Противоопухолевое средство



Противоопухолевое средство
Противоопухолевое средство
Противоопухолевое средство

 


Владельцы патента RU 2569729:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" (ФГБНУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина") (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт органического синтеза им. И.Я. Постовского Уральского отделения Российской академии наук (ИОС УрО РАН) (RU)

Изобретение относится к фармацевтике, в частности к противоопухолевому средству, содержащему Nδ-нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин, поливинилпирролидон низкомолекулярный Mm=7000-11000 и кислоту хлористоводородную. Осуществление изобретения позволяет получить противоопухолевое средство из класса НАМ, удобное в употреблении, обладающее хорошей растворимостью, стабильностью при хранении и обладающее высоким цитостатическим эффектом. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к лекарственным средствам, обладающим противоопухолевым действием, и может найти применение при лечении злокачественных опухолей.

Известны лекарственные средства для лечения злокачественных опухолей из ряда нитрозоалкилмочевины (НАМ), которые широко применяются в современной онкологии [Полозкова С.А., Орел Н.Ф., Маркович А.А., Кузьминов А.Е., Горбунова В.А. / Злокачественные опухоли. №1 - 2013 (5) С. 47-55].

Так, при лечении опухолей центральной нервной системы (ЦНС) широко применяются препараты, относящиеся к алкилирующим агентам, - это НАМ, а также ее производные: ломустин, кармустин, нидран, мюстафоран [Дементьева Н.П., Корман Д.Б. / Вопросы онкологии. 2001. Т. 47. №6. С. 3-11], [Горбунова В.А., Орел Н.Ф. / Эффективная фармакотерапия. 2010. №2. С. 30-33].

Направленность действия препаратов данной группы объясняется не только способностью присоединяться ко многим веществам путем реакции алкилирования, но прежде всего способностью НАМ и ее производных проникать через гематоэнцефалический барьер [Перетолчина Н.М., Герасимова Г.К., Белоусова А.К. и др. / В кн. "Экспериментальная онкология на рубеже веков" // Ред. М.И. Давыдов, А.Ю. Барышников. - М.: Издательская группа РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. 2003. С. 147-160].

Отличительной чертой производных НАМ от других алкилирующих агентов является отсутствие перекрестной устойчивости по отношению к другим препаратам этой же группы, а также липофильность и миелосупрессивное действие. Препараты НАМ широко используются в клинической практике. Они обладают высокой терапевтической активностью, широким спектром противоопухолевого действия и применяются в комбинированной терапии опухолей (диссеминированной меланомы, мелкоклеточной карциномы легких, опухолей мозга и лимфом) [Горбунова В.А., Орел Н.Ф., Егоров Г.Н. Этюды химиотерапии. Юбилейный сборник, посвященный 40-летию отделения химиотерапии РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН / Под редакцией проф. В.А. Горбуновой. - Москва. - 2000. - С. 22-47].

Известно производное НАМ: лизомустин в виде «Лизомустина лиофилизата для приготовления раствора для инфузий 100 мг» [Краснов В.П., Авдюкова Н.В., Клочкова Т.И. и др. / Аналитика и контроль. 2001. Т.5. №2. С. 168-170], [Перетолчина Н.М., Клочкова Т.И., Михайлова Л.М. и др. / Практическое пособие для онкологов и врачей. 2000. С. 22].

Недостатки лизомустина:

1. Выраженная токсичность.

2. Высокая доза вводимого препарата.

3. Низкий спектр терапевтического действия.

Известно средство - Nδ-нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин - производное НАМ (Патент РФ №2503657), обладающее противоопухолевым действием.

Данное средство принято в качестве прототипа.

Недостатки прототипа:

1. Плохая растворимость.

2. Невозможность автоматического дозирования.

3. Нестабильность растворов.

Задачей настоящего изобретения является создание нового отечественного противоопухолевого средства из класса НАМ, удобного в употреблении, обладающего хорошей растворимостью, стабильного при хранении и обладающего высоким цитостатическим эффектом.

Технический результат:

1. Хорошая растворимость.

2. Стабильность при хранении.

3) Расширение спектра отечественных противоопухолевых препаратов из класса НАМ.

Поставленная задача достигается тем, что создано новое противоопухолевое средство, содержащее:

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин; поливинилпирролидон низкомолекулярный Mm=7000-11000 (ПВП) и кислоту хлористоводородную при следующем соотношении компонентов (мг):

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин 112,5-137,5
ПВП 270,0-330,0
Кислота хлористоводородная 14,4-17,6

Пример 1

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин 112,5
ПВП 270,0
Кислота хлористоводородная 14,4

Пример 2

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин 125,0
ПВП 300,0
Кислота хлористоводородная 16,0

Пример 3

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин 137,5
ПВП 330,0
Кислота хлористоводородная 17,6

Способ получения заявляемого средства

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин растворяли в 0,1 М кислоте хлористоводородной, добавляли ПВП (6%), проводили стерилизующую фильтрацию, разливали по 5,0 мл во флаконы вместимостью 20 мл, подвергали сублимации: кассеты с флаконами помещали в камеру сублимационной установки на предварительно охлажденные полки для замораживания и последующей лиофилизации. Температура полки при загрузке не превышала (-40) - (-45)°С.

При достижении температуры (-40) - (-45)°С продукт выдерживали в течение 3 часов.

Повышение температуры полок до -20°С проводили после включения и выравнивания вакуума со скоростью 2°С в час и далее до +20°С со скоростью 5°С в час. Температура препарата при досушивании не превышала +20°С. Продолжительность досушивания составила 3 часа.

Общее время сушки препарата составило 27,5-28 часов.

По окончании процесса сушки вакуум в сублимационной камере гасили чистым профильтрованным стерильным воздухом, пропущенным через патрон с безводным силикагелем и стерильным воздушным фильтром с размером пор 0,22 мкм.

Сравнение цитотоксического действия заявляемого средства и прототипа

Исследование in vitro проводили на клеточных линиях диссеминированной меланомы человека Mel Kor и Mel Z, аденокарциномы молочной железы MCF-7; карциномы легкого А549; карциномы толстой кишки НСТ-116; нейробластомы человека SH-SY5Y; Т-клеточного лимфобластного лейкоза Jurkat.

Клеточные линии культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% телячьей эмбриональной сыворотки, 10мМ HEPES (Sigma, США), 2 мМ L-глутамина (Sigma, США), 40 нг/мл гентамицина (ICN, США), 0,1% 1000х раствора аминокислот и 0,1% 1000х раствора витаминов (ПанЭко, Россия), при t°=37°С в атмосфере 5% СO2. Клетки поддерживали в логарифмической фазе роста постоянным пересевом культуры через 3-4 дня. Для открепления адгезионных клеточных культур от пластика использовали раствор Версена. Клетки отмывали жидкостью чистой бессывороточной среды RPMI-1640 и пересаживали в 96-луночные плоскодонные планшеты по 4 тыс. клеток в 180 мкл полной среды RPMI-1640 на лунку. Суспензионную клеточную культуру Jurkat снимали без использования раствора Версена и сажали в плоскодонные планшеты в количестве 25 тыс. клеток на лунку в 180 мкл полной среды RPMI-1640.

Через сутки в лунки с клетками добавляли по 20 мкл заявляемого средства и прототипа в различных концентрациях. Планшеты с клетками помещали в инкубатор при t°=37°С 5% СО2. В качестве контроля использовали лунки с клетками, в которые добавляли 20 мкл среды.

Через 24, 48 или 72 ч в каждую лунку вносили по 20 мкл раствора МТТ[3-(4,5-диметилтиазолин-2)-2,5 дифенилтетразолий бромид] (маточный раствор 5 мг/мл) и инкубировали 4 ч при t°=37 °С в 5% СО2-инкубаторе.

После образования формазана планшеты с клетками центрифугировали, надосадочную жидкость удаляли. Осадок растворяли, добавляя в лунки по 200 мкл диметисульфоксида. Планшеты помещали на 5-7 минут в термостат при t°=37°С, затем - в шейкер. Интенсивность окрашивания среды измеряли на фотометрическом анализаторе иммуноферментных реакций «АИФР-01 Униплан» (ЗАО «Пикон») при λ=530 нм. Величина поглощения была прямо пропорциональна числу живых клеток.

Выживаемость клеток рассчитывалась по формуле:

Все эксперименты повторяли не менее трех раз.

Цитотоксическую активность оценивали по ИК50-концентрации, при которой происходит подавление роста 50% клеток.

Изобретение иллюстрируется таблицами 1-3, где приводятся результаты сравнения цитотоксического и противоопухолевого действия заявляемого средства и прототипа на используемые в исследовании клеточные линии и модели опухолей животных.

На линии клеток Mel Коr максимальный цитотоксический эффект наблюдался для заявляемого средства и прототипа при 72 ч инкубации с самой высокой дозой 1×10-3 М при 10% выживших клеток. ИК50 для прототипа при инкубации в течение 24 ч и 48 ч в исследуемых концентрациях не найдена, при инкубации в течение 72 ч она составила 5х10-4 М. При инкубации в течение 72 ч она составила 1х10-4 М (табл.1).

На клеточной линии Mel Z максимальный цитотоксический эффект наблюдался для заявляемого средства и прототипа при 72 ч инкубации с самой высокой исследованной дозой 5×10-3 М и составил 10% выживших клеток. ИК50 - для прототипа при инкубации в течение 24 ч и 48 ч в исследуемых концентрациях не найдена, при инкубации в течение 72 ч она составила 5×10-4 М. ИК50 для заявляемого средства при инкубации 24 ч составила 5×10-4 М, при инкубации 48 ч - 2,5×10-4 М, при инкубации в течение 72 ч- 1×10-4 M (табл. 1).

При 72 ч инкубации ИК50 для заявленного средства на клеточной линии MCF-7 составила 5×10-4 М, на клеточной линии А549 - 7×10-4 М, на клеточной линии НСТ-116 - 5×10-4 М, на клеточной линии SH-SY5Y - 1×10-4 М и на клеточной линии Jurkat - 4×10-4 М. Тогда как для прототипа на всех клеточных линиях ИК50 была более высокой: на MCF-7 - 7×10-4 М, на А549 - 7×10-3 М, на НСТ-116 и Jurkat - 9×10-4 М и на SH-SY5Y - 5×10-4 М (табл. 1).

Показано, что заявляемое средство в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций по сравнению с прототипом оказывает более выраженное цитотоксическое действие на клетки диссеминированной меланомы человека, аденокарциномы молочной железы человека, карциномы легкого человека, карциномы толстой кишки человека, нейробластомы человека и Т-клеточного лимфобластного лейкоза человека.

Сравнение противоопухолевого действия заявляемого средства и прототипа in vivo

Исследование противоопухолевой активности заявляемого средства и прототипа проводили при внутривенном введении стандартным животным: самкам мышей гибридов BDF157l/6j×DBA/2) массой 18-20 грамма, полученным из питомника ФГБНУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» в соответствии с этическими аспектами проведения исследований на биомоделях и на лабораторных животных. Все мыши были здоровы, имели ветеринарный сертификат качества о состоянии здоровья. мышей содержали в специальных просторных клетках по 5 особей при температуре воздуха 20-23°С и относительной влажности 60-65% в условиях естественного освещения и принудительной вентиляции на подстилке из древесных стружек, стерилизованных в сухожаровом шкафу. Для кормления животных использовали стандартный промышленный и сертифицированный брикетированный корм для грызунов с установленным сроком годности. Кормление проводили в одно и то же время.

Для оценки противоопухолевой активности в соответствии с «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств» использовали лимфолейкозы Р-388 и L-1210 мышей и рак шейки матки РШМ-5. Лечение лейкозов начинали через 24 часа, а рака шейки матки через 48 часов после перевивки.

Группы формировались с учетом получения статистически достоверных результатов: контрольная группа состояла из 12 мышей, опытные группы - из 8 или 9 животных.

Критериями оценки противоопухолевого эффекта служили: торможение роста опухоли (ТРО,%), увеличение продолжительности жизни (УПЖ,%) опытных мышей по сравнению с контрольными и излечение.

После однократного внутривенного введения заявляемого средства на модели лимфолейкоза мышей Р-388 в диапазоне доз от 50 мг/кг до 125 мг показана зависимость терапевтического эффекта от дозы. При введении заявляемого средства в дозе 50 мг/кг у мышей с лимфолейкозом Р-388 УПЖ составляло 90%, в дозе 100 мг/кг - 178% и излечение в 22% случаев, в дозе 125 мг/кг - 174% и излечение в 33% случаев. Прототип был эффективен в более высокой дозе - 150 мг/кг, УПЖ составило 178% и излечение 44% случаев (табл.2).

После однократного внутривенного введения заявляемого средства в диапазоне доз от 50 мг/кг до 125 мг/кг на модели лимфолейкоза L-1210 также выявлено, что терапевтический эффект увеличивался при возрастании дозы, в дозе 100 мг/кг УПЖ составило 244%, а излечение 50% случаев, в дозе 125 мг/кг УПЖ составило 346% и излечение в 67% случаев. Тогда как применение прототипа в более высокой дозе 150 мг/кг вызывало УПЖ 196% и излечение в 67% случаев (табл. 2).

Показано, что заявляемое средство в виде лиофилизата для приготовления раствора для инъекций по сравнению с прототипом оказывает более выраженное противоопухолевое действие на перевиваемые опухоли животных - лимфолейкоз Р-388 и L-1210 и рак шейки матки РШМ-5.

Противоопухолевое средство, содержащее Nδ-нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин, отличающееся тем, что оно содержит поливинилпирролидон низкомолекулярный Мm=7000-11000 (ПВП) и кислоту хлористоводородную при следующих соотношениях компонентов (мг):

Nδ-Нитрозо-Nδ-[(2-хлорэтил)карбамоил]-L-орнитин 112,5-137,5
ПВП 270,0-330,0
Кислота хлористоводородная 14,4-17,6



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединениям формулы (I), их рацемической смеси, энантиомерам, диастереомерам и фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибитора Syk, фармацевтической композиции и лекарственному препарату на их основе, их применению, способу ингибирования и способу лечения с их использованием.

Изобретение относится к кристаллической форме 2-хлоро-4-метокси-N-[4-(8-метил-имидазо[1,2-а]пиридин-2-ил)-фенил]-бензамида формулы 1. Также изобретение относится к фармацевтической композиции и лекарственному средству на основе соединения формулы 1, которые могут быть применимы для профилактики и лечения пролиферативного заболевания, связанного с запуском эмбрионального сигнального каскада Hedgehog (Hh).

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому пиразолопиридиновому производному формулы (I), а также к его таутомеру, геометрическому изомеру, оптически активным формам, таким как энантиомеры, диастереомеры и рацематы, и к его фармацевтически приемлемой соли, где G1 выбирают из -С(О)-R1; R1 выбирают из C1-С6-алкокси-C1-С6-алкила; C1-С6-алкила; замещенного С6-арил-C1-С6-алкила; замещенного пиперидина; G2 выбирают из необязательно замещенного С6-арила; G3 выбирают из C1-С6-алкила; G4 выбирают из пиридин-C1-С6-алкила; G5 выбирают из Н; где термин «замещенный» обозначает группы, замещенные 1 заместителем, выбираемым из группы, которая включает «C1-С6-алкил», «C1-С6-алкокси», «C1-С6-алкоксикарбонил» и «галоген».

Изобретение относится к полиморфу мезилатной соли 2-(5-(4-(2-морфолиноэтокси)фенил)пиридин-2-ил)-N-бензилацетамида, обладающему свойствами ингибитора Syk, способу его синтеза, фармацевтической композиции на его основе и ее применению для лечения и профилактики пролиферации клеток.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителам против ангиопоэтина-2 человека, кодирующим их нуклеиновым кислотам и клеткам-хозяевам. Антитело отличается тем, что не связывается с ангиопоэтином-1 человека.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для применения метаарсенита натрия для производства терапевтического агента для лечения устойчивых к таксану и цисплатину форм рака.

Изобретение относится к пиридо[3,4-d]пиримидиновым соединениям формулы (III), обладающим свойствами ингибитора киназы Pan-erbB. Соединения могут быть использованы при лечении рака, опосредованного активностью указанной киназы.

Изобретение относится к новым соединениям, выбранным из группы, указанной ниже. Соединения содержат как минимум 5 колец, включая фрагмент с мостиковой структурой, при углеродной стороне центральной группы С(O)-NH-SO2, пиперидинил, или пиперазинил, или фенил; фенил, присоединенный к каждому атому углерода и серы группы С(O)-NH-SO2, где фенил со стороны атома серы замещен нитрогруппой и NH-CH2(тетрагидро-2Н-пиран-4-ильной или циклогексильной) группой.
Изобретение относится к области фармакологии, а именно к биологически активным соединениям хлоринового ряда и к способу их получения, и может быть использовано для получения трисмеглуминовой соли хлорина e6 в лиофильно высушенной форме, которая может быть использована в качестве высокоэффективного фотосенсибилизатора (ФС) для фотодинамической терапии (ФДТ) рака и других новообразований различного генезиса, а также для флюоресцентной диагностики раковых клеток.

Изобретение относится к клинической медицине и предназначено для выявления предрасположенности к раку и его первичной профилактики. Сущность изобретения состоит в том, что способ выявления предрасположенности к раку включает проведение исследования клеточного иммунитета по основным субпопуляциям лимфоцитов по CD-маркерам: a) CD3+; б) CD4+; в) CD8+; г) CD16+; д) CD56+, а способ первичной профилактики рака включает применение комплексных растительных препаратов «Капли Плетнева», которые восстанавливают метаболизм и энергообеспечение тканей и органов, содержащих β-каротин, витамины Р, С, РР, урсоловую кислоту, хлорофилл.
Изобретение относится в области нанотехнологии, в частности к способу получения нанокапсул АСД в хитозане. Технической задачей изобретения является упрощение и ускорение процесса получения нанокапсул и увеличение выхода по массе.

Группа изобретений относится к медицине и касается системы пероральной доставки действующего вещества белковой природы в виде наночастиц со средним размером не более 500 нм на основе ПМГК при соотношении молочной кислоты к гликолевой кислоте 50:50 в полимере и молекулярной массе ПМГК 24-69 кДа в виде порошка, полученного лиофилизацией в присутствии бычьего сывороточного альбумина в эффективном количестве.

Настоящее изобретение относится к биоразлагаемым и биоабсорбируемым блок-сополимерам в виде твердого порошка или воскообразного порошка. Описана композиция блок-сополимера типа АВ, ABA или ВАВ для введения лекарственного средства, при этом указанный блок-сополимер содержит: по меньшей мере первый блок-сополимерный компонент типа АВ, ABA или ВАВ, содержащий первый гидрофобный А-блок и первый гидрофильный В-блок, причем первый гидрофобный А-блок представляет собой биоразлагаемый сложный полиэфир, содержащий по меньшей мере 60% капролактона и по меньшей мере один второй полиэфир-образующий мономер, при этом указанный первый гидрофильный В-блок имеет первую среднюю молекулярную массу и содержит полиэтиленгликоль; по меньшей мере второй блок-сополимерный компонент типа АВ, ABA или ВАВ, содержащий второй гидрофобный А-блок и второй гидрофильный В-блок, при этом второй гидрофобный А-блок содержит биоразлагаемый сложный полиэфир, а второй гидрофильный В-блок имеет вторую среднюю молекулярную массу и содержит полиэтиленгликоль, причем вторая средняя молекулярная масса отличается от первой средней молекулярной массы; при этом общая средневесовая молекулярная масса блок-сополимерной композиции составляет от 1500 до 10000 Дальтон, общее содержание А-блока в композиции составляет примерно от 60 до 85% по массе, а общее содержание В-блока в композиции составляет примерно от 15 до 40% по массе, причем общая средневесовая молекулярная масса В-блока в композиции составляет от 300 до 2000 Дальтон, при этом указанная композиция блок-сополимера является твердой при комнатной температуре, способна к обратимому термическому гелеобразованию при получении в виде водного полимерного раствора и способна превращаться в водный полимерный раствор менее чем за тридцать минут при перемешивании без применения добавок или нагревания свыше 60°C.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтике, и может быть использовано для создания препарата на основе рекомбинантного интерферона альфа-2 человека в жидкой форме для ректального применения.

Настоящее изобретение относится к способу получения пэгилированного олигонуклеотида, который может быть использован для получения биологически активных веществ.

Изобретение относится к фармацевтической области. Более конкретно, изобретение касается способа получения фармацевтической композиции, содержащей наночастицы оксалиплатина, включающего эмульсифицирование липидного раствора смеси, в котором миристиловый спирт смешан с поверхностно-активным веществом, выбранным из гелюцира, солютола и полоксамера, в водном растворе смеси, где оксалиплатин смешан с сорастворителем, выбранным из воды и диметилсульфоксида, с последующим удалением миристилового спирта и сорастворителя с использованием сверхкритического сжиженного газа.

Данное изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую суспендирующийся в воде совместный гранулят микрокапсул немедленного высвобождения и неактивных ингредиентов, где указанные микрокапсулы являются микрокапсулами с замаскированным вкусом и представляют собой фексофенадин, покрытый нерастворимым в воде полимерным покрытием; а также способ получения данной композиции и способ лечения состояния, связанного с воспалением, включающий введение пациенту данной композиции.
Изобретение относится к области медицины, фармакологии и химико-фармацевтической промышленности и касается средств, обладающих влиянием на неврологические и мнестические функции человека.
Изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения герпетических инфекций. Указанная композиция включает в качестве активных компонентов триазавирин в количестве 1,5 - 2,0 мас.% и облепиховое масло в количестве 1,5 - 2,0 мас.%, а в качестве гелевой основы - кремнийорганический глицерогидрогель состава Si(C3H7O3)4·6C3H8O3·24H2O.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к ветеринарии, и может использоваться для лечения животных при парамфистомидозах, фасциолезе и цестодозах.

Изобретение относится к медицине, а именно к фармакологии, и касается применения воды со стабильным отрицательным окислительно-восстановительным потенциалом от -201 до - 225 мВ в качестве растворителя для изготовления биологически активных добавок в виде гелей, содержащих глутатион, пектин, аргинин и растительные экстракты.
Наверх