Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы

Изобретение относится к области профилактической медицины и может быть использовано для экспресс-обнаружения яиц геогельминтов в пробах почвы. Для этого 25 г пробы исследуемой почвы смешивают с 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода. Содержимое отстаивают после перемешивания, в результате чего на линии соприкосновения раствора с верхней границей почвы формируется зона, отличная по цвету от исследуемого образца. Из этой зоны пипеткой отбирают материал для микроскопирования и просматривают под увеличением ×40. Изобретение обеспечивает быстрый и точный способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы при санитарно-паразитологическом исследовании. 3 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области профилактической медицины и санитарной паразитологии, экологии человека и может быть использовано как экспресс-способ для обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы.

Геогельминты - гельминты, передающиеся через почву, являются наиболее распространенными паразитами в мире. Заболеваемость геогельминтозами, по оценкам Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), более одного миллиарда жителей нашей планеты (Acceleratingworktoovercometheg-lobalimpactofneglectedtropicaldiseases. A roadmap for implementation. Executive summary. \\WorldHealthOrganization, 2012, p. 12). Геогельминты -Ascaris lumbricoides, Ascaris suum, Toxocara canis встречаются практически повсеместно не только в местностях, характеризующихся плохими санитарными условиями, но и очень часто в благополучных мегаполисах в песке на детских площадках и в песочницах. Наиболее подверженная группа риска заражения геогельминтами - дети. В современных условиях необходимы быстрые - экспресс способы обнаружения яиц геогельминтов для проведения профилактических мероприятий и постоянного мониторинга за очагами геогельминтозов и факторами риска распространения инвазий и эпидемиологически значимыми объектами мегаполисов, растениеводческих хозяйств и пищевой промышленности, а также за объектами питьевого и хозяйственного водоснабжения (SingerBH, CastroMC (2007) Bridgestosustainabletropicalhealth. \\ProcNatlAcadSciUSA 104: 16038-16043).

Существующие на сегодняшний день способы санитарно-гельминтологического исследования почвы трудоемки и требуют значительного времени (3-3,5 часа, включая пробоподготовку) для проведения исследований, кроме того, проведение таких исследований возможно только в специализированных лабораториях.

Все известные способы основаны на применении различных флотационных растворов. Для обнаружения яиц гельминтов в почве используется комбинированный способ Романенко, где в качестве флотационного раствора используется насыщенный раствор нитрата натрия (Романенко НА., Падченко И.К., Чебышев Н.В. Санитарная паразитология. - М.: Медицина, 2000, стр. 231 -275). Для исследования по способу Романенко отбирают 25 г почвы, помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды. Смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин.

Всплывшие крупные частицы сразу же удаляют. После центрифугирования в течение 3 мин при 800-1000 об/мин воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл насыщенного раствора нитрата натрия. Перемешивают палочкой и вновь центрифугируют 3 мин.

Пробирки устанавливают в штатив, доливают тем же раствором до образования выпуклого мениска, накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости. Через 15 мин предметное стекло снимают, на влажную поверхность добавляют несколько капель 50% водного раствора глицерина и микроскопируют. С целью повышения эффективности выявления яиц рекомендуется снятие препарата повторить 2-3 раза.

Основными недостатками данного метода являются:

- насыщенный раствор нитрата натрия, а также другие альтернативные растворы, такие как растворы тиосульфата натрия и натриевой селитры, очень быстро кристаллизуются, что затрудняет просмотр проб и снижает вероятность выявление яиц гельминтов;

- применение нескольких последовательных промывок приводит к потери исследуемого материала, что в свою очередь влияет на точность определения количества яиц геогельминтов в пробе почвы;

- значительное время на подготовку флотационного раствора и проведение исследования образца почвы на наличие гельминтов 3-3,5 часа.

Прототипом данного способа является «Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы» (патент РФ №2466388):

Способ выявления яиц гельминтов, клещей и ооцист простейших в пробах почвы заключается в том, что пробу почвы весом 25 г помещают в центрифужную пробирку вместимостью 250 мл и заливают 150 мл воды, смесь тщательно размешивают стеклянной палочкой в течение 5 мин или с помощью электромешалки 1 мин и центрифугируют в течение 3 мин при 800-1000 об/мин, воду сливают, а в пробирки добавляют 150 мл трехкомпонентной флотационной системы, состоящей из насыщенных растворов цинка хлорида (2 кг ZnCl2 на 1 л), натрия хлорида (0,42 кг NaCl на 1 л) и глицерина, взятых в соотношении 1:1:1, в пробирку доливают тот же раствор до образования выпуклого мениска, пробирку накрывают обезжиренным предметным стеклом так, чтобы оно касалось слоя жидкости, через 20-30 мин стекло снимают и микроскопируют, снятие препарата рекомендуется повторить 2-3 раза.

Основными недостатками данного способа являются:

- использование сложного флотационного раствора;

- быстрая кристаллизация флотационного раствора;

- потеря исследуемого материала при центрифугировании и удаления раствора;

- значительное (2-2,5 часа) время на исследование.

Задача изобретения - повышение точности определения яиц гельминтов в пробах почвы (за счет избавления от кристаллизации флотационного раствора и уменьшения потери исследуемого материала путем исключения последовательных промывок), снижение трудоемкости процесса и значительное уменьшение (до 30-35 мин) времени обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.

Поставленная задача решается способом обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы, включающим смешивание исследуемого образца почвы с флотационным раствором и последующее микроскопирование, отличающимся тем, что в качестве флотационного раствора используют 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода на 25 г пробы почвы.

Практически способ осуществляют следующим образом. К 25 г образца почвы, помещенного в большую центрифужную пробирку, добавляют 25 мл 1,4-1,6% перекиси водорода. Содержимое перемешивают маленькими стеклянными палочками и отстаивают в течение 4-6 минут. Перемешивание повторяют дважды. Затем пробирку оставляют отстаиваться на 20-25 минут. В процессе реагирования почвы и перекиси водорода почва поднимается выше уровня жидкости и оседает на стенках пробирки. Ее смывают небольшим количеством раствора перекиси водорода, также смывают частички почвы с палочки, которую используют для перемешивания образца, с целью недопущения возможных потерь в пробе. В процессе отстаивания на линии соприкосновения перекиси водорода с верхней границей образца почвы формируется зона, отличающаяся по цвету от основной массы исследуемого образца, из которой пипеткой забирается материал для микроскопирования на предметном стекле. Для обнаружения яиц геогельминтов, которые могут находиться в образце, необходимо микроскопировать не более трех предметных стекол. Полученные препараты просматривают под увеличением ×40, для удобства просмотра можно добавить раствор Люголя.

Предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет в 98% случаев в 2-2,5 раза быстрее по сравнению с используемыми на сегодняшний день способами обнаружить яйца геогельминтов.

Основой предлагаемого способа является способность перекиси водорода в определенной концентрации взаимодействовать с частичками почвы исследуемого образца и поднимать вверх яйца гельминтов. Подбор концентрации раствора перекиси водорода был определен экспериментальным способом. Его результаты представлены в табл. 1.

Таблица 1
Концентрация перекиси водорода Недостатки Преимущества
3-4% Слишком активное взаимодействие с почвой, отчего появляется много пузырьков воздуха, мешающих просмотру образца под микроскопом Очень быстро поднимает частички почвы и яйца гельминтов к поверхности
1,4-1,6% Не выявлено Оптимальная концентрация для просмотра препаратов почвы с яйцами геогельминтов
1,0-1,4% Недостаточная концентрация для подъема яиц геогельминтов над основным пластом почвы Отсутствуют
0,5-1,0% Недостаточная концентрация для подъема яиц геогельминтов над основным пластом почвы Отсутствуют

Были проведены по 100 испытаний с образцами почвы и песка. Авторами проведены сравнительные исследования заявленного способа со способом Романенко (табл. 2).

Таблица 2
Способ Романенко Патентуемый способ
Время пробоподготовки и проведения исследований 180-210 минут 30-35 минут
Необходимые реагенты Гидроксид натрия (NaOH), Нитрат натрия (NaNO3) Перекись водорода (Н2O2)
Среднее количество выявляемых яиц (в 100 опытах) 4,4 8,6

Пример 1. Проба песка общей массой 300 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.

При исследовании способом Романенко яиц гельминтов не было выявлено.

Применение заявленного способа позволило выявить яйца Тохосаrasp.и Trichuristrichiura.

Пример 2. Проба почвы общей массой 200 г. Забор пробы осуществлялся в соответствии со способом Романенко.

При исследовании методом Романенко яиц гельминтов не выявлено.

По предлагаемому способу при исследования почвы выявлено яйцо Toxocarasp.

Таблица 3
Сравнительная эффективность выявления яиц геогельминтов в пробах почвы
Определение числа яиц геогельминтов в пробе
№ пробы почвы Способ Романенко Способ, представленный в патенте РФ №2466388 Патентуемый способ
1 2 5 7
2 3 6 9
3 2 3 6
4 3 2 5
5 1 7 12
6 2 3 6
7 3 4 7
8 2 3 5
9 1 3 4
10 2 5 4

Из представленных данных следует, что предлагаемый способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы позволяет повысить точность определения яиц гельминтов в пробах почвы, снизить трудоёмкость процесса и значительно уменьшить (до 30-35 мин) время обнаружения яиц гельминтов в исследуемых образцах почвы.

Это позволяет использовать предлагаемый способ как для проведения санитарно-паразитологических исследований, так и для проведения научных исследований.

Способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы, включающий смешивание исследуемого образца почвы с флотационным раствором и последующее микроскопирование, отличающийся тем, что в качестве флотационного раствора используют 25 мл 1,4-1,6% раствора перекиси водорода на 25 г пробы почвы.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области сельского хозяйства и может быть использовано при оценке опасности водной эрозии почвы. Для осуществления предлагаемого способа оценки ударного действия капель дождя на горизонтальной поверхности в центре подложки мишени с размеченными концентрическими окружностями устанавливают почвенный образец, поливают каплями дождя почвенный образец, измеряют величину радиуса разлета почвенных частиц.
Изобретение относится к способам контроля эрозионной опасности дождя. Осуществляют заполнение пор почвенного образца окрашенной водой.

Изобретение относится к области инженерной геологии, а именно к способам для определения влияния различных веществ на газообразующую способность грунтов в лабораторных и полевых условиях, и позволяет подобрать ингибиторы газообразования в грунтах.

Изобретение относится к области «Физики материального контактного взаимодействия» весомой среды в ее массиве и на краях откосов в естественном и нарушенном состоянии.
Изобретение относится к области исследований параметров грунтов мелиорируемых земель. На верхней поверхности образца грунта размещают грузик.

Изобретение относится к области сельского хозяйства Нечерноземной зоны для реализации точного земледелия, а также к технологиям комплексной мелиорации агроландшафтов и использования минеральных почв, осушаемых как закрытыми дренами, так и закрытыми собирателями.

Изобретение относится к определению механических характеристик грунтов в лабораторных и полевых условиях. Для этого используют сдвиговое устройство для испытания на срез образцов мелкозернистых связных и несвязных грунтов и снега.

Изобретение относится к области «Физики контактного взаимодействия материальной среды», конкретно к способу определения несущей способности и устойчивости дисперсной среды под нагрузкой от плоского жесткого штампа.

Изобретение относится к области экологии и может быть использовано для отбора проб воздуха из грунта в местах подземных переходов магистральных газопроводов под водными и иными преградами, в местах расположения подземных газовых хранилищ, емкостей и т.д.

Изобретение относится к «Физике материального взаимодействия» при контакте твердого жесткого плоского тела штампа с полупространством деформируемой материальной среды в начале фазы ее предельно критического (провального разрушающего) по прочности и устойчивости состояния.

Изобретение относится к области горного дела и может быть использовано для исследования сыпучих свойств геоматериалов. Устройство представляет собой сварную конструкцию башенного типа, устанавливаемую на верхней предварительно спланированной площадке отработанного карьера с обеспечением вертикальной устойчивости. В ее верхней части размещены приемный бункер, затем колосниковый виброгрохот, секторный затвор, перфорированная качающаяся дека, воздухораспределительный контур и два приемных бункера. Технический результат - повышение достоверности определения фракционного и вещественного состава защитной подушки. 1 ил.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно агрохимическому картографированию почв. Для этого проводят выделение контуров по результатам дистанционного зондирования полей с последующим перенесением на карты землепользования. Выделение контуров по результатам дистанционного зондирования полей проводят на мультиспектральных космических снимках высокого разрешения методом кластеризации на основе различия светоотражения объектов. Выделение элементарных участков для отбора почвенных образцов с переносом их на натуру проводят на основе различия светоотражения объектов. Изображение обследуемых объектов создают в виде электронных картограмм. Расчет величины отношения яркости свечения изучаемого объекта к показателям длинно- и коротковолновой части спектра солнечной радиации на точках отбора почвенных образцов проводят методом многофакторного анализа. Изобретение позволяет широко применять дифференцированную систему повышения плодородия почв, что повышает урожайность полевых культур на 20-30%.

Изобретение относится к техническим средствам измерений физико-механических свойств почвы, преимущественно для непрерывной регистрации твердости слоя почвы при основной обработке неоднородных почв, культивации и внесении удобрений и/или мелиорантов почвообрабатывающими агрегатами, моторно-транспортное средство которых содержит двигатель внутреннего сгорания. Устройство содержит последовательно соединенные датчики и функциональные преобразователи давлений наддува, на входе турбокомпрессора и его разрежения, аналого-цифровой преобразователь, определитель твердости почвы, задатчики коэффициента связи, коэффициентов влажности и твердости почвы, индикаторы твердости, влажности почвы и твердости почвы с учетом влажности, датчики угловой скорости коленчатого вала и ротора турбокомпрессора, тахометр, формирователь и счетчик угловых меток цилиндра, функциональные преобразователи угловой скорости коленчатого вала и ротора, числа импульсов в напряжение, дифференциатор, датчик и формирователь импульсов ВМТ, аналоговый ключ ВМТ, задатчик угловых меток цикла, нуль-орган, перестраиваемый резонансный фильтр, формирователь строба, аналоговый ключ цилиндров, задатчик номеров угловых меток цилиндров, первые и вторые измерители средневыпрямленного, максимального и среднеквадратического значений, с первого по четвертый переключатели, двойной дифференциатор, измеритель тока и напряжения генератора, последовательно соединенные приемник теплового излучения почвы, состоящий из линейки пироэлектрических инфракрасных датчиков, функциональные преобразователи, сумматор-усреднитель, цифровой вольтметр и определитель влажности почвы, определитель твердости почвы с учетом влажности. Достигается повышение точности определения твердости любых неоднородных почв с учетом их влажности для почвообрабатывающих агрегатов. 1 ил.
Изобретение относится к способам измерения эрозионной опасности дождя. По слоям почвенного образца размещают группы меченых почвенных частиц. Почвенный образец поливают каплями дождя. После чего измеряют радиусы разлета почвенных частиц и их метки. По максимальной величине радиуса разлета и меткам почвенных частиц измеряют эрозионную опасность дождя. Обеспечивается расширение функциональных возможностей способа, заключающееся в возможности определения, из какого слоя почвенного образца вылетают почвенные частицы.

Группа изобретений относится к области анализа почв и может быть использована при оценке плодородия земель сельскохозяйственного использования. Способ автоматизированного прямого определения доступного растениям фосфора в углеаммонийной почвенной вытяжке, окрашенной гуминовыми соединениями, заключается в том, что производится одновременное двухканальное спектрофотометрирование и измерение оптической плотности гидравлических потоков в спектральном диапазоне 898-900 нм одной пробы полученного образца вытяжки на автоанализаторе проточного типа, причем в одном канале с добавлением реактивов для окрашивания фосфора, а в другом канале с добавлением реактивов без окрашивания фосфора. Разница в измерениях оптической плотности одной и той же пробы в двух каналах характеризует содержание фосфора, доступного растениям, без учета фосфора, входящего в органическую компоненту вытяжки и не доступного растениям. Группа изобретений относится также к автоанализатору для прямого определения доступного растениям фосфора в почвенной вытяжке и пузырькоотделителю для удаления пузырьков воздуха из потока перед кюветой колориметра указанного устройства. Группа изобретений обеспечивает повышение производительности и точности анализа. 3 н.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к экологическому и технологическому мониторингу сельхозугодий. Способ включает определение места, частоты, длительности отбора проб почвы на исследуемой территории. Причем отбор проб проводят с учетом вертикальной структуры, неоднородности покрова почвы, рельефа и климата местности. Пробы отбирают с глубины от 0 до 5 см, вертикальную структуру почвенного покрова принимают с каждой стороны малой реки в отдельности с учетом неоднородности покрова почвы и прибрежного рельефа у малой реки или ее притока. До агрохимического анализа из проб почвы удаляют корни травяных растений, а по результатам агрохимического анализа проб почвы проводят статистическое моделирование для выявления устойчивых биотехнических закономерностей. При этом на выбранном месте по точкам взятия проб почвы, расположенных на характерных местах рельефа, измеряют высоты этих точек над урезом воды малой реки или его притока. Затем берут пробы почвы и проводят агрохимический анализ и статистическое моделирование данных измерений идентификацией биотехнических волновых закономерностей влияния высоты расположения точки взятия пробы над линией уреза водной поверхности малой реки или ее притока на агрохимические показатели. После этого на других местах на водосборе малой реки или ее притока измеряют высоты расположения характерных точек рельефа без взятия пробы почвы. Затем по выявленным на экспериментальном участке биотехническим закономерностям выполняют расчеты ориентировочного содержания биохимических веществ в почвенном слое 0-5 см на любом участке водосбора малой реки или ее притока, на котором были измерены высоты расположения характерных точек рельефа. Способ позволяет снизить трудоемкость измерений и повысить точность сопоставления высоты над урезом воды с измеренными концентрациями биохимических веществ в почве, а также повысить функциональные возможности дистанционного зондирования высоты расположения характерных точек рельефа прибрежной зоны малой реки. 6 з.п. ф-лы, 6 ил., 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к СВЧ-способу определения содержания физической глины и гумуса в почвах, Способ включает измерение показателя преломления почвы с влажностью, превышающей максимальное содержание связанной воды, образцы которой выдерживают в герметическом контейнере в течение 1-2 суток при комнатной температуре, измеряют показатель преломления на частотах f1=0,35 ГГц и f2=1,75 ГГц, находят разность показателей преломления Δn=n(f1)-n(f2), на частотах f1 и f2 одновременно измеряют и показатель поглощения, находят разность показателей поглощения Δκ=κ(f1)-κ(f2) и определяют массовую долю физической глины С в почве из соотношения: и массовую долю гумуса в почве из соотношения: где С - содержание физической глины в почве (в массовых долях); Δn - разность показателей преломления; Δκ - разность показателей поглощения; Н - содержание гумуса в почве (в массовых долях). Повышение точности определения массовой доли физической глины и гумуса в почвах является техническим результатом изобретения. 2 ил.

Изобретение относится к области промышленного и гражданского строительства и может быть использовано в технике и технологии исследования физико-механических свойств грунтов в естественных условиях. Техническим результатом является упрощение технологического процесса испытаний и обеспечение непрерывного получения информации на всю глубину залегания исследуемых грунтов. Предложен способ испытания грунтов в массиве, включающий определение сопротивления срезу за счет непрерывного перемещения спирального зонда, скорость которого ограничивают до величины шага спирали лидера за один оборот шнековой колонны. При этом значение сопротивления срезу определяют по величине осевого усилия, создаваемого первой промежуточной секцией с шагом лопасти больше шага лидерной лопасти. Кроме того, способ может содержать этап, на котором трение срезанного грунта о грунт измеряются при перемещении срезанного грунта в прежнее положение второй промежуточной секцией с шагом лопасти, равным шагу лидерной лопасти. Предложено также устройство для испытания грунтов в массиве, включающее спиральный зонд, жестко соединенный со шнековой колонной. При этом спиральный зонд выполнен по длине составным из двух частей и снабжен двумя дополнительными промежуточными секциями, смонтированными на полой втулке, с возможностью относительного осевого перемещения и жестко связанными с датчиками силы. Сигналы с указанных датчиков поступают по грузонесущему кабелю к блоку сбора информации. При этом спиральная лопасть первой промежуточной секции выполнена с углом наклона, превышающим угол наклона спиральной лопасти лидера, а спиральная лопасть второй промежуточной секции выполнена с углом наклона, равным углу наклона спиральной лопасти лидера. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 ил.
Изобретение относится к сфере космических исследований и технологий и может быть использовано для изучения вулканического состояния Марса. На Марсе осуществляют вскрытие бурением закупоренных фумарол. С помощью газоаналитической и/или видеоаппаратуры устанавливают наличие или отсутствие струи истечения фумарольных газов. Обеспечивается исследование ресурсов Марса в аспекте возможности увеличения массы и объема его атмосферы за счет фумарольных газов.

Изобретение относится к области инженерной геологии применительно к определению необходимых параметров грунта. Способ включает отбор образца грунта, взвешивание и определение его объема, высушивание и взвешивание высушенного образца, определение плотности и влажности образца грунта и расчет по полученным значениям плотности и влажности грунта, причем предварительно строят графики зависимости относительного содержания воздуха в грунте и степени заполнения пор талого грунта водой и мерзлого грунта льдом от влажности при различных постоянных значениях плотности грунта, причем расчет данных для построения графиков производят в двух точках - при нулевой суммарной влажности талого или мерзлого грунта и при нулевом относительном содержании воздуха в образце грунта из заданных соотношений для талых и мерзлых грунтов. Затем по экспериментально найденным значениям плотности сухого грунта и влажности грунта из графиков находят величины относительного содержания воздуха в образце грунта в талом и мерзлом состояниях, пористость грунта, полную влагоемкость образца грунта в талом и мерзлом состояниях и степень заполнения пор образца грунта в талом состоянии - водой и мерзлом состоянии - льдом, для чего из точки на оси абсцисс, соответствующей экспериментально найденной величине суммарной влажности, проводят вертикальную прямую до пересечения с наклонными прямыми зависимости относительного содержания воздуха в образце грунта в талом и мерзлом состояниях от суммарной влажности и степени заполнения грунта водой или льдом от суммарной влажности, ординаты точек пересечения которых равны значениям относительного содержания воздуха в образце грунта и степени заполнения пор образца грунта в талом и мерзлом состояниях, а пересечения наклонных прямых зависимости относительного содержания воздуха в образце грунта в талом и мерзлом состояниях от суммарной влажности с осью ординат дают значение пористости образца грунта, а с осью абсцисс - значения полной его влагоемкости в талом и мерзлом состояниях. Достигается повышение оперативности определения. 1 ил.

Изобретение относится к области профилактической медицины и может быть использовано для экспресс-обнаружения яиц геогельминтов в пробах почвы. Для этого 25 г пробы исследуемой почвы смешивают с 25 мл 1,4-1,6 раствора перекиси водорода. Содержимое отстаивают после перемешивания, в результате чего на линии соприкосновения раствора с верхней границей почвы формируется зона, отличная по цвету от исследуемого образца. Из этой зоны пипеткой отбирают материал для микроскопирования и просматривают под увеличением ×40. Изобретение обеспечивает быстрый и точный способ обнаружения яиц гельминтов в пробах почвы при санитарно-паразитологическом исследовании. 3 табл., 2 пр.

Наверх