Способ диагностики хронической сердечной недостаточности путем использования циркулирующих уровней микрорнк

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности (ХСН). Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Определяют циркулирующие уровни микроРНК и при концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность. Предложенное изобретение позволяет с повышенной достоверностью проводить диагностику ХСН на ранних стадиях заболевания. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано при диагностике хронической сердечной недостаточности (ХСН).

Несмотря на достигнутые успехи в изучении патогенеза и лечения хронической сердечной недостаточности (ХСН) прогноз при данном состоянии остается неблагоприятным и сопоставимым с таковым при различных злокачественных новообразованиях. Это связано с тем, что в последние годы не выявлены новые патогенетические схемы заболевания, являющиеся потенциальными терапевтическими мишенями.

Известен способ диагностики хронической сердечной недостаточности, включающий исследование образцов сыворотки или плазмы человека и приведения в контакт биологического образца с антителом к проBNP(1-108), детектирование проBNP(1-108) в образце и корреляцию между количеством обнаруженных комплексов антиген-антитело с клиническим состоянием субъекта.

(Патент РФ №2315773, МПК С07K 16/26, опубл. 27.01.2008 г.)

Недостатки данного способа связаны с тем, что имеется ряд других состояний, при которых повышается содержание данного вещества. Сюда относятся беременность, хроническая почечная недостаточность, тромбоэмболические осложнения. Соответственно, проведение точной дифференциальной диагностики в связи с этим затруднено. Кроме того, у ряда категорий больных, в частности у пожилых, пациентов с избыточной массой тела, содержание проBNP не увеличивается даже в случае клинически значимой хронической сердечной недостаточности.

Задачей изобретения является создание достоверного способа диагностики хронической сердечной недостаточности путем использования циркулирующих уровней микроРНК, позволяющего осуществлять раннюю диагностику ХСН и проводить контроль эффективности лечения данного заболевания.

Технический результат заключается в повышении достоверности способа и возможности проведения диагностики ХСН на ранних стадиях заболевания.

Это достигается тем, что в заявляемом способе диагностики хронической сердечной недостаточности, включающем исследование биологического образца человека, согласно изобретению, в крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность.

В последние годы активно изучается возможность воздействия на основные процессы регуляции внутриклеточной транскрипции, проявляющиеся в изменении процессов метаболизма и фиброза. Эти процессы закономерно меняются в процессе формирования хронической сердечной недостаточности и зависят как от стадии, так и от этиологии.

Несмотря на то, что эти процессы являются сложными, комплексными и мультимодальными, имеется возможность разновекторного влияния на них, модулируя эпигенетическую активность. Это связано с наличием систем, регулирующих данные внутриклеточные процессы на верхнем (корневом) уровне. К числу таких систем относятся микро-РНК.

МикроРНК представляют собой большое количество различных видов одноцепочечных молекул РНК, вовлеченных в процессы эпигенетической регуляции синтеза большого количества различных белков, ферментов, структурных и регуляторных молекул, а также посттранскрипционного подавления активности генов.

Перспективы использования микроРНК в диагностике сердечнососудистых заболеваний прежде всего связаны с недавним обнаружением нового класса РНК - циркулирующих микроРНК. Хотя до недавнего времени считалось, что время жизни молекул РНК вне клеток очень коротко, введение новых более чувствительных методов позволило обнаружить постоянно присутствующий в крови и физиологических жидкостях класс микроРНК. Устойчивость микроРНК к эндонуклеазам объясняется формированием надмолекулярных комплексов с белковыми молекулами, а также инкапсуляцией микроРНК в липидный слой с образованием наноструктурных комплексов, называемых экзосомами.

Осуществление способа

Образцы цельной крови собирают в пробирки, содержащие ЭДТА, и центрифугируют при 3000 g в течение 5 минут. Выделение общей РНК (длина цепи менее 1000 н.п.) производят методом адсорбционной колоночной хроматографии на смоле из 200 мкл плазмы крови. Затем осуществляют реакцию обратной транскрипции и синтеза первой цепи кДНК. Для определения уровней 5 исследуемых индивидуальных микроРНК 423-5р используют химические модификации LNA специфических праймеров и анализируют методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации «в режиме реального времени». Данные по экспрессии микроРНК нормализуют на исходный объем цельной крови.

При концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность.

Пример 1

Мужчина 62 года, в анамнезе длительно протекающая артериальная гипертония. Сочетанные заболевания - сахарный диабет, ожирение. Жалобы на одышку, снижение толерантности к физической нагрузке. На ЭхоКГ признаки диастолической дисфункции. МНП 90 пг/мл. Определение возможной сердечной недостаточности, как причины данной симптоматики, произведено согласно заявляемому способу. Концентрация микроРНК-423-5р составила 62400 копий/мкл, что превышает пороговое значение 35500 копий/мкл. В связи с этим выставлен диагноз хронической сердечной недостаточности. Назначенная терапия позволила добиться значимого улучшения клинической симптоматики.

Пример 2

Женщина 69 лет с длительным анамнезом артериальной гипертонии и курения. Сочетанное заболевание - хроническая обструктивная болезнь легких. Жалобы на одышку. Для определения возможной сердечной недостаточности как причины данной симптоматики и решения вопроса о тактике лечения определены циркулирующие уровни, согласно заявляемому способу. Концентрация микроРНК-423-5р составила 2726 копий/мкл, что меньше порогового значения 35500 копий/мкл. В связи с этим диагноз хронической сердечной недостаточности отвергнут. Назначена терапия хронической обструктивной болезни легких, на фоне которой наблюдается улучшение самочувствия

В исследование было включено 100 человек: из которых 56 больных с клинически и инструментально подтвержденной ХСН и 44 составили контрольную группу, среди которых 15 (34%) имели ранее установленное ССЗ без СН и 29 (66%) практически здоровые добровольцы. Средний возраст больных ХСН составил 59,4±11,4 и колебался от 25 до 78 лет, 40,5±17,5 лет было добровольцам. Критериями отбора пациентов, включенных в первую группу, являлись: наличие систолической ХСН (со снижением ФВ менее 40%), ХСН с сохраненной фракцией выброса ЛЖ, независимо от факта компенсации/декомпенсации на момент включения. В последнем случае для подтверждения диагноза требовалось наличие в анамнезе либо на момент включения декомпенсации СН, или превышение диагностического уровня BNP.

Основными причинами развития ХСН послужили ИБС: Постинфарктный кардиосклероз (ИБС:ПИКС) 45,5%, дилатационная кардиомиопатия (ДКМП) 18,2%, гипертоническое сердце (ГС) 14,5% и воспалительная кардиомиопатия (ВКМП) 10,9%. Небольшой процент составили пациенты с ХСН на фоне клапанного порока и тиреотоксического сердца. Тяжесть ХСН оценивалась по классификации Нью-Йоркской Ассоциации сердца (NYHA, 1964 г) и варьировала от I до IV ФК. Все пациенты получали базисную терапию в соответствии со стандартами лечения (иАПФ или АРА, β-блокаторы, антагонисты минералокортикоидных рецепторов, диуретики - по показаниям). Критериями исключения являлась СН, обусловленная ОКС, изолированная правожелудочковая недостаточность на фоне ТЭЛА. Измерение фракции выброса левого желудочка (ФВ ЛЖ), конечно-диастолического размера ЛЖ и концентрации BNP проводились только для больных ХСН.

Проводилась оценка профиля экспрессии циркулирующих микроРНК. Статистическая обработка данных исследования была проведена с помощью программного обеспечения SPSS 17.0, Microsoft Excel 2010.

Результаты

МикроРНК-423-5р была достоверно повышена у больных ХСН по сравнению с контрольной группой в 2,5 раза (р=0,003).

Расхождение кривых Капалана-Мейера при сравнении кумулятивной доли пациентов в зависимости от концентрации микроРНК-423-5р и наличия ХСН было статистически значимым как при интервальной оценке по доверительным интервалам, так и по критерию раннего расхождения Бреслау (р=0,002) и по критерию позднего расхождения Лог-Ранка.

Диагностическую значимость микроРНК-423-5р оценивали с помощью ROC-анализа. Площадь под кривой AUC составила 0,674 (ДИ 95% 0,566-0,783, р=0,003).

Пороговое значение концентрации микроРНК-423-5р по наличию ХСН в соответствии с графиком и таблицей ROC-анализа по точке с наибольшей чувствительностью и специфичностью составило 35500 копий/мкл. Чувствительность данного порогового значения составила 78,6% (95% ДИ 70,6-86,5%), специфичность 63,6% (95% ДИ 55,4-71,9%), прогностическая ценность положительного результата 73,3% (95% ДИ 64,8-81,9%)), прогностическая ценность отрицательного результата 70% (95%) ДИ 61,1-78,9%), индекс точности 72% (63,3-80,7%)). Отношение правдоподобий, оценивающее насколько вероятность наличия ХСН превышает вероятность отсутствия ХСН при концентрации микроРНК-423-5р выше или равное 35500 копий/мкл, составило 6,417 (95% ДИ 2,646-15,561).

Таким образом, заявляемый способ позволит с высокой достоверностью провести раннюю диагностику ХСН, а также контроль эффективности лечения.

Способ диагностики хронической сердечной недостаточности, включающий исследование биологического образца человека, отличающийся тем, что в крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия в биологических жидкостях, окружающей среде и продуктах питания бактерий Escherichia coli штамма O157:Н7, включающий дезинтеграцию бактерий ферментативной обработкой и лизис неионным детергентом, адсорбцию на парамагнитных частицах при помощи специфического моноклонального антитела, детекцию антигена бактерий Е.coli O157:Н7 при помощи специфического биотинилированного моноклонального антитела, связывание полученного комплекса с нековалентным коньюгатом ДНК-матрицы с нейтравидином, диссоциацию твердофазного комплекса "антитело-антиген Е.coli O157:Н7 - биотинилированное антитело-коньюгат" добавлением раствора глицин - HCl рН 2.6, ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы и выявление наличия бактерий Е.coli O157:Н7 по скорости нарастания флуоресцентного сигнала.

Изобретение касается способа дифференциальной диагностики новообразований щитовидной железы (ЩЖ) человека. Способ включает выделение из образца опухолевой ткани ЩЖ человека и образца прилежащей неизмененной ткани железы (в качестве контроля) суммарного пула РНК (в том числе содержащий и микроРНК) любым из известных способов.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития и степени тяжести преэклампсии. Для прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765).

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ специфического выделения полного ДНК-содержимого бактериальных возбудителей инфекции.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу комбинирования определения генотипа IL28B вместе с измерением сывороточного уровня IFN-γ-индуцируемого белка 10 (IP-10) для прогнозирования получения устойчивого вирусологического ответа (SVR) или отсутствия ответа на пегинтерферон и рибавирин для индивидуальных пациентов, инфицированных HCV, а также к диагностическому набору для применения в данном способе.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа прогнозирования устойчивого вирусологического ответа у человеческого индивида, инфицированного вирусом гепатита С с генотипом 1, на лечение с помощью интерферона.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия штамма молочнокислых бактерий, включающего IS-элемент, в молочном продукте.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для хранения препаратов ДНК в жидком виде. Получают композицию, содержащую буферный раствор, включающий 0,5-4% N-лаурилсаркозина, 5-20 мМ ЭДТА, 30-200 мМ Трис (гидроксиметил) аминометана и воду - остальное.

Группа изобретений относится к области биотехнологии и касается зонда пептидных нуклеиновых кислот (PNA) для обнаружения рода Salmonella в различных типах проб, набора, включающего такой зонд, способа обнаружения Salmonella и применений указанных зонда и набора в обнаружении Salmonella.
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности (ХСН). Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии. Предложенное изобретение позволяет с повышенной достоверностью проводить диагностику ХСН на ранних стадиях заболевания. 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенную нуклеиновую кислоту для типирования и/или маркировки штаммов Bifidobacterium lactis, состоящую из последовательности локуса CRISPR В.lactis, выбранной из группы, состоящей из a) Balal (SEQ ID NO: 1); b) последовательности повтора Balal, выбранной из последовательности SEQ ID NO: 2 и ее вариантов; c) последовательности спейсера Balal, выбранной из SEQ ID NO:3-24; где варианты последовательности SEQ ID NO: 2 выбраны из группы, состоящей из: замены Т в положении 12, замены Т в положении 14 и замены А в положении 36. Изобретение относится также к вектору, содержащему нуклеиновую кислоту, клетке, трансформированной нуклеиновой кислотой, и к способу типирования штаммов B. lactis. Изобретение позволяет эффективно проводить типирование микроорганизмов. 14 н. и 1 з.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ обнаружения вещества, которое опосредует положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера, или определения, опосредует ли вещество положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера, состоит из следующих этапов: обеспечение первой системы анализа, включающей последовательность мРНК, которая содержит область, кодирующую первый репортерный белок, функционально связанную с промотором первого биологического маркера; обеспечение второй системы анализа, включающей вторую последовательность мРНК, которая содержит область, кодирующую второй репортерный белок, функционально связанную с промотором второго биологического маркера; осуществление контакта указанной второй системы анализа с веществом; осуществления контакта указанной первой системы анализа со стандартным веществом или контрольным веществом и определение уровней транскрипции указанных первой и второй последовательностей мРНК. При этом уровень транскрипции второй последовательности мРНК выше, чем уровень транскрипции первой последовательности мРНК, если указанное вещество опосредует положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера. Гены первого биологического маркера и второго биологического маркера выбраны из группы, состоящей из проапоптотического белка, гомологичного С/ЕВР (CHOP), связывающего шаперонного белка эндоплазматического ретикулума (BiP), фактора активации транскрипции 4 (ATF-4), белка 1, связывающего X-box (Xbp-1) и синтетазы аминокислот. 13 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к набору для выявления ДНК вируса оспы свиней методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Набор включает олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд следующего состава: SPVU - 5' - gta сса ttt tgg agg аса cg - 3', SPVD - 5' - ttc aat aaa tcg cca gtt gta с - 3', SPVZ - 5'- [FAM] ggt acc ata tct ata tat ccc tgt tg [BHQ1] - 3'. Предложенное изобретение позволяет повысить степень специфичности и чувствительности, а также сокращает время проведения диагностической работы по обнаружению ДНК вируса оспы свиней в пробах исследуемого биоматериала. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и касается библиотеки нуклеотидных последовательностей в составе клонировочного плазмидного вектора. Целью изобретения является конструирование олигонуклеотидных праймеров для получения библиотеки полноразмерных генов, кодирующих иммунодоминантные белки р17, р30, р54, р60, р72 вируса АЧС. Технический результат заключается в создании банка нуклеотидных последовательностей, кодирующих иммунодоминантные белки вируса африканской чумы свиней р17, р30, р54, р60, р72, которые можно использовать при получении рекомбинантных белков, изучении биологических свойств, белок-белковых взаимодействий и создании диагностических препаратов. Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 3 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии. Сущность изобретения состоит в подавлении активности активированного онкогена AML-ETO методом РНК-интерференции в злокачественных кроветворных клетках, полученных от больных лейкозом, с использованием конструкции малой шпилечной РНК, встроенной в лентивирусный вектор pLSLP-AML-ETO-shRNA, кодируемой нуклеотидной последовательностью двухцепочечной ДНК, представляющей собой: 5′-р-gatccgCCTCGAAATCGTACTGAGActtcctgcaa TCTCAGTACGATTTCGAGGtttttg-3′ (смысловая цепь), 5′-р-aattcaaaaaCCTCGAAATCGTACT GAGAttgcaggaagTCTCAGTACGATTTCGAGGcg-3′ (антисмысловая цепь). Ингибирование активности конкретного онкогена посредством малой шпилечной РНК позволяет определить спектр изменения экспрессии генов, ответственных за рост и дифференцировку кроветворных клеток, и обнаружить те из них, изменение активности которых напрямую связано с активацией данного онкогена, и определить, в какой мере воздействие на такие гены - потенциальные мишени оказывает влияние на способность злокачественных клеток к неконтролируемому росту. 2 н.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл. 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу определения зиготности растения сои, включающего арилоксиалканоатдиоксигеназу (AAD-12) с SEQ ID NO: 1, где указанное растение содержит трансгенную конструкцию, включающую ген AAD-12, состоящий из остатков 2731-9121 SEQ ID NO: 1, и указанная трансгенная конструкция фланкирована 5′-фланкирующей геномной ДНК сои и 3′-фланкирующей геномной ДНК сои, где указанная 5′-фланкирующая геномная ДНК содержит остатки 1-2730 SEQ ID NO: 1, указанная 3′-фланкирующая геномная ДНК содержит остатки 9122-10212 SEQ ID NO: 1, а также к комплекту для его выполнения. Изобретение позволяет эффективно определять зиготность растения сои, включающего арилоксиалканоатдиоксигеназу(AAD-12). 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению натрийуретического пептида C-типа (CNP), и может быть использовано в медицине. Получают пептид структуры PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP37), который используют для лечения дегенеративных костных патологий, отвечающих на CNP. Изобретение позволяет увеличить по сравнению с нативным CNP время полужизни в плазме за счет пониженной способности связываться с эндопептидазой и пониженной аффинности к рецептору NPR-C при сохранении функциональности CNP. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 83 ил., 17 табл., 19 пр.

Биомаркер // 2573925
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к маркерам рака, и может быть использовано в медицине. Выявление белка Engrailed-2 (EN2) или кодирующей его нуклеиновой кислоты в образце тканей мочевого пузыря или мочи от пациента может быть использовано в диагностике рака мочевого пузыря или для идентификации пациента, имеющего риск развития рака мочевого пузыря, а также для мониторинга прогрессирования рака мочевого пузыря у пациента или мониторинга эффективности лечения рака мочевого пузыря. Изобретение позволяет использовать EN2 в диагностике рака мочевого пузыря. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.), включающий проведение полимеразной цепной реакции с фрагментом ITS2 ядерной ДНК. При этом для идентификации используют видоспецифичные участки для создания прямого, обратного праймеров и разрушаемого зонда, где в качестве прямого праймера - последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: 5′-TATCCCGGCTCTCGCATCGA-3′; обратного праймера - последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: 5′-GACGAGGCACGGGAGGTCAG-3′, разрушаемого зонда последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: (флуоресцентная метка)-5′-CCGTGAACCATCGAGTTTTT-3′-(гаситель). Изобретение позволяет эффективно идентифицировать видовую принадлежность володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.) в ходе проведения скрининга растительного сырья. 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности. Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Определяют циркулирующие уровни микроРНК и при концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копиймкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность. Предложенное изобретение позволяет с повышенной достоверностью проводить диагностику ХСН на ранних стадиях заболевания. 2 пр.

Наверх