Способ дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности (ХСН). Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии. Предложенное изобретение позволяет с повышенной достоверностью проводить диагностику ХСН на ранних стадиях заболевания. 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано в дифференциальной диагностике хронической сердечной недостаточности (ХСН) и хронической сердечной недостаточности на фоне воспалительной кардиомиопатии.

Несмотря на достигнутые успехи в изучении патогенеза и лечения хронической сердечной недостаточности прогноз при данном состоянии остается неблагоприятным и сопоставимым с таковым при различных злокачественных новообразованиях. Это связано с тем, что в последние годы не выявлены новые патогенетические схемы заболевания, являющиеся потенциальными терапевтическими мишенями.

Известен способ диагностики хронической сердечной недостаточности, включающий исследование образцов сыворотки или плазмы человека и приведения в контакт биологического образца с антителом к проBNP(1-108), детектирование проBNP(1-108) в образце и корреляцию между количеством обнаруженных комплексов антиген-антитело с клиническим состоянием субъекта.

(Патент РФ №2315773, МПК C07K 16/26, опубл. 27.01.2008 г.).

Недостатки данного способа связаны с тем, что имеется ряд других состояний, при которых повышается содержание данного вещества. Сюда относятся беременность, хроническая почечная недостаточность, тромбоэмболические осложнения. Соответственно, проведение точной дифференциальной диагностики в связи с этим затруднено. Кроме того, у ряда категорий больных - в частности у пожилых, пациентов с избыточной массой тела, содержание проBNP не увеличивается даже в случае клинически значимой хронической сердечной недостаточности.

Задачей изобретения является создание достоверного способа дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, позволяющего с высокой точностью устанавливать этиологию заболевания для дальнейшего проведения контроля эффективности лечения.

Технический результат заключается в повышении достоверности и точности способа, в том числе на ранних стадиях заболевания.

Это достигается тем, что в заявляемом способе дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, включающем исследование крови человека, согласно изобретению, в крови методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии.

В последние годы активно изучается возможность воздействия на основные процессы регуляции внутриклеточной транскрипции, проявляющиеся в изменении процессов метаболизма и фиброза. Эти процессы закономерно меняются в процессе формирования хронической сердечной недостаточности и зависят как от стадии, так и от этиологии.

Несмотря на то, что эти процессы являются сложными, комплексными и мультимодальными, имеется возможность разновекторного влияния на них, модулируя эпигенетическую активность. Это связано с наличием систем, регулирующих данные внутриклеточные процессы на верхнем (корневом) уровне. К числу таких систем относятся микроРНК.

МикроРНК представляют собой большое количество различных видов одноцепочечных молекул РНК, вовлеченных в процессы эпигенетической регуляции синтеза большого количества различных белков, ферментов, структурных и регуляторных молекул, а также посттранскрипционного подавления активности генов.

Перспективы использования микроРНК в диагностике сердечно-сосудистых заболеваний прежде всего связаны с недавним обнаружением нового класса РНК - циркулирующих микроРНК. Хотя до недавнего времени считалось, что время жизни молекул РНК вне клеток очень коротко, введение новых более чувствительных методов позволило обнаружить постоянно присутствующий в крови и физиологических жидкостях класс микроРНК. Устойчивость микроРНК к эндонуклеазам объясняется формированием надмолекулярных комплексов с белковыми молекулами, а также инкапсуляцией микроРНК в липидный слой с образованием наноструктурных комплексов, называемых экзосомами.

Осуществление способа.

Образцы цельной крови собирают в пробирки, содержащие ЭДТА, и центрифугируют при 3000 g в течение 5 минут. Выделение общей РНК (длина цепи менее 1000 н.п.) производят методом адсорбционной колоночной хроматографии на смоле из 200 мкл плазмы крови. Затем осуществляют реакцию обратной транскрипции и синтеза первой цепи кДНК. Для определения уровней исследуемых индивидуальных микроРНК используют химические модификации LNA специфических праймеров и анализируют методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации «в режиме реального времени». Данные по экспрессии микроРНК нормализуют на исходный объем цельной крови.

При одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность.

При одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии.

Пример 1.

Пациент 49 лет с жалобами на одышку, отеки нижних конечностей. В анамнезе длительно текущая нелеченная артериальная гипертония и перенесенный миокардит. Для назначения специфической терапии требуется определение возможной этиологии сердечной недостаточности - воспалительная или нет.

С этой целью в соответствии с заявляемым способом были определены циркулирующие микроРНК. Концентрация микроРНК-423-5р составила 84000 копий/мкл и концентрация микроРНК-21-5р составила 823568 копий/мкл. В связи с этим определяющим является воспалительная этиология ХСН. Назначено специфическое лечение со значимым клиническим улучшением.

Пример 2.

Пациент 38 лет с жалобами на одышку, отеки голеней и стоп, плохую переносимость физической нагрузки. В анамнезе перенесенный миокардит и долговременное злоупотребление алкоголем. Для решения вопроса о возможной воспалительной причине сердечной недостаточности и необходимости специфической терапии определены циркулирующие уровни микро РНК по заявляемому способу. Концентрация микроРНК-423-5р составила 57345 копий/мкл и концентрация микроРНК-21-5р составила 11214 копий/мкл. Это показывает на то, что причиной сердечной недостаточности является алкогольная кардиомиопатия. На фоне воздержания от алкоголя и отсутствия противовоспалительной терапии наблюдается значимое улучшение клинической симптоматики.

По заявляемому способу проведено исследование 100 человек, из которых 56 больных с клинически и инструментально подтвержденной ХСН и 44 составили контрольную группу, среди которых 15 (34%) имели ранее установленное сердечно-сосудистое заболевание (ССЗ) без сердечной недостаточности (СН) и 29 (66%) - практически здоровые добровольцы.

Таким образом, исследование активности различных микроРНК у пациентов с хронической сердечной недостаточностью дают возможность проведения дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, что позволит провести дифференциальную диагностику ХСН, в том числе и на ранних этапах, а также контроль эффективности лечения.

Способ дифференциальной диагностики этиологии хронической сердечной недостаточности, включающий исследование крови человека, отличающийся тем, что в крови методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копий/мкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копий/мкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности (ХСН). Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия в биологических жидкостях, окружающей среде и продуктах питания бактерий Escherichia coli штамма O157:Н7, включающий дезинтеграцию бактерий ферментативной обработкой и лизис неионным детергентом, адсорбцию на парамагнитных частицах при помощи специфического моноклонального антитела, детекцию антигена бактерий Е.coli O157:Н7 при помощи специфического биотинилированного моноклонального антитела, связывание полученного комплекса с нековалентным коньюгатом ДНК-матрицы с нейтравидином, диссоциацию твердофазного комплекса "антитело-антиген Е.coli O157:Н7 - биотинилированное антитело-коньюгат" добавлением раствора глицин - HCl рН 2.6, ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы и выявление наличия бактерий Е.coli O157:Н7 по скорости нарастания флуоресцентного сигнала.

Изобретение касается способа дифференциальной диагностики новообразований щитовидной железы (ЩЖ) человека. Способ включает выделение из образца опухолевой ткани ЩЖ человека и образца прилежащей неизмененной ткани железы (в качестве контроля) суммарного пула РНК (в том числе содержащий и микроРНК) любым из известных способов.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития и степени тяжести преэклампсии. Для прогнозирования риска возникновения преэклампсии тяжелого течения у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и анализируют генетические полиморфизмы: -308 G/A TNFα (rs1800629), +36 A/G TNFR1 (rs767455), -801 G/A SDF 1(rs1801157), C/G MCP-1 (rs285765).

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и предназначено для выявления риска развития преэклампсии. Для прогнозирования риска развития преэклампсии у женщин русской национальности, уроженок Центрального Черноземья, выделяют ДНК из периферической венозной крови и проводят анализ полиморфизмов генов цитокинов.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ специфического выделения полного ДНК-содержимого бактериальных возбудителей инфекции.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу комбинирования определения генотипа IL28B вместе с измерением сывороточного уровня IFN-γ-индуцируемого белка 10 (IP-10) для прогнозирования получения устойчивого вирусологического ответа (SVR) или отсутствия ответа на пегинтерферон и рибавирин для индивидуальных пациентов, инфицированных HCV, а также к диагностическому набору для применения в данном способе.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа прогнозирования устойчивого вирусологического ответа у человеческого индивида, инфицированного вирусом гепатита С с генотипом 1, на лечение с помощью интерферона.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия штамма молочнокислых бактерий, включающего IS-элемент, в молочном продукте.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для хранения препаратов ДНК в жидком виде. Получают композицию, содержащую буферный раствор, включающий 0,5-4% N-лаурилсаркозина, 5-20 мМ ЭДТА, 30-200 мМ Трис (гидроксиметил) аминометана и воду - остальное.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой выделенную нуклеиновую кислоту для типирования и/или маркировки штаммов Bifidobacterium lactis, состоящую из последовательности локуса CRISPR В.lactis, выбранной из группы, состоящей из a) Balal (SEQ ID NO: 1); b) последовательности повтора Balal, выбранной из последовательности SEQ ID NO: 2 и ее вариантов; c) последовательности спейсера Balal, выбранной из SEQ ID NO:3-24; где варианты последовательности SEQ ID NO: 2 выбраны из группы, состоящей из: замены Т в положении 12, замены Т в положении 14 и замены А в положении 36. Изобретение относится также к вектору, содержащему нуклеиновую кислоту, клетке, трансформированной нуклеиновой кислотой, и к способу типирования штаммов B. lactis. Изобретение позволяет эффективно проводить типирование микроорганизмов. 14 н. и 1 з.п. ф-лы, 12 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Способ обнаружения вещества, которое опосредует положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера, или определения, опосредует ли вещество положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера, состоит из следующих этапов: обеспечение первой системы анализа, включающей последовательность мРНК, которая содержит область, кодирующую первый репортерный белок, функционально связанную с промотором первого биологического маркера; обеспечение второй системы анализа, включающей вторую последовательность мРНК, которая содержит область, кодирующую второй репортерный белок, функционально связанную с промотором второго биологического маркера; осуществление контакта указанной второй системы анализа с веществом; осуществления контакта указанной первой системы анализа со стандартным веществом или контрольным веществом и определение уровней транскрипции указанных первой и второй последовательностей мРНК. При этом уровень транскрипции второй последовательности мРНК выше, чем уровень транскрипции первой последовательности мРНК, если указанное вещество опосредует положительную регуляцию транскрипции гена биологического маркера. Гены первого биологического маркера и второго биологического маркера выбраны из группы, состоящей из проапоптотического белка, гомологичного С/ЕВР (CHOP), связывающего шаперонного белка эндоплазматического ретикулума (BiP), фактора активации транскрипции 4 (ATF-4), белка 1, связывающего X-box (Xbp-1) и синтетазы аминокислот. 13 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к набору для выявления ДНК вируса оспы свиней методом полимеразной цепной реакции в реальном времени. Набор включает олигонуклеотидные праймеры и флуоресцентно-меченый зонд следующего состава: SPVU - 5' - gta сса ttt tgg agg аса cg - 3', SPVD - 5' - ttc aat aaa tcg cca gtt gta с - 3', SPVZ - 5'- [FAM] ggt acc ata tct ata tat ccc tgt tg [BHQ1] - 3'. Предложенное изобретение позволяет повысить степень специфичности и чувствительности, а также сокращает время проведения диагностической работы по обнаружению ДНК вируса оспы свиней в пробах исследуемого биоматериала. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и касается библиотеки нуклеотидных последовательностей в составе клонировочного плазмидного вектора. Целью изобретения является конструирование олигонуклеотидных праймеров для получения библиотеки полноразмерных генов, кодирующих иммунодоминантные белки р17, р30, р54, р60, р72 вируса АЧС. Технический результат заключается в создании банка нуклеотидных последовательностей, кодирующих иммунодоминантные белки вируса африканской чумы свиней р17, р30, р54, р60, р72, которые можно использовать при получении рекомбинантных белков, изучении биологических свойств, белок-белковых взаимодействий и создании диагностических препаратов. Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 3 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к области молекулярной биологии. Сущность изобретения состоит в подавлении активности активированного онкогена AML-ETO методом РНК-интерференции в злокачественных кроветворных клетках, полученных от больных лейкозом, с использованием конструкции малой шпилечной РНК, встроенной в лентивирусный вектор pLSLP-AML-ETO-shRNA, кодируемой нуклеотидной последовательностью двухцепочечной ДНК, представляющей собой: 5′-р-gatccgCCTCGAAATCGTACTGAGActtcctgcaa TCTCAGTACGATTTCGAGGtttttg-3′ (смысловая цепь), 5′-р-aattcaaaaaCCTCGAAATCGTACT GAGAttgcaggaagTCTCAGTACGATTTCGAGGcg-3′ (антисмысловая цепь). Ингибирование активности конкретного онкогена посредством малой шпилечной РНК позволяет определить спектр изменения экспрессии генов, ответственных за рост и дифференцировку кроветворных клеток, и обнаружить те из них, изменение активности которых напрямую связано с активацией данного онкогена, и определить, в какой мере воздействие на такие гены - потенциальные мишени оказывает влияние на способность злокачественных клеток к неконтролируемому росту. 2 н.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл. 2 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу определения зиготности растения сои, включающего арилоксиалканоатдиоксигеназу (AAD-12) с SEQ ID NO: 1, где указанное растение содержит трансгенную конструкцию, включающую ген AAD-12, состоящий из остатков 2731-9121 SEQ ID NO: 1, и указанная трансгенная конструкция фланкирована 5′-фланкирующей геномной ДНК сои и 3′-фланкирующей геномной ДНК сои, где указанная 5′-фланкирующая геномная ДНК содержит остатки 1-2730 SEQ ID NO: 1, указанная 3′-фланкирующая геномная ДНК содержит остатки 9122-10212 SEQ ID NO: 1, а также к комплекту для его выполнения. Изобретение позволяет эффективно определять зиготность растения сои, включающего арилоксиалканоатдиоксигеназу(AAD-12). 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению натрийуретического пептида C-типа (CNP), и может быть использовано в медицине. Получают пептид структуры PGQEHPNARKYKGANKKGLSKGCFGLKLDRIGSMSGLGC (Pro-Gly-CNP37), который используют для лечения дегенеративных костных патологий, отвечающих на CNP. Изобретение позволяет увеличить по сравнению с нативным CNP время полужизни в плазме за счет пониженной способности связываться с эндопептидазой и пониженной аффинности к рецептору NPR-C при сохранении функциональности CNP. 7 н. и 10 з.п. ф-лы, 83 ил., 17 табл., 19 пр.

Биомаркер // 2573925
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к маркерам рака, и может быть использовано в медицине. Выявление белка Engrailed-2 (EN2) или кодирующей его нуклеиновой кислоты в образце тканей мочевого пузыря или мочи от пациента может быть использовано в диагностике рака мочевого пузыря или для идентификации пациента, имеющего риск развития рака мочевого пузыря, а также для мониторинга прогрессирования рака мочевого пузыря у пациента или мониторинга эффективности лечения рака мочевого пузыря. Изобретение позволяет использовать EN2 в диагностике рака мочевого пузыря. 4 н. и 6 з.п. ф-лы, 5 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к набору синтетических олигонуклеотидов для выявления видовой принадлежности володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.), включающий проведение полимеразной цепной реакции с фрагментом ITS2 ядерной ДНК. При этом для идентификации используют видоспецифичные участки для создания прямого, обратного праймеров и разрушаемого зонда, где в качестве прямого праймера - последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: 5′-TATCCCGGCTCTCGCATCGA-3′; обратного праймера - последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: 5′-GACGAGGCACGGGAGGTCAG-3′, разрушаемого зонда последовательность ДНК со следующим нуклеотидным составом: (флуоресцентная метка)-5′-CCGTGAACCATCGAGTTTTT-3′-(гаситель). Изобретение позволяет эффективно идентифицировать видовую принадлежность володушки многожильчатой (Bupleurum multinerve DC.) в ходе проведения скрининга растительного сырья. 1 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения эффективной терапевтической дозы противоэпилептического препарата и риска развития побочных эффектов. Способ включает забор биологического материала, проведение полимеразной цепной реакции по генам-кандидатам, последующий анализ их аллельных вариантов и, путем сопоставления выявленного аллельного полиморфизма с данными о его влиянии на эффективную терапевтическую дозу и возникновении побочных эффектов, расчет эффективной терапевтической дозы противоэпилептического препарата и определение риска развития побочных эффектов. Предложенное изобретение позволяет с высокой точностью определять эффективную терапевтическую дозу и наличие риска развития побочных эффектов. 4 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу диагностики хронической сердечной недостаточности. Способ включает исследование крови человека методом полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации. Определяют циркулирующие уровни микроРНК и при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копиймкл и микроРНК-34а-5р более 4538 копиймкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность, а при одновременном определении концентрации микроРНК-423-5р более 35500 копиймкл и концентрации микроРНК-21-5р более 711755 копиймкл устанавливают хроническую сердечную недостаточность на фоне воспалительной кардиомиопатии. Предложенное изобретение позволяет с повышенной достоверностью проводить диагностику ХСН на ранних стадиях заболевания. 2 пр.

Наверх