Экспресс-метод диагностики бруцеллеза овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации (рнга) для исследования молока


 


Владельцы патента RU 2571560:

Государственное научное учреждение Прикаспийский зональный научно-исследовательский ветеринарный институт Российской академии сельскохозяйственных наук (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики бруцеллеза овец и коз. Изобретение заключается в применении молока в реакции непрямой агглютинации для диагностики бруцеллеза овец и коз. Заявленное изобретение позволяет выявлять бруцеллезные гемагглютинины в молоке овец и коз, позволяет своевременно ставить диагноз на бруцеллез, установить источник возбудителя бруцеллеза для людей и животных и является более чувствительным способом, пригодным для диагностики бруцеллеза у овец и коз и осуществления контроля за благополучием овцеводческих хозяйств по бруцеллезу. 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к экспресс-методу диагностики бруцеллеза овец и коз в реакции непрямой гемагглютинации для исследования молока.

В доступной нам литературе мы не нашли данных по использованию реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с молоком и кольцевой реакции с молоком (КР с молоком) для выявления бруцеллеза у овец и коз. Кольцевая реакция с молоком официально применяется для исследования коров на бруцеллез. В связи с этим, в качестве аналога мы применяли кольцевую реакцию с молоком для исследования молока овец и коз.

Постановка кольцевой реакции

Перед исследованием молоко тщательно перемешивают путем энергичного встряхивания для равномерного распределения сливок.

Реакцию ставят в серологических пробирках Флоринского, которые нумеруют в соответствии с описью проб молока. В пробирки вносят по 2 мл молока. После взятия каждой пробы молока пипетку двукратно промывают теплой водой. Антиген вносят по 0,1 мл в каждую пробирку с пробой молока. После внесения антигена в каждые 10 проб штатив с пробирками энергично встряхивают для равномерного распределения антигена в молоке.

При постановке реакции одновременно с испытуемыми пробами молока ставят следующие контрольные пробы:

- молоко от заведомо здоровой коровы;

- смесь молока здоровой коровы с позитивной бруцеллезной сывороткой (0,1 мл сыворотки на 2 мл молока).

Штатив с испытуемыми и контрольными пробами молока помещают в термостат или водяную баню при температуре 37-38°С на один час и затем выдерживают 30 минут при комнатной температуре.

Результаты реакции учитывают визуально через 30-40 минут после извлечения штативов из термостата (водяной бани) в крестах по следующей схеме:

+++ (3 креста) - четко выраженное синее или красно-вишневое кольцо (в зависимости от использованного антигена) в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока остается белой;

++ (2 креста) - четко выраженное синее (красно-вишневое) кольцо в верхней части столбика молока в слое сливок, остальная часть молока имеет синеватый или бледно-розовый цвет;

+ (1 крест) - синее (красно-вишневое) кольцо в слое сливок выражено слабо и весь столбик молока имеет синий (розовый) цвет;

- (минус) - столбик молока остается равномерно окрашенным в первоначальный синий (красно-вишневый) цвет.

Все пробирки молока, давшие кольцевую реакцию с оценкой 3 и 2 креста, считают положительными, 1 крест - сомнительными.

При получении отрицательных результатов КР по всему стаду коров его считают благополучным по бруцеллезу.

Преимущество КР с молоком заключается в простоте постановки, быстроте получения результатов и в том, что ее можно использовать для контроля благополучия дойных стад коров.

Недостатком КР является ее слабая чувствительность и возможность получения неспецифических реакций у больных маститом животных.

Кольцевая реакция с молоком овец и коз не входит в число официально принятых методов диагностики бруцеллеза мелкого рогатого скота и не используется в практике с этой целью. Данная реакция применяется для исследования коровьего молока и имеет диагностическое значение для выявления больных бруцеллезом коров. Она менее эффективна для диагностики бруцеллеза овец и коз.

Основная причина недостаточной эффективности кольцевой реакции с молоком овец и коз при диагностике бруцеллеза заключается в том, что более мелкие жировые шарики молока овец и коз менее активно, чем у крупного рогатого скота, абсорбируют агглютинированные окрашенные бруцеллы (бруцеллезный антиген для КР с молоком) в положительных молочных образцах и не поднимаются для образования типичного окрашенного кольца.

Имеется еще один недостаток КР с молоком овец и коз - низкое содержание специфических антител в молоке овец и коз и слабая серологическая активность их по сравнению с антителами, содержащимися в коровьем молоке.

В связи с указанными причинами, кольцевая реакция оказалась непригодной для диагностики бруцеллеза у овец и коз. Поэтому для диагностики бруцеллеза овец и коз путем исследования молока возникает необходимость в изыскании более чувствительного метода, пригодного для выявления специфических антител, содержащихся в молоке у животных этого вида.

Известен метод диагностики бруцеллеза крупного и мелкого рогатого скота, предназначенный для выявления специфических антител в сыворотке крови - реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с применением эритроцитарного антигена, разработанного Прикаспийским зональным НИВИ, ФГБУ «ВГНКИ» и ГНУ ВНИИБТЖ.

В связи с тем что в специальной литературе нет сообщений о возможности исследования на бруцеллез молока овец и коз с помощью РНГА, целесообразно испытать эту реакцию для выявления бруцеллезных специфических антител в молоке и установить диагностическую ценность РНГА с молоком животных этого вида.

На основании изложенного, мы решили испытать РНГА с эритроцитарным бруцеллезным антигеном, разработанным ПЗНИВИ, ВГНКИ и ВНИИБТЖ, для исследования молока овец и коз, по сравнению с КР с молоком и сывороткой крови РА, РСК и РНГА.

Целью изобретения является повышение чувствительности и специфичности метода исследования на бруцеллез молока овец и коз.

При исследовании на бруцеллез молока коров в неблагополучном по бруцеллезу хозяйстве в РНГА выявлено гемагглютининов в молоке 44% больных, тогда как по КР реагировало 31%, что доказывает чувствительность РНГА. Полученные результаты были подтверждены при одновременном исследовании коров в РБП, РА, РСК и РНГА с сыворотками крови.

На большом фактическом материале при серологическом исследовании крупного и мелкого рогатого скота установлено, что РНГА с разработанным нами эритроцитарным антигеном для исследования сывороток крови реакция по диагностической эффективности значительно превосходит используемые в ветеринарной практике другие методы диагностики бруцеллеза (РА, РСК, РБП и РИД с ОП-С антигеном), вместе взятые, выявляет больных бруцеллезом животных в более ранние сроки после заболевания и может заменить все эти реакции.

По заключению республиканских, краевых и областных ветеринарных лабораторий, испытавших РНГА, эта реакция обладает специфичностью, высокой чувствительностью и пригодна для массовых исследований животных на бруцеллез.

Поэтому мы решили испытать возможность использования РНГА для исследования молока овец и коз по сравнению КР с молоком и другими серологическими реакциями, применяемыми в практике для исследования сывороток крови (РНГА, РБП, РА и РСК).

Специфичность РНГА с бруцеллезным эритроцитарным антигеном и КР для исследования молока изучали путем исследования 220 проб молока от овец и коз благополучных по бруцеллезу хозяйств.

Результаты исследования даны в таблице 1.

Таблица 1
Результаты проверки специфичности РНГА и КР с молоком здоровых овец и коз благополучных по бруцеллезу хозяйств
Количество животных Исследовано проб молока РНГА КР
пол. отр. пол. отр.
Овцы - 120 гол. 120 - 120 2 118
Козы - 100 гол. 100 - 100 1 99
Итого: 220 - 220 3 97

Как видно из таблицы 1, при исследовании 220 проб молока овец и коз в РНГА со всеми пробами молока здоровых животных получен отрицательный результат, что показывает ее специфичность, тогда как по КР в трех случаях получен положительный результат. При проверке животные, которые реагировали в КР с молоком положительно, оказались больными маститом.

В неблагополучных по бруцеллезу хозяйствах исследованию в РНГА и КР были подвергнуты молоко и сыворотки крови от 95 овец и коз. Результаты исследований представлены в таблице 2.

Таблица 2
Результаты испытания РНГА и КР с молоком в сравнении с РА,
РСК и РНГА с сывороткой крови для исследования овец и коз
неблагополучных по бруцеллезу хозяйств
Исследовано овец и коз Молоко Сыворотки крови
РНГА КР РА+РСК РНГА
пол. % пол. % пол. % пол. %
95 12 12,6 5 5,3 8 8,4 12 12,6

Как видно из приведенных в таблице 2 данных, РНГА с молоком по чувствительности не уступает РНГА с сывороткой крови и превосходит КР с молоком и РА, РСК с сывороткой крови. В частности, положительная РНГА с сывороткой крови получена у 12 (12,6%) овец и коз, которые положительно реагировали и в РНГА с молоком, тогда как с помощью КР с молоком бруцеллез был установлен у 5 (5,3%) овец и коз. В РА и РСК реагировало 8 (8,4%) животных.

Дополнительно к КР с молоком, РНГА с молоком выявила 7 больных бруцеллезом овец и коз.

Достоверность показаний РНГА с молоком была подтверждена положительными результатами ПНР и РНГА с антительным бруцеллезным эритроцитарным диагностикумом проб молока и образцов биоматериала (экстракт гомогенизированных лимфоузлов и органов) от больных бруцеллезом животных. Эти данные свидетельствуют о высокой эффективности РНГА с эритроцитарным антигеном, разработанным Прикаспийским зональным НИВИ, ФГБУ ВГНКИ и ВНИИБТЖ для исследования на бруцеллез молока овец и коз.

Наряду с этим, нами было подвергнуто исследованию в РНГА молоко от 2 коз, принадлежащих частным владельцам г. Хасавюрт и с. Новый Параул, реагировавших положительно на бруцеллез в РНГА с сывороткой крови.

В обоих случаях с молоком этих коз получена положительная РНГА в титрах 1:200 и 1:4092. При этом было установлено, что владельцы животных, употреблявшие козье молоко, заболели бруцеллезом в острой форме.

Проведенными исследованиями установлено, что использование РНГА с эритроцитарным антигеном для обнаружения бруцеллезных гемагглютининов в молоке овец и коз позволяет своевременно установить диагноз на бруцеллез, выявлять источник возбудителя болезни для людей и животных и является высокочувствительным и специфичным методом, пригодным для осуществления контроля за благополучием овцепоголовья по бруцеллезу.

Применение молока в реакции непрямой агглютинации для диагностики бруцеллеза овец и коз.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к гастроэнтерологии, и предназначено для прогнозирования исходов стандартной противовирусной терапии хронического гепатита В.

Настоящее изобретение относится к области биохимии. Предложены способы скрининга антитела IgG, обладающего повышенной способностью элиминировать антиген в плазме, основанные на отборе IgG, антигенсвязывающая активность которого при рН от 6,7 до 10,0 выше антигенсвязывающей активности при рН от 4,0 до 6,5.

Настоящее изобретение относится к иммунологии. Предложено поликлональное или моноклональное антитело, которое специфически связывает эпитоп, состоящий из пептида TKSLDKGYNK нейротоксина Clostridium, и получено путем применения олигопептида с упомянутым эпитопом.

Изобретение относится к области медицины, а именно онкологии, ортопедии и травматологии, и может быть использовано для дооперационной дифференциальной диагностики новообразований костной ткани.

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложено антитело и его антигенсвязывающий фрагмент, способные связываться с дельта-подобным лигандом 4 (DLL4) человека, в том числе в форме меченого антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, конструкции с константным доменом иммуноглобулина, конъюгата с терапевтическим или цитотоксическим средством и в кристаллизованной форме.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антигенсвязывающей молекуле (АСМ), которая специфически связывает связанный с мембраной человеческий карциноэмбриональный антиген (CEA).

Изобретение относится к новым молекулам-ингибиторам JNK, способам получения антител к указанным молекулам-ингибиторам JNK, а также к соответствующим антителам и клеткам, продуцирующим указанные антитела.
Изобретение относится к области медицины, неврология, нейротравматологии и может быть использовано для прогнозирования риска развития депрессии в отдаленном периоде ушиба головного мозга.
Изобретение относится к области медицины, неврологии, инфекционным болезням и может быть использовано для прогнозирования высокого риска развития постгерпетической невралгии.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения трихофитии. В супернатантах культур мононуклеаров до и на 14 день лечения определяют показатели спонтанной и индуцированной фитогемагглютинином продукции цитокина ИЛ-6 мононуклеарами крови твердофазным иммуноферментным анализом.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия штамма молочнокислых бактерий, включающего IS-элемент, в молочном продукте.
Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для диагностики дисбаланса Cu, Mo и W у сельскохозяйственных копытных животных. Способ включает подготовку проб биоиндикаторов, определение в них содержания микроэлементов и оценку полученных результатов.

(57) Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для определения санитарно-гигиенического состояния молока. Оценивают общее количество бактерий и количество соматических клеток в молоке.

Изобретение относится к техническому контролю в сыродельной отрасли молочной промышленности. Способ предусматривает вырезание из анализируемого продукта пробы в форме пластинки размером (10×10×2) мм, помещение ее в стеклянную бюксу объемом 10 см3 и массой М1, измерение массы бюксы с пробой продукта М2, высушивание пробы продукта в бюксе при остаточном давлении 70-100 кПа в течение 8-12 ч до получения пористой капиллярной структуры, пятикратное экстрагирование свободного жира по 1 ч органическим растворителем объемом: 1) 3 см3, 2) 2 см3, 3) 2 см3, 4) 2 см3, 5) 2 см3, слив экстракта свободного жира после каждой экстракции в бюксу объемом 50 см3 и массой М3; выпаривание органического растворителя на водяной бане при температуре 60-80°C, измерение массы бюксы со свободным жиром М4 и определение массовой доли свободного жира в продукте по заданной формуле.

Изобретение относится к области аналитической химии, в частности к вольтамперометрическому способу определения молочной кислоты, используемой во многих областях пищевой промышленности, ветеринарии, косметологии и играющей огромную роль в физиологическом процессе человека.

Группа изобретений относится к области животноводства и молочного производства и предназначена для обнаружения остатков антибиотиков в молоке. Заявлен способ с использованием заявленной системы и способ калибровки данной системы.

Изобретение относится к пищевой промышленности, а именно к методам оценки качества и биологической ценности кисломолочных продуктов. Проводят азодиизобутиронитрил-индуцированную хемилюминесценцию добавлением к 10 мл кумыса 1 мл 1·10-1 М раствора азодиизобутиронитрила, измерение светосуммы свечения и максимальной светимости продукта реализуют методом хемилюминесцентного анализа на «Хемилюминомере ХЛ-003» в течение 5 минут, при температуре 20°С, значениях кислотности кумыса от 80 до 110°Т.

Изобретение относится к области пищевой промышленности, а именно к определению биологической ценности молока и молочных продуктов. Способ осуществляют с использованием в качестве тестирующего объекта имаго комнатной мухи (Musca domestica).

Изобретение относится к молочной промышленности. При осуществлении способа одновременно измеряют концентрацию ионов калия в молоке и количество соматических клеток, сравнивают показатели измерений и по их результатам судят о качестве молока, причем при значениях концентрации ионов калия от 11,0-20,0 мг %, соответствующих значению содержания соматических менее 400 тыс/см3 - молоко высшего сорта, при значениях концентрации от 6,0-11,0 мг %, соответствующих значению содержания соматических клеток от 400 до 1000 тыс/см3 - молоко 1 сорта, при значениях, больших вышеуказанных, - молоко по качеству не сортовое.

Изобретение относится к сыродельной отрасли молочной промышленности, а именно к методам технического контроля. Способ предусматривает внесение в молочный жиромер 1,5 г продукта, измельченного на металлической терке с отверстиями диаметром 5-7 мм, добавление 10 см3 водного раствора хлористого натрия концентрацией 3%, нагретого до температуры 37-40°C, перемешивание, помещение жиромера в водяную баню с температурой 37-40°C на 15-17 мин пробками вниз, центрифугирование в течение 5-7 мин при частоте вращения 1000-1100 с-1, охлаждение в холодильной камере с температурой минус 5-8°C до отвердевания выделившегося при центрифугировании столбика свободного жира, удаление из жиромера раствора хлористого натрия с остатками белка и жировыми шариками в белково-липоидных оболочках, не нарушая затвердевший столбик свободного жира в градуированной части жиромера, добавление в жиромер новой порции 10 см3 водного раствора хлористого натрия концентрацией 3%, нагретого до температуры 37-40°C, перемешивание и центрифугирование 5 мин, помещение жиромера в водяную баню с температурой 63-67°C на 5 мин пробками вниз, измерение количества выделившегося свободного жира по шкале жиромера и определение количества свободного жира в продукте по заданной формуле.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к способу определения термоустойчивости молока. Для этого степень денатурации белков молока осуществляют по данным измерения биоэлектрического потенциала в биологически активных центрах кожи коровы №1, №3, №16, №20, №38, №39, №44 до выдаивания молока, находят среднюю его величину. При значении 25,0 мкА и менее молоко относят к 5 группе термоустойчивости, при значении 25,1-30,0 мкА к 4 группе, при значении 30,1-35,0 мкА к 3 группе, при значении 35,1-40,0 мкА ко 2 группе, при значении 40,1 мкА и более к 1 группе. Изобретение позволяет быстро определять термоустойчивость получаемого молока до выдаивания, при этом не используются специальные химические реагенты. 2 табл., 3 пр., 1 ил.
Наверх