Способ выявления бактерий рода salmonella в пищевых продуктах

Изобретение относится к области биохимии и микробиологии, а именно к выявлению бактерий рода Salmonella. Для этого проводят обогащение сальмонелл в неселективной питательной среде, содержащей забуференную пептонную воду и компонент для продуцирования кислоты сальмонеллами. Закисление рН среды реакции указывает на наличие сальмонелл. В качестве компонента для продуцирования кислоты сальмонеллами используют пропиленгликоль, 0,6 г которого вводят во флаконы с 225 мл готовой забуференной пептонной воды. Изобретение позволяет сократить срок выявление бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах с 48 до 24 часов. 3 пр.

 

Изобретение относится к области биохимии и микробиологии, касается выявления бактерий рода Salmonella.

Бактерии рода Salmonella могут присутствовать в патологическом материале в небольшом количестве вместе с большим числом других бактерий. Поэтому предварительное обогащение просто необходимо.

Известен стандартный способ выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, состоящий из двух этапов обогащения: на первом этапе - этапе неселективного обогащения - часть пробы массой 25 г помещают в 225 мл забуференной пептонной воды (ЗПВ) и инкубируют при температуре 37°С 24±3 часа. Далее 1 см3 культуры пересевают в среды для селективного обогащения, благоприятные для накопления сальмонелл: среду Раппапорта-Вассилиадиса с соей (RVS-бульон) и одну из двух сред: Мюллер-Кауфман тетратионатный бульон (МКТ-бульон) или селенитовую среду. После посева RVS-бульон инкубируют при температуре (41,5±1,0)°С в течение (24±3) ч, а МКТ-бульон и селенитовую среду - при температуре (37±1)°С в течение (24±3) ч, т.е. выполняют второй этап обогащения. Для идентификации сальмонелл полученные культуры пересевают на две селективные агаризованные среды: ксилоза-лизин-дезоксихолатный агар (XLD-агар) и на одну из следующих агаризованных сред: висмут-сульфит агар, среду Плоскирева, среду Эндо, среду Левина или бриллиантовый зеленый агар. Посевы на агаризованных средах инкубируют при температуре (37±1)°С в течение (24±3) ч. [1]. Недостатком данного способа является наличие двух обязательных этапов бактериологического анализа, что увеличивает сроки проведения диагностики.

Сальмонеллы образуют кислоту при ферментации пропиленгликоля [2-4].

Пропиленгликоль входит в состав хромогенной дифференциально-диагностической среды для идентификации сальмонелл в пищевых продуктах, сырье и клиническом материале Рамбах-агар (RAMBACH® agar for the identification of Salmonella, Мерк, Германия). Дезоксихолат натрия ингибирует сопутствующую грамположительную микрофлору. Сальмонеллы продуцируют кислоту из пропиленгликоля, в результате чего происходит изменение рН среды и колонии сальмонелл окрашиваются в красный цвет. Для дифференциации сальмонелл от колиформных бактерий в состав среды включена хромогенная смесь, которая выявляет наличие фермента β-галактозидазы - характерного фермента колиформных бактерий. Колиформные бактерии растут в виде сине-зеленых или сине-фиолетовых колоний. Остальные энтеробактерии и грамотрицательные бактерии, такие как Proteus, Pseudomonas, Shigella, вырастают в виде бесцветных желтоватых колоний. РАМБАХ-агар обеспечивает однозначную дифференциацию сальмонелл от других бактерий.

Состав среды (г/л): пептон 8.0; хлорид натрия 5.0; дезоксихолат натрия 1.0; хромогенная смесь 1.5; пропиленгликоль 10.5; агар-агар 15.0.

Приготовление среды. Добавить 1 флакон жидкой хромогенной смеси среды к 250 мл дистиллированной воды и перемешать до полного растворения. Добавить 1 флакон порошка среды (питательная основа), дать среде набухнуть в течение 20-30 минут, перемешать до полного растворения. Колбу со средой нагревать на кипящей водяной бане с периодическим помешиванием. Среда полностью растворяется. Стандартное время до полного растворения для 250 мл - 20-25 мин. Охладить среду как можно быстрее на водяной бане 45-50°С. Во время этой процедуры (максимум 30 минут) следует помешивать среду время от времени. Разлить по чашкам. Для предотвращения образования осадка следует разместить чашки Петри на охлажденной поверхности стола (максимум 25°С). Готовые чашки со средой опалесцируют и слегка розовые. Перед посевом чашки следует подсушить. рН: 7.3±0.2 при 25°С.

Ход исследования. После этапа селективного обогащения посеять на ¼ поверхности агара петлей. Для того чтобы получить изолированные колонии - той же петлей посеять на оставшуюся поверхность чашки. Инкубировать в аэробных условиях 24-48 часов при 35-37°С.

Недостатком указанной питательной среды является невозможность ее использования на первом этапе селективного обогащения.

Целью заявляемого изобретения является ускорение выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах.

Поставленная цель достигается тем, что при выявлении бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах на этапе обогащения сальмонелл в неселективной жидкой среде во флаконы с 225 мл с готовой забуференной пептонной водой вводят 0,6 г пропиленгликоля для продуцирования кислоты сальмонеллами.

Заявляемый способ выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах позволяет через 24 часа исследования получить ответ о присутствии бактерий рода Salmonella в образце продукта на основании изменения рН питательной среды в кислую сторону в результате продуцирования кислоты сальмонеллами, что сокращает срок микробиологического анализа на 24 часа.

Забуференная пептонная вода служит средой первичного обогащения, которую используют для повышения высеваемости поврежденных сальмонелл из пищевых продуктов (перед селективным обогащением и выделением). Она рекомендована также международным комитетом (ISO 6579: 1993). Состав: протеозопептон - 10,0 г/л; натрия хлорид - 5,0 г/л; натрия гидрофосфат - 3,5 г/л; калия дигидрофосфат - 1,5 г/л. Выпускается в виде гомогенного светло-желтого порошка.

Пропиленгликоль - бесцветная вязкая жидкость со слабым характерным запахом, сладковатым вкусом, обладающая гигроскопическими свойствами. Синонимы: 1,2-пропиленгликоль, пропандиол, монопропиленгликоль. Выпускается промышленностью. Изменяет рН питательной среды в кислую сторону в результате продуцирования кислоты сальмонеллами.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Приготовление питательной среды.

Для приготовления питательной среды размешивали 20,0 г порошка в 1000 мл дистиллированной воды. Разливали в стерильные флаконы и стерилизовали автоклавированием при 1,1 атм (121°С) в течение 15 мин пропиленгликолем. К 225 мл стерильной забуференной пептонной воды добавляли 0,6 г пропиленгликоля.

Пример 2. Неселективное обогащение сальмонелл.

В работе использовали 4 штамма сальмонелл: S. choleraesuis №1348, S. typhimurium №79, S. enteritidis №5765, S. dublin №780. Во флаконы серии №1 (n=40) с питательной средой, согласно прим. 1, инокулировали по 0,5 мл микробной взвеси 105 млрд/мл.

В качестве контроля во флаконы серии №2 (n=20) с забуференной пептонной водой инокулировали по 0,5 мл микробной взвеси 105 млрд/мл.

Для сравнительного анализа во флаконы серии №3 (n=20) инокулировали по 0,1 мл микробной взвеси 105 млрд/мл из штаммов E. coli 675 №240417 и Shigella flexori1a 851b №232412.

Все посевы во флаконах серий №1, №2, №3 имели нейтральный уровень рН. Все посевы во флаконах серий №1, №2, №3 инкубировали при температуре 37°С в течение 24 часов.

На вторые сутки исследований определяли водородный показатель, который составил: во флаконах серии №1 (согласно предлагаемому изобретению) - 6,35±0,18 (сдвиг рН в кислую среду), во флаконах №2 (контроль) - 6,94±0,2 (сохранялся нейтральный уровень рН); во флаконах №3 - 6,93±0,2 (сохранялся нейтральный уровень рН).

Таким образом, после первого этапа исследований во флаконах серии №1 сдвиг реакции среды в кислую сторону указывает на наличие сальмонелл в исследуемой пробе продукта.

Пример 3. Идентификация сальмонелл.

Микробиологической петлей распределяли материал из питательной среды флаконов серии 1, согласно прим.2, на поверхность висмут-сульфит агара в чашках Петри (n=40). Через 24 часа в 35 чашках наблюдали рост единичных культур, через 48 часов - более 100 культур во всех чашках. По результатам биохимической и серологической идентификации выращенные нами сальмонеллы соответствуют заявленным серотипам.

В патентной и научно-технической литературе не обнаружены технические решения, аналогичные заявляемому с использованием пропиленгликоля на первом этапе неселективного обогащения сальмонелл, что свидетельствует о новизне предлагаемого решения.

Литература

1. ГОСТ Ρ 52814 - 2007. Продукты пищевые. Метод выявления бактерий рода Salmonella.

2. Rambach Α. // Environ. Microbiol. - 1990. - Vol. 56. - P. 301.

3. Greenberg A.E., Trussel R.R., Clesceri L.S. (Eds.). Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater, 16th ed., APHA, Washington, D.C. - 1985.

4. Greenwald R., Henderson R.W. and Yappaw S. // J. Clin. Microbiol. - 1991. - Vol. 29. - P. 2354.

Способ выявления бактерий рода Salmonella в пищевых продуктах, заключающийся в обогащении сальмонелл в неселективной питательной среде, содержащей забуференную пептонную воду и компонент для продуцирования кислоты сальмонеллами, отличающийся тем, в качестве компонента для продуцирования кислоты сальмонеллами используют пропиленгликоль, который вводят во флаконы с 225 мл готовой забуференной пептонной воды в дозе 0,6 г.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к пищевой промышленности. Согласно способу отбирают пробу гречневой крупы, варят в воде в соотношении 1:3 в течение 15-20 мин для усиления аромата, охлаждают до температуры 20-25°C, раздельно помещают по 5 г пробы в пять виал, опускают виалы в автоматическое устройство отбора проб мультисенсорной системы распознавания компонентов газовых смесей типа «VOCmeter», нагревают до температуры 50-55°C в течение 10-20 мин, отбирают из емкостей летучие вещества, пропускают их через четыре неселективных металл-оксидных сенсора, реагирующих на летучие компоненты образца изменением электрической проводимости чувствительного слоя, которая преобразовывается в электрический сигнал.

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к определениию свежести рисовой крупы. Для этого отбирают пробу крупы и варят в воде в соотношении 1:3 в течение 15-20 мин для усиления аромата, а затем охлаждают до температуры 20-25°C.

Изобретение относится к аналитической химии азота, в частности к определению общего азота в сельскохозяйственном сырье и продуктах его переработки. Способ характеризуется тем, что предусматривает термическое кислотное разложение пробы растительного образца, кратное разбавление пробы до содержания аммонийного азота не более 1000 мг/дм3 и выполнение анализа методом капиллярного электрофореза в кварцевом капилляре, эффективной длиной 0,5 м, внутренним диаметром 75 мкм с получением электрофореграммы, причем общий азот определяют по содержанию аммонийного азота и остаточному содержанию нитрат- и нитрит- ионов, причем для определения аммонийного азота используют водный раствор ведущего электролита, содержащий бензимидазол, 18-краун-эфир-6, сульфат натрия при положительном напряжении на капилляре 12 кВ и длине волны детектирования - 254 нм, а для определения методом капиллярного электрофореза остаточного содержания нитрат- и нитрит-ионов применяют водный раствор ведущего электролита, содержащего хромат калия, уротропин и Трилон Б при отрицательном напряжении на капилляре 14 кВ и длине волны детектирования -254 нм.

Изобретение относится к области пищевой промышленности и касается способа определения массовой доли моносахаридов в инвертном сиропе. Способ предусматривает взвешивание навески, растворение в дистиллированной воде, тщательное перемешивание до растворения навески, экстракцию в ультразвуковой бане, фильтрацию раствора и центрифугирование.

Изобретение относится к аналитической аппаратуре. Устройство для экспресс-оценки качества продуктов питания включает в себя пьезоэлектрические преобразователи со щупами, генератор высокой частоты, генератор импульсов низкой частоты, смеситель, усилитель, преобразователь выходного сигнала, блок отображения информации.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для повышения эффективности и достоверности определения уровня токсикантов в воде, продуктах питания или физиологических жидкостях путем проведения твердофазного иммуноферментного анализа.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для определения степени зрелости у сортов томатов с красной, желтой, оранжевой и коричневой окраской плодов.

Изобретение относится к области пищевой промышленности и предназначено для контроля качества зефира и мармелада. Способ определения предусматривает взвешивание 2,0-5,0 г образца изделия, помещение образца в мерную колбу объемом 1000 мл, добавление 100-200 см3 дистиллированной воды с температурой 50-70°С, тщательное перемешивание до растворения образца в течение 10-20 мин на водяной бане при температуре 75-85°С, фильтрацию раствора, доведение объема до метки дистиллированной водой и центрифугирование в течение 25-40 мин при скорости 3000-3500 об/мин, после чего прозрачный раствор переносят в емкость для проведения исследований состава органических кислот и макроэлементов методом капиллярного электрофореза с косвенным детектированием.
Способ определения механических микроповреждений зерна включает покрытие зерна металлическим нанопорошком с размером частиц 5-15 нм, очистку поверхности зерна от металлического порошка, определение количества порошка, оставшегося в микротрещинах зерна, для определения степени микроповреждения зерна.

Настоящее изобретение относится к детектору микроволнового излучения для измерения внутренней температуры образца белковосодержащего вещества, например мяса. Заявлено устройство тепловой обработки, предназначенное для тепловой обработки белковосодержащих пищевых продуктов (3) и включающее детектор (1) микроволнового излучения для измерения внутренней температуры белковосодержащего пищевого продукта (3), средство перемещения для транспортировки продуктов (3) через устройство в направлении перемещения (y-направление), так что продукты (3) проходят под неподвижным детектором (1), и средства воздействия на тепловую обработку, управляемые по сигналу детектора (1).
Изобретение относится к области определения качества кормов. Техническим результатом является сокращение времени пробоподготовки и проведения анализа в наиболее адекватной «in-vivo» тест-системе с получением полной информации по интегральному показателю качества - биологической полноценности корма. Для этого исследуемые пробы вносят в инкубационную среду для выращивания чайного гриба штамма Medusomyces Gisevii Lindau, инкубируют микроорганизм в течение 12-14 суток и затем биомассу гриба взвешивают и по кратности значений биомассы гриба в опыте и контроле (г) определяют коэффициент эффективности (КЭ). По коэффициенту эффективности, равному 1,1-1,6, судят о низком качестве кормов; 1,7-2,5 - о среднем качестве; 2,6-3,0 - хорошем качестве и 3,1-4,0 - высшем качестве кормов. 8 пр.

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для объективной оценки степени зрелости различных ботанических сортов томатов при высокоточном отборе плодов необходимой стадии зрелости. Способ оценки степени зрелости плодов томата заключается в измерении максимума медленной индукции флуоресценции хлорофилла и его вариабельности, при этом стадия незрелых плодов характеризуется высокими значениями максимума медленной индукции флуоресценции хлорофилла при его низкой вариабельности; стадия, предшествующая созреванию, характеризуется средними значениями максимума медленной индукции флуоресценции хлорофилла при его высокой вариабельности; а стадия полного созревания - низкими значениями максимума медленной индукции флуоресценции хлорофилла при его низкой вариабельности. Разделение плодов на группы зрелости внутри каждой стадии проводят в соответствии со следующими критериями: для двух первых стадий созревания - чем меньше максимум медленной индукции флуоресценции хлорофилла, но выше его вариабельность, тем более зрелый плод; для стадий полного созревания - чем меньше максимум медленной индукции флуоресценции хлорофилла, но ниже его вариабельность, тем более зрелый плод. Изобретение позволяет повысить точность и эффективность анализа степени зрелости томатов посредством количественной оценки функционального состояния плодов по оптическим характеристикам. 5 табл., 1 пр.
Наверх