Лекарственное средство на основе вещества, влияющего на эндоканнабиноидную систему

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и эндокринологии, и касается лечения заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы. Для этого предложено лекарственное средство на основе антител к каннабиноидному рецептору человека, полученное в процессе многократного последовательного разведения этих антител и промежуточного внешнего механического воздействия. Введение такого лекарственного средства обеспечивает нормализацию метаболических нарушений, включая ожирение. 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 4пр.

 

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для повышения эффективности лечения заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы, в том числе с метаболическими нарушениями, включая ожирение.

Согласно данным Международной рабочей группы по проблеме ожирения (International Obesity Task Force), более 300 млн человек на нашей планете страдают ожирением, а еще 800 млн человек имеют избыточную массу тела. При сохранении таких высоких темпов роста заболеваемости к 2025 г. ожидается двукратное увеличение числа страдающих ожирением.

Избыточный вес и ожирение являются одной из наиболее распространенных проблем в развитых странах и повышают риск развития заболеваний сердечно-сосудистой системы, дислипидемии, сахарного диабета 2 типа, онкологических заболеваний.

Среди современных препаратов, используемых для снижения массы тела, можно выделить три основные группы - препараты периферического и центрального действия, усиливающие «сжигание» калорий, препараты, снижающие поступление жиров в организм, и препараты центрального действия (регуляторы аппетита) (Padwal R.S., Majumdar S.R., Drug treatments for obesity: orlistat, sibutramine, and rimonabant. Lancet, 2007; 366 (9555):71-7). Однако известные препараты всех групп имеют множественные побочные эффекты, в связи с чем их применение крайне ограничено.

Кроме того, известен препарат для лечения ожирения «Римонабант» (Акомплиа), по механизму действия являющийся антагонистом каннабиноидных рецепторов (CB1), который оказывают центральное действие на мозг, уменьшая аппетит (Despres JP, Golay А, Sjostrom L; Rimonabant in Obesity-Lipids Study Group. Effects of rimonabant on metabolic risk factors in overweight patients with dyslipidemia. The New England Journal of Medicine. 2005 Nov 17; 353(20):2121-34), который также обладает множественными побочными эффектами.

Изобретение направлено на создание лекарственного средства, обеспечивающего эффективное лечение заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы, в том числе с метаболическими нарушениями, включая ожирение, на основе антител к каннабиноидному рецептору (Ken Mackie. Cannabinoid receptors as therapeutic targets. The Annual Review of Pharmacology and Toxicology, 2006. 46:101-122).

Решение поставленной задачи и достижение вышеуказанного технического результата обеспечивается тем, что лекарственное средство на основе вещества, влияющего на эндоканнабиноидную систему, согласно изобретению получено в процессе многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации (активирования-потенцирования) антител к каннабиноидному рецептору человека в водном или водно-спиртовом растворителе и промежуточного внешнего механического воздействия.

При этом используют антитела предпочтительно к цельной молекуле или полипептидному фрагменту каннабиноидного рецептора I типа человека.

Кроме того, лекарственное средство может быть получено путем многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации матричного раствора аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека с начальной концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл и промежуточного внешнего воздействия.

Кроме того, лекарственное средство может быть выполнено в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного водным или водно-спиртовым раствором, полученным путем многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации антитела к цельной молекуле или полипептидному фрагменту каннабиноидного рецептора I типа человека, и фармацевтически приемлемые добавки.

При этом фармацевтически приемлемые добавки могут включать лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Кроме того, лекарственное средство может содержать смесь различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений, полученных путем многократного последовательного равномерного уменьшения концентрации матричного раствора аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека и промежуточного внешнего воздействия.

Возможно для получения заявленного лекарственного средства использование матричного раствора антител к цельной молекуле каннабиноидного рецептора I типа человека или полипептидному фрагменту с последовательностью, выбираемой, например, и следующей группы:

QRGTQKSIII;

EKLQSVCSDIFPHIDETYL;

IQRGTQKSIIIHTSEDGKVQVTRPDQARM;

KAHSHAVRMIQRGTQKSIIIHTSEDGKVQVTRPDQARMDIRLAKT;

MSVSTDTSAEAL;

TEFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLNPS;

AQPLDNSMGDSDCLHKHAN;

GTQKSIIIHTSEDG;

MTAGDNPQLVPADQVNITEFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLN;

VVAFCLMWTIAIVI;

EFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLNPSQQLAIAVLSLTL;

NEENIQCGE;

GSPFQEKMTAGDNPQLVPADQVNITEFYNKSL;

AYKRIVTRPKAVVAFCLMWTIAIVIAVLPLLGWN.

При этом лекарственное средство может быть приготовлено путем сверхразведениея исходного матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору человека в водном или водно-спиртовом растворителе в 10012, 10030, и 100200 раз, что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям C12, C30 и C200.

Таким образом, в процессе приготовления заявленного лекарственного средства путем многократного последовательного разведения исходного матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору человека и промежуточного внешнего воздействия - вертикального встряхивания, предпочтительно, по гомеопатической технологии активирования-потенцирования, водный или водно-спиртовой растворитель приобретает биологическую активность, обусловленную образованием так называемой активированной-потенцированной формы антител к каннабиноидному рецептору человека в сверхмалой дозе, которая в фармакологических моделях и/или клинических методах лечения заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы, в том числе с метаболическими нарушениями, включая ожирение, обеспечивает получение ранее неизвестного (неожиданного) терапевтического эффекта, который заключается, например, в нормализации углеводного и липидного обмена, приводящей к снижению массы тела без каких-либо побочных явлений, что подтверждено экспериментально на адекватных (валидных) моделях.

При этом технический результат изобретения, который заключается в обеспечении эффективного лечение заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы, обусловлен тем, что заявленное лекарственное средство в результате используемой технологического процесса активирования-потенцирования исходного матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору человека обладает биологической активностью и воздействует на известные каннабиноидные рецепторы 1 типа и эндоканнабиноиды единой каннабиноидной системы в гипоталамусе, которая, воздействуя на специфические участки мезолимбической области головного мозга, влияет в том числе и на чувство насыщения и регулирует аппетит и как результат потребление пищи, приводящее к снижению массы тела.

Кроме того, полученное в соответствии с изобретением лекарственное средство расширяет арсенал лекарственных средств центрального действия, не вызывающих побочных эффектов, предназначенных для эффективного лечения, в том числе ожирения и/или излишнего веса, как в монотерапии, так и в составе комплексной терапии.

Лекарственное средство приготовляют преимущественно следующим образом.

Для приготовления заявленного лекарственного средства в качестве исходного действующего вещества - антител к каннабиноидному рецептору человека используют моноклональные или, преимущественно поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы. Под ред. Г. Фримеля. М., Медицина, 1987, с.9-33; или, например, в статье Laffly Е., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol.14. - N 1-2. P.33-55.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение в индивидуальном виде проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - антигеном: каннабиноидным рецептором I типа человека. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Для иммунизации кроликов можно использовать в качестве иммуногена (антигена) адъювант цельную молекулу каннабиноидного рецептора I типа человека следующей последовательности:

MKSILDGLAD TTFRTITTDL LYVGSNDIQY EDIKGDMASK LGYFPQKFPL TSFRGSPFQE KMTAGDNPQL VPADQVNITE FYNKSLSSFK ENEENIQCGE NFMDIECFMV LNPSQQLAIA VLSLTLGTFT VLENLLVLCV ILHSRSLRCR PSYHFIGSLA VADLLGSVIF VYSFIDFHVF HRKDSRNVFL FKLGGVTASF TASVGSLFLT AIDRYISIHR PLAYKRIVTR PKAVVAFCLM WTIAIVIAVL PLLGWNCEKL QSVCSDIFPH IDETYLMFWI GVTSVLLLFI VYAYMYILWK AHSHAVRMIQ RGTQKSIIIH TSEDGKVQVT RPDQARMDIR LAKTLVLILV VLIICWGPLL AIMVYDVFGK MNKLIKTVFA FCSMLCLLNS TVNPIIYALR SKDLRHAFRS MFPSCEGTAQ PLDNSMGDSD CLHKHANNAA SVHRAAESCI KSTVKIAKVT MSVSTDTSAE AL или, преимущественно, полипептидный фрагмент каннабиноидного рецептора I типа человека с последовательностью, выбираемой, например, из следующей группы:

QRGTQKSIII;

EKLQSVCSDIFPHIDETYL;

IQRGTQKSIIIHTSEDGKVQVTRPDQARM;

KAHSHAVRMIQRGTQKSIIIHTSEDGKVQVTRPDQARMDIRLAKT;

MSVSTDTSAEAL;

TEFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLNPS;

AQPLDNSMGDSDCLHKHAN;

GTQKSIIIHTSEDG;

MTAGDNPQLVPADQVNITEFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLN;

VVAFCLMWTIAIVI;

EFYNKSLSSFKENEENIQCGENFMDIECFMVLNPSQQLAIAVLSLTL;

NEENIQCGE;

GSPFQEKMTAGDNPQLVPADQVNITEFYNKSL;

AYKRIVTRPKAVVAFCLMWTIAIVIAVLPLLGWN

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенных инъекций для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства растворимых антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000 g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученную антисыворотку, которая должна быть желтого цвета, хранят до использования в замороженном состоянии при температуре -70°C. Для выделения из антисыворотки антител к каннабиноидному рецептору I типа человека производят абсорбцию на твердой фазе в следующей последовательности:

1) 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 М NaCl, добавляют 6,26 г Na2SO4, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2) выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3) после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенную фосфатным буфером;

4) фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Затем производят очистку антител методом аффинной хроматографии путем прикрепления полученных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, который находится на нерастворимом матриксе с последующим элюированием концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷2,5 мг/мл, используют в качестве матричного (первичного) раствора для последующего приготовления активированной-потенцированной формы.

Процесс активирования-потенцирования полученного матричного (первичного) раствора антител к каннабиноидному рецептору I типа человека производят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части упомянутого матричного раствора в 9 частях (для десятичного разведения) или в 99 частях (для сотенного разведения С) или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального водного или водно-спиртового растворителя с промежуточным многократным вертикальным встряхиванием ("динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения, предпочтительно, по гомеопатическому методу (см., например, В. Швабе Гомеопатические лекарственные средства. М., 1967 г., с.14-29).

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения C12 одну часть упомянутого матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору I типа человека с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют полученное 1-е сотенное C1 разведение. Из 1-го сотенного C1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение C12. Таким образом, 12-е сотенное разведение C12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно в разных емкостях 12 раз 1-й части исходного матричного раствора антител к каннабиноидному рецептору I типа человека с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный сверхразведением исходного матричного раствора в 10012 раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений C 30 и C 200.

При использовании смеси различных гомеопатических, преимущественно сотенных разведений антител к каннабиноидному рецептору I типа человека каждый компонент состава (например, C 12, C 30, C 200) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до их предпоследнего разведения (соответственно до получения C 11, C 29, C 199) и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). При этом получают активированную-потенцированную форму антител к каннабиноидному рецептору I типа человека в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, что эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200.

Возможно приготовление заявленного лекарственного средства в виде смеси других различных гомеопатических разведений, например десятичных и/или сотенных (D 20, C 30, C 100 или C12, C30, C50 и т.д.), эффективность которых в каждом конкретном случае определяют экспериментально.

При потенцировании вместо встряхивания в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять внешнее воздействие ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано в твердой лекарственной форме, которую приготовляют таблетированием из таблеточной массы, которая, например, содержит 8÷30 мас.ч. гранул лактозы с размером частиц 150÷300 мкм, орошенных в псевдоожиженном - кипящем слое водным или водно-спиртовым раствором активированной-потенцированной формы антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие 75÷95 мас.ч. чистой лактозы, 8÷15 мас.ч. микрокристаллической целлюлозы и 0,8÷1,2 мас.ч. стеарата магния. Масса таблетки может составлять 150÷500 мг. Предпочтительно использовать таблетки массой 250÷300 мг, которые включают 3,0÷6,0 мг/табл активированной-потенцированной формы водно-спиртовых разведений субстанции - действующего вещества поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением по вышеуказанной гомеопатической технологии исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР).

Предпочтительно для эффективного лечения ожирения или излишнего веса рекомендуется применять заявленное лекарственное средство по 1-2 таблетке (держать во рту до полного растворения) 2-4 раза в день.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы поликлональные антитела, приготовленные по заказу специализированной фармацевтической фирмой.

Пример 1

Для лечения ожирения неоднократно проводились попытки использовать психоактивные вещества (антидепрессанты, ноотропы, различные эндорфины, энкефалины, эндоканнабиноиды), воздействующие на систему позитивного эмоционального подкрепления и, прежде всего, функциональную активность «центров удовольствия» в латеральном гипоталамусе. Однако из-за выраженных побочных действий, развития привыкания (пристрастия) эффективное и одновременно безопасное лекарственное средство центрального действия до сих пор не создано.

Заявленное лекарственное средство (по направленности действия - рецептор каннабиноидный 1 типа - является центральным) в связи использованием особой технологии потенцирования оказывает щадящее воздействие на рецептор, приводящее к его сенситизации и вследствие этого повышению чувствительности к эндогенным каннабиноидам.

Данный эффект подтверждается следующим экспериментом: проведено изучение влияния заявленного лекарственного средства в виде в одного раствора активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР) на функциональное состояние каннабиноидного рецептора 1 типа (in vitro) в 2 режимах: в режиме агониста и в режиме антагониста.

Режим агониста:

Перед внесением в лунки микропланшета (96-луночный планшет, объем лунки 250 µl) клетки суспендировали в буфере HBSS (Invitrogen), содержащем 20 мМ HEPES (pH 7.4). Клетки преинкубировали в течение 10 мин при комнатной температуре вместе с добавлением 20 мкл препарата СМД анти-КР. После преинкубации в лунки добавляли активатор аденилатциклазы NKH477. Клетки инкубировали в течение 10 мин 37°C и лизировали. В лунки вносили флуоресцентный акцептор (цАМФ, меченный D2) и флуоресцентный донор (антитела к цАМФ, меченные криптатом европия).

В качестве базального контроля вместо препарата СМД анти-КР суспензию клеток преинкубировали в присутствии HBSS буфера (20 мкл). В качестве стимулированного контроля вместо СМД анти-КР суспензию клеток преинкубировали в присутствии референсного агониста CP 55940 (20 мкл).

Функциональную активность (по концентрации цАМФ) оценивали методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF). Интенсивность флуоресценции в базальном контроле принимается за фоновую и ее значение вычитается из интенсивностей флуоресценции в опыте (СМД анти-КР) и контроле (CP 55940):

Измеренный специфический ответ клетки на введение СМД анти-КР вычисляется по формуле: интенсивность флуоресценции в опыте (СМД анти-КР) - интенсивность флуоресценции в базальном контроле.

Измеренный специфический ответ клетки на введение референсного агониста (CP 55940) вычисляется по формуле: интенсивность флуоресценции в контроле (CP 55940) - интенсивность флуоресценции в базальном контроле.

Результаты выражаются в процентах от специфического ответа клетки на введение референсного агониста в стимулированном контроле:

% ответа референсного агониста = ((измеренный специфический ответ/специфический ответ в контроле на введение референсного агониста)×100%).

Режим антагониста:

Перед внесением в лунки микропланшета (96-луночный планшет, объем лунки 250 µl) клетки суспендировали в буфере HBSS (Invitrogen), содержащем 20 мМ HEPES (pH 7.4). Клетки преинкубировали в течение 5 мин при комнатной температуре вместе с добавлением 20 мкл препарата СМД анти-КР. После добавления в лунки референсного агониста CP 55940 клетки инкубировали 10 мин при комнатной температуре. Далее в лунки добавляли активатор аденилатциклазы NKH477. Клетки инкубировали в течение 10 мин 37°C и лизировали. В лунки вносили флуоресцентный акцептор (цАМФ, меченный D2) и флуоресцентный донор (антитела к цАМФ, меченные криптатом европия).

В качестве базального контроля вместо СМД анти-КР суспензию клеток преинкубировали в присутствии референсного антагониста AM 281 (20 мкл). В лунки с базальным контролем не добавляли референсный агонист CP 55940. В качестве стимулированного контроля суспензию клеток преинкубировали в присутствии HBSS буфера, содержащего 20 мМ HEPES (pH 7.4), и референсного агониста CP 55940 (20 мкл).

Функциональную активность (по концентрации цАМФ) оценивали методом гомогенной флуоресценции с временным разрешением (HTRF). Интенсивность флуоресценции в базальном контроле принимается за фоновую и ее значение вычитается из интенсивностей флуоресценции в опыте (СМД анти-КР) и контроле (CP 55940):

Измеренный специфический ответ клетки на введение СМД анти-КР вычисляется по формуле: интенсивность флуоресценции в опыте (СМД анти-КР) - интенсивность флуоресценции в базальном контроле.

Измеренный специфический ответ клетки на введение референсного агониста (CP 55940) вычисляется по формуле: интенсивность флуоресценции в контроле (CP 55940) - интенсивность флуоресценции в базальном контроле.

Результаты выражаются в процентах ингибирования специфического ответа клетки на введение референсного агониста (CP 55940) в контроле:

% ингибирования ответа референсного агониста = 100% -((измеренный специфический ответ/специфический ответ в контроле на введение референсного агониста)×100%)

В результате исследований показано (см. таблицу 1), что СМД анти-КР изменяет функциональную активность каннабиноидного рецептора 1 типа, оцененную по концентрации внутриклеточной цАМФ.

Образец (сверхмалые дозы антител к каннабиноидному рецептору I типа (смесь гомеопатических разведений C12+C30+C200)) проявляет свойства агониста каннабиноидному рецептору I типа, выраженность модифицирующего эффекта которого составляет 21% от эффекта стандартного агониста CP 55940 (эффект стандартного агониста принимается за 100%).

Таблица 1
Рецептор Препарат Содержание СМД анти-КР
в лунке (% по объему) (общий объем всех соединений в лунке равен 200 мкл)
Режим агониста Режим
антагониста
Пояснения к результатам
% ответа на СМД анти-КР стандартный агонист % ингибир ования ответа агониста Стандартный антаго
нист
СВ1- Рецептор каннабиноидный 1 типа СМД анти-КР 10% 21 CP 55940 0 AM 281 СМД анти-КР
обладают эффектом агониста, выраженность которого составляет 21% от эффекта стандартного агониста (принимается за 100%)

Пример 2

Для исследования свойств заявленного лекарственного средства был использован водный раствор активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР).

В исследовании использованы 40 мышей-самцов линии C57B1 (вес на начало исследования 13,5-15,5 г). 10 мышей получали обычный стандартный корм (стандартная диета), 30 мышей - стандартный корм с высококалорийными добавками (высококалорийная диета) и одновременно либо дистиллированную воду (контроль, 0,4 мл/кг), либо сибутрамин (Меридиа 10 мг капсулы, Abbott GMBH, Германия) (10 мг/кг), либо СМД анти-КР (0,4 мл/кг). Все препараты вводили внутрижелудочно 1 раз в день в течение 5 месяцев. До начала введения препаратов (исходно), а также каждую неделю после начала их введения измеряли потребление мышами корма. Потребление корма оценивали как среднее количество пищи (г), потребленного мышью за 1 и 2 месяца исследования, и как среднее количестве корма на 10 г массы тела мыши.

Мыши в группе низкокалорийной диеты потребляли в среднем за весь период наблюдения на 15% меньше корма, чем мыши на высококалорийной диете (таблица 2). И сибутрамин и СМД анти-КР снижали потребление корма, причем эффект сибутрамина был выражен несколько выше: препарат снижал потребление корма в неделю на 19,3% (p<0,05), в то время как СМД анти-КР - только на 9,3% относительно контроля (p>0,05). В таблице 2 представлены результаты влияния СМД анти-КР и сибутрамина на потребление пищи мышами C57B1 (средние значения за 5 месяцев наблюдения), M±m.

Таблица 2
Препарат Потребление корма (г/мышь) в день Потребление корма (г на 10 г массы тела) в день
Стандартная диета 2,95±1,42 1,35±0,05
Высококалорийная диета + дистиллированная вода 3,41±1,64# 1,54±0,05#
Высококалорийная диета + сибутрамин 2,75±1,36** 1,28±0,05**
Высококалорийная диета + СМД анти-КР 3,10±2,02 1,44±0,08
Примечание: ** - отличия от контроля достоверны, p<0,01; # - отличия от стандартной диеты достоверны, p<0,05

Однако при анализе динамики потребления корма были выявлены следующие особенности. На двадцатой неделе эксперимента мыши на высокожировой диете, получавшие СМД анти-КР, потребляли больше корма по сравнению с первой неделей эксперимента, что показано на Фиг.1, где СМД анти-КР обозначено как «Диетра».

При этом у мышей, получавших СМД анти-КР, по-прежнему наблюдалось снижение прироста массы тела на 51,2% относительно контроля. Сибутрамин на последней двадцатой неделе эксперимента также снижал прирост массы тела на 51,5% по сравнению с контрольной группой.

Пример 3

Для исследования свойств заявленного лекарственного средства был использован водный раствор активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, сверхразведением исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР).

В исследовании использованы 33 мышей-самцов линии C57B1 (вес на начало исследования 13,09±0,738 г). Мыши получали модифицированную диету с высоким (45%) содержанием жира и одновременно либо дистиллированную воду (контроль, 0,2 мл/кг), либо сибутрамин (10 мг/кг), либо антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, смесь сотенных гомеопатических разведений C12+C30+C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР) (0,2 мл/кг). Все препараты СМД анти-КР вводили внутрижелудочно 1 раз в день в течение 2 месяцев. До начала введения препаратов (исходно), а также каждую неделю после начала их введения измеряли вес мышей на электронных весах Philips Cucina HR 239016 (Венгрия). Прирост массы тела мышей оценивали в % от исходного.

Начиная с 6 недели введения, СМД анти-КР снижала прирост массы тела мышей, содержащихся на высокожировой диете. В таблице 3 представлена средняя еженедельная масса (г) мышей C57B16, получавших высокожировую диету и СМД анти-КР (0,2 мл/мышь) или сибутрамин 10 мг/кг) (M±m). В таблице 3 показан прирост массы тела мышей.

Таблица 3
Группа Масса тела (г), недели исследования
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Дистил.вода 12,18±0,501 15,27±0,982 15,27±0,488 16,00±0,972 18,18±0,569 17,27±0,557 20,18±0,501 20,55±0,608 21,45±0,857
Δ к исходному 25,4 25,4 31,3 49,3 41,8 65,7 68,7 76,1
Сибутрамин 13,82±1,094 13,45±0,474 16,73±0,407* 19,82±0,501** 20,18±0,784 20,91±0,563** 22,36±0,927 23,64±1,343 22,91±1,091
Δ к исходному -2,6 21,1 43,4 46,1 51,3 61,8 71,1 65,8
СМД анти-КР 13,27±0,619 16,18±0,182 17,45±0,282** 19,64±0,453** 20,18±0,423* 20,18±0,423** 19,82±0,501 21,64±0,364 22,00±0,467
Δ к исходному 21,9 31,4 47,9 52,1 52,1 49,43 63,0 65,8
Примечание: * - p<0,05 по отношению к группе контроля; ** - p<0,001 по отношению к группе контроля;

Таким образом, препарат СМД анти-КР снижает пророст массы тела мышей на высокожировой диете, снижая потребление ими пищи, и не уступает по эффективности известному широко используемому для снижения массы тела препарату сибутрамину.

Пример 4

Для исследования свойств заявленного лекарственного средства были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (6 мг/табл.) активированной-потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к каннабиноидному рецептору I типа человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 10012, 10030, 100200 раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений C12, C30, C200 (сверхмалые дозы - СМД анти-КР).

В исследование принимали участие 80 добровольцев (20 мужчин и 60 женщин) в возрасте от 20 до 69 лет (средний возраст составил 40,2±1,26 года), 68,7% из которых страдали избыточной массой тела или ожирением (I-III степени), которые принимали по 1-й таблетке 2 раза в день. В таблице 4 представлены демографические и антропометрические показатели пациентов, включенных в исследование. В анализ безопасности были включены данные всех пациентов, участвовавших в исследовании (n=80). В течение всего периода наблюдения за пациентами отмечалась хорошая переносимость препарата. Нежелательные явления отсутствовали. Все пациенты исследуемых групп завершили лечение в сроки, установленные протоколом исследования, досрочно выбывших пациентов не было. При оценке влияния СМД анти-КР на изменение массы тела испытуемых выявлено, что использование препарата привело к снижению массы тела 56 (70%) пациентов. У 24 (30%) пациентов вес оставался неизменным, или незначительно увеличивался, однако следует отметить, что среди указанных пациентов 14 (17,5%) исходно имели нормальную массу тела (ИМТ<25 кг/м2).

Таблица 4
Показатель Значение
Возраст, лет М±m 40,2±1,26
Рост, см М±m 167,1±0,89
Вес, кг М±m 80,3±1,85
Пол мужчины 20 человек(25%)
женщины 60 человек(75%)
ИМТ, кг/м2 М±m 28,7±0,6
ИМТ, кг/м2 менее 25 25 человек (31,3%) Нормальная масса тела
25-29,99 28 человек(35%) Избыточная масса тела (предожирение)
30-34,99 20 человек (25%) Ожирение I степени
35-39,99 5 человек (6,2%) Ожирение II степени
40 и более 2 человек (2,5%) Ожирение III степени

В динамике наблюдения у пациентов, ответивших на терапию, отмечалось статистически достоверное снижение массы тела (p<0,001), которое уже через 15 дней приема СМД анти-КР составило 1,1 кг (1,3%), а через 1 месяц достигло 1,9 кг (2,2%) от исходного значения, что показано на Фиг.2.

Также в указанной группе пациентов уже через 1 неделю после начала приема СМД анти-КР отмечалось статистически значимое (p<0,001) уменьшение окружности талии и окружности бедер, которое к окончанию терапии достигло 2,3% и 2,7% соответственно. В таблице 5 представлена динамика изменения окружности талии и окружности бедер.

Таблица 5
День 1 (исх) День 7 День 14 День 15 День 16 День 22 День 29 День 30
окружность талии, см
М±m, см 96,3±1,97 95,2±2,07** 93,7±1,82*** 94,2±1,96*** 95,1±2,16*** 94,5±2,16*** 94,3±2,10*** 94,1±2,07***
Δ от исх, % -1,1% 2,7% -2,2% -1,2% -1,9% -2,1% -2,3%
окружность бедер, см
М±m, см 110,8±1,52 110,8±1,66*** 109,3±1,37** 109,9±1,50*** 108,7±1,60*** 108,3±1,56*** 108,1±1,58*** 107,8±1,69***
Δ от исх, % 0,0% -1,4% -0,8% -1,9% -2,3% -2,4% -2,7%
Примечание: ** - Р от исх<0,01; *** - Р от исх<0,001

При оценке выраженности чувства голода пациентов по Визуальной аналоговой шкале (ВАШ) исходно показано, что наибольшая интенсивность чувства голода отмечалось у пациентов в вечернее время. По окончании 1 месяца приема СМД анти-КР уровень голода в вечерние часы снизился достоверно (p<0,001) с 49,4±3,75 до 42,0±4,32 баллов. В утреннее и дневное время также отмечалась тенденция к снижению выраженности чувства голода (с 20,5±3,23 до 13,6±1,78 баллов в утренние часы, с 44,7±3,45 до 27,3±3,72 баллов в дневные часы), которая, однако, не достигла статистически значимых значений к окончанию терапии, что возможно связано с недостаточным числом пациентов и умеренными исходными значениями показателей.

Таким образом, в проведенном клиническом исследовании СМД анти-КР подтверждена высокая переносимость препарата, нежелательные явления при приеме препарата отсутствовали.

1. Лекарственное средство, влияющее на эндоканнабиноидную систему, характеризующееся тем, что получено в процессе многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации антител к каннабиноидному рецептору человека в водном или водно-спиртовом растворителе и промежуточного внешнего механического воздействия.

2. Лекарственное средство по п.1, характеризующееся тем, что используют антитела к цельной молекуле или полипептидному фрагменту каннабиноидного рецептора I типа человека.

3. Лекарственное средство по п.1 или 2, характеризующееся тем, что получено путем многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации матричного раствора аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека с начальной концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл и промежуточного внешнего воздействия.

4. Лекарственное средство по п.3, характеризующееся тем, что выполнено в твердой лекарственной форме и содержит эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного водным или водно-спиртовым раствором, полученным путем многократного последовательного разведения - равномерного уменьшения концентрации антитела к цельной молекуле или полипептидному фрагменту каннабиноидного рецептора I типа человека, и фармацевтически приемлемые добавки.

5. Лекарственное средство по п.4, характеризующееся тем, что фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

6. Лекарственное средство по п.3, характеризующееся тем, что содержит смесь различных, преимущественно сотенных гомеопатических разведений, полученных путем многократного последовательного равномерного уменьшения концентрации матричного раствора аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека и промежуточного внешнего воздействия.

7. Лекарственное средство по п.3, характеризующееся тем, что содержит смесь различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений, полученных путем многократного последовательного равномерного уменьшения концентрации матричного раствора аффинно очищенных антител к каннабиноидному рецептору I типа человека и промежуточного внешнего воздействия.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к новым циклопентил- и циклогептилпиразоловым производным формулы I, где А и R1-R4 определены в формуле изобретения, или их фармацевтически приемлемым солям.

Изобретение касается применения композиции, содержащей Bifidobacterium longum АТСС ВАА-999, для поддержания уменьшения веса или сохранения веса у половозрелых людей или животных.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к составу, способствующему продукции адипонектина и обладающему промоторной активностью в отношении продукции адипонектина.

Изобретение относится к амидным соединениям структурной формулы 1, которые обладают ингибирующей активностью в отношении 11β-HSD1 фермента. В формуле 1 X представляет N или CR, и Y представляет N или СН при условии, что X и Y не являются в одно и то же время углеродом; Z представляет N или СН; R1 и R2 представляют независимо водород, (С3-С10)циклоалкил, норборнил, адамантил или норадамантил, или R1 и R2 могут быть связаны друг с другом вместе с атомами азота, к которым они присоединены, образуя (С5-С10) насыщенный или ненасыщенный гетероцикл или сконденсированный гетероцикл, при условии, что R1 и R2 не являются в одно и то же время водородом; L представляет одинарную связь, -СО-, -SO2-, -(CR21R22)-(СН2)c- (с представляет целое число 0-5), , -СО(CR21R22)d- (d представляет целое число 1-6), (С3-С10)циклоалкилен, (С6-С20)арилен или 5-6-членный гетероарилен, включающий один или два гетероатома, выбранных из N; R21 и R22 представляют независимо водород или (C1-С10)алкил, R представляет водород или гидроксил; R4 и R5 независимо представляют водород или (С1-С10)алкил, или R4 и R5, связанные вместе, образуют 6-членный ненасыщенный карбоцикл; R6 и R7 представляют независимо водород, (С1-С10)алкил или галоген; R31-R38, R41-R43 и R46 представляют независимо водород или (С1-С10)алкил; и m и n независимо представляют целое число 0-3 при условии, что m+n представляют целое число 2 или более.

Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для комплексного лечения синдрома поликистозных яичников и ожирения.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению производных аналогов GLP-1, и может быть использовано в медицине для лечения инсулиннезависимого сахарного диабета, инсулинозависимого сахарного диабета или ожирения.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для комплексного лечения ожирения при синдроме поликистозных яичников.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается лечения эссенциальной артериальной гипертензии на фоне ожирения. Для этого осуществляют комплексное лечение, включающее введение кандесартана 8 мг/сутки, амлодипина 5 мг/сутки, индапамида 2,5 мг/сутки и сибутрамина 10 мг/сутки в осчетании с ежедневной дозированной ходьбой на 1-2 км в течение 1 месяца с последующим увеличением дистанции до 3 км.

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы I или их фармацевтически приемлемым солям. Соединения изобретения обладают свойствами антагониста орексинового рецептора.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности представляет способ лечения и/или предупреждения нарушений, связанных с избыточным весом и/или ожирением, в том числе при сахарном диабете.
Группа изобретений относится к иммуногенной водной композиции, содержащей биологический антиген и полимер акриловой кислоты, причем данная композиция содержит электролит для обеспечения по меньшей мере на 30% более высокой осмолярности, чем осмолярность водного раствора 0,9 мас./об.% хлорида натрия.

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается лечения сахарного диабета. Для этого на фоне лечения диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами дополнительно вводят фармацевтическую композицию, содержащую активированную-потенцированную форму антител к рецептору инсулина и активированную-потенцированную форму антител к эндотелиальной NO-синтазе.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к урологии, и касается лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и абактериального простатита.
Изобретение относится к области фармацевтики и касается адъюванта, его применения для получения композиции, непосредственно композиции и набора. Охарактеризованный адъювант представляет собой смесь трех активных соединений, содержащихся в количестве, составляющем соответственно 20-50%, 20-50% и 40-60% от массы всего адъюванта, со следующей структурой: соединение 1: β-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1→4)-N-ацетил-D-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелиновая кислота (ГМтри); соединение 2: β-N-ацетил-D-глюкозаминил-(1→4)-N-ацетил-D-мурамоил-L-аланил-D-изоглютаминил-мезо-диаминопимелоил-D-аланин (ГМтетра), и соединение 3: димера ГМтетра (диГМтетра). Связь между мономерными остатками ГМтетра осуществляется за счет карбоксильной группы терминального D-аланина одного остатка ГМтетра и ω-аминогруппы мезо-диаминопимелиновой кислоты другого остатка Гмтетра.

Группа изобретений относится к медицине и фармакологии и касается лечения рассеянного склероза. Предложены: фармацевтическая композиция указанного назначения для детей, содержащая 0,25 мг и менее 2-амино-2-[2-(4-С2-С20алкилфенил)этил]пропан-1,3-диола или его фармацевтически приемлемой соли для введения 1 раз в день, применение указанного соединения (FTY720) по 0,25 мг и менее для изготовления лекарственного средства для лечения, предупреждения или замедления развития рассеянного склероза у пациента педиатрического возраста для введения 1 раз в день и соответствующий способ лечения, предупреждения или замедления развития рассеянного склероза у пациента педиатрического возраста.

Изобретение относится к медицине, а именно стоматологии, и может быть использовано для лечения больных пародонтитом. Для этого сначала проводят снятие над- и поддесневых зубных отложений ультразвуковым аппаратом «PerioScan» одномоментно с антисептической обработкой раствором «Октенисепт» в разведении 1:10.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к рекомбинантным вакцинам против Candida albicans, и может быть использовано в медицине. Вакцина для лечения или предупреждения кандидозной инфекции содержит выделенный полипептид с SEQ ID NO: 2 в эффективном количестве, который может быть слит с партнером слияния.

Изобретение относится к области птицеводства и предназначено для повышения иммунного статуса птицы. Способ включает выдерживание яиц при температуре 37,8°C в течение 21 суток до проклевывания и введение in ovo биопрепарата.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой иммуногенную композицию для предупреждения и лечения раковых заболеваний, которая содержит нефункциональный BORIS белок, в последовательности которого отсутствуют все «цинковые пальцы».
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для подготовки детей с отягощенным аллергическим анамнезом к пробе Манту с 2 ТЕ ППД-Л.

Изобретение касается вакцины для предупреждения инфекции, вызванной по меньшей мере одним из Leptospira, герпес-вируса коров, вируса парагриппа и коровьего респираторного синцитиального вируса. Представленная вакцина содержит обработанный нагреванием бактерин Leptospira, имеющий липазную активность 50% или менее по сравнению с липазной активностью бактерина до обработки нагреванием и сохраняющий антигенную активность, и 1-3 живых вируса, выбранных из группы, состоящей из герпес-вируса коров, вируса парагриппа и коровьего респираторного синцитиального вируса. Указанная обработка нагреванием включает нагревание бактерина Leptospira до температуры от 60°C до 70°C в течение времени от 5 до 10 часов. Изобретение позволяет получать стабильные вакцины с сохранением вирусной инфекционности вирусов. 6 з.п. ф-лы, 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии и эндокринологии, и касается лечения заболеваний, связанных с нарушениями эндоканнабиноидной системы. Для этого предложено лекарственное средство на основе антител к каннабиноидному рецептору человека, полученное в процессе многократного последовательного разведения этих антител и промежуточного внешнего механического воздействия. Введение такого лекарственного средства обеспечивает нормализацию метаболических нарушений, включая ожирение. 4 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 табл., 4пр.

Наверх