Способ культивирования опухолевых стволовых клеток глиобластомы

Авторы патента:

A61K35/00 - Лекарственные препараты, содержащие вещества или продукты реакции неизвестного строения

Владельцы патента RU 2572574:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дальневосточный федеральный университет" (ДВФУ) (RU)

Изобретение относится к биохимии. Раскрыт способ культивирования опухолевых стволовых клеток глиобластомы. Способ включает отбор таких клеток, высевание и инкубирование в культуральном сосуде. Отбирают не менее 0,5 г материала глиобластомы, который измельчают до кусочков размером не более 5×5×5 мм, которым не дают подсыхать. Далее выделяют из отобранного материала опухолевые стволовые клетки и их осаждают. Затем смешивают со средой для культивирования клеток млекопитающих, ресуспендируют клетки и высаживают в культуральные флаконы. Осуществляют культивирование до образования монослоя. Затем осуществляют ферментативную диссоциацию в течение 10 мин при 37°C посредством 0,05% трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты, добавляемой в соотношении 1:4, центрифугирование в течение 3 мин при 1200 об/мин. После этого добавляют свежую среду, ресуспендируют, повторно культивируют с использованием клеточных суспензий, содержащих не менее чем 85-95% жизнеспособных клеток, и обрабатывают флуоресцентным маркером, флуоресцирующим при ультрафиолетовом излучении. Изобретение может быть использовано при лабораторной доклинической молекулярно-биологической оценке терапевтической эффективности противоопухолевого препарата, полученного путем целенаправленной модификации транскриптомного профиля гемопоэтических стволовых и прогенеторных клеток (СК и ПК), используемых для проведения высокотехнологичного комплексного лечения предпочтительно злокачественных глиальных опухолей головного мозга. 3 з.п. ф-лы, 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а точнее к онкологии, и может быть использовано при лабораторной доклинической молекулярно-биологической оценке терапевтической эффективности противоопухолевого препарата, полученного путем целенаправленной модификации транскриптомного профиля гемопоэтических стволовых и прогенеторных клеток (СК и ПК), используемых для проведения высокотехнологичного комплексного лечения предпочтительно злокачественных глиальных опухолей головного мозга.

Получение персонифицированных клеточных систем из СК и ПК пациента включает сбор СК стандартными методами (мобилизации СК в периферическую кровь с использованием гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), эксфузии СК из костного мозга пациента, забора обонятельной выстилки носа или липосакции и т.д.), ресуспензирование первичного биоматериала, иммуносепарацию СК из клеточной суспензии по маркерам клеточной поверхности, а при необходимости увеличение клеточной массы для анализа и культивирования этих клеток. В дальнейшем клеточные системы отмывают центрифугированием и стандартно криоконсервируются с 10% раствором диметилсульфоксида (ДМСО) в жидком азоте при температуре -196 градусов до клинического использования. Перед применением клеточный препарат размораживают на водяной бане, 2-кратным центрифугированием препарат отмывается от ДМСО 0,9% физиологическим раствором NaCl.

В настоящее время используют различные способы получения опухолевых стволовых клеток. В одном из них линию стволовых клеток получают из внутренней клеточной массы нормального эмбриона на стадии бластоцисты (см. патенты US №№5843780 и 6200806, 1998). Во втором способе для создания плюрипотентных эмбриональных стволовых (ЭС) клеток используют перенос ядра соматической клетки (SCNT). По данной методике ядро удаляют из нормальной яйцеклетки, тем самым удаляя генетический материал. Ядро донорской диплоидной соматической клетки вводят непосредственно в безъядерный ооцит, например, при помощи микроманипуляции либо донорскую диплоидную соматическую клетку помещают рядом с безъядерной яйцеклеткой и проводят слияние двух клеток. Полученная клетка обладает потенциалом развития в ранний эмбрион, из которого можно получать часть, содержащую продуцирующую стволовые клетки внутреннюю клеточную массу.

Известен также способ получения опухолевых стволовых клеток, согласно которому ядро человеческой клетки трансплантируют в безъядерный ооцит животного, относящегося к виду, отличному от вида донорской клетки (см. US №20010012513, 2001). Полученные клетки-химеры используют для продукции плюрипотентных ЭС клеток, особенно плюрипотентных ЭС клеток, подобных человеческим. К недостаткам данного способа относится то, что данные клетки-химеры могут содержать неизвестные вирусы и сохранять митохондрии животных.

Названные способы технически сложны, кроме того, не дают возможность получить клетки, которые генетически соответствуют отдельным пациентам.

Известен также способ культивирования опухолевых стволовых клеток млекопитающего, включающий их отбор, высевание и инкубирование в культуральном сосуде (см. RU №2434636, 2005).

Недостаток этого способа - невозможность получения культуры глиобластомы человека, пригодной для лабораторной доклинической молекулярно-биологической оценки терапевтической эффективности противоопухолевого препарата, полученного целенаправленной модификацией транскриптомного профиля гемопоэтических стволовых и прогенеторных клеток, предназначенного для проведения высокотехнологичного комплексного лечения злокачественных глиальных опухолей головного мозга.

Задача, на решение которой направлено данное изобретение, состоит в обеспечении возможности получения культуры глиобластомы человека, пригодной для лабораторной доклинической молекулярно-биологической оценки терапевтической эффективности противоопухолевого препарата, полученного целенаправленной модификацией транскриптомного профиля гемопоэтических стволовых и прогенеторных клеток.

Технический результат, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в обеспечении возможности получения культуры глиобластомы человека, пригодной для лабораторной доклинической молекулярно-биологической оценки терапевтической эффективности противоопухолевого препарата, полученного целенаправленной модификацией транскриптомного профиля гемопоэтических стволовых и прогенеторных клеток, обеспечивающего возможность регуляции пролиферативных свойств и ключевых функций опухолевых, или «раковых», стволовых клеток.

Поставленная задача решается тем, что способ культивирования опухолевых стволовых клеток глиобластомы включает отбор не менее 0,5 г материала глиобластомы, который измельчают до кусочков размером не более 5×5×5 мм, которым не дают подсыхать, выделение из отобранного материала опухолевых стволовых клеток и их осаждение, смешивание со средой для культивирования клеток млекопитающих, ресуспендирование клеток и высаживание в культуральные флаконы, культивирование до образования монослоя, ферментативную диссоциацию в течение 10 мин при 37°C посредством 0,05% трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты, добавляемой в соотношении 1:4, центрифугирование в течение 3 мин при 1200 об/мин, добавление свежей среды, ресуспендирование, повторное культивирование с использованием клеточных суспензий, содержащих не менее чем 85-95% жизнеспособных клеток, и обработку флуоресцентным маркером, флуоресцирующим при ультрафиолетовом излучении. При этом часть материала опухоли используют для определения ее гистологического типа. Кроме того, в качестве среды для культивирования клеток млекопитающих предпочтительно используют среду DMEM содержащую 10%-ный натрий-фосфатный буфер и антибиотик-антимикотик «100Х», производства Gibco. Кроме того, в качестве флуоресцентного маркера используют флуоресцентный маркер V12883 Vybrant CFDA SE Cell Tracer производства Molecular Probes, флуоресцирующий зеленым цветом в свете ультрафиолетового лазера с длинной волны 488 нм или в свете ультрафиолетовых ламп.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками прототипа и аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию "новизна".

Признаки формулы изобретения обеспечивают решение комплекса функциональных задач.

Признаки, указывающие, что способ включает «отбор не менее 0,5 г материала глиобластомы, который измельчают до кусочков размером не более 5×5×5 мм, которым не дают подсыхать», обеспечивают эффективную пропитку отбираемого материала культуральной средой и сохранность культивируемого материала.

Признаки «… выделение из отобранного материала опухолевых стволовых клеток и их осаждение …» обеспечивают концентрирование целевого материала, далее подвергаемого культивированию.

Признаки, указывающие на «смешивание со средой для культивирования клеток млекопитающих, ресуспендирование клеток и высаживание в культуральные флаконы, культивирование до образования монослоя», обеспечивают подготовку материала, пригодного для ферментативной диссоциации.

Признаки «… ферментативную диссоциацию в течение 10 мин при 37°C посредством 0,05% трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты, добавляемой в соотношении 1:4 …» определяют оптимальные параметры процедуры ферментативной диссоциации опухолевых стволовых клеток.

Признаки, указывающие на «центрифугирование в течение 3 мин при 1200 об/мин, добавление свежей среды, ресуспендирование», определяют оптимальные параметры процедуры центрифугирования, материала ферментативной диссоциации и обеспечивают получение препарата стволовых клеток и возможность его обработки флуоресцентным маркером.

Признаки, указывающие на «повторное культивирование с использованием клеточных суспензий, содержащих не менее чем 85-95% жизнеспособных клеток», повышают эффективность процесса культивирования.

Признаки, указывающие на «обработку флуоресцентным маркером, флуоресцирующим при ультрафиолетовом излучении», обеспечивают возможность автоматизации флуоресцентной оценки эффективности терапевтического воздействия препарата на опухолевые стволовые клетки.

Признаки второго пункта формулы изобретения обеспечивают возможность определения гистологического типа опухоли.

Признаки третьего пункта формулы изобретения определяют параметры среды для культивирования клеток млекопитающих, оптимальной для культивирования опухолевых стволовых клеток.

Признаки четвертого пункта формулы изобретения определяют флуоресцентный маркер оптимальной для автоматизированной реализации флуоресцентной оценки эффективности терапевтического воздействия препарата на опухолевые стволовые клетки.

В соответствии с заявленным способом из культивирования стволовых клеток млекопитающего отбирают материал глиобластомы (ткань глиальной опухоли мозга получают от пациентов и обрабатывают по стандартному культуральному протоколу), из которого выделяют опухолевые стволовые клетки и осаждают центрифугированием, далее их смешивают со средой для культивирования клеток млекопитающих (среда DMEM, предпочтительно содержащая 10%-ный натрий-фосфатный буфер (далее PBS) и антибиотик-антимикотик «100Х» или сбалансированный солевой раствор Хенкса без Са²⁺ и Mg²⁺ (HBSS), содержащий антибиотики и антимикотики (1:100; оба препарата производства Gibco), ресуспендируют и высаживают в культуральные флаконы, после чего культивируют до образования монослоя, который подвергают ферментативной диссоциации, и после его центрифугирования добавляют свежую среду и снова ресуспендируют, после чего клетки обрабатывают флуоресцентным маркером.

Для успешной работы с препаративными образцами желательно избегать попадания РНКаз с кожи рук, рабочей поверхности или с растворами. Для этого необходимо прокалить стеклянную посуду при 160°C в течение 4-6 часов; автоклавировать или прокипятить пластиковую посуду в дистиллированной воде (кипячение не инактивирует РНКазы, но смывает их).

Для наведения растворов или растворения проб следует использовать только воду, свободную от РНКаз.

Все поверхности, с которыми может соприкасаться образец, должны быть обработаны ингибиторами РНКаз (например, RNase ZAP).

Все процедуры, начиная с выделения РНК и заканчивая промывкой чипов, проводить в перчатках.

Все пластиковые материалы (пробирки, наконечники) должны иметь маркировку «RNase free». Никогда не использовать посуду или инструменты, которые были обработаны РНКазами либо ДНКазами. Этапы выделения РНК, наведения смесей для синтеза кДНК, кРНК, фрагментации и гибридизации следует проводить в боксе с классом защиты 1 (BL1).

Начиная с момента введения флуоресцентной метки весьма желательно работать в помещении, свободном от озона.

Пример 1 конкретного исполнения. Забор материала опухоли для получения опухолевых стволовых клеток (далее РСК) включает отбор образцов (не менее 0,5 г, примерно 3-4 кусочка ткани 5×5×5 мм). Его выполняют интраоперационно во время резекции опухоли или паллиативной операции. Кусочки большего размера аккуратно разрезают ножницами, т.к. образец больше чем 5×5×5 мм не пропитается культуральной средой и произойдет гибель клеток. Кусочкам ткани не дают подсыхать, поскольку это также вызовет гибель клеток.

Далее, с соблюдением максимальной стерильности кусочки помещают в одноразовую стерильную 15 мл пробирку со сбалансированным солевым раствором Хенкса (HBSS), и сразу же охлаждают до +4°C.

Обязательно выполняют патоморфологическое исследование образца этой же опухоли для определения ее гистологического типа. Лучше всего забирать кусочки для выделения РСК рядом с местом опухоли, откуда взят образец для патоморфологии. Охлажденная пробирка как можно быстрее доставляется в культуральную лабораторию (время доставки не должно превышать 2 ч). Часть полученной ткани опухоли отправляют на гистологическое и цитологическое исследование, а другую часть ресуспендируют с использованием трипсина (после повторной промывки в том же растворе из ткани опухоли удаляют кровеносные сосуды, после чего ткань измельчают и инкубируют в течение 40 мин. при 36,5°C в растворе трипсина /ЭДТА 025%, приготовленном на 0.01 М фосфатном буфере (PBS, pH 7.4)). Действие ферментов блокируют средой DMEM, содержащей 3% сыворотки, ткань промывают в трех сменах сбалансированного солевого раствора Хенкса (HBSS. Sigma) и диссоциируют повторным пипетированием в питательной среде. Состав среды: минимальная среда Игла (MEM, Sigma) 90%, эмбриональная сыворотка телят (Fetal bovine serum. FBS.Gibco.Ivitrogen), глюкоза 0.8%, глутамин 2 мМ ((Gibco), добавка В27 (Sigma), HEPES 20 мМ, ростовые факторы (только для первичных культур), фактор роста фибробластов (FGF2, 1 ng/ml Sigma), нейроростовой фактор (NGF 2 ng/ml, Sigma).

Полученную суспензию клеток центрифугируют (3 мин при 1200 об/мин), осадок ресуспендируют в питательной среде того же состава.

Количество и жизнеспособность диссоциированных клеток определяют в камере Горяева после окраски 0.1% раствором трипанового синего. Для последующего культивирования используют клеточные суспензии только с 85-95% жизнеспособных клеток.

Диссоциированные клетки (5×10⁵ кл./мл) культивируют в 12-луночных планшетах на полилизин-ламининовом субстрате в течение 14 суток (36.5°C, 5% CO₂). Частичную смену 1/3 питательной среды производят два раза в неделю. Первичную культуру после формирования сливного монослоя снимают с помощью раствора трипсина/ЭДТА. После промывки в HBSS и центрифугирования клетки ресуспезируют в питательной среде.

Клеточную суспензию (10000-12000 кл./см²) переносят в 12-луночные планшеты или флаконы (площадь 25 см²). Таким способом культуры пассируют 4 раза до формирования сливного монослоя. Формирующиеся в клеточном монослоя прикрепленные к субстрату и свободноплавающие нейросферы отбирают с помощью Пастеровских пипеток и диссоциируют описанным выше методом ферментной обработки. Выделение нейросфер позволяет отделить их от прикрепленных к субстрату обкладочных глиальных клеток, фибробластов и стромальных (опорных) клеток. Клеточную суспензию клеток нейросфер после промывки и центрифугирования ресуспендируют в питательной среде и культивируют в 12-луночных планшетах (10000-12000 кл./см²) и на покровных стеклах (18×18 мм) в чашках Петри до формирования сливного монослоя.

Часть клеток последних пассажей замораживают в среде для криоконсервирования (90% сыворотки, 10% диметилсульфоксида) и хранят в жидком азоте.

Клеточный монослой фиксируют в 4% растворе параформальдегида, приготовленном на 0.01 М фосфатном буфере (pH 7.4) в течение 30 мин.

После промывки в PBS (3×10 мин) клетки инкубируют 24 ч при 4°C с первичными антителами к β-тубулину (1:300, Chemicon), нестину (1:100, Chemicon) и нейрональной специфической енолазе (1:100, антитела получены в нашей лаборатории). После промывки в PBS клетки последовательно обрабатывают биотинилированными антителами с авидин-биотиновым комплексом (ABC, Vector Laboratories, Inc), раствором диаминобензидина, приготовленным на фосфатном буфере (DBA 0.5 мг/мл, перекись водорода 0.03%).

Пример 2 конкретного исполнения. Забор материала опухоли для получения РСК и его предварительная подготовка к культивированию соответствуют вышеописанному. В соответствии с заявленным способом из культивирования стволовых клеток млекопитающего отбирают материал глиобластомы (ткань глиальной опухоли мозга получают от пациентов и обрабатывают по стандартному культуральному протоколу), из которого выделяют опухолевые стволовые клетки и осаждают центрифугированием (3 мин при 1200 об/мин), далее их смешивают со средой для культивирования клеток млекопитающих (среда DMEM, предпочтительно содержащая 10%-ный натрий-фосфатный буфер (далее PBS) и антибиотик-антимикотик «100Х», производства Gibco), ресуспендируют и высаживают в культуральные флаконы, после чего культивируют до образования монослоя, который подвергают ферментативной диссоциации (в течение 10 мин при 37°C посредством 0,05% раствора трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты, добавляемого в соотношении 1:4), и после его центрифугирования (3 мин при 1200 об/мин) добавляют свежую среду и снова ресуспендируют, после чего клетки обрабатывают флуоресцентным маркером (флуоресцентный маркер V12883 Vybrant CFDA SE Cell Tracer производства Molecular Probes, флуоресцирующий зеленым цветом в свете ультрафиолетового лазера с длинной волны 488 нм или в свете ультрафиолетовых ламп).

1. Способ культивирования опухолевых стволовых клеток глиобластомы, включающий отбор не менее 0,5 г материала глиобластомы, который измельчают до кусочков размером не более 5×5×5 мм, которым не дают подсыхать, выделение из отобранного материала опухолевых стволовых клеток и их осаждение, смешивание со средой для культивирования клеток млекопитающих, ресуспендирование клеток и высаживание в культуральные флаконы, культивирование до образования монослоя, ферментативную диссоциацию в течение 10 мин при 37°C посредством 0,05% трипсин-этилендиаминтетрауксусной кислоты, добавляемой в соотношении 1:4, центрифугирование в течение 3 мин при 1200 об/мин, добавление свежей среды, ресуспендирование, повторное культивирование с использованием клеточных суспензий, содержащих не менее чем 85-95% жизнеспособных клеток, и обработку флуоресцентным маркером, флуоресцирующим при ультрафиолетовом излучении.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что часть материала опухоли используют для определения ее гистологического типа.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве среды для культивирования клеток млекопитающих предпочтительно используют среду DMEM, содержащую 10%-ный натрий-фосфатный буфер и антибиотик-антимикотик «100Х», производства Gibco.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве флуоресцентного маркера используют флуоресцентный маркер V12883 Vybrant CFDA SE Cell Tracer производства Molecular Probes, флуоресцирующий зеленым цветом в свете ультрафиолетового лазера с длинной волны 488 нм или в свете ультрафиолетовых ламп.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для повышения активности обменных процессов и иммунитета у животных. Средство содержит мед натуральный, гидролизат пчелиной пыльцы, гидролизат мышечной ткани норок, теотропин, воду дистиллированную при следующем соотношении компонентов, г/100 мл: мед натуральный 25,0±2,5; гидролизат пчелиной пыльцы 2,5±0,25; гидролизат мышечной ткани норок 12,5±1,25; теотропин 0,1±0,0; вода дистиллированная - остальное.

Штамм бактерий enterococcus faecium, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий рода listeria и вида enterococcus faecalis // 2571852

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium Ef79OSAU, обладающий антагонистической активностью в отношении бактерий рода Listeria и вида Enterococcus faecalis, депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры человека (ГКНМ) ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н.

Средство для эндоэкологической реабилитации // 2571287

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для эндоэкологической реабилитации, включающему листья смородины черной, листья или плоды расторопши и прополис в цельном или нативном виде при определенном соотношении компонентов.

Средство с альбумином и экстрактом прополиса, обладающее репаративной активностью при анемиях различного генеза // 2571071

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству в форме суппозитория, которое применяется для лечения геморрагической анемии, которое содержит в качестве действующих веществ альбумин и экстракт прополиса 10%-ный спиртовой, в качестве основы твердый жир типа А, лутрол F68, при определенном соотношении компонентов.

Средство для лечения и профилактики гастрита и язвенной болезни желудка // 2569737

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения и профилактики гастрита и язвенной болезни желудка. Средство для лечения и профилактики гастрита и язвенной болезни желудка, содержащее водный экстракт полыни горькой, плодов шиповника, травы тысячелистника и почек сосны, а также мед майский, сок алоэ, растительный экстракт бефунгина, коньяк, при этом оно выполнено в виде суспензионно-эмульсионной композиции с размером частиц дисперсной фазы, не превышающих 0,1 мм, кроме того, оно дополнительно содержит масло авокадо, масло льна, водный экстракт корня алтея и семян льна.

Способ пластики уретры у детей с проксимальными формами гипоспадии с использованием аутологичных кератиноцитов на биодеградирующем матриксе // 2567975

Изобретение относится к медицине, хирургии. Выполняют уретропластику у детей с проксимальными формами гипоспадии.

Новый опухолевый биомаркер // 2567005

Изобретение относится к биохимии. Описаны способы определения наличия или метастазов опухоли, скрининга наличия опухоли среди популяции высокого риска, прогноза для пациента, имеющего опухоль, определения эффективности хирургического вмешательства, радиационной терапии или химиотерапии.

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности фактора н комплемента человека // 2565454

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах, а также набору для определения функциональной активности фактора Н комплемента человека.

Способ повышения репродуктивной способности американской норки и жизнеспособности приплода // 2564092

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для повышения репродуктивной способности американской норки Standard (+/+ +/+) и жизнеспособности ее приплода.

Способ реконструкции молочной железы // 2562098

Изобретение относится к медицине, хирургии. Осуществляют реконструкцию молочной железы.

Рекомбинантный аденовирус, который содержит рибозим, опосредующий транс-сплайсинг, и противораковый терапевтический ген, и его применение // 2575620

Предложены рекомбинантный аденовирус, фармацевтическая композиция, содержащая такой вирус, и способ лечения рака с использованием такого вируса или композиции. Охарактеризованный рекомбинантный аденовирус содержит полинуклеотид, кодирующий комплекс рибозима, опосредующего транс-сплайсинг, и HSVtk (тимидинкиназы вируса простого герпеса человека), где рибозим, опосредующий транс-сплайсинг, представляет собой рибозим Rib67, и где мишенью рибозима, опосредующего транс-сплайсинг, является мРНК гена рак-специфичной TERT (обратной транскриптазы теломеразы) и противораковый терапевтический ген, кодирующий sPD-1 (растворимый белок программируемой гибели 1). Рекомбинантный аденовирус обладает селективностью в отношении раковых клеток, обусловленной рибозимом, опосредующим транс-сплайсинг, и повышенной противораковой активностью, обусловленной противораковым терапевтическим геном. Представленные изобретения могут быть использованы для эффективных профилактики и лечения рака. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 23 ил., 13 пр.

Конъюгаты аматоксина с улучшенными связями // 2575854

Изобретение относится к конъюгатам аматоксина и мишень-связывающего фрагмента, например антитела, соединенных связями определенного типа, которые применимы в лечении рака, и к фармацевтическим композициям, включающим такие конъюгаты. 5 н. и 20 з.п. ф-лы, 2 ил., 3 пр.

Способ получения клеток, продуцирующих панкреатические гормоны // 2576000

Настоящее изобретение относится к способу получения панкреатических гормонпродуцирующих клеток (варианты). Представленный способ включает культивирование человеческих индуцированных плюрипотентных стволовых (iPS) клеток в среде, содержащей (+)-(R)-транс-4-(1-аминоэтил)-N-(4-пиридил)циклогексанкарбоксамид дигидрохлорид; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей (i) 6-[[2-[[4-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-метил-1Н-имидазол-2-ил)-2-пиримидинил]амино]этил]амино]никотинонитрил и/или (ii) (2′Z,3′Е)-6-броминдирубин-3′-оксим; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей (i) 6-[[2-[[4-(2,4-дихлорфенил)-5-(4-метил-1Н-имидазол-2-ил)-2-пиримидинил]амино]этил]амино]никотинонитрил и/или (ii) (2′Z,3′E)-6-броминдирубин-3′-оксим и активин; далее образование клеточной массы из полученных клеток и культивирование клеточной массы в суспензионном состоянии в среде; далее культивирование полученных клеток в среде, содержащей ретиноевую кислоту, дорсоморфин, 4-[4-(1,3-бензодиоксол-5-ил)-5-(2-придинил)-1Н-имидазол-2-ил]-бензамид и основной фактор роста фибробластов; далее культивирование полученных клеток. При осуществлении заявленного изобретения не используется питающая клетка, а среда не содержит сыворотку. Изобретение может быть использовано в клеточной терапии при лечении сахарного диабета. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 8 ил., 3 пр.

Способ накостного остеосинтеза // 2576807

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к ортопедии и травматологии, и может быть использовано для лечения переломов костей у людей и животных. Проводят накостный остеосинтез, включающий установку в области перелома металлической пластины с фиксацией к кости винтами и использование средства из препарата крови. При этом используют пластину, которая имеет цилиндрические углубления с диаметром 0,3-1,0 мм и глубиной 0,3-1,0 мм, в количестве 10-20 на 1 см2. После стерилизации пластины на ее контактирующую с костной тканью поверхность наносят, фиксируя в углублениях, лиофилизированную аутогенную тромбоцитарную массу, полученную из 2-5 мл венозной крови больного после двухэтапного центрифугирования и лиофильной сушки. Способ обеспечивает сокращение сроков лечения и реабилитации, снижение сопутствующей травматизации и риска осложнений. 21 пр., 2 табл.

Лечение заболевания периферических сосудов при помощи клеток, полученных из ткани пуповины // 2576836

Группа изобретений относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использована для повышения реперфузии у пациента, имеющего заболевание периферических сосудов. Для этого применяют местно фармацевтическую композицию, содержащую фибриновый клей и выделенную однородную популяцию клеток, полученных из ткани пуповины человека, в количестве, эффективном для лечения заболевания, причем ткань пуповины по существу свободна от крови. Указанная выделенная однородная популяция клеток способна к самообновлению и размножению в культуре, имеет потенциал для дифференцирования и не экспрессирует CD117 и/или теломеразу. Использование данных изобретений позволяет повысить реперфузию у пациента, имеющего заболевание периферических сосудов путем местного использования клеток ткани пуповины. 2 н. и 32 з.п. ф-лы, 7 пр., 13 ил., 7 табл.

Состав для криоконсервации сперматозоидов // 2576841

Изобретение относится к медицине, а именно к андрологии, и предназначено для сохранения фертильности сперматозоидов после глубокого охлаждения. Сущность изобретения состоит в том, что предложенный состав для криоконсервации сперматозоидов содержит смешанные с дистиллированной водой: глицерин и альбумин человека, мексидол, полиген, глутатион восстановленный, яичный желток и трис-фруктозо-цитратную смесь, при этом в состав на 100 мл дистиллированной воды введено 590-660 мг глицерина, 2-3 г яичного желтка, 0,4-0,6 мг полигена, 1-10 мг альбумина человека, 0,1-0,4 мг глутатиона восстановленного, 0,04-0,06 мкг мексидола и 4,3-11,3 г трис-фруктозо-цитратной смеси, содержащей 2,5-6,0 г трис, 0,6-1,5 г фруктозы и 1,2-3,8 г цитрата. Техническим результатом использования изобретения является выраженный эффект сохранения подвижности значительного количества сперматозоидов при использовании предложенного состава для криоконсервации, а также существенное уменьшение себестоимости предложенного состава по сравнению с себестоимостью, например, состава среды для криоконсервации сперматозоидов фирмы COOK SYDNEY IVF. 1 табл.

Композиция для повышения адаптации организма человека в арктической зоне // 2580297

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к композиции для повышения адаптации организма человека в Арктической зоне. Композиция для повышения адаптации организма человека в Арктической зоне в виде мармелада, содержащая настойку родиолы розовой, порошок медуницы, пектин, смесь из сушеного меда с пергой, в определенном количестве. Вышеописанная композиция эффективно оптимизирует и коррелирует обменные процессы в организме человека, повышает работоспособность и резистентность во время адаптационного напряжения. 1 пр.

Средство для повышения адаптационного потенциала человека в экстремальных условиях // 2580298

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к средству для повышения адаптационного потенциала человека в экстремальных условиях. Средство для повышения адаптационного потенциала человека в экстремальных условиях, содержащее семена плодов лимонника, сныть, пектин, смесь сушеного меда с пыльцой, взятые в определенном количестве. Вышеописанное средство эффективно для повышения адаптационного потенциала человека в экстремальных условиях.

Способ лечения хронических заболеваний на базе модуляции противовирусного иммунитета // 2582295

Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, и может быть использовано для лечения хронических заболеваний, отягощенных герпетической вирусной латентной инфекцией. Для этого способ включает введение в организм химиопрепаратов, препаратов из лекарственных растений и физиотерапевтическое воздействие, стимулирующие интерстициальный гуморальный транспорт и функции лимфатической системы. При этом введение препаратов и физиотерапевтическое воздействие сочетают с гепатотропными средствами, нормализующими деятельность желудка и кишечника, энтеросорбентами, витаминами и микроэлементами. Дополнительно проводят эпицентральную противовирусную лимфотропную терапию в точки Юрьина иммуномодулирующими препаратами полиоксидоний и циклоферон. Использование данного способа позволяет повысить эффективность лечения хронических заболеваний, отягощенных герпетической инфекцией путем лимфотропного введения иммуномодулятора. 2 табл.

Способ получения средства для лечения нерубцовых алопеций // 2583552

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения нерубцовых алопеций и способу его получения. Способ получения средства для лечения нерубцовых алопеций, включающий центрифугирование крови пациента в 2 этапа, на первом этапе при 500 об/мин, на втором этапе при 1200 об/мин. Средство для лечения нерубцовых алопеций, содержащее от 1500 до 2000 *109/л аутологичных тромбоцитов и от 20 до 30 *109/л лейкоцитов, находящихся в собственной плазме крови. Способ лечения нерубцовых алопеций. Средство, полученное вышеописанным способом, эффективно для лечения нерубцовых алопеций, характеризуется высоким содержанием тромбоцитов и лейкоцитов, которое позволяет использовать средство в меньшем количестве, что обеспечивает снижение болезненности процедур и позволяет эффективно пройти курс лечения очаговой алопеции. 3 н.п. ф-лы, 1 табл., 3 ил.