Пик оксима пиностробина детектируют по иону с m/z 269.10, образующемуся в результате фрагментации иона оксима пиностробина с m/z 286.10, а его концентрацию рассчитывают по формуле: Coxime=2,073299×RS, где Coxime - концентрация оксима пиностробина (мкг/мл); RS - отношение площади хроматографического пика оксима пиностробина к площади пика внутреннего стандарта. Изобретение обеспечивает метод количественного определения оксима пиностробина в плазме крови для использования в экспериментальной и клинической фармакокинетике. 2 табл., 6 ил.

Группа изобретений относится к анализу биологических жидкостей с помощью биосенсорных систем. Способ определения концентрации анализируемого вещества в образце включает: генерацию выходного сигнала, соответствующего концентрации анализируемого вещества в образце и входному сигналу; компенсацию выходного сигнала с помощью основной функции и первой функции невязки для определения скомпенсированного выходного сигнала, причем основная функция предназначена для компенсации основной ошибки в выходном сигнале, а первая функция невязки предназначена для компенсации оставшейся ошибки в выходном сигнале; и определение концентрации анализируемого вещества в образце по скомпенсированному выходному сигналу. Также описана биосенсорная система аналогичного назначения. Достигается повышение точности и надежности анализа. 2 н. и 28 з.п. ф-лы, 25 ил., 8 табл.

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для укупорки реакционных кювет, содержащих высушенные реагенты для биоаффинных исследований. Система (20) для биоанализа содержит картридж (4) для биоанализа с реакционной камерой (6) и прокалываемую герметичную крышку (2). Крышка (2) содержит верхний слой (8), средний слой (10), нижний слой (12) и места (14), предназначенные для прокалывания. Крышка (2) имеет в местах (14), предназначенных для прокалывания, полость (18) между верхним слоем (8) и нижним слоем (12), причем верхний слой (8) герметичен до прокалывания, а нижний слой (12) предварительно надрезан так, что при прокалывании иглой прокол не является газонепроницаемым, а позволяет газу свободно вытекать из реакционной камеры (6), и упомянутый слой (12) обеспечивает плотное смыкание следа иглы после отведения упомянутой иглы. Изобретение позволяет исключить перекрестное загрязнение, вызванное случайными переливами или испарением реагента. 7 з.п. ф-лы, 7 ил., 7 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, гистологии и патологической анатомии, и может быть использовано для оценки анаболического действия лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа заключается в том, что дополнительно определяют интенсивность биосинтетических процессов в миосимпластах путем подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами, на основании которого делают заключение об анаболическом действии лекарственных препаратов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности морфологической оценки анаболического действия лекарственных препаратов за счет применения комплекса современных методов исследования (гистологического, гистохимического и морфометрического). Заявляемый способ обладает высокой точностью, прост в применении, эффективен и легко выполним в любой гистологической лаборатории. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования перинатального поражения ЦНС у недоношенных новорожденных, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в 10% гомогенате плаценты, взятой сразу после преждевременных родов, методом капиллярного электрофореза определяют содержание глутамата и агматина, рассчитывают их соотношение и при величине коэффициента, равного 1,70 и ниже, прогнозируют перинатальное поражение ЦНС у недоношенных новорожденных. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования перинатального поражения ЦНС у недоношенных новорожденных. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования перинатального поражения ЦНС у недоношенных новорожденных, включающий исследование биологического материала, отличающийся тем, что в 10% гомогенате плаценты, взятой сразу после преждевременных родов, методом капиллярного электрофореза определяют содержание глутамата и агматина, рассчитывают их соотношение и при величине коэффициента, равного 1,70 и ниже, прогнозируют перинатальное поражение ЦНС у недоношенных новорожденных. Осуществление изобретения позволяет повысить точность прогнозирования перинатального поражения ЦНС у недоношенных новорожденных. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования ишемически-геморрагических церебральных осложнений у новорожденных. Сущность способа состоит в том, что в пуповинной крови определяют уровни 6-keto-простагландина F1α (6-KetoPGF-1α) и тромбоксана В2 (ТХВ2) и рассчитывают их соотношение К=6-KetoPGF-1α/TXB2. При значении коэффициента К равном 0,04 и менее прогнозируют возникновение ишемически-геморрагических церебральных осложнений. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность прогнозирования ишемически-геморрагических церебральных осложнений у новорожденных из группы высокого перинатального риска. 2 пр.
Наверх