Штамм клубеньковых бактерий bradyrhizobium japonicum для изготовления бактериального удобрения под сою

Авторы патента:

C12R1/01 - Схема кодирования для подклассов C12C-C12Q или C12S, относящаяся к микроорганизмам

C12N1/20 - бактерии; питательные среды для них

C05F11/08 - органические удобрения с добавкой культур бактерий, мицелиев и т.п.

Владельцы патента RU 2568067:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский институт сои " (RU)

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии. Предложен штамм клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D для изготовления бактериального удобрения под сою. Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D обладает устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры, повышает урожай семян сои. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к сельскохозяйственной микробиологии и может быть использовано для производства бактериального удобрения для сои.

Наиболее близким к изобретению является штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D, используемый для приготовления соевого нитрагина (Патент РФ на изобретение №2413762 от 10.03.11. Прототип).

Известный штамм обладает сравнительно низким уровнем амидазной и каталазной активности, не устойчив к высоким дозам аммиачной селитры, что ограничивает его применение в производственных условиях.

При создании изобретения ставилась задача получения штамма, обладающего более высокой ферментативной активностью, устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры, повышающего семенную продуктивность растения-хозяина.

Задача решается новым штаммом клубеньковых бактерий Bradyrhizobium japonicum MM - 117, который выделен в 1996 году из клубеньков сои сорта Октябрь-70, выращенной на бурых лесных почвах Мазановского района Амурской области.

Полученный штамм депонирован и хранится во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов (ИБФМ) им. Г.К. Скрябина Российской академии наук под регистрационным номером ВКМ B-2629D и коллекции ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института сои под номером ММ - 117.

Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками:

Культурально-морфологические признаки.

В молодом возрасте бактерии штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ В-2629D подвижные, представляют собой удлиненные палочки размером (2,3…2,5)×0,4 мкм. Грамотрицательные. Медленнорастущая культура. В чашках Петри на маннитно-соевой твердой питательной среде указанные бактерии вырастают на 10 сутки после посева, образуя выпуклые, молочно-белые, слизистые колонии диаметром 1,0…2,0 мм. Бактерии Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D хорошо растут и на других питательных средах:

Среда Норриса, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; MgSO₄ - 0,8; NaCl - 0,2; FeCl₃ - 0,01; дрожжевой экстракт - 2,0; маннит - 10,0.

Соевая среда с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с глюкозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; глюкоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с сахарозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; сахароза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с мальтозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; мальтоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Соевая среда с лактозой, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄ - 0,1; соль молибдена - следы; лактоза - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

Навеску соевой муки получают путем размола пророщенных соевых семян, заливают 1 л воды и кипятят в течение 30 мин. В фильтрат, доведенный до 1 л, вносят соли.

При выращивании штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D в пробирках на всех вышеперечисленных средах (при температуре 28°C в течение 480 ч) отмечен обильный рост штриха пастообразной молочно-белой консистенции. При длительном хранении чистой культуры в холодильнике при температуре 4°C консистенция штриха штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D не изменяется.

Физиологе-биохимические признаки.

Аэроб.

Температурный диапазон роста 27-30°С. Оптимальная температура роста 27-28°C.

Оптимум рН 7,0.

Отношение к источникам углерода. Хорошо усваивает и растет на сахарозе, глюкозе, мальтозе, лактозе, манните с образованием продуктов щелочного характера.

Признаки штамма устойчивые. Штамм не патогенен. Пересевается один раз в 6 месяцев. Хранится в пробирках на маннитно-соевом агаре при температуре 4-5°C.

Штамм ВКМ В-2629D идентифицирован по «Определителю» Берги (1984) как штамм вида Bradyrhizobium japonicum.

Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ В-2629D отличается от штамма-прототипа (Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2456D) высокой амидазной, каталазной активностью, а также устойчивостью к высоким дозам аммиачной селитры (дает рост на маннитно-соевой твердой питательной среде с содержанием NH₄NO₃ 40 г/л).

Изобретение поясняется следующим конкретным примером использования штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D.

Пример

Посевной материал получают выращиванием штамма в пробирках с агаризованной питательной соевой средой с маннитом, г/л: K₂HPO₄ - 0,5; KH₂PO₄ - 0,5; NaCl - 0,1; MgSO₄ - 0,1; CaSO₄- 0,1; соль молибдена - следы; маннит - 20,0; соевая мука - 10,0; агар-агар - 15,0.

После посева пробирки с бактериальной культурой выставляют в термостаты с температурой 27-28°C на 20 суток. За это время в пробирках на косячке плотной питательной среды отмечается обильное нарастание бактериальной массы испытываемого штамма.

Для инокуляции семян в день посева сои готовят бактериально-молибденовую смесь. Для этого в пробирки со штрихом испытываемого штамма клубеньковых бактерий сои вносят по 2,5 мл заранее приготовленного 1,25% раствора молибдена (25 г/л молибдата аммония). Штрих с косяка питательной среды смывают раствором молибдена. Путем встряхивания пробирки получают однородную бактериально-молибденовую смесь, которой сразу же обрабатывают семена сои. Полученный объем суспензии (2,5 мл) используют для предпосевной обработки 250 г семян сои. После нанесения суспензии семена сои тщательно перемешивают, подсушивают в тени и высевают в подготовленную почву.

В таблице приводятся данные об эффективности штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D в зависимости от условий года, полученные в результате проведения полевых экспериментов. Опыты проводили на лугово-черноземовидных почвах с сортом сои Гармония. Бактеризованные семена высевали в день обработки. Штамм Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D по сравнению с контролем (фон - естественная инокуляция) стабильно повышал урожайность семян сои в течение трех лет испытаний в среднем на 1,9 ц/га.

Эффективность штамма Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D.

Штамм клубеньковых бактерий сои вида Bradyrhizobium japonicum ВКМ B-2629D для изготовления бактериального удобрения под сою.

Изобретение относится к промышленной микробиологии. Биопрепарат содержит гидролизат, содержащий продукт анаэробной ферментации смеси листьев растений, свекольной или тростниковой мелассы и воды, взятых в заданных соотношениях, и культуральную жидкость, образованную в процессе получения микробной массы аборигенных углеводородокисляющих микроорганизмов при заданном соотношении компонентов.

Штамм бактерий staphylococcus aureus, используемый в качестве тест-культуры для отбора антибактериальных средств // 2568058

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Staphylococcus aureus 113, обладающий антилизоцимной активностью, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им.

Штамм streptococcus salivarius вкпм в-11174, полученный на доступных питательных средах // 2567814

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Streptococcus salivarius М-11, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11174 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов.

Способ получения бактериального концентрата // 2567813

Предлагаемое изобретение относится к биотехнологии. Способ предусматривает приготовление питательной среды на основе осветленной творожной сыворотки, стерилизацию и охлаждение.

Штамм гриба eremothecium ashbyi - продуцент эфирного масла с запахом свежих цветков розы // 2567675

Изобретение относится к биотехнологии, прикладной микробиологии и может быть использовано для получения эфирного масла. Штамм Eremothecium ashbyi Guill.

Способ получения пищевого белкового продукта, обогащенного грибным белком // 2567673

Изобретение относится к пищевой промышленности. Предложен способ получения пищевого продукта из очищенных от лузги семян подсолнечника.

Штамм гриба eremothecium ashbyi - продуцент эфирного масла, аналогичного болгарскому розовому // 2567672

Средство для селективной апоптотической элиминации опухолевых клеток // 2567670

Изобретение относится к микробиологической промышленности и может быть использовано в биотехнологии, генетической инженерии, медицине и ветеринарии. Предложено применение РНКаза Bacillus sp.

Способ установления подлинности молочных продуктов // 2567658

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия штамма молочнокислых бактерий, включающего IS-элемент, в молочном продукте.

Способ определения антилизоцимной активности стафилококков // 2567642

Изобретение относится к области клинической микробиологии. Исследуемую культуру стафилококков выращивают в условиях постоянного встряхивания, в качестве контроля используют смесь бульона и культуры без лизоцима, проводят двукратное измерение оптической плотности опытных и контрольных лунок через 2 и 4 часа инкубации и об уровне антилизоцимной активности судят по степени выраженности признака у определенного штамма стафилококков, которую рассчитывают по формуле: где K - коэффициент антилизоцимной активности стафилококков; VК - объем бульонной культуры исследуемого штамма; VЛ - объем раствора лизоцима исходной концентрации; CЛ - концентрация лизоцима; MО4 - среднее значение оптической плотности опытных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма с лизоцимом через 4 часа инкубации, ед.

Биопрепарат для очистки почвы и шламов от нефти и нефтепродуктов // 2568063

Лиофилизированная питательная среда для визуального выявления ureaplasma urealyticum // 2568062

Изобретение относится к области медицинской микробиологии. Изобретение представляет собой питательную среду для визуального выявления Ureaplasma urealyticum, содержащую питательную основу, стимуляторы роста, мочевину, селективные компоненты, лошадиную сыворотку, pH индикатор и дистиллированную воду.

Штамм streptococcus salivarius вкпм в-11174, полученный на доступных питательных средах // 2567814

Способ получения бактериального концентрата // 2567813

Штамм francisella tularensis 15/23-1δreca со сниженной реактогенностью для создания живой туляремийной вакцины и способ его получения // 2567810

Изобретения относятся к области биотехнологии и касаются штамма Francisella tularensis 15/23-1ΔrecA и способа его получения. Охарактеризованный штамм является генетически маркированным: имеет только одну копию гена iglC и делетированный ген recA.

Bifidobacterium longum atcc baa-999 (bl999) и контролирование веса // 2567660

Изобретение касается применения композиции, содержащей Bifidobacterium longum АТСС ВАА-999, для поддержания уменьшения веса или сохранения веса у половозрелых людей или животных.

Способ установления подлинности молочных продуктов // 2567658

Штамм streptococcus thermophilus, используемый для производства кисломолочных продуктов // 2567150

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Streptococcus thermophilus Во4-I, обладающий высокой антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-10893 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.

Штамм lactobacillus plantarum, используемый для получения кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов // 2567149

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus plantarum В2-II, обладающий высоко антагонистической активностью, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-10816 и может быть использован при производстве кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов.

Хитоолигосахариды и способы их применения для усиления роста растений // 2564844

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Осуществляют усиление роста растений путем обработки семян растения или растения, которое прорастает из семян, эффективным количеством по меньшей мере одного хитоолигосахарида (ХО), представленного формулой: в которой R1 означает водород или метил; R2 означает водород или метил; R3 означает водород, ацетил или карбамоил; R4 означает водород, ацетил или карбамоил; R5 означает водород, ацетил или карбамоил; R6 означает водород, арабинозил, фукозил, ацетил, сульфат, 3-0-S-2-0-MeFuc, 2-0-MeFuc или 4-0-AcFuc; R7 означает водород, маннозил или глицерин; R8 означает водород, метил или -CH2OH; R9 означает водород, арабинозил или фукозил; R10 означает водород, ацетил или фукозил; и n равно 0, 1, 2 или 3.