Новые сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида, фармацевтическая композиция, содержащая их, и их применение в качестве ингибиторов системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза

Изобретение относится к соединениям формулы (1) или их фармацевтически допустимым солям, где в формуле (1) R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, фенил или бензил; R2 обозначает водород или C1-C8 алкил-2-формамидацетатную группу; R3 обозначает ацильную группу карбоновой кислоты, выбранную из групп 2,6-дихлорбензойной или 2,6-ди(трифторметил)бензойной кислоты. Также изобретение относится к применению соединений формулы (1) и фармацевтической композиции, их содержащей. Технический результат - соединения формулы (1), обладающие ингибирующей активностью в отношении системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

 

Объектом настоящего изобретения являются новые сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида, фармацевтическая композиция, содержащая их, и их применение в изготовлении лекарственных средств, которые нацелены на систему тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза. Настоящее изобретение предназначено для применения в медицинской химии, фармацевтике и медицине.

На процесс онкогенеза, а также последующие стадии развития опухоли значительное влияние оказывают ферменты, которые контролируют состояние окисления-восстановления клеток, и среди них, по-видимому, важную роль играет ферментативная система, состоящая из двух белков: тиоредоксина (Trx) и тиоредоксин-редуктазы (TrxR). Основная функция этой системы состоит в защите клеток от окислительного стресса. Как тиоредоксин, так и тиоредоксин-редуктаза могут восстанавливать множество молекул, в том числе активные формы кислорода (ROS). Однако способность Trx-TrxR системы окислительно модифицировать крупные макромолекулы, в частности белки, делает эту систему исключительной в отношении регулирования важных клеточных процессов, таких как выживание и пролиферация клетки или гибель клетки по апоптическому или неапоптическому путям.

При восстановлении определенных молекул тиоредоксин окисляется вследствие образования дисульфидных мостиков между двумя цистеинами в активном центре фермента. Окисленный Trx не может больше функционировать в качестве восстановителя, и, таким образом, следующий этап представляет собой восстановление Trx с помощью тиоредоксин-редуктазы. Редуктаза совместно с NADPH2 восстанавливает дисульфидный мостик, благодаря чему тиоредоксин восстанавливает свою активность.

Тиоредоксин-редуктаза представляет собой фермент с молекулярной массой 55 кДа, который встречается в активной форме как гомодимер (Gromer S et al., Med. Res. Rev., 2004, 24, 1, pp. 40-89). В клетках млекопитающих существуют три изоформы TrxR: цитоплазматическая (TrxR1), митохондриальная (TrxR2) и глутатион-TrxR (которая проявляет способность восстанавливать глутатион). Этот фермент имеет два активных сайта: так называемый N-концевой активный сайт и C-концевой активный сайт. Первый из них содержит два цистеиновых остатка в положениях Cys59 и Cys64, тогда как C-концевой сайт содержит цистеин в положении Cys497 и, что интересно, селеноцистеин в положении Sec498. Присутствие селена вместо атома серы объясняет уменьшенную прочность связей S-Se между соседними остатками селеноцистеина и цистеина по сравнению со связью между двумя цистеинами. В эукариотических клетках субстратная специфичность TrxR довольно низкая. Наряду с тиоредоксином человеческая редуктаза может восстанавливать целый ряд других соединений, включая восстановление окисленной формы аскорбиновой кислоты (витамин C) (May J.M. et al., J. Biol.Chem., 1997; 272, pp. 22607-22610).

Тиоредоксин представляет собой небольшой белок с массой приблизительно 12 кДа. Его активный сайт представляет собой так называемый «мотив тиоредоксина», содержащий последовательность: (W)CGPC(K), где аминокислоты в скобках могут отличаться между различными типами тиоредоксинов. Как и в случае TrxR, при восстановлении целевых молекул остатки цистеина (Cys33 и Cys35) в активном сайте образуют дисульфидный мостик. Один из каталитически активных цистеинов выставляется за пределы фермента, тогда как другой прячется внутри. Дополнительный цистеин (Cys73) используется для образования гомодимера, характерного только для ферментов млекопитающих. Тиоредоксин встречается в двух изоформах: цитоплазматической (Trx-1) и митохондриальной (Trx-2). Кроме того, имеется множество белков с тиоредоксиновой активностью, которые выполняют пока неизвестные функции в различных компартментах клетки.

Интерес к системе Trx-TrxR в контексте лечения рака базируется, среди прочего, на повышенном синтезе этих белков в опухолевых клетках в сравнении с нормальными клетками (Berggren, M. et al., Anticancer Res 1996, 16, pp. 3459-3466). Повышенный синтез белков системы Trx-TrxR благоприятен для опухолевых клеток. Тиоредоксин наряду с глутаредоксином участвует в синтезе дезоксинуклеотидов, являясь донором протонов для рибонуклеотид-редуктазы. Таким способом быстро пролиферирующие клетки обеспечиваются субстратами, необходимыми для синтеза нуклеиновых кислот (Holmgren, A., J. Biol. Chem. 1989, 264, pp. 13963-13966).

Система Trx-TrxR также отвечает за ингибирование апоптоза. Этот механизм основан на связывании восстановленного тиоредоксина с ASK1 (регулирующей сигнал апоптоза киназой 1). Этот фактор отвечает за активацию киназного пути, инициирующего апоптоз, и эффективное связывание его тиоредоксином, который сверхэкспрессируется в опухолевых клетках, эффективно предотвращает гибель опухолевой клетки (Ichijo, H. et al., Science 1997, 275, pp. 90-94). Кроме того, тиоредоксин модулирует активность транскрипционного фактора NF-κВ, который также ингибирует апоптоз. Дополнительно, посредством увеличения синтеза HIF-1 (индуцируемого гипоксией фактора-1) система Trx-TrxR положительно регулирует опухолевый ангиогенез, увеличивая возможность опухолевого роста. Также наблюдалось, что с уровнями тиоредоксина коррелируют как агрессивность, так и устойчивость опухолевых клеток к лекарственным средствам.

Итак, ингибирование системы Trx-TrxR уменьшает пролиферацию опухолевых клеток, индуцирует их гибель по апоптическому и неапоптическому механизмам, увеличивает чувствительность опухолевых клеток к химиотерапии, радиотерапии, а также к индуцирующим факторам апоптоза и отрицательно влияет на ангиогенез опухоли.

В медицине имеется потребность в разработке селективных ингибиторов системы Trx-TrxR, которые потенциально представляют собой очень эффективные противоопухолевые лекарственные средства, которые могут применяться в монотерапии, а также в комбинированной терапии с другими, уже зарегистрированными, формами для лечения рака.

В последнее время была синтезирована группа химиотерапевтических средств, ингибирующих систему Trx-TrxR. Мишенью ингибиторов является как собственно тиоредоксин, так и тиоредоксин редуктаза. При разработке ингибиторов первоначальное внимание следует уделить активным сайтам обоих ферментов. Большинство известных ингибиторов связывают (обратимо или необратимо) два цистеина активного сайта (селеноцистеин, в человеческой TrxR).

В таблице ниже приведены известные ингибиторы системы Trx-TrxR.

Цисплатин (CDDP)
CDDP-нитрофуран
Рак яичка и предстательной железы, небольшие опухоли легкого
PX-12 Фаза ІІ клинических испытаний в отношении лечения рака поджелудочной железы
Алкилирующие факторы Алкилированные остатки цистеина или селеноцистеина
Куркумин Клинические испытания относительно различных опухолей
Палмарумицин Рак молочной железы, опухоли легкого
Ауранофин Рак яичника

Одним из самых ранних ингибиторов тиоредоксина, давно применяемым в опухолевой терапии, является цисплатин (1), а также его более новые аналоги (2). Механизм, с помощью которого соединения платины действуют в опухолевых клетках, основан на прямом разрушении ДНК, приводящем в результате к образованию устойчивых аддуктов. Однако оказывается, что, будучи хорошим электрофилом, соединение платины является эффективным ингибитором тиоредоксин-редуктазы. Действительно настолько сильным, что оно может даже действовать на фермент в стехиометрических количествах (Sasada, T. et al., Free Radic. Biol. Med. 1999, 27, pp. 504-514).

Другим соединением, которое селективно ингибирует активность тиоредоксина, является 1-метилпропил-2-имидазол-дисульфид, PX-12 (4). Оно было открыто в ходе процесса разработки ингибитора тиоредоксин-редуктазы, и уже было оценено в фазе II клинических испытаний в отношении лечения распространенного рака поджелудочной железы. Интересным фактом в контексте медицинской химии является то, что для ингибиторной активности необходима метильная группа в алкильной цепи. Соединения со сходной структурой, но не имеющие этой группы, не служили ингибиторами тиоредоксина, а были его субстратами. PX-12 может обратимо образовывать дисульфиды в активных сайтах как TrxR, так и Trx, что приводит к их окислению. Однако окисленные таким образом ферменты могут быть восстановлены, и ингибирование происходит в результате связывания Cys73. Во-первых, это блокирует формирование активного димера Trx, и, во-вторых, тиоредоксин, связанный в этом положении, больше не будет субстратом для тиоредоксин-редуктазы и, таким образом, не сможет восстанавливаться (Kirkpatrick, D.L. et al., Biochem. Pharmacol. 1998, 55, pp. 987 -994). Дополнительная активность PX-12, наблюдаемая in vivo, представляет собой ингибирование синтеза VEGF (фактор роста эндотелия сосудов). Повышенный синтез тиоредоксина в опухолевых клетках часто ведет к повышенной экспрессии VEGF, что, в свою очередь, ускоряет ангиогенез внутри опухоли. Если концентрация VEGF снижается, вазогенез капилляров в опухоли также уменьшается, что дополнительно замедляет опухолевый рост.

Куркумин (7), соединение натурального происхождения, извлекаемое из Curcuma longa, является интересным соединением, в первую очередь, из-за широкого спектра его активности. Кроме применения в качестве приправы (компонент карри) в азиатских культурах куркумин применялся для лечения различных болезней: от анорексии, кашля, заболеваний печени до синуситов (Calabrese, V. et al., Mol. Nutr. Food Res. 2008, 52, pp. 1062-1073). Если посмотреть на химическое строение куркумина, легко заметить электрофильные центры в форме акцепторов Михаэля. Они могут взаимодействовать с нуклеофильными остатками селеноцистеина и цистеина в активных центрах системы Trx-TrxR. Выяснено, что куркумин действительно сильно ингибирует активность тиоредоксин-редуктазы как при анализах активности выделенного фермента, так и в экстрактах клеток HeLa (Fang, J., Lu, J., Holmgren, A., J. Biol. Chem. 2005, 280, pp. 25284-25290). Куркумин, однако, не является селективным ингибитором этой системы, поскольку он влияет на множество киназ, циклинов или циклооксигеназу.

Поскольку активный центр тиоредоксина с остатками цистеина или селеноцистеина может рассматриваться в качестве нуклеофильного центра, можно предположить, что алкилирующие средства будут ковалентно и необратимо ингибировать активность фермента. Два известных серных алкилирующих средства (Sun, Q. et al., J. Biol. Chem. 1999, 274, pp. 24522-24530), иодацетамид (5) или иодуксусную кислоту, проверяли в отношении их противоопухолевой активности, но из-за их низкой селективности они ограниченно применяются в качестве химиотерапевтических средств. Однако оба демонстрируют сильное ингибирование активности тиоредоксин-редуктазы. 1-Хлор-2,4-динитробензол представляет собой небольшое соединение, которое алкилирует как остатки селеноцистеина, так и соседние остатки цистеина (Nordberg, J. et al., J. Biol.Chem. 1998, 273, pp. 10835-10842). Такая алкилированная TrxR активирует митохондриальные каспазы, что вызывает цитотоксический эффект, среди прочего, в отношении рака легкого человека.

Соединения золота первоначально применялись в лечении ревматоидного заболевания, но из-за их сильной цитотоксической активности в отношении опухолевых клеток возрастающее количество химиотерапевтических средств, основанных на соединениях золота (I) или золота (III), становятся доступными. Механизм активности этих соединений до сих пор не полностью понятен. Предполагается, что он такой же, как у платины, или он основан на прямом повреждении ДНК. Однако, поскольку золото имеет высокое сродство с тиоловыми группами, возможно, что клеточной мишенью этих терапевтических средств может быть тиоредоксин. Примером такого соединения является ауранофин (9), известный своей противоревматоидной активностью. Он ингибирует тиоредоксин-редуктазу в наномолярных концентрациях, тогда как глутатион-редуктазу он ингибирует на микромолярных уровнях (Gromer, S. et al., K., J. Biol. Chem. 1998, 273, pp. 20096-20101). Глутатион-редуктаза не содержит C-концевой активный сайт с селеноцистеином. Таким образом, возможно, что этот сайт является мишенью активности ауранофина. Цитотоксичность ауранофина оценивали в отношении опухолевых клеток, которые стали резистентными к цисплатину (Marzano, C. et al., Free Radic. Biol. Med. 2007, 42, pp. 872-881), и наблюдали явное ингибирование TrxR (с параллельным отсутствием ингибирования активности глутатион-редуктазы) и высокую цитотоксичность, что открыло новые возможности в лечении опухолей, резистентных к терапии цисплатином. Интересно, что активность TrxR гораздо выше в клетках, резистентных к циспластину. Это подтверждает важную роль повышенного синтеза тиоредоксин-редуктазы и тиоредоксина в резистентности к химиотерапии.

Как очевидно из вышеизложенного описания известных ингибиторов системы Trx-TrxR, большинство из них реагируют непосредственно с тиоловыми или селеновыми остатками обоих ферментов. Взаимодействия представляют собой сильные ковалентные связи или постоянные комплексы с металлами. Однако механизмы действия многих из них до сих пор непонятны. В связи с тем фактом, что ингибиторы, известные в настоящее время, представляют собой очень активные молекулы, многие из них могут проявлять нежелательные эффекты, основанные на низкой селективности в отношении остатков цистеина в других ферментах.

Целью настоящего изобретения является обнаружение новых ингибиторов системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза, эффективных и более селективных, чем доступные на настоящий момент. Фактором, отличающим систему Trx-TrxR, при этом, является остаток селеноцистеина, являющийся более сильным нуклеофилом, чем цистеин, что может иметь решающее значение для селективности ингибитора.

Эта цель была достигнута с помощью получения новых ариловых сложных эфиров (2-гидроксиметил)акриламида и карбоновых кислот. Соединения по настоящему изобретению, как выяснилось, являются эффективными ингибиторами тиоредоксина (Trx). Эти соединения, в то же самое время, проявляют сильные противоопухолевые свойства.

Объектом настоящего изобретения, таким образом, являются соединения, определяемые общей формулой (1):

(1),

где:

R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, замещенную или не замещенную фенильной или бензильной группой,

R2 обозначает водород, алкил-2-формамидацетатную группу, где алкильная группа содержит прямую или разветвленную цепь от C1 до C8, и

R3 обозначает ацильную группу карбоновой кислоты, выбранную из групп 2,6-дихлорбензойной или 2,6-ди(трифторметил)бензойной кислоты;

или их фармацевтически допустимая соль.

Предпочтительно, эти соединения выбраны из группы, охватывающей соединения, определяемые общей формулой:

N-(R1,R2-метил)-2-(ацилокси)метакриламид,

где:

R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, замещенную или не замещенную фенильную группу, бензил,

R2 обозначает атом водорода или группу CONHCH2COOX, где X представляет собой линейный или разветвленный C1-C6 алифатический заместитель,

R3 обозначает фенильный заместитель или комплексный фенильный заместитель, имеющий в положениях 2,6 два идентичных или различных галидных (Cl, Br, I) или трифторметильных заместителя.

В частности объектом настоящего изобретения являются соединения, выбранные из группы, включающей:

(R)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;

(1S)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;

2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;

2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат;

2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;

2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат.

Следующим объектом настоящего изобретения является применение соединения с общей формулой (1) или его фармацевтически допустимых солей в качестве лекарственных средств.

Вышеупомянутое применение предпочтительно характеризуется тем, что лекарственное средство предназначено для профилактики или лечения онкогенных заболеваний, заболеваний, связанных с повышенной клеточной пролиферацией, предпочтительно острым и хроническим отторжением трансплантата, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, лимфоидными пролиферативными синдромами, миелодиспластическими и миелопролиферативными синдромами и предонкогенными состояниями.

Объект настоящего изобретения представляет собой фармацевтическую композицию, характеризующуюся тем, что она содержит в качестве своего активного ингредиента соединение с общей формулой (1) или его фармацевтически допустимую соль.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению предпочтительно предназначена для профилактики или лечения онкогенных заболеваний, заболеваний, связанных с повышенной клеточной пролиферацией, предпочтительно острым и хроническим отторжением трансплантата, аллергическими и аутоиммунными заболеваниями, лимфоидными пролиферативными синдромами, миелодиспластическими и миелопролиферативными синдромами и предонкогенными состояниями.

Следующий объект настоящего изобретения представляет собой способ получения соединения с общей формулой (1), в котором осуществляют образование амидной связи посредством связывания карбоновой кислоты с компонентом с аминогруппой в органическом растворителе в присутствии связывающего реагента.

Объект настоящего изобретения иллюстрируется в примерных вариантах осуществления на чертежах, при этом:

на фигуре 1 показана компиляция результатов экспериментов, определяющих цитостатическую/цитотоксическую активность оцениваемых соединений (в столбцах) в отношении ряда опухолевых клеток (описание линии POM с правой стороны); цитостатическую/цитотоксическую активность в отношении прикрепленных клеток из клеток солидных опухолей (EMT6, PAN02, CT26 и T24) оценивали с применением теста с кристаллическим фиолетовым, тогда как в отношении суспензионно-выращенных линий клеток с помощью MTT; b.d.=нет данных;

тогда как на фигуре 2 показан анализ цикла T24 клеток после инкубации с ингибиторами тиоредоксина.

Эксперименты согласно настоящему изобретению показывают, что сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида обладают значительно более предпочтительными фармакологическими свойствами, чем 1-метилпропил-2-имидазол-дисульфид, упоминаемый в литературе как PX-12. Они ингибируют активность тиоредоксина более эффективно, чем PX-12, они более селективны (при больших концентрациях они ингибируют тиоредоксин-редуктазу и, в отличие от PX-12, не ингибируют глутатион-редуктазу), проявляют цитостатическую/цитотоксическую активность в отношении человеческих и мышиных опухолевых клеток, происходящих как из солидных опухолей (рак молочной железы, почки, толстой кишки и поджелудочной железы), так и из гематопоэтической системы (лейкемии и лимфомы).

Соединения согласно настоящему изобретению, обозначенные в данном документе как: 3a, L-3a, D-3a, 3b, 8a и 8b, ингибируют активность тиоредоксина в концентрациях меньших, чем соединение PX-12, эталонный ингибитор этого фермента, противоопухолевая активность которого на настоящий момент проходит клинические испытания.

Соединения 3a, 8a и 8b также более селективны, чем PX-12. Например, соединение 3a ингибирует активность рекомбинантного тиоредоксина в три раза сильнее и ингибирует активность рекомбинантной тиоредоксин-редуктазы приблизительно в три раза слабее по сравнению с эталонным соединением PX-12. Кроме того, большая селективность соединения 3a также демонстрировалась в испытаниях, связанных с глутатион-редуктазой. Цитостатические/цитотоксические активности 3a и PX-12 в отношении испытуемых линий человеческих и мышиных опухолевых клеток сравнимы.

Аналогично, соединения L-3a, D-3a, 3b, 8a и 8b проявляют сильную цитостатическую/цитотоксическую активность в отношении панели человеческих и мышиных линий опухолевых клеток. Указанный ингибиторный эффект тестируемых соединений на клеточное деление делает возможным их применение как в лечении неопластических заболеваний, так и других заболеваний, где наблюдается чрезмерная клеточная пролиферация.

Объектом настоящего изобретения является также фармацевтическая композиция, предназначенная для лечения неопластических заболеваний, содержащая в качестве своего активного ингредиента сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида в количестве, достаточном для того, чтобы вызвать цитотоксический эффект, вместе с по меньшей мере одним инертным, фармацевтически допустимым носителем, разбавителем или вспомогательным веществом, а также фармацевтическая композиция, разработанная для лечения неопластических заболеваний, содержащая в качестве своего активного ингредиента рацемически- или энантиомернообогащенный 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат, 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат, 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат, 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат в количестве, достаточном для того, чтобы вызвать цитостатические/цитотоксические эффекты, вместе с по меньшей мере одним инертным фармацевтически допустимым носителем, разбавителем или вспомогательным веществом.

Объект настоящего изобретения, сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида, можно применять в терапии в форме фармацевтических композиций, разработанных для перорального и парентерального введения. Такие композиции могут изготавливаться с применением способов получения форм лекарственных средств, известных из уровня техники.

Соединения согласно настоящему изобретению могут, таким образом, изготавливаться и вводиться в различных формах для парентерального и перорального введения. Следовательно, соединение согласно настоящему изобретению может вводиться посредством внутривенной, внутримышечной, кожной, подкожной и внутрибрюшинной инъекций.

Для парентерального введения жидкие лекарственные формы изготавливаются с применением каждого из соединений по настоящему изобретению, а именно 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоата, 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоата, 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоата, 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоата, и инертного наполнителя, причем предпочтительно применяется вода. Вышеупомянутые соединения в зависимости от типа фармацевтически совместимого носителя можно суспендировать или растворять в наполнителе. При изготовлении раствора активное соединение можно растворять в инъецируемом растворе и стерилизовать фильтрацией. Полученный в результате стерильный раствор переносят во флаконы или ампулы и запечатывают.

После распределения по флаконам препараты можно заморозить или удалить растворитель под вакуумом. Затем лиофилизированный порошок запечатывают во флакон и дополняют флаконом воды для инъекций с получением инъецируемого лекарственного средства. Для специалиста является очевидным, что вышеупомянутые лекарственные формы могут содержать в качестве активного ингредиента как новое соединение, так и фармацевтически допустимую соль каждого из соединений по настоящему изобретению.

Соединения по настоящему изобретению, сложные эфиры (ацилоксиметил)акриламида, применимы в лечении онкогенных заболеваний благодаря сильной цитостатической активности (угнетение клеточного цикла на фазе G1, уменьшение процентной доли клеток, в которых проходит синтез ДНК). Их ожидаемые свойства также делают их применимыми для лечения заболеваний, патогенез которых включает повышенную пролиферацию клеток, например острое и хроническое отторжение трансплантата, аллергические и аутоиммунные заболевания, лимфоидные пролиферативные синдромы, миелодиспластические и миелопролиферативные синдромы и другие предонкогенные состояния.

Настоящее изобретение иллюстрируется следующими примерными вариантами осуществления.

1. Способ получения соединения с общей формулой

N-(R1,R2-метил)-2-(ацилокси)метакриламид,

определяющей новые сложные эфиры ацилоксиметакриламида, определяемые формулой 1, в которой R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, замещенную или незамещенную фенильную группу или бензил,

R2 обозначает атом водорода или группу CONHCH2COOX, где X представляет собой линейный или разветвленный C1-C6 алифатический заместитель,

R3 обозначает фенильный заместитель или комплексный фенильный заместитель, имеющий в положениях 2, 6 два идентичных или различных галидных заместителя (Cl, Br, I) или трифторметил.

1.1. Рацемические пептидомиметики, R1=iBu, R2=H, R3=CONH2CH2COOEt

Схема 1

a) Метанол, к.т., 16 ч, 46%;

b) TFA, CH2Cl2, 30 мин, к.т., 70%;

c) 4, ацетон, температура кипения, 59-87%.

Соединение 1: Этил-2-(2-(2-(бромметил)-N-(2,4-диметоксибензил)акриламидо)-4-метилпентанамидо)ацетат

В раствор изовалерианового альдегида (96 мкл, 0,88 ммоль) в метаноле (1 мл) добавили 2,4-диметоксибензиламин (133 мкл, 0,88 ммоль) и смешивали на протяжении 30 минут. После этого к нему добавили бромметилметакриловую кислоту (146 мг, 0,88 мМ) и смешивали на протяжении дополнительных 30 минут. Смесь охладили до температуры 0°C и добавили этилизоцианоацетат (100 мкл, 0,88 ммоль), и затем смешивали на протяжении 20 часов при комнатной температуре. Растворитель выпарили и остаток очистили с применением колоночной хроматографии в системе гексан:этилацетат (силикагель, Rf=0,33, 5:5, об.:об.). Выход составил 207 мг прозрачного масла (46%).

1H ЯМР (200 МГц, CDC13): δ 0,84-0,89 (m, 6H), 1,21-1,28 (m, 5H), 1,54-1,67 (m, 1H) 1,91-1,98 (m, 1H), 3,77 (s, 3H), 3,77 (s, 3H), 3,85 (d, J=5,2 Гц), 4,04-4,23 (m, 4H), 4,55-4,70 (m, 2H), 5,43 (s, 1H), 5,54 (s, 1H), 6,39-6,43 (m, 2H), 7,43 (d, J=9,2 Гц, 1H). 13C ЯМР (50 Мгц, CDC13): δ 14,5, 22,8, 22,9, 25,5, 33,4, 37,6, 41,7, 55,6, 55,6, 59,1, 61,6, 98,7, 104,3, 119,3, 130,3, 140,4, 169,8. HR-MS (ESI, [M+Na+]) рассчитано для C23H33BrN2O6Na: 535,1414, обнаружено: 535,1402.

Соединение 2: Этил-2-(2-(2-(бромметил)акриламидо)-4-метилпентанамидо)ацетат

Соединение 1 (117 мг, 0,23 ммоль) растворили в метиленхлориде (2 мл). Затем в этот раствор добавили трифторуксусную кислоту (475 мкл) при комнатной температуре. Смесь оставили на 1 час, пока наблюдалось изменение цвета от прозрачного до темно-фиолетового. Содержимое колбы переместили в сепаратор, и в него добавили метиленхлорид (4 мл) и добавляли насыщенный раствор карбоната натрия до тех пор, пока не исчез фиолетовый цвет. Водную фазу экстрагировали метиленхлоридом (3 × 8 мл), и затем объединенные органические фазы высушили рассолом и растворитель выпарили. Остаток очистили с применением колоночной хроматографии в системе гексан:этилацетат (силикагель, Rf=0,25, 6:4, об.:об.).

Выход составил 58 мг продукта (70%).

1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 0,87-0,94 (m, 6H), 1,22-1,29 (m, 5H), 1,38-1,70 (m, 4H), 3,96 (d, J=5,2 Гц, 1H), 4,01 (d, J=5,8 Гц, 1H), 4,10-4,23 (m, 5H), 4,60-4,78 (m, 1H), 5,69 (s, 1H), 5,85 (s, 1H), 6,90 (d, J=8,0 Гц, 1H), 7,14 (m, 1H). 13C ЯМР (50 МГц, CDC13): δ 14,5, 22,4, 23,3, 25,1, 30,7, 41,4, 41,7, 52,1, 61,8, 123,0, 141,3, 166,4, 170,0, 172,6; HR-MS (ESI, [M+Na+]) рассчитано для C14H23BrN2O4Na: 385,0733, обнаружено: 385,0740.

Общий способ №1 получения рацемических соединений 3a-b

Соединение 2, 0,1 ммоль, растворили в ацетоне и затем добавили цезиевую соль карбоновой кислоты (0,30 ммоль). Реакцию осуществляли на протяжении 30 мин при температуре кипения. Растворитель выпарили, остаток растворили в этилацетате и воде. Водную фазу экстрагировали этилацетатом и затем объединенные органические фазы промыли насыщенным раствором бикарбоната натрия, а затем рассолом. Их высушили безводным сульфатом магния. Растворитель выпарили и остаток очистили на хроматографической колонке в системе гексан:этилацетат (силикагель).

Соединение rac-3a: 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат

Получено с применением общего способа II. Белый порошок, tt=114-115°C, выход 87%, Rf=0,61 (5:5, об.:об.), 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3): δ 0,85-0,91 (m, 6H), 1,21-1,28 (m, 4H), 1,51-1,70 (m, 4H), 3,46 (d, J=5,2 Гц, 1H), 4,08 (d, J=5,8 Гц, 1H), 4,10-4,19 (m, 3H), 4,60-4,78 (m, 1H), 5,10 (s, 2H), 5,79 (s, 1H), 6,02 (s, 1H) 6,74 (d, J=8,2 Гц, 1H), 6,98-7,03 (m, 1H), 7,72 (d, J=7,8 Гц, 1H), 7,91 (d, J=7,8 Гц, 2H).13C ЯМР (50 МГц, CDCl3): δ 14,4, 22,4, 23,0, 25,0, 30,7, 41,2, 41,6, 51,9, 61,8, 65,6, 120,0, 124,3, 125,8, 129,0, 129,7, 130,2, 130,7 137,9, 166,4, 169,9, 172,6; элементный анализ рассчитан для C23H26F6N2O6: C, 51,11; H, 4,85; N, 5,18; обнаружено: C, 51,00; H, 5,07; N, 4,86.

Соединение rac-3b: 2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат

Получено с применением общего способа II. Белый порошок, tt=120-121°C, выход 59%. Rf=0,34 (5:5, oб.:oб.). 1H ЯМР (200 МГц, CDCl3) δ 0,83 (d, J=6 Гц, 6H), 1,16-1,30 (m, 3H), 1,47-1,69 (m, 4H), 3,91 (d, J=5,2 Гц, 1H), 3,95 (d, J=5,6 Гц, 1H), 4,12 (q, J=7,2 Гц, 2H), 4,51-4,60 (m, 1H), 5,07 (d, J=4,2 Гц, 2H), 5,78 (s, 1H), 6,00 (s, 1H), 6,56 (d, J=8,2 Гц 1H), 6,77 (bs, 1H), 7,20-7,25 (m, 3H). 13C ЯМР (50 МГц, CDCl3) δ 14,5, 22,4, 23,2, 25,1, 41,2, 41,7, 51,9, 61,9, 65,1, 124,6, 128,2, 131,4, 132,2, 138,1, 166,4, 169,8, 172,28; HR-MS (ESI, [M+Na+]) рассчитано для C21H26N2O6NaCl2: 495,10601,0733, обнаружено: 495,10812.

1.2. Хиральные, нерацемические пептидомиметики 3a-b

Схема 2

d) SOCl2, CH2Cl2, 24 ч., к.т., 5-6%;

e) 4, ацетон, температура кипения, 2 ч, 33-67%.

Соединение D-3a: (R)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат

К бромметакриловой кислоте (150 мг, 0,9 ммоль) добавили свежеперегнанный тионилхлорид (162 мкл, 2,2 ммоль). Смесь смешивали при температуре кипения на протяжении 2 часов. Излишек тионилхлорида выпарили при пониженном давлении. Добавили метиленхлорид (2 мл). Раствор ацилхлорида охладили до температуры 0°C и добавили DMAP (45 мг, 0,4 ммоль) и раствор NH2-D-Leu-Gly-OEt (80 мг, 0,4 ммоль) в метиленхлориде (2 мл), и смешивали 1,5 часа при температуре 0°C и затем на протяжении 2 часов при комнатной температуре. Растворитель выпарили и остаток очистили на хроматографической колонке (Rf=0,45 гексан:этилацетат 6:4 oб./oб., как для rac-2). Выход составил 12 мг прозрачного масла (эффективность 6%).

Полученное таким образом соединение D-2, (R)-этил-2-(2-(2-(бромметил)акриламидо)-4-метилпентанамидо)ацетат, растворили в ацетоне (5 мл), и добавили цезиевую соль бис-(трифторметил)бензойной кислоты (39 мг, 0,1 ммоль). Смешивали при комнатной температуре на протяжении 16 часов, и затем при температуре кипения на протяжении 4 часов. Осадок отфильтровали, растворитель выпарили и остаток очистили на хроматографической колонке (Rf=0,61 гексан:этилацетат 5:5 oб./oб., как для rac-3a), c выходом 12 мг прозрачного масла с эффективностью 67%. HR-MS (ESI, [M+Na+]) рассчитано для C23H26F6N2O6Na: 563,1587; обнаружено: 563,1592; [α]D=+20° (c=1,2, CHCl3).

Соединение L-3a: (S)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат

К бромметакриловой кислоте (84 мг, 0,5 ммоль) добавили свежеперегнанный тионилхлорид (111 мкл, 1,5 ммоль). Смесь смешивали при температуре кипения с обратным холодильником на протяжении 2 часов. Излишек тионилхлорида выпарили при пониженном давлении. Добавили метиленхлорид (2 мл). Раствор ацилхлорида охладили до температуры 0°C и добавили DMAP (62 мг, 0,5 ммоль) и раствор NH2-L-Leu-Gly-OEt (110 мг, 0,5 ммоль) в метиленхлориде (2 мл). Смесь смешивали на протяжении 1,5 часов при температуре 0°C и затем на протяжении 2 часов при комнатной температуре. Растворитель выпарили и остаток очистили на хроматографической колонке (Rf=0,46 гексан:этилацетат 6:4, об./об., как для rac-2). Выход составил 18 мг прозрачного масла (выход 5%).

Полученное таким образом соединение L-2, (S)-этил2-(2-(2-(бромметил)акриламидо)-4-метилпентанамидо)ацетат (16 мг, 0,04 ммоль) растворили в ацетоне (1 мл) и добавили цезиевую соль 2,6-бис-(трифторметил)-бензойной кислоты (36 мг, 0,09 ммоль). Суспензию довели до температуры кипения и смешивали до исчезновения субстрата (TLC, 2 часа). Смесь профильтровали через целит для удаления излишка цезиевой соли и бромида цезия. Растворитель выпарили и остаток растворили в 10 мл этилацетата. Промывку осуществили в следующей последовательности: водой (5 мл), насыщенным раствором карбоната натрия (5 мл) и рассолом. Органическую фазу высушили безводным сульфатом магния, профильтровали и выпарили. Полученное в результате масло профильтровали через силикагель, элюировали в системе гексан:этилацетат. Выход составил 8 мг продукта (эффективность 33%). HR-MS (ESI, [M+Na+]) рассчитано для C23H26F6N2O6Na: 563,1587, обнаружено: 563,1582 [α]D=-23° (c=0,8, CHCl3). 1H ЯМР спектр обоих энантиомеров полностью идентичен спектру соединения rac-3a.

1.3. Амиды, R1=R2=H, R3=Ph

Схема 3

f) iBuOCOCl, DMAP, DIPEA, BnNH2.

К раствору кислоты 7 (0,7 моль) в THF (5 мл) добавили изобутилхлороформиат (0,7 ммоль) при температуре -10°C и смешивали на протяжении 30 мин. Потом добавили бензиламин (0,7 ммоль). Смесь смешивали на протяжении 2 часов при температуре -10°C и на протяжении 1 часа при комнатной температуре. Растворитель выпарили и остаток растворили в этилацетате (20 мл) и промыли последовательно насыщенным раствором бикарбоната натрия (10 мл), лимонной кислотой (10%, 10 мл) и солевым раствором (10 мл). Остаток очистили на хроматографической колонке (силикагель, гексан:этилацетат).

Соединение 8a: 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат

1H ЯМР (CDCl3, 200 МГц) δ 4,50 (d, J=5,8 Гц, 2H,), 5,13 (s, 2H), 6,03 (s, 1H), 6,37 (bs, 1H), 7,28 (s, 5H), 7,71 (t, J=7,8 Гц, 1H), 7,91 (d, J=7,8 Гц, 2H). 13C ЯМР (CDCl3, 50 Мгц) δ 44,1, 66,0, 124,5, 125,8, 127,9, 128,1, 129,0, 130,1, 130,2, 130,7, 138,1, 138,4, 166,1. Элементный анализ: рассчитано для C20H21NO3: C, 55,69; H, 3,51; N, 3,25; обнаружено: C, 55,61; H, 3,38; N, 3,21.

Соединение 8b: 2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат

1H ЯМР (CDCl3, 200 МГц) δ 4,45 (d, J=6 Гц, 2H), 5,09 (s, 1H), 5,75 (s, 1H) 6,0 (s, 1H), 6,35 (bs, 1H), 7,18-7,24 (m, 8H). 13C ЯМР (CDCl3, 50 Мгц): δ 44,2, 65,5, 124,7, 127,9, 128,2, 129,0, 131,5, 132,2, 138,1, 138,4, 164,5, 166,0. Элементный анализ: рассчитано для C18H15Cl2NO3, 1H2O: C, 56,56; H, 4,48; N, 3,66; обнаружено: C, 56,89; H, 4,36; N, 3,28.

2. Результаты анализа in vitro

2.1. Оценка активности системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза и глутатион-редуктазы с применением рекомбинантных ферментов

2.1.1. Определение активности тиоредоксина

Способ определения активности тиоредоксина основан на восстановлении инсулина тиоредоксином. Тиоредоксин восстанавливается тиоредоксин-редуктазой с помощью NADPH. Полученные в результате свободные тиоловые -SH группы реагируют с 5,5'-дитиобис-2-нитробензойной кислотой (DTNB). Прекращение реакции приводит к появлению красного цвета. Интенсивность окрашивания определяется спектрофотометрически при 412 нм, и она соответствует числу восстановленных сульфгидрильных групп. Реакцию осуществляли при 37°C в течение 30 мин в буфере, содержащем 50 мM Tris-HCl и 20 мM EDTA при pH 7,6. Применяемые концентрации субстрата составляли: 0,25 мкМ рекомбинантного тиоредоксина человека и 0,325 мкМ рекомбинантной тиоредоксин-редуктазы крысы (IMCO Corporation Ltd AB, Швеция), и 316 мкМ инсулина, 0,8 мкМ NADPH, 8 мМ DTNB (Sigma Aldrich).

Таблица 1 обобщает результаты ингибирования тиоредоксина в вышеупомянутой системе. Оказалось, что все испытанные соединения ингибируют ферментативную активность тиоредоксина при более низких концентрациях, чем известный ингибитор PX-12. Самую большую активность демонстрировали соединения 3a, L-3a, D-3a и 3b, для которых IC50 была приблизительно в 5 раз ниже, чем для PX-12.

Таблица 1

Испытанные соединения IC50 [мкМ]
PX-12 15,4
3a 3,2
L-3a 2,8
D-3a 3,5
3b 2,9
8a 8,6
8b 5,9

2.1.2. Оценка активности тиоредоксин-редуктазы с применением рекомбинантного фермента

Реакции, в которых определялась активность рекомбинантной тиоредоксин-редуктазы крысы, выполняли с применением хромогенной реакции с 5,5'-дитиобис-2-нитробензойной кислоты. NADP, образованный в результате активности тиоредоксин-редуктазы, реагирует с DTNB, придавая раствору желтый оттенок, интенсивность которой определяли спектрофотометрически при 412 нм после 5 и 15 мин инкубации при комнатной температуре. Реакцию выполняли с применением реагентов в соответствии с Thioredoxin Reductase Assay Kit (Sigma) и рекомбинантной тиоредоксин-редуктазы крысы с концентрацией 0,165 мкМ. В таблице 2 показаны значения IC50 ингибирования активности тиоредоксин-редуктазы с применением PX-12, 3a, 8a и 8b. Самым высокоактивным из испытанных соединений было PX-12, которое ингибировало активность тиоредоксин-редуктазы при низких микромолярных концентрациях (IC50 через 5 мин составила 13 мкМ). Среди остальных только соединение 3a незначительно ингибировало активность тиоредоксин-редуктазы, но при значительно более высоких концентрациях, чем PX-12 (IC50 приблизительно в три раза выше).

Таблица 2

IC50 ингибирования активности тиоредоксин-редуктазы [мкМ]
Время измерения от начала реакции PX-12 3a 8a 8b
5 мин 13 37,1 >40 >40
15 мин 24 >40 >40 >40

2.1.3. Оценка активности глутатион-редуктазы

Пространственная структура активных центров глутатион-редуктазы и ферментов системы Trx-TrxR показывает высокое сходство. Чтобы дополнительно оценить селективность оцениваемых соединений, их активность оценивали в отношении глутатион-редуктазы по сравнению с известным ингибитором PX-12. Реакции для определения активности рекомбинантной глутатион-редуктазы человека проводили с применением хромогенной реакции с 5,5'-дитиобис-2-нитробензойной кислоты, как и в случае с тиоредоксин-редуктазой. Активность определяли после 5 и 10 мин инкубации при комнатной температуре. Реакцию проводили с применением реагентов в соответствии с Glutathione Reductase Assay Kit (Sigma) и рекомбинантной тиоредоксин-редуктазы человека (Sigma) при концентрации 0,04 ед. Единственным активным соединением среди оцениваемой группы было PX-12, которое ингибировало активность глутатион-редуктазы в микромолярных концентрациях (IC50 после 5 мин составило 19,8 мкМ). Ни одно из остальных оценениваемых соединений (3a, 8a и 8b) не ингибировало активность глутатион-редуктазы, даже при концентрации 100 мкМ. Результаты, показанные в таблицах 1, 2 и 3, указывают, что соединения 3a, 8a и 8b являются значительно более селективными ингибиторами тиоредоксина, чем PX-12.

Таблица 3

IC50 ингибирования активности глутатион-редуктазы [мкМ]
Время измерения от начала реакции PX-12 3a 8a 8b
5 мин 19,8 >100 >100 >100
10 мин 28,6 >100 >100 >100

2.2. Оценка цитостатической/цитотоксической активности оцениваемых соединений

Цитостатическую/цитотоксическую активность оценивали с применением следующих линий опухолевых клеток: EMT6 (рак молочной железы мыши), PANC02 (рак поджелудочной железы мыши), B78 (меланома мыши), C-26 (рак толстой кишки мыши), K562 (человеческая хроническая миелогенная лейкемия), T24 (рак мочевого пузыря человека), RAJI (лимфома Беркитта человека), Ramos (лимфома Беркитта человека). Культуры поддерживали на следующих средах: DMEM (EMT6, PANC02, B78), RPMI (C-26, Raji, Ramos), IMDM (K562), МакКоя (T24) с добавлением 10% бычьей сыворотки (Invitrogen) и антибиотиков (Sigma).

Для определения цитостатической/цитотоксической активности оцениваемых соединений клеточные культуры пересевали в 96-луночный планшет. После 24 часов добавили ингибиторы в заданных концентрациях. Результаты определяли с применением колориметрических методов после 72 часов инкубации. Для определения цитостатической/цитотоксической активности применяли окрашивание кристаллическим фиолетовым (считывание при 595 нм) или MTT (Sigma; считывание при 570 нм).

В таблице 4 вписаны результаты экспериментов (LD50), в которых определяли цитостатическую/цитотоксическую активность эталонного ингибитора тиоредоксина PX-12 и соединения 3a. В большинстве оцениваемых линий опухолевых клеток эти соединения имеют одинаковое значение LD50. В отношении линии EMT6 (рак молочной железы мыши) соединение 3a, как выяснилось, было более чем в два раза более активно.

Таблица 4

LD50 оцениваемых соединений [мкМ] после 72 часов инкубации
Линия опухолевых клеток PX-12 3a
EMT6 12,7 5,3
PANC02 3,8 3,2
C-26 5,4 3,2
B78 5,3 4,3
RAJI 5,9 4,6
Ramos 3,7 3,3
K562 4,9 3,8
T24 4,5 5,1

Сходные анализы осуществляли для других оцениваемых соединений. Результаты показаны на фигуре 1. Все соединения проявляли цитостатическую/цитотоксическую активность в отношении опухолевых клеток, наиболее сильную в отношении клеток, происходящих из гематопоэтической системы (хроническая миелогенная лейкемия K562, лимфома Беркитта RAJI).

2.3. Анализ клеточного цикла - эффект оцениваемого соединения на клеточное деление

Клеточный цикл состоит из ряда событий, приводящих к клеточному делению. В клеточном цикле различают следующие фазы: G1 (интервал между делениями), S (удвоение генетического материала) и G2/M (деление или митоз). Анализ клеточного цикла с применением проточного цитометра позволяет определить процентную долю клеток на каждой фазе, а кроме того, процентную долю клеток в так называемой фазе субG1: клеток, генетический материал которых был разрушен в результате апоптоза или некроза.

Клеточный цикл оценивали с применением линии рака T24 после 72 часов инкубации с PX-12 и рацемической смесью 3a. Клетки окрашивали пропидия иодидом при 10 мкг/мкл и анализировали с помощью проточной цитометрии. Результаты этого анализа показаны на фигуре 2. Процентная доля делящихся клеток, удваивающих свой генетический материал (фаза S), явно ниже после инкубации с ингибиторами тиоредоксина.

Библиография

Berggren, M., Gallegos, A., Gasdaska, J.R., Gasdaska, P.Y., Warneke, J., Powis, G., Anticancer Res 1996, 16, pp. 3459-3466

Gromer S., Urig S., Becker K. Med. Res. Rev. 2004, 24, 1, pp. 40-89

May J.M., Mendiratta S, Hill K.E., Burk R.F., J. Biol.Chem., 1997; 272, pp. 22607-22610

Holmgren, A., J. Biol. Chem. 1989, 264, pp. 13963-13966

Ichijo, H., Nishida, E., Irie, K., ten Dijke, P., Science 1997, 275, pp. 90-94

Sasada, T., Nakamura, H., Ueda, S., Sato, N., Free Radic. Biol. Med. 1999, 27, pp. 504-514

Kirkpatrick, D. L., Kuperus, M., Dowdeswell, M., Potier, N., Biochem. Pharmacol. 1998, 55, pp. 987-994

Calabrese, V., Bates, B.E., Mancuso, C., Cornelius, C., Ventimiglia, B., Cambria, M.T., Di Renzo, L., De Lorenzo, A., Dinkova-Kostova D., Mol. Nutr. Food Res. 2008, 52, pp. 1062-1073

Fang, J., Lu, J., Holmgren, A., J. Biol. Chem. 2005, 280. pp. 25284-25290

Sun, Q., Wu, Y., Zappacosta, F., Jeang, K.T., Lee, B. J., Hetfield, L.D., Gladyshev, N.V., J. Biol. Chem. 1999, 274, pp. 24522-24530

Nordberg, J., Zhong, L., Holmgren, A., Arner, E. S., J. Biol.Chem. 1998, 273, pp. 10835-10842

Gromer, S., Arscott, L.D., Williams, C.H., Jr., Schirmer, R.H., Becker, K., J. Biol. Chem. 1998, 273, pp. 20096-20101

Marzano, C., Gandin, V., Folda, A., Scutari, G., Free Radic. Biol. Med. 2007, 42, pp. 872-881

1. Соединение с общей формулой (1):

где:
R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, фенил или бензил,
R2 обозначает водород или C1-C8 алкил-2-формамидацетатную группу, и
R3 обозначает ацильную группу карбоновой кислоты, выбранную из групп 2,6-дихлорбензойной или 2,6-ди(трифторметил)бензойной кислоты;
или его фармацевтически допустимая соль.

2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что оно выбрано из группы, включающей соединения:
(R)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;
(S)-2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;
2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;
2-((1-((2-этокси-2-оксоэтил)амино)-4-метил-1-оксопентан-2-ил)карбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат;
2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-бис(трифторметил)бензоат;
2-(бензилкарбамоил)аллил-2,6-дихлорбензоат.

3. Применение соединения с общей формулой (1) по пп. 1-2 в качестве лекарственного средства, обладающего ингибирующей активностью в отношении системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза.

4. Фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей активностью в отношении системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза, содержащая в качестве активного ингредиента соединение с общей формулой (1) по пп. 1-2 в количестве, достаточном для того, чтобы вызвать желаемый эффект, и фармацевтически приемлемый носитель.



 

Похожие патенты:

Производные аминокислот по настоящему изобретению предоставляют новые соединения общей формулы (I), где значения радикалов указано в описании. Производные аминокислот по настоящему изобретению представляют собой новые соединения, демонстрирующие превосходное анальгетическое действие не только в модели ноцицептивной боли на животных, но также и в модели нейропатической боли на животных, таким образом, производные аминокислот очень эффективны в качестве лекарственных средств для лечения различных заболеваний, сопровождающихся болью.

Изобретение относится к соединениям общей формулы (I), где Y выбран из -CRay=CRby- и -CHRay-CRby=CRcy-; каждый Ray, Rby и Rcy независимо выбран из атома водорода и незамещенного C1-C12 алкила; каждый R1, R2, R3, R4 и R5 независимо выбран из атома водорода и незамещенного C1-C12 алкила; R6 выбран из NR8R9 и OR10; W выбран из NR7; R7 представляет собой атом водорода; R8 представляет собой атом водорода; R10 представляет собой незамещенный C2-C12 алкенил; R9 представляет собой замещенный C2-C12 алкенил, который замещен в одной или более позициях галогеном, OR', OCONHR' и OH, защищенная простым силиловым эфиром, где R' представляет собой водород; каждый из R11, R12, R13, R14 и R15 независимо выбран из атома водорода, ORa, OSiRaRbRc; и каждый Ra, Rb и Rc независимо выбран из атома водорода и незамещенного C1-C12 алкила.

Изобретение относится к новым соединениям следующей общей формулы [Ia], в которой R1 представляет собой (1) атом водорода, (2) C1-C6алкильную группу, (3) C2-C6алкенильную группу, (4) C 2-C6алкинильную группу, (5) C1-C 6алкоксигруппу, (6) гидроксиC1-C6 алкильную группу, (7) C1-C6алкокси(C 1-C6)алкильную группу, (8) -CONR11 R12, в которой R11 и R12 являются одинаковыми или различными и каждый представляет атом водорода или C1-C6алкильную группу, (9) фенильную группу или (10) пятичленную гетероарильную группу, которая содержит по меньшей мере один гетероатом, выбранный из группы, состоящей из атома азота и атома кислорода и которая может быть замещена C1-C6алкильной группой; R2 представляет собой (1) атом галогена, (2) C1-C6алкильную группу, (3) гидроксигруппу или (4) C1-C6 алкоксигруппу; p равно 0, 1, 2 или 3; X представляет собой атом углерода или атом азота; m1 равно 0, 1 или 2; m2 равно 0 или 1; причем спирокольцо AB может быть замещено 1-5 одинаковыми или различными заместителями, выбранными из группы, состоящей из (1) гидроксигруппы, (2) C1-C6алкильной группы, (3) C1-C6алкоксигруппы и (4) оксогруппы; n1 равно 0, 1, 2, 3 или 4; n2 равно 1, 2, 3 или 4; n3 равно 0, 1 или 2, при условии, что n2+n3 равно 2, 3 или 4; и связь, представленная символом , обозначает одинарную связь или двойную связь при условии, что три соседних атома углерода не образуют алленовую связь, представленную формулой: , или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к органической химии, а именно к композиции каликсаренов, способной сорбировать азо-красители из водных растворов, и может быть использовано в процессах сорбирования водорастворимых азо-красителей, например, для очистки промышленных сточных вод, которая была и остается одной из главных экологических проблем.

Изобретение относится к органической химии, а именно к новому производному тетраметилоксифенилкаликс[4]арена, способному сорбировать азо-красители из водных растворов.

Изобретение относится к производному тетрадодецилоксифенилкаликс[4]арена формулы которое может применяться для сорбции азо-красителей из водных растворов и расширяет арсенал известных средств указанного назначения.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложены: клещевой аллерген домашней пыли, представляющий собой полипептид, содержащий определенную аминокислотную последовательность, приведенную в описании в перечне списка последовательностей; кодирующая полипептид молекула ДНК; экспрессирующий вектор на её основе и трансформированная им рекомбинантная клетка для экспрессии полипептида.

Изобретение относится к соединениям формулы (I), их рацемической смеси, энантиомерам, диастереомерам и фармацевтически приемлемым солям, обладающим свойствами ингибитора Syk, фармацевтической композиции и лекарственному препарату на их основе, их применению, способу ингибирования и способу лечения с их использованием.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело против фракталкина (ФКН, CX3CL1) и его фракталкин-связывающий фрагмент, охарактеризованные последовательностями вариабельных доменов.

Изобретение относится к твердой форме, включающей кристаллическое соединение формулы 1: или его фармацевтически приемлемой соли, гидрату или сольвату. Кристаллическое соединение формулы 1 представляет собой кристаллическую форму А формулы 1 и имеет рентгеновскую порошковую дифрактограмму, содержащую пики, в приблизительных положениях пиков: 17,26±0,10, 21,60±0,10 и 27,73±0,10 градусов 2θ и по меньшей мере в приблизительных положениях пиков: 9,68±0,10, 24,68±0,10, 25,48±0,10 и 29,08±0,10 градусов 2θ.

Изобретение относится к медицине и предназначено для предупреждения развития вариабельного иммунодефицита с преобладающими отклонениями в количестве и функциональной активности В-клеток.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к конъюгатам Apo A с терапевтическими полипептидами, и может быть использовано в медицине. Получают конъюгат, содержащий молекулу Apo A-I или ее функционально-эквивалентный вариант, такой как Apo А-IV или Аро A-V, ковалентно связанную с представляющим терапевтический интерес полипептидом, выбранным из интерферона, ингибитора TGF-бета Р144 или Р17, IL-15, кардиотрофина-1, порфобилиногендеаминазы, инсулина и фактора VII.

Изобретения относятся к области биотехнологии. Предложены: варианты моноклонального антитела против VEGF или его антигенсвязывающего фрагмента, которые характеризуются тем, что содержат 6 CDR и при этом возможно замену Т51А в CDR-L2, а также имеют одну или комбинацию замен по сравнению с антителом бевацизумабом, а именно: 1.

Изобретение относится к кристаллической безводной δ-модификации N-(2-хлор-6-метилфенил)-2-[[6-[4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинил]-2-метил-4-пиримидинил]амино]-5-тиазолкарбоксамида, характеризующейся следующим набором межплоскостных расстояний (d, Å) и соответствующих им интенсивностей (Iотн., %): 9,637 - 69,1%; 7,928 - 29,2%; 6,415 - 100%; 5,819 - 39,4%; 5,529 - 3,0%; 4,941 - 27,2%; 4,887 - 5,6%; 4,549 - 72,6%; 4,092 - 3,8%; 4,037 - 3,2%; 3,847 - 35,0%; 3,782 - 5,8%; 3,751 - 5,2%; 3,642 - 3,9%; 3,607 - 2,7%; 3,442 - 16,6%; 3,383 - 3,0%; 3,183 - 27,4%; 3,122 - 21,7%; 3,099 - 5,6%; 2,958 - 6,9%; 2,905 - 3,4%; 2,763 - 7,5%; 2,757 - 7,8%; 2,694 - 9,2%; 2,551 - 12,6%; 2,516 - 2,6%; 2,463 - 3,9%; 2,292 - 3,9%; 2,270 - 5,0%; 2,137 - 4,0%; 2,112 - 3,5%; 2,024 - 3,7%; 1,906 - 3,4%; 1,867 - 3,0%; 1,780 - 6,0%.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии. Предложено гуманизированное антитело и его фрагмент, способные специфически связывать бета-амилоид, охарактеризованные фрагментами последовательностей на основе антитела мыши 8F5, и Fc-областью человеческого IgG1, содержащей аминокислотную замену D265A; а также кодирующая нуклеиновая кислота, вектор экспрессии, продуцирующие антитело или его фрагмент клетки, способ продуцирования антитела или его фрагмента; композиция, применение антитела и его фрагмента для изготовления лекарственного средства, способ предупреждения, лечения или облегчения эффектов амилоидоза; способ диагностики амилоид-ассоциированных заболеваний или состояний, способ определения степени нагрузки амилоидогенных бляшек и тест-набор для выявления и диагностики амилоид-ассоциированных бляшек.

Изобретение относится к амидным соединениям структурной формулы 1, которые обладают ингибирующей активностью в отношении 11β-HSD1 фермента. В формуле 1 X представляет N или CR, и Y представляет N или СН при условии, что X и Y не являются в одно и то же время углеродом; Z представляет N или СН; R1 и R2 представляют независимо водород, (С3-С10)циклоалкил, норборнил, адамантил или норадамантил, или R1 и R2 могут быть связаны друг с другом вместе с атомами азота, к которым они присоединены, образуя (С5-С10) насыщенный или ненасыщенный гетероцикл или сконденсированный гетероцикл, при условии, что R1 и R2 не являются в одно и то же время водородом; L представляет одинарную связь, -СО-, -SO2-, -(CR21R22)-(СН2)c- (с представляет целое число 0-5), , -СО(CR21R22)d- (d представляет целое число 1-6), (С3-С10)циклоалкилен, (С6-С20)арилен или 5-6-членный гетероарилен, включающий один или два гетероатома, выбранных из N; R21 и R22 представляют независимо водород или (C1-С10)алкил, R представляет водород или гидроксил; R4 и R5 независимо представляют водород или (С1-С10)алкил, или R4 и R5, связанные вместе, образуют 6-членный ненасыщенный карбоцикл; R6 и R7 представляют независимо водород, (С1-С10)алкил или галоген; R31-R38, R41-R43 и R46 представляют независимо водород или (С1-С10)алкил; и m и n независимо представляют целое число 0-3 при условии, что m+n представляют целое число 2 или более.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к выделенному пептиду, который имеет индуцибельность цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), а также к его применению. Предложенный пептид может использоваться в противораковой иммунотерапии, более конкретно, в противораковых вакцинах.

Изобретение относится к соединениям формулы или их фармацевтически допустимым солям, где в формуле R1 обозначает линейную или разветвленную C1-C8 алкильную группу, фенил или бензил; R2 обозначает водород или C1-C8 алкил-2-формамидацетатную группу; R3 обозначает ацильную группу карбоновой кислоты, выбранную из групп 2,6-дихлорбензойной или 2,6-дибензойной кислоты. Также изобретение относится к применению соединений формулы и фармацевтической композиции, их содержащей. Технический результат - соединения формулы, обладающие ингибирующей активностью в отношении системы тиоредоксин - тиоредоксин-редуктаза. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 2 ил., 4 табл.

Наверх