Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов


 

G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2568903:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, гистологии и патологической анатомии, и может быть использовано для оценки анаболического действия лекарственных препаратов. Сущность заявляемого способа заключается в том, что дополнительно определяют интенсивность биосинтетических процессов в миосимпластах путем подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами, на основании которого делают заключение об анаболическом действии лекарственных препаратов. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности морфологической оценки анаболического действия лекарственных препаратов за счет применения комплекса современных методов исследования (гистологического, гистохимического и морфометрического). Заявляемый способ обладает высокой точностью, прост в применении, эффективен и легко выполним в любой гистологической лаборатории. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, гистологии и патологической анатомии, и может быть использовано для морфологической оценки анаболического действия лекарственных препаратов.

Одним из клинических проявлений анаболического действия лекарственных препаратов является увеличение объема скелетной мышечной ткани. Этот процесс может осуществляться по саркоплазматическому или миофибриллярному типу (Foss М, Kateyian S.: «Fox′s Physiological Basis for Exercise and Sport.» McGraw Hill. 1998.; G.T. Mangine, N.A. Ratamess, J.R. Hoffman, A.D. Faigenbaum, J. Kang, A. Chilakos The effects of combined ballistic and heavy resistance training on maximal lower - and upper-body strength in recreationally trained men / J Strength Cond Res, Vol. 22 (2008), 132-139).

Рост мышцы при гипертрофии неизменно сопряжен с активацией процессов синтеза белков на рибосомах (Bodine SC et al. Akt/mTOR pathway is a crucial regulator of skeletal muscle hypertrophy and can prevent muscle atrophy in vivo. Nat Cell Biol. 2001 Nov; 3 (11): 1014-9.; Pallafacchina G, Calabria E, Serrano A, Kalhovde JM & Schiaffmo S (2002). A protein kinase B-dependent and rapamycin-sensitive pathway controls skeletal muscle growth but not fiber type specification. Proc Natl Acad Sci USA 99, 9213-9218), то есть с активацией биосинтетических процессов в миосимпластах мышечных волокон. Масса и объем скелетной мышцы может меняться за счет изменения содержания белка, реализуемого через изменение числа ядер миосимпластов, скорости процессов транскрипции, трансляции и интенсивности протеолиза.

Известен способ морфологической оценки гипертрофии мышечных волокон путем биопсии с последующим микроскопическим исследованием и определением площади поперечного сечения мышечных волокон морфометрическими методами, который используется для диагностики нейродистрофических состояний, анаболического действия лекарственных препаратов.

Однако известный способ недостаточно точен, т.к. мышечная ткань при биопсии сильно сокращается и нормальное расположение мышечных волокон нарушается. Площадь поперечного сечения мышечных волокон - величина значительно варьирующая. Она зависит от места, где взята биопсийная проба, угла сечения, количества разрезов мышечного волокна (Hoppeler, Н. Exercise-induced ultrastructural changes in skeletal muscle. 1986. Int. J. Sports Med. 7, 187-204).

Наиболее близким по достигаемому техническому результату является способ оценки функциональной (биосинтетической) активности клеток путем окраски срезов, позволяющий дифференцировать в ядрах эу - и гетерохроматин (Яцковский, А.Н. Метод оценки функциональной активности клеточных ядер / А.Н. Яцковский // Арх. анат. - 1987. - Т. 92. - Вып. 1. - С. 76-79) и по преобладающему типу хроматина оценить интенсивность процессов транскрипции, а следовательно и биосинтетической активности клеток. Способ заключается в заборе участка скелетной мышцы для исследования, гистологической проводке материала, морфометрической оценке гипертрофии мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон, изготовления и окраски гистологических препаратов на ядрышковые организаторы альциановым синим и сафранином, имеющих разную молекулярную массу. Различие размеров молекул определяет их способность диффундировать в неодинаковые по плотности структуры. Вследствие этого гетерохроматин окрашивается сафранином, а эухроматин - альциановым синим.

Способ достаточно прост и воспроизводим, используется для диагностики нейродистрофических состояний, анаболического действия лекарственных препаратов, но недостаточно точен из-за низкой информативности, что приводит к затруднению дифференцировки, кроме того, требует учитывать особенности фиксации скелетных мышц.

Авторы предлагают способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов, позволяющий с высокой точностью оценить морфологические признаки анаболического действия лекарственных препаратов.

Техническим результатом заявляемого способа является повышение точности оценки анаболического действия лекарственных препаратов за счет подбора комплекса современных методов исследования (гистологического, гистохимического и морфометрического), позволяющих оценить гипертрофию и биосинтетическую активность мышечных волокон скелетной мышечной ткани.

Технический результат достигается тем, что интенсивность биосинтетических процессов в миосимпластах достигается путем определения (измерения) поперечного сечения мышечных волокон, подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро миосимпласта и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами в сравнении с интактными (контрольными) животными.

Способ осуществляют поэтапно следующим образом:

1. Забор участка скелетной мышцы для исследования и изготовление гистологических препаратов.

После эвтаназии экспериментальных животных методом декапитации, мышечную область левой задней конечности освобождают от соединительной и жировой ткани, из центральной ее части вырезают кусочки размером 0,5×0,3 см и помещают в 10% раствор забуференного формалина. Гистологический материал фиксируют 24 часа. Используют проводку с изопропанолом и заливку в парафин (Пешков М.В. Метод гистологической проводки тканей с использованием изопропанола и минерального масла / М.В. Пешков, И.И. Дыгало // Архив патологии. - 2009. - №3. - С. 39-41). Срезы тканей толщиной 6-8 мкм изготавливают на ротационном микротоме. Гистологические препараты окрашивают гематоксилином и эозином на ядрышковые организаторы (Бобров И.П. Модификация гистохимического метода выявления ядрышковых организаторов на гистологических срезах / И.П. Бобров, A.M. Авдалян, В.В. Климачев и др. // Архив патологии. - 2010. - №3. - С. 35-37).

2. Ход определения.

Оценивают гипертрофию мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон. Для этого препараты, окрашенные гематоксилином и эозином, рассматривают в светооптическом микроскопе ЛОМО Микмед-6 на увеличении ×400. Изготавливают снимки гистологических препаратов с использованием цифровой камеры Canon PS А520. Препараты анализируют на фотографиях с помощью программного пакета Axio Vision 3.4LE.

Определение биосинтетической активности ядер миосимпластов производят путем изучения гистологического препарата и подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами на увеличении ×400 светооптического микроскопа.

При определении поперечного сечения мышечных волокон и подсчете среднего количества гранул серебра на 1 ядро миосимпласта и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами анализируют не менее 100 мышечных волокон.

Заявляемый способ позволяет с высокой точностью оценить морфологические признаки анаболического действия лекарственных препаратов.

Корректность оценки анаболического действия лекарственных препаратов была апробирована экспериментальным путем.

Эксперименты проводились на 30 аутбредных крысах-самцах сток Вистар массой 200-250 г, которые находились в индивидуальных клетках в условиях стандартной лабораторной диеты. Для создания необходимых экспериментальных условий животные были разделены на 2 группы: 1-я группа - интактные крысы; 2-я группа - крысы, которые получали лекарственный препарат.

Результаты исследований представлены в примерах 1-2.

Пример 1. Установлено, что у крыс 1-й группы средний размер поперечного среза мышечного волокна составил 4,7±0,16 мкм. При этом процент ядер с одним ядрышковым организатором составил 46%, с двумя - 48%, с тремя и более - 6%.

Пример 2. У крыс 2-й группы средний размер поперечного среза мышечного волокна составил 5,9±0,14 мкм, что в 1,3 раза превышало показатели в 1-й группе (p<0,05). При этом процент ядер с одним ядрышковым организатором уменьшился в 1,5 раза (31,6%), с двумя практически не изменился (49,2%), а с тремя возрос в 3,2 раза до 19,2% (p<0,001).

Таким образом, полученные результаты наглядно демонстрируют точность применения заявляемого способа, позволяющего с высокой точностью морфологически оценивать анаболический эффект лекарственных препаратов.

Способ оценки анаболического действия лекарственных препаратов, заключающийся в заборе от экспериментального животного участка скелетной мышцы для исследования, гистологической проводке участка скелетной мышцы, изготовлении и окраске гистологических препаратов гематоксилином и эозином на ядрышковые организаторы, морфометрической оценке гипертрофии мышечных волокон путем измерения поперечного сечения мышечных волокон и определения интенсивности биосинтетических процессов в миосимпластах путем подсчета среднего количества гранул серебра на 1 ядро и определения процентного содержания ядер с 1, 2, 3 и более гранулами по сравнению с интактными (контрольными) животными.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для укупорки реакционных кювет, содержащих высушенные реагенты для биоаффинных исследований. Система (20) для биоанализа содержит картридж (4) для биоанализа с реакционной камерой (6) и прокалываемую герметичную крышку (2).

Группа изобретений относится к анализу биологических жидкостей с помощью биосенсорных систем. Способ определения концентрации анализируемого вещества в образце включает: генерацию выходного сигнала, соответствующего концентрации анализируемого вещества в образце и входному сигналу; компенсацию выходного сигнала с помощью основной функции и первой функции невязки для определения скомпенсированного выходного сигнала, причем основная функция предназначена для компенсации основной ошибки в выходном сигнале, а первая функция невязки предназначена для компенсации оставшейся ошибки в выходном сигнале; и определение концентрации анализируемого вещества в образце по скомпенсированному выходному сигналу.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и может быть использовано для количественного определения оксима пиностробина в плазме крови. Для этого проводят определение оксима пиностробина в плазме крови методом жидкостной хромато-масс-спектрометрии с использованием смеси плазмы крови с оксимом пиностробина и внутреннего стандарта - вещества, близкого по строению молекулы к анализируемому веществу.
Изобретение относится к области ветеринарии и животноводства и может быть использовано при искусственном осеменении для выявления генетически неполноценных сперматозоидов.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования риска развития неблагоприятных сердечно-сосудистых событий у больных ишемической болезнью сердца с ишемической и/или постинфарктной дисфункцией миокарда на фоне хронической сердечной недостаточности.

Изобретение относится к медицине, в частности к терапии, и может быть использовано в гепатологии и гастроэнтерологии для диагностики фибротических процессов печени.
(57) Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для посмертной диагностики токсокароза плотоядных животных. Способ включает отбор проб массой 50,0 г.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза тромбоцитопении у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ).

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ оценки эффективности антибактериальной терапии при диализном перитоните, включающий введение антибактериальных препаратов в пакет с диализным раствором с последующим введением в брюшную полость, морфологическое исследование диализата, отличающийся тем, что после проведения цикла обмена диализирующего раствора проводят исследование диализата методом клиновидной дегидратации, при этом диализат центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10-15 минут и отбирают 2 пробы - первую из верхней половины пробирки, вторую - из нижней, выявляют структуру кристаллов солей в диализате и при наличии линейных кристаллов в центральной зоне фаций обеих проб оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и не требующую ее продолжения, при наличии линейных кристаллов только в первой пробе оценивают эффективность терапии как удовлетворительную и требующую ее продолжения, при их отсутствии - как неудовлетворительную.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения глубины залегания липидных ядер, являющихся центром атеросклеротических бляшек. Изобретение представляет способ определения глубины залегания липидных ядер атеросклеротических бляшек методом ИК-Фурье спектроскопии, заключающийся в том, что подготавливаются срезы атеросклеротически измененного участка сосудистого русла, записываются инфракрасные спектры пропускания подготовленных срезов, идентифицируются характеристические пики поглощения, отличающийся тем, что определяется срез, имеющий максимальное поглощение в диапазоне 1720-1760 см-1, соответствующем валентным колебаниям связей C=O сложных эфиров холестерина, который отвечает глубине залегания липидного ядра.
Изобретение относится к области медицины, в частности к медицинской диагностике, и описывает способ прогнозирования выживаемости у больных с метастазами колоректального рака в печени после ее резекции.

Изобретение относится к области анализа текучей среды и может быть использовано для выполнения анализа проб жидкости при помощи дистанционного анализатора. Система для перемещения текучей среды от источника жидкости к дистанционному анализатору содержит капиллярную линию, соединяющую источник жидкости и анализатор проб жидкости.
Группа изобретений относится к получению стандартных образцов состава крови, содержащих ртуть, кадмий и свинец, и может быть использована в токсикологии, медицине и ветеринарии при определении содержания указанных токсичных металлов в крови.

Изобретение относится к области технического обустройства нефтедобычи, в частности к обеспечению поточных измерений количества и показателей качества скважинного флюида.

Изобретение относится к технологии контроля качества измерений, проводимых с использованием компьютерных систем анализа изображений, и может быть использовано для оценки систематической погрешности морфологических характеристик структуры материалов тел в конденсированном состоянии.

Изобретение предназначено для оценки деформативности соединений в изделиях из импрегнированной ткани, подвергаемых двухосному напряжению неразрушающими нагрузками с целью определения деформативных характеристик пневматической конструкции в целом.

Изобретение относится к определению механических характеристик труб, а именно к моделям, предназначенным для испытаний материалов труб малого диаметра на трещиностойкость, и может быть использовано при производстве и эксплуатации труб.

Группа изобретений относится к области экспериментальной биологии и медицины для приготовления тотальных препаратов биологических тканей для оптической проекционной томографии, конфокальной, мультифотонной и светоплоскостной микроскопии и может быть использована для предклинических испытаний фармакологических препаратов и оценки физиологических воздействий на организм, а также для работы с материалом биопсий в диагностических и исследовательских целях.

Изобретение относится к табачной отрасли и предназначено для использования в исследовательских лабораториях. Установка для отбора пробы газовой фазы дыма кальяна состоит из четырех отдельных линий, связанных соединительными трубками в одной точке.

Изобретение относится к способу подготовки биологических материалов для проведения исследований, в частности подготовки тканей клеща для дальнейшего определения наличия в них вируса клещевого энцефалита, и может быть использовано в здравоохранении, биотехнологиях и иммунологии.
Изобретение относится к области биологии и предназначено для биомониторинга водоема с использованием генетического состава популяций хирономид. В водоеме осуществляют отбор личинок хирономид IV стадии развития с последующей их фиксацией и приготовлением временных цитологических препаратов политенных хромосом слюнных желез личинок по ацето-орсеиновой методике. О степени загрязнения водоема судят по состоянию политенных хромосом и хромосомным индексам. Достигается упрощение способа при одновременном повышении точности определения показателей полиморфизма популяции хирономид в водных экосистемах. 1 з. п. ф-лы.
Наверх