Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на формирование восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной



Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на формирование восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной
Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на формирование восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной
Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на формирование восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной
Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на формирование восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной

 


Владельцы патента RU 2570742:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения РАМН (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для установления формирования восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции. Для этого в периферической крови измеряют титр антител к цитомегаловирусу и содержание глутатионредуктазы в эритроцитах и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 и снижении активности глутатионредуктазы до 4,48±0,22 Ед/гHb устанавливают подавление формирования восстановленного глутатиона в эритроцитах. Способ позволяет установить нарастание оксидативных процессов в мембранах эритроцитов за счет определения снижения активности глутатионредуктазы в эритроцитах. 4 ил.

 

Цель работы - показать влияние цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) на содержание восстановленного глутатиона в эритроцитах периферической крови в силу подавления активности глутатионредуктазы.

Глутатион - активное вещество, принимающее участие во многих окислительно-восстановительных процессах в организме. Он обеспечивает функционирование многих ферментов, содержащих SH группы. Восстановленный глутатион разрушает в эритроцитах H2O2 в ходе реакции, катализируемой глутатионпероксидазой GGSH+H2O2→GSSG+2H2O.

Эта реакция подтверждает защитную роль глутатиона в эритроцитах против оксидантов [1, 2, 7, 12].

Больше всего глутатион находят в таких органах как почки, печень, головной мозг, эритроциты периферической крови [3]. Восстановление окисленного глутатиона происходит под влиянием глутатионредуктазы, что отчетливо наблюдается в эритроцитах периферической крови [9, 10]. Установлено, что восстановленный глутатион защищает гемоглобин эритроцитов от различных окислителей, поддерживая тем самым структурную устойчивость их мембран [2, 8]. Этот процесс протекает успешно в связи с включением в эту реакцию глутатионпероксидазы, катализирующей окисление восстановленного глутатиона и разрушая перекись водорода.

Гемолитическая анемия проявляется у новорожденных в связи с недостаточностью глутатионредуктазы, от которой зависит уменьшение содержания в эритроцитах G-SH. Нарушение реакций глутатионовой системы приводит к ряду острых интоксикационных воздействий на клеточные системы организма [4, 5].

Так, перекись водорода и активные радикалы, образующиеся в результате перекисного окисления липидов клеточных мембран, приводят к дестабилизации и делают их проходимыми для многих структур из окружающей среды.

Глутатионредуктаза очень специфична к глутатиону. Причины изменения интенсивности реакции с участием глутатионредуктазы до настоящего времени точно не установлены. Поэтому прототипа, освещающего механизм подавления активности глутатионредуктазы в эритроцитах, не имеется.

Заявленный способ имеет следующие приемы.

1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания CO РАМН. Обследовано 25 рожениц в возрасте 18-25 лет с хронической цитомегаловирусной инфекцией в стадии обострения (основная группа) и 20 беременных без патологии (контрольная группа). Диагноз обострения хронической цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности (65%), а также наличия ДНК к ЦМВ.

2. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с учетом человека» с поправками 2000 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

3. Верификация ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществлялись методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax 2100» (USA) с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), методами ПНР на аппарате ДТ-96 (Россия) с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

4. Глутатион в эритроцитах периферической крови определяли гистохимическим методом путем помещения их в раствор 10% нитропрусида натрия с добавлением 2% аммиака, после чего изготовлялись мазки, фиксированные 1-2 мин в 96° этаноле. Количественное содержание восстановленного глутатиона в эритроцитах определяли компьютерным цитофотометрическим методом. Глутатионредуктаза определялась спектрофотометрическим методом с использованием набора реагентов «Sentinel Diagnostics» (Италия) на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

5. Содержание перекисей липидов в мембранах эритроцитов определяли по методу И.Д. Стальной, Т.Г. Гаришвили [11].

6. Статистическая обработка проводилась непарным параметрическим критерием Стьюдента и методом Фишера.

В процессе исследования были получены следующие результаты: при обострении цитомегаловирусной инфекции в периферической крови беременной наблюдалось снижение в эритроцитах периферической крови активности глутатионредуктазы: при титре антител 1:400 - до 7,82±0,18 Ед/гHb; при титре 1:800 - до 6,70±0,20 Ед/гHb, а при титре 1:1600 - до 4,48±0,22 Ед/гHb (контроль - 8,36±0,13 Ед/гHb). По мере снижения активности глутатионредуктазы в эритроцитах снижалось содержание восстановленного глутатиона: при титре антител 1:400 до 35,0±1,3 усл. ед. (фиг.1); при титре антител 1:800 - до 23,0±0,95 усл. ед. (фиг.2), а при титре антител 1:1600 - до 17,6±1,1 усл. ед. (фиг.3); контроль - 56,0±1,5 усл. ед. (фиг.4). Снижение восстановленного глутатиона приводило к нарастанию оксидативных процессов в мембранах эритроцитов до 30,25±1,3 ммоль/л (контроль - 22,5±1,7 мкмоль/л).

ЛИТЕРАТУРА

1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. 1998. М.: Медицина. 750.

2. Владимиров Ю.А. Активные формы кислорода и азота: значение для диагностики, профилактики и терапии. Биохимия. 2004. 69. 1; 53-66.

3. Воробьев А.И. Руководство по гематологии. 2007. М.: «Ньюдиамед». 1275.

4. Глушков С.И., Куценко С.Л. Новикова Т.И., Аксенов В.В. Состояние системы глутатиона в тканях сердца крыс при острых отравлениях доксорубицином. Вопросы онкологии. 2005. 5 г.. 1; 108-112.

5. Глушков С.И. Нарушения системы глутатиона и их роль в патогенезе острых интоксикаций ксенобиотиками с различными механизмами токсического действия. С.П. 2007. Автореф… дисс. докторской. 35.

6. Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. 2001. М.: «Наука» / Интерпериодика. 343.

7. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатиона. Успехи биол. химии. 1990. 110. 1(4); 20-23.

8. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Обмен глутатиона. Успехи биол. химии. 1990. 31; 157-179.

9. Луценко М.Т., Андриевская И.А. «Способ диагностики дыхательной функции эритроцитов беременных путем определения активности глутатионредуктазы в эритроцитах периферической крови при герпес-вирусной инфекции». Патент №2456613. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 20.07.2012.

10. Луценко М.Т., Андриевская И.А. «Способ определения изменений активности глутатионпероксидазы в эритроцитах периферической крови беременных при вспышке герпес-вирусной инфекции». Патент №2405149. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 27.11.2010.

11. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового альдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты. 1977. М.: «Медицина». 390.

12. Чоккинэ В.К., Граева С.Н., Невоя А.В., Граева О.И., Бешетя С.Т., Георгиу З.Б. Серосодержащие аминокислоты в диагностике, целенаправленном поддержании и формировании здоровья. Buletinul ASM. Stintele vietii. 2011. 3(315); 1-35.

Способ установления подавления формирования восстановленного глутатиона в эритроцитах беременной при обострении цитомегаловирусной инфекции, включающий измерение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу и содержание глутатионредуктазы в эритроцитах, и при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 и снижении активности глутатионредуктазы до 4,48±0,22 Ед/гHb устанавливают подавление формирования восстановленного глутатиона в эритроцитах.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и биологии и может быть использовано для определения функционального состояния клетки. Для этого растровое изображение клетки и ее органелл получают в функции от оптической разности хода, представленной как фазовая толщина локального участка клетки или ее органелл, получают построчным последовательным сканированием каждого элемента клетки или ее органелл, попадающего в строку, с последующим переходом в следующую строку, расположенную под строкой, прошедшей сканирование.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования исхода сепсиса, включающий определение абсолютного количества эозинофилов (КЭ), отличающийся тем, что КЭ определяют также в динамике на 3-5-е сутки пребывания в отделении реанимации и интенсивной терапии, и если в динамике на 3-5-е сутки КЭ увеличивается в два и более раза по сравнению с 1-2-ми сутками, то прогнозируют благоприятный исход с уже установленным диагнозом сепсис, если существенно не изменяется, то прогнозируют летальный исход у пациентов с сепсисом, при этом заключают, что риск развития летального исхода у пациентов с сепсисом при КЭ менее 120 кл./мкл увеличивается на 62,5% по сравнению с септическими пациентами, которые имеют КЭ более 120 кл./мкл.

Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, и может быть использовано для прогнозирования поражения нервной системы в ранней стадии болезни Кавасаки.

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимической лабораторной диагностике, и может быть использовано для определения жесткости сосудистой стенки у пациентов с артериальной гипертонией и абдоминальным ожирением.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики заболеваний с использованием элементов-индикаторов. Согласно изобретению у пациентов старше 18 лет выявляют в пробе крови содержание следующих элементов: Cr менее 0,0119±0,010 мг/кг; Eu менее 4,33*10-5±8,57*10-6 мг/кг; Tb менее 2,06*10-5±9,06*10-6 мг/кг; Er менее 2,27*10-5±9,96*10-6 мг/кг; Tm менее 1,31*10-5±9,85*10-6 мг/кг; Lu менее 1,25*10-5±1,04*10-5 мг/кг; Ta менее 2,31*10-5±2,11*10-5 мг/кг; Ba более 0,0152±0,009 мг/кг; V более 0,0122±0,0079 мг/кг; Pd более 0,000187±0,00013 мг/кг, определяют показатель: Y=(10-3*3*Cr+5*(Eu+Tb+Er+Tm+Lu+Ta))/(10-1*(V+4*Ba)+5*Pd) и диагностируют заболевание сердечно-сосудистой системы (ССС) и/или онкологическое заболевание при Y меньше 0,026 и их отсутствие при Y больше 0,093.

Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и описывает способ определения высокого тромбогенного риска при беременности для проведения гепаринопрофилактики.
Изобретение относится к медицине и предназначено для предупреждения развития вариабельного иммунодефицита, с преобладанием нарушений иммунорегуляторных Т-клеток (D83.1) у детей с наличием неприемлемого риска развития вариабельного иммунодефицита.

Изобретение относится к медицине, а именно к болезням внутренних органов, и предназначено для прогнозирования обострения бронхиальной астмы. Проводят забор периферической крови на стадии ремиссии заболевания.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к иммунологической диагностике заболеваний крупного рогатого скота (КРС) в общем комплексе противотуберкулезных мероприятий.

Изобретение относится к медицине, а именно к медицине труда. Сущность способа: в мазке крови определяют количество базофилов, а в мазке со слизистой носа определяют количество эозинофилов.
Изобретение относится к области медицины и ветеринарии применительно к взятию, хранению и транспортировке проб крови или сыворотки с целью последующего проведения анализа материала на содержание биологически активных веществ. Набор содержит упаковочную коробку, одно устройство для прокалывания кожных покровов и получения капель крови, упаковку антисептического средства, рабочую карточку, держатель для высушивания рабочих карточек, бланк заказа для проведения лабораторных анализов необходимого числа образцов крови, полимерный контейнер для обеспечения сохранности рабочих карточек с высушенными образцами крови, почтовый конверт, обеспечивающий внешнюю оболочку полимерного контейнера с рабочей карточкой и бланком заказа при их транспортировке или почтовой пересылке, а также инструкцию к набору. Достигается повышение надежности хранения и транспортировки. 9 з.п. ф-лы.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения кислотной устойчивости эритроцитов. Способ заключается в том, что в пробирку с кровью добавляют антикоагулянт (трилон Б) из расчета 10 мкл на 2 мл крови. Проводят измерения при длине волны 0,450 нм. Используют физиологический раствор 0,65% NaCl. Затем после гемолиза рассчитывают эритрограмму резистентности и определяют процентное распределение эритроцитарных мембран по стойкости. Заявленный способ прост и эффективен для определения кислотной устойчивости эритроцитов. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и касается способа получения растворимого фибриногена, заключающегося в том, что свежезамороженную плазму размораживают и центрифугируют, полученный криопреципитат солюбилизируют и подвергают обработке гидроокисью алюминия, полученную суспензию центрифугируют, образовавшийся осадок, содержащий нецелевые белки, отбрасывают, супернатант подвергают обработке полиэтиленгликолем, суспензию центрифугируют, надосадочную жидкость отбрасывают, а осадок солюбилизируют и подвергают вирусной инактивации, освобождают от продуктов вирусной инактивации, встряхивая с вазелиновым маслом и переосаждая глицином, процедуру осаждения повторяют дважды, полученный раствор фибриногена разливают и лиофильно высушивают. Изобретение обеспечивает получение фибриногена, который обладает быстрой растворимостью. 2 пр., 2 ил., 3 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может использоваться для прогнозирования частой заболеваемости ОРВИ у детей раннего возраста со спастическими формами ДЦП. Для этого у ребенка второго года жизни методом хемилюминесценции определяют антиоксидантную активность мочи по величине тангенса угла наклона кривой к оси времени и при значении показателя менее 21,0 мВ/сек прогнозируют частую заболеваемость ОРВИ до 3-летнего возраста. Изобретение позволяет своевременно выделить группу риска формирования частой заболеваемости ОРВИ среди указанной группы детей и назначить им необходимые профилактические мероприятия. Снижение вероятности реализации риска частой заболеваемости ОРВИ повысит реабилитационный потенциал детей. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторным методам исследования изменения состояния цитоскелета эритроцитов. Для этого эритроциты отмывают от плазмы крови, помещают на водяную баню при 49,2°C и прогревают в течение 15 мин. После этого эритроциты фиксируют с помощью глутарового альдегида. Об изменении состояния цитоскелета эритроцитов судят по изменению морфологической картины. Способ обеспечивает определение состояния цитоскелета эритроцитов при различных заболеваниях человека. 3 ил., 3 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для определения функционального состояния яичников у самок сельскохозяйственных животных в условиях первой лактации. Способ включает забор крови из яремной вены, исследование содержания общего холестерина и показателя альбумино-глобулинового коэффициента и суждение о функциональном состоянии яичников у коров-первотелок. При значениях общего холестерина 5,2-7,8 ммоль/л и показателя альбумино-глобулинового коэффициента в пределах 1,0-1,8 дополнительно исследуют содержание общего белка, калия и магния. При достижении значений содержания общего белка более 65,6 г/л, концентраций калия 4,2-4,8 ммоль/л и магния 1,0-1,2 ммоль/л диагностируют активно функционирующие яичники с возможностью последующего оплодотворения. Когда величины указанных показателей не достигают вышеуказанных оптимальных значений общего белка, калия и магния, делают заключение о снижении функциональной активности яичников с прохождением неполноценных циклов у коров-первотелок. Способ позволяет доступно в условиях животноводческих и фермерских хозяйств на основе исследования в сыворотке крови общего белка, альбумино-глобулинового коэффициента, общего холестерина, калия и магния более точно определять функциональное состояние яичников и условия для формирования полноценных эстральных циклов у молодых коров в период первой лактации. 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для предупреждения развития вариабельного иммунодефицита с поражением, преимущественно, клеток моноцитарно-макрофагальной системы иммунитета у детей, потребляющих питьевую воду с остаточными количествами продуктов гиперхлорирования. Осуществляют сочетанное применение курсом 2 раза в год лекарственных средств: Ликопид перорально по 1 мг внутрь 1 раз в сутки в течение 10 дней; Эслидин перорально в возрасте от 3 до 7 лет - по 1 капсуле 2 раза в сутки, старше 7 лет - по 1 капсуле 3 раза в сутки, в течение 21 дня. Способ позволяет повысить эффективность предупреждения развития у детей старше 3 лет вариабельного иммунодефицита с поражением, преимущественно, клеток моноцитарно-макрофагальной системы иммунитета, связанного с остаточными количествами токсикантов. 3 табл.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики наличия заболевания у животных по изменению лейкограммы после ультразвукового воздействия. Способ включает воздействие на образцы крови объемом от 1 мл до 1,5 мл, помещенные в кювету, непрерывной бегущей ультразвуковой волной частотой 880 кГц интенсивностью от 0,05 до 0,1 Вт/см2 с экспозицией воздействия на кровь животных от 15 с - 30 с, обработку образцов крови в абсолютно одинаковых условиях, поддержание постоянной температуры образцов в кюветах с проточным охлаждением и анализ морфологического состояния клеток методами световой микроскопии. При уменьшении числа лимфоцитов и изменении числа нейтрофилов диагностируют наличие заболевания. Изобретение позволяет регистрировать наличие ухудшения гематологических показателей больных животных и диагностировать наличие или отсутствие заболевания по изменению лейкограммы. 2 ил., 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к поглощающему изделию, выполненному с возможностью определения ионной силы мочи. Изделие включает непроницаемый для жидкости слой; проницаемый для жидкости слой; поглощающий внутренний слой, расположенный между непроницаемым для жидкости слоем и проницаемым для жидкости слоем; устройство с латеральным потоком, интегрированное в изделие и расположенное таким образом, что оно находится в жидкостном соединении с потоком мочи, выделяемой пользователем изделия. Устройство включает: буферную зону, которая содержит полиэлектролит и зону обнаружения или индикаторную зону, где зона обнаружения содержит недиффузионно иммобилизованные: буферный компонент, включающий слабую полимерную кислоту и слабое полимерное основание с pKa ≤ 10-3, и вещество из класса заряженных полимерных сурфактантов, чувствительных к относительным концентрациям ионов в растворе образца, и заряженный pH-индикатор, заряд которого противоположен заряду заряженного полимерного сурфактанта, где заряженный полимерный сурфактант растворим в количествах, превышающих или равных приблизительно 1 масс. % (≥ 1 масс. % растворенного вещества) в воде и водных растворах, имеющих низкую концентрацию ионов, составляющую ≤ 0,1 масс. % солей, но нерастворим (< 1 масс. % растворенного вещества) в водном растворе с высокой концентрацией ионов, составляющей > 0,1 масс. % солей. 7 з.п. ф-лы, 3 ил., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики туберкулеза, заключающийся в том, что выделяют мононуклеарные клетки периферической крови, культивируют их в питательной среде, получают образец супернатанта культуры мононуклеарных клеток периферической крови и проводят иммуноферментный анализ (ИФА), при этом перед проведением ИФА в лунки отрицательного контроля вносят питательную среду для культивирования клеток, а в лунки положительного контроля вносят сыворотку крови больного туберкулезом, заведомо содержащую анти-Mtb IgG и анти-Mtb IgA и разведенную 1:100, при ИФА используют в качестве сорбента раствор антигенов Mtb и определяют оптическую плотность образца супернатанта культуры мононуклеарных клеток периферической крови испытуемых ОПобр, образца отрицательного контроля К- и образца положительного контроля К+, после чего определяют критическое значение оптической плотности из соотношения ОПкр=К-+0,1 и при значениях ОПобр>ОПкр и К+>ОПкр устанавливают диагноз активный туберкулез, при значениях ОПобр<ОПкр и К+>ОПкр устанавливают отсутствие туберкулезной инфекции или латентную туберкулезную инфекцию, а при значениях К+<ОПкр и любых значениях ОПобр результат анализа считают недостоверным. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики туберкулеза при одновременном расширении области применения способа и для дифференциальной диагностики туберкулеза, и латентной инфекции. 6 пр.
Наверх