Способ дифференциации поствакцинного и инфекционного бруцеллёзного процессов по степени повышенной чувствительности организма к бруцеллам в условиях in vitro


 


Владельцы патента RU 2574207:

Федеральное казённое учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к области медицины и касается способа дифференциальной диагностики поствакцинального и инфекционного бруцеллезного процессов у людей в условиях in vitro. Охарактеризованный способ включает инкубацию цельной гепаринизированной крови с бруцеллезным жидким аллергеном - Бруцеллином и моноклональными антителами против маркера дегрануляции базофилов - CD63+. Далее определяют методом проточной цитометрии количество активированных базофилов, которое у вакцинированных против бруцеллеза находится в пределах от 5,1% до 19%, у больных бруцеллезом людей от 19,1% и выше. Изобретение может быть использовано в дифференциальной диагностике поствакцинального и инфекционного процессов при бруцеллезе.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к дифференциальной диагностике аллергической реакции организма, обусловленной вакцинацией против бруцеллеза и инфекционным бруцеллезным процессом.

Согласно Санитарно-эпидемиологическим правилам СП 3.1.7.2613-10 «Профилактика Бруцеллеза», профилактические прививки против бруцеллеза входят в Национальный календарь прививок по эпидемическим показаниям. Вакцинация проводится в очагах козье-овечьего типа лицам, достигшим 18 лет, выполняющим работы по заготовке, хранению, обработке сырья и продуктов животноводства, по убою скота, заготовке и переработке полученных от него мяса и мясопродуктов, животноводам, ветеринарным работникам, зоотехникам, а также работникам бактериологических лабораторий, работающим с живыми культурами.

Для иммунизации людей против бруцеллеза применяется сухая живая вакцина, приготовленная из вакцинного штамма В. abortus 19 ВА, которая способствует сохранению наивысшего напряженного иммунитета в течение 5-6 месяцев. Ревакцинация проводится через 12 мес после вакцинации лицам с отрицательными серологическими и аллергическими реакциями на бруцеллез.

При выявлении случаев заболевания бруцеллезом сельскохозяйственных животных в животноводческих хозяйствах вне зависимости от форм собственности организуется проведение внеочередного профилактического медицинского осмотра работников, включая лабораторное обследование (серологическое, аллергическое).

При отрицательных результатах серологического и бактериологического исследования, диагностика бруцеллеза основывается на клинических данных и результате пробы Бюрне (Вершилова П.А., 1974, E1-Mohammady Н. et al., 2012, Naves J.H. et al., 2012). В этих случаях необходимо особенно тщательно дифференцировать иммуноаллергическую перестройку организма в результате заболевания бруцеллезом или вследствие ранее проведенной вакцинации против бруцеллеза.

В связи с тем, что лабораторная диагностика бруцеллеза, в настоящее время, не позволяет дифференцировать поствакцинальный и инфекционный процессы (МУК 4.2.3010-12. Порядок организации и проведения лабораторной диагностики бруцеллеза для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней), возникают трудности с выявлением заболевших людей среди лиц, иммунизированных против бруцеллеза.

Научно и практически доказана высокая диагностическая ценность кожной пробы Бюрне при исследовании иммуноаллергической перестройки у больных бруцеллезом и вакцинированных лиц (Онищенко Г.Г., 2006, Denoel Р.А. et al., 1997, Bercovich Z., 2000, Hort G.M., 2003).

Реакция на внутрикожное введение аллергена бруцеллезного жидкого - Бруцеллин, у людей больных бруцеллезом и иммунизированных вакциной из штамма В. abortus 19 ВА сопровождается гиперемией, отеком, болезненностью на месте введения препарата. Реакция становится положительной через 3-5 недель от начала болезни или вакцинации и сохраняется в течение длительного времени иногда до нескольких лет (Вершилова П.А. с соавт. 1974).

При помощи пробы Бюрне невозможно проведение дифференциальной диагностики аллергической перестройки организма обусловленной хроническим бруцеллезом и поствакцинальными иммунологическими процессами (Вершилова П.А. с соавт. 1974, Курманова К.Б. 1999, Желудков М.М. 2009, Dizbay М. et al., 2007, Shoja М.М. et al., 2008, Catakli Т. et al., 2009).

В связи с тем, что применяемая для иммунизации людей сухая живая вакцина, обеспечивает напряженность иммунитета в течение 5-6 месяцев, а ревакцинация контингента проводится через 12 мес, возникает риск инфицирования людей в течение 6-7 мес до ревакцинации. Заболевшие могут положительно реагировать на внутрикожное введение Бруцеллина, даже при серонегативных реакция на бруцеллез.

Наиболее близким к предлагаемому способу можно считать тест активации базофилов in vitro, при помощи которого определяют аллергическую перестройку организма при пищевых и лекарственных аллергиях (Клыкова Т.В. с соавт., 2010, Богачева Н.В. с соавт., 2011, Boumiza R, Debard A.-L., Monneret G., 2006. Maria L. Sanz et al., 2010).

Применительно к бактериальным инфекциям аналогичные исследования не проводились.

Предлагаемый способ основан на оценке аллергической реакции организма и может использоваться как дифференциальный тест инфекционного и поствакцинального бруцеллезного процесса у больных и иммунизированных против бруцеллеза людей.

Целью настоящего изобретения является дифференциация инфекционного и вакцинного бруцеллезного процессов по уровню в крови людей активированных Бруцеллином базофилов, экспрессирующих рецепторы CD63 определяемых методом проточной цитофлюорометрии.

Поставленная цель достигается тем, что в стабилизированную кровь обследуемых людей добавляют Бруцеллин, после чего определяют экспрессию на базофилах рецепторов к маркеру дегрануляции CD63 методом проточной цитометрии.

Заявляемый способ отличается возможностью дифференцировать инфекционный и вакцинный бруцеллезный процесс по уровню количественных различий активированных бруцеллезным антигеном базофилов крови. Экспрессию на базофилах маркера дегрануляции CD63 определяют на проточном цитометре FACSCalibur, используя диагностический набор «Flow CAST», содержащий буфер для стимуляции, лизирующиий раствор, специфические моноклональные антитела, положительный контроль (Buhlmann laboratories, Швейцария).

На каждого испытуемого используют три отдельные пробирки типа «ФАЛКОН» объемом 15×75 мм.

1-я пробирка - фоновая проба содержит 50 мкл «буфера для стимуляции»;

2-я пробирка - содержит 50 мкл «положительного контроля»;

3-я пробирка - содержит 50 мкл аллергена бруцеллезного жидкого - Бруцеллин.

Во все три пробирки вносят по 100 мкл «буфера для стимуляции» и 50 мкл стабилизированной крови взятой от испытуемых людей, перемешивают и во все пробирки добавляют по 20 мкл суспензии моноклональных антител против маркера дегрануляции базофилов CD63. Полученную смесь инкубируют 15 мин на водяной бане при 37°C. Затем добавляют 2,0 мл предварительно прогретого до 18-28°C рабочего разведения лизирующего раствора. Пробы оставляют на 5-10 мин при 18-28°C, после чего центрифугируют 5 мин при 2000 об/мин, удаляют супернатант и вносят 450 мкл отмывочного буфера.

Экспрессию на базофилах рецепторов активации базофилов CD63 определяют на проточном цитометре.

При учете результатов аллерготестирования из процента активированных базофилов, экспрессирующих рецепторы CD63 в пробирке с антигеном вычитают процент базофилов в фоновой пробе, полученная разница и является искомым результатом.

Пример: Исследовали кровь 16 пациентов с установленным диагнозом - хронический бруцеллез и 15 человек, иммунизированных штаммом В. abortus 19 ВА. Контролем служила кровь 12 доноров не больных бруцеллезом и не вакцинированных против данной инфекции.

В результате эксперимента установлено увеличение количества базофилов экспрессирующих рецепторы CD63+ в крови людей больных бруцеллезом, по сравнению с данными, полученными у вакцинированных добровольцев. У вакцинированных против бруцеллеза людей количество активированных Бруцеллином базофилов находится в пределах от 5,1% до 19%, у больных бруцеллезом от 19,1% и выше, у относительно здоровых доноров от 0% до 5%.

Достоинством заявляемого способа является возможность дифференцировать вакцинный и постинфекционный бруцеллезный процессы. Использование указанного способа исключает добавочное антигенное воздействие на организм и позволяет проводить постановку и учет реакций в течение 1 часа.

Таким образом, предлагаемый способ реально осуществим, может использоваться как дифференциальный тест инфекционного и вакцинного бруцеллезного процесса у больных бруцеллезом и вакцинированных против бруцеллеза людей.

Способ дифференциальной диагностики поствакцинального и инфекционного бруцеллезного процессов у людей в условиях in vitro, характеризующийся инкубацией цельной гепаринизированной крови с бруцеллезным жидким аллергеном - Бруцеллином и моноклональными антителами против маркера дегрануляции базофилов - CD63+, заключающийся в определении методом проточной цитометрии количества активированных базофилов, которое у вакцинированных против бруцеллеза находится в пределах от 5,1% до 19%, у больных бруцеллезом людей от 19,1% и выше.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения эрозивных поражений слизистой оболочки желудка у детей с ювенильным артритом. Проводят комплексную оценку в баллах показателей жалоб, анамнеза, лабораторных показателей: отсутствие болей в животе - 4 балла, мужской пол пациента - 4 балла, возраст пациента старше 12 лет - 4 балла, наличие комбинированной противовоспалительной терапии - 4 балла, длительность комбинированной терапии от 1 до 3 лет - 3 балла, системный вариант ювенильного артрита - 2 балла, отсутствие аутоантител к H+K+/АТФ-азе париетальных клеток желудка - 4 балла, положительный тест «Colon View Hb/Нр» - 4 балла, уровень пепсиногена II больше нормы - 3 балла, снижение соотношения пепсиногена I к пепсиногену II - 3 балла, уровень гастрина-17 больше нормы - 2 балла.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у подростков в возрасте от 14 до 17 лет включительно с помощью измерения соотношения 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 в моче, отличающийся тем, что проводят количественное определение метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона и 16α-гидроксиэстрона в моче in vitro, вычисляют их соотношение и сравнивают полученные значения с установленными нормативами для здоровых сверстниц, при значении 0,71±0,03 диагностируют СПКЯ.

Группа изобретений относится к области мониторинга здоровья по части функции иммунной системы и измерения эффектов токсинов и других воздействий. Способ включает в себя предоставление аппарата, предоставление образца крови, установление базового значения молекулярного кислорода, приложение воздействия на упомянутый образец, получение данных об изменении концентрации молекулярного кислорода и скорости ее изменения, а также сравнение полученных данных с данными здорового индивидуума.

Настоящее изобретение относится к контейнеру, предназначенному для хранения множества тест-полосок, пригодных для анализа биологической жидкости, например крови.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования скорости рубцевания язв у больных неосложненной язвенной болезнью желудка, включающий определение отношения произведения процента жировой массы тела, скорости оседания эритроцитов и процентного содержания моноцитов к процентному содержанию лимфоцитов общего анализа крови, устанавливающий коэффициент рубцевания по формуле: где % ЖМТ - процент жировой массы тела, определяемый измерением кожно-жировых складок в 4 точках тела калиперометрией по методу Durnin - Womersley (1974); СОЭ, мм/ч; % моноциты; % лимфоциты - показатели общего анализа крови, если коэффициент рубцевания ≥8, прогнозируется скорость рубцевания язвы в желудке ≥0,044 см2/день, если коэффициент рубцевания <8, прогнозируется скорость рубцевания язвы в желудке <0,044 см2/день.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу ранней диагностики хронического пылевого бронхита путем исследования биологического материала. Сущность способа состоит в том, что при морфологическом, иммуногистохимическом исследовании легких и бронхов определяют наличие белков семейства мышечных антител: виментина, десмина, актина в эпителиальном компоненте.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для клинического и гистологического исследования эритродермии. Для этого проводят биопсию: выполняется из наиболее инфильтрованного участка кожи.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ ранней диагностики эндогенной интоксикации путем расчета раннего интегрального индекса интоксикации (РИИ), отличающийся тем, что РИИ для мужчин рассчитывается по формуле: а РИИ для женщин рассчитывается по формуле: где Гомоцист.

Изобретение относится к медицине, а именно к компьютерной обработке и анализу медицинских изображений, и может быть использован для автоматической диагностики маркеров гипоксии головного мозга человека.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования частого развития острых респираторных вирусных инфекций в течение первого года жизни у доношенных новорожденных с внутриутробным гриппом В.
Изобретение относится к области медицины, а именно к реагенту для предварительной подготовки биологического образца in vitro диагностике инфекционного заболевания. Реагент для предварительной подготовки биологического образца к in vitro диагностике инфекционного заболевания методом ПЦР представляет собой водный раствор, содержащий спирт, щелочь и третичный амин в концентрациях, обеспечивающих повышение эффективности амплификации не менее чем на 2 цикла. Способ предварительной подготовки биологического образца. Способ хранения биологического образца. Применение реагента для предварительной подготовки биологического образца. Использование заявленного реагента позволяет эффективно очистить клетки от ингибиторов ПЦР-реакции, инактивировать микроорганизмы в биологических образцах, осуществить их разжижение с сохранением стабильности ДНК, обеспечив повышение амплификации не менее чем на 2 цикла. 4 н. и 1 з.п. ф-лы, 8 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки эффективности противотуберкулезной химиотерапии у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания. Сущность способа состоит в том, что проводят диагностические исследования после процедуры химиотерапии и путем сравнения результатов диагностических исследований до и после проведения процедуры химиотерапии судят об эффективности процедуры химиотерапии. С помощью пипетки в лунку скрипта наносят 200 мкл плазмы, осуществляют ее инкубацию в течение 30 минут при комнатной температуре и определяют в ней концентрацию прокальцитонина путем сравнения интенсивности окрашивания тестовой линии с окрашенными блоками на карточке сравнения. При концентрации прокальцитонина <0,5 нг/мл, что соответствует отсутствию окрашивания тестовой линии, результат диагностических исследованиях считают отрицательным. В случае если уровень прокальцитонина до и после проведения процедуры химиотерапии уменьшился, то оценивают эффективный результат лечения с использованием процедуры химиотерапии. Использование заявленного способа позволяет осуществить раннюю диагностику эффективности противотуберкулезной химиотерапии у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания. 1 пр.

Изобретение касается способа определения правильности проведения теста в отношении образца биологической жидкости и/или составляющей биологической жидкости, внесенного для проведения теста в проточном тестовом элементе. Элемент имеет несколько функциональных зон (3, 4, 5, 6), по меньшей мере частично сообщающихся между собой и включающих в себя зону (3) внесения, предназначенную для внесения образца жидкости, и зону (5) тестирования, сообщающуюся с зоной (3) внесения и выполненную с возможностью определения маркера в образце. Проточный тестовый элемент имеет по меньшей мере одну соединительную зону (4), расположенную между зоной (5) тестирования и зоной (3) внесения, сообщающуюся с этими зонами (3, 5) и задерживающую по меньшей мере 95% эритроцитов, и зону (6) контроля, расположенную ниже по потоку от зоны (5) тестирования, сообщающуюся с ней и содержащую контрольный реагент. Для одной или нескольких функциональных зон (3, 4, 5, 6) измеряют по меньшей мере один оптический параметр и сравнивают его измеренное значение с его заданным значением, поставленным в соответствие одной или нескольким функциональным зонам (3, 4, 5, 6). Таким образом, оптически определяют содержание эритроцитов. 9 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к устройствам, предназначенным для неинвазивного определения содержания глюкозы в крови с использованием электромагнитных волн. Устройство для определения содержания глюкозы в крови содержит отрезок металлической волноводной линии передачи, плоскопараллельную пластину, второй отрезок металлической волноводной линии передачи. При этом первый и второй отрезки волноводной линии передачи снабжены фланцами с обоих концов, с одинаковыми размерами внутреннего поперечного сечения. Внутренняя часть второго отрезка металлической волноводной линии передачи заполнена диэлектриком. Фланец одного конца первого отрезка металлической волноводной линии передачи, плоскопараллельная пластина и фланец одного конца второго отрезка соединены между собой механически. Другой конец первого отрезка металлической волноводной линии передачи предназначен для соединения с источником электромагнитной волны и измерителем коэффициента отражения, а другой конец второго отрезка предназначен для контакта с кровью. Длина второго отрезка кратна половине длины электромагнитной волны во втором отрезке металлической волноводной линии передачи. Устройство позволяет увеличить точность определения содержания глюкозы в крови. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов органа зрения для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени. Сущность способа: хирургически выделяют фрагмент теноновой капсулы, в которой на проточном цитофлюориметре определяют распределение CD-маркеров на поверхности клеток. Данное изобретение отличается высокой точностью, чувствительностью и специфичностью определения популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы. Объективность интерпретирования результатов позволяет использовать заявленный способ для разработки более эффективных методов профилактики и лечения стационарной миопии средней степени, в которых активно участвуют соединительнотканные структуры глаза. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов. Сущность способа состоит в том, что в родах одновременно забирают кровь роженицы из периферической вены, пуповинную кровь, околоплодные воды и грудное молоко, а также кусочек плаценты, в которых методом ПЦР определяют наличие РНК вируса гепатита С или ДНК вируса гепатита В. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к посмертной патоморфологической диагностике бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга. Сущность способа состоит в том, что проводят микроскопическое, морфометрическое и гистохимическое исследование продольных гистологических срезов бифуркации артерии. При выявлении не менее трех признаков: увеличении длины сочленения артерий более 370 мкм, наличии метахромазии основного вещества в сочленении и адвентиции артерий, декомплексации и неравномерной толщины коллагеновых волокон, фрагментации и лизиса внутренней эластической мембраны и эластических волокон адвентиции, диагностируют бифуркационную недостаточность сосудов артериального круга большого мозга. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга за счет комплексной оценки изменений гистологических признаков. 1 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу неинвазивной диагностики развития тубулоинтерстициального фиброза (ТИФ) у пациентов с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС). Сущность способа состоит в том, что у пациентов с ФСГС исследуют мочу на масс-спектрографе, и при выявлении в моче белков TGF β2 и/или цистатина B диагностируют развитие ТИФ. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать развитие ТИФ. 4 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано в неврологии для диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. Изобретение представляет способ диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. Изобретение обеспечивает высокую точность и специфичность осуществления диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени. 2 пр.
Наверх