Способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека


 


Владельцы патента RU 2575086:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургский государственный аграрный университет" (RU)

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору. Способ предусматривает выделение из кишечной микрофлоры человека чистых культур энтерококков, их идентифицикацию и определение у выделенных штаммов энтерококков видов E. faecalis и E. faecium способности к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активности - AHbA). К нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E. faecalis и E. faecium, не обладающие AhbA, и Е. faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а Е. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л. Изобретение позволяет повысить точность идентификации энтерококков. 3 пр., 1 табл.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в практической работе бактериологических лабораторий для дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору с целью проведения своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Энтерококки, входящие в состав нормальной микрофлоры тела человека, в частности, пищеварительного тракта, играют важную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистой оболочки. В то же время энтерококки являются представителями группы условно-патогенных бактерий и штаммы микроорганизмов рода Enterococcus кишечной микробиоты человека могут стать причиной эндогенной инфекции [Валышева И.В. Генетическая характеристика вирулентного потенциала энтерококков кишечной микробиоты человека. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012. №4. С. 45]. Энтерококки кишечной микрофлоры с экспрессией двух и более факторов патогенности могут иметь существенное значение в развитии эндогенных инфекций, особенно у иммунокомпрометированных пациентов [Валышев А.В., Герцен Н.В. Факторы патогенности энтерококков кишечной микрофлоры человека. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2012. №4. С. 42].

Рост инфекций, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, диктует необходимость поиска новых способов дифференциации нормальной микрофлоры от этиологических агентов, способных вызывать развитие патологических процессов [Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. М.: «Медицина», 1999. С. 185].

Известна дифференциация резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры, основанная на оценке способности микроорганизмов к инактивации лизоцима [Чернова О.Л. Антилизоцимная активность стафилококков, выделенных при бактерионосительстве. Автореф. дис. … канд. биол. наук. Челябинск, 1998. С. 8.] или их устойчивости к коммерческому препарату лейкоцитарного интерферона [патент РФ №2092562, МПК C12Q 1/04, C12N 1/20, C12Q 1/14, 1997].

Указанные способы предназначены лишь для дифференциации резидентной и транзиторной стафилококковой микрофлоры у бактерионосителей в носовой полости и не могут быть использованы для других видов микроорганизмов и иных экологических ниш.

Известен способ дифференциации нормальной микрофлоры урогенитального тракта человека от возбудителей инфекционно-воспалительного процесса по способности выделенных микроорганизмов к инактивации антимикробного белка тромбоцитов [патент РФ №2260054, C12Q 1/04, 2005].

Вышеуказанный способ предназначен для дифференциации нормальной микрофлоры от возбудителей инфекционно-воспалительного процесса урогенитального тракта человека и не может быть использован для других видов микроорганизмов и иных экологических ниш.

Известен способ дифференциации энтерококков, полезных для человека, от энтерококков патогенных путем разграничения потенциально опасных штаммов по их генетическому профилю с применением полимеразной цепной реакции. При обнаружении генов, кодирующих факторы вирулентности энтерококков, делают заключение о патогенности штамма энтерококка [Вершинин А.Е., Колоджиева В.В., Ермоленко Е.И., Грабовская К.Б., Климович Б.В. и др. Генетическая идентификация как способ выявления патогенных и симбиотических штаммов энтерококков. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2008. №5. С. 82].

Известен способ дифференциации патогенных и непатогенных энтерококков разной локализации у новорожденных детей (кишечник, пупочная культя, нижние дыхательные пути, мочевыводящие пути) с помощью математической формулы с использованием линейной дискриминантной функции, характеризующей тип штамма энтерококка.

Данный способ основан на выделении энтерококков, определении их вида и изучении у выделенных штаммов энтерококков маркеров патогенности и персистенции (гемолитической, протеолитической, фибринолитической активности, полиантибиотикорезистентности, адгезивной способности, лизоцимной и антилизоцимной активностей) [Черданцева Г.Α., Билимова С.И. Характеристика биологических свойств энтерококков различного происхождения. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №4. С. 103].

Однако данный способ является очень трудоемким, поскольку предполагает определение шести биологических свойств (маркеры вирулентности и персистенции) у выделенных штаммов, а также определение у них антибиотикорезистентности. Применение способа в клинической практике затруднено из-за сложности математических расчетов.

Наиболее близким к заявляемому способу по назначению и совокупности существенных признаков является способ дифференциации энтерококков на представителей нормальной микрофлоры кишечника и возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний, основанный на способности энтерококков к инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма (антилизоцимной, антикомплементарной, «антиинтерфероновой», антитромбоцитарной катионно-белковой активности) [Билимова С.И. Характеристика факторов персистенции энтерококков. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2000. №4. С. 104].

Указанный способ имеет ряд существенных недостатков:

1. Трудоемок для применения в условиях клинической лаборатории и больше подходит для научно-исследовательских целей из-за необходимости определения у выделенных микроорганизмов нескольких факторов персистенции (антилизоцимной, антикомплементарной, «антиинтерфероновой», антитромбоцитарной катионно-белковой активности).

2. Требует использования тест-культур для определения величины указанных активностей и, как следствие, дополнительных манипуляций и реактивов для их подготовки.

3. Способ предназначен для дифференциации энтерококков - представителей симбиотической микрофлоры кишечника от возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний.

Технический результат, на достижение которого направлено заявляемое изобретение, заключается в возможности дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору.

Для достижения указанного технического результата в заявляемом способе дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека проводят забор исследуемого материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур энтерококков, определение способности выделенных микроорганизмов к инактивации бактерицидных факторов, отличающийся тем, что в качестве бактерицидного фактора используют гемоглобин и к нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E. faecalis и E. faecium, не обладающие способностью к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активностью - AHbA), и Е. faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а Е. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л.

Новым в заявляемом способе является то, что у выделенной культуры микроорганизма определяют антигемоглобиновую активность, при этом к нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E. faecalis, и E. faecium, не обладающие способностью к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активностью - AHbA) и Е. faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а Е. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л.

Достигаемый при осуществлении изобретения технический результат состоит в том, что заявляемый способ путем определения у энтерококков антигемоглобиновой активности позволяет дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Известно, что гемоглобин обладает бактерицидными свойствами [Froidevaux R., Krier F., Nedjar-Arroume N. et al. Antibacterial activity of pepsin-derived bovine hemoglobin fragment. FEBS Letters. 2001. Vol. 491. P. 159-163. Thulin K.E. Agglutination of bacteria by haemoglobin. Acta Rheumatol. Scand. 1957. № 3. Р. 154-168].

Известна способность микроорганизмов утилизировать железо из гемоглобина - антигемоглобиновая активность [патент РФ №2262705, МПК G01N 33/72, 2005].

Из научно-технических и патентных источников известно применение антигемоглобиновой активности микроорганизмов для прогнозирования анемии гнойно-воспалительных заболеваниях [патент РФ №2296336, МПК G12Q 33/72, C12Q 1/02, 2007].

Известно использование феномена способности микроорганизмов к инактивации бактерицидных факторов в клинике для прогнозирования течения заболеваний, вызываемых патогенными и условно-патогенными микроорганизмами [патент РФ №2132558, МПК G01N 33/569, 1999], а также для выбора рациональной терапии и оценки ее эффективности [патент РФ №2192880, МПК A61K 38/11, A61P 31/04, 2002].

Авторами экспериментально установлены различия в распространенности и выраженности антигемоглобиновой активности у энтерококков кишечной микрофлоры человека, выделенных из кишечника здоровых лиц и лиц с дисбиозом кишечника.

Исследование проведено на 95 штаммах энтерококков, выделенных из кишечника здоровых детей при обследовании на дисбиоз, 52 штаммах, выделенных от детей с дисбиозом кишечника.

Исследуемый материал (кал) засевали на чашки со средой Enterococcosel agar (BD, США). Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°C в течение 24-48 часов. Выросшие колонии пересевали на скошенный агар Шэдлера и изучали морфологию при окраске мазков по Граму. Чистую культуру идентифицировали до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров (синтез праймеров осуществлен компанией «СИНТОЛ», Москва) по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы [Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. Vol. 42(8). P. 3558-3565].

E. faecalis регистрировали в 46,2% случаев, Ε. faecium в 37% случаев, редкие виды энтерококков (E. durans, Ε. casseliflavus, Ε. gallinarum, E. hirae) были изолированы в 16,8% случаев.

Наиболее распространенными видами энтерококков кишечной микрофлоры человека являются E. faecalis и E. faecium [Бухарин О.В., Валышев А.В. Биология и экология энтерококков. Екатеринбург: Уро РАН, 2012. С. 7].

Поэтому у этих двух видов выделенных энтерококков определяли антигемоглобиновую активность известным способом [патент РФ №2262705, МПК G01N 33/72, 2005].

Результаты исследований представлены в таблице.

Как видно из таблицы, у штаммов Е. faecalis, выделенных из кишечника здоровых лиц, антигемоглобиновая активность присутствует в 70% случаев с уровнем выраженности признака от 0,96 г/л до 12,0 г/л.

В то же время энтерококки, выделенные из кишечника детей с дисбиозом, характеризовались наличием антигемоглобиновой активности в 100% случаев с уровнем выраженности признака от 12,1 г/л до 16,7 г/л.

Штаммы Ε. faecium, выделенные из кишечника здоровых детей, обладали антигемоглобиновой активностью в 62,5% случаев с уровнем выраженности признака от 1,1 г/л до 13,7 г/л; Е. faecium, выделенные от детей с дисбиозом кишечника, в 100% случаев обладали антигемоглобиновой активностью с уровнем выраженности признака от 13,8 г/л до 15,9 г/л.

Таким образом, проведенные исследования показали, что и штаммы Е. faecalis и штаммы Е. faecium, выделенные при дисбиозе кишечника, в 100% случаев обладали антигемоглобиновой активностью, при этом уровень выраженности данного признака у всех штаммов Е. faecalis был более 12,1 г/л, а у культур Е. faecium - более 13,8 г/л.

Тогда как у энтерококков, выделенных из кишечника здоровых детей, антигемоглобиновая активность определялась в 62,5-70% случаев с уровнем выраженности признака у Е. faecalis от 0,96 г/л до 12,0 г/л, а у Е. faecium - от 1,1 г/л до 13,7 г/л.

Таким образом авторами при изучении штаммов энтерококков, выделенных из кишечника здоровых людей и лиц с дисбиозом, установлены пороговые значения антигемоглобиновой активности штаммов Е. faecalis и штаммов Е. faecium, позволяющие отнести их к нормальной микрофлоре кишечника: к нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E. faecalis и E. faecium, не обладающие способностью к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активностью - AHbA), и Е. faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а Е. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л.

Предложенный способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека был испытан в Оренбургском клиническом перинатальном центре и ГБУЗ «Оренбургская районная больница». Эффективность дифференциации, проведенной в соответствии с заявляемым способом, составила 95%.

Способ осуществляется следующим способом:

1. Исследуемый материал (кал) засевают на чашки со средой Enterococcosel agar (BD, США).

2. Посевы инкубируют в термостате при температуре 37°C в течение 24-48 часов.

3. Выросшие колонии пересевают на скошенный агар Шэдлера и изучают морфологию при окраске мазков по Граму.

4. Чистую культуру идентифицируют до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы [Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. 42(8):3558-3565]. Синтез праймеров осуществлен компанией «Синтол» (Москва).

5. У выделенных штаммов энтерококков видов E. faecalis и E. faecium определяют антигемоглобиновую активность известным способом [патент РФ №2262705, МПК G01N 33/72, 2005].

6. К нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E. faecalis и E. faecium, не обладающие способностью к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активностью - AHbA), и Е. faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а Е. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л.

Примеры конкретного выполнения.

Пример 1.

В родильном доме у новорожденных детей (4 ребенка) были взяты фекалии и засеяны на чашки со средой Enterococcosel agar. Посевы инкубировали в термостате при температуре 37°C в течение 24-48 часов. Выросшие колонии пересевали на скошенный агар Шэдлера и изучали морфологию при окраске мазков по Граму.

По совокупности морфологических (овоидные (яйцевидные) неподвижные клетки несколько вытянутые в длину, расположены попарно) и тинкториальных свойств (положительные при окраске по Граму) свойств отнесли данный штамм к представителям рода Enterococcus.

Затем чистую культуру идентифицировали до вида с помощью мультиплексной ПЦР с использованием известных праймеров по видоспецифическим генам, кодирующим синтез супероксиддисмутазы.

У выделенных энтерококков определяли антигемоглобиновую активность известным способом [патент РФ №2262705, МПК G01N 33/72, 2005].

У двоих детей были выделены Е. faecalis, обладающие AHbA 10,3 г/л и 9,5 г/л, соответственно. От третьего ребенка был высеян Е. faecium с уровнем выраженности данного признака, равным 13,7 г/л. Был сделан вывод о том, что данные штаммы энтерококков относятся к нормальной микрофлоре кишечника. Дальнейшее наблюдение за пациентами подтвердило правильность проведенной дифференциации штаммов энтерококков.

У четвертого ребенка обнаружен Е. faecalis с AHbA, равной 15,2 г/л. Был сделан вывод о том, что выделенный энтерококк является патогенным. Ребенок отнесен к группе риска по развитию инфекционно-воспалительного заболевания, и ему назначена терапия цефураксимом.

Пример 2.

Из мочи у новорожденного с инфекцией мочевыводящих путей выделен Е. faecium. В поисках источника инфицирования мочевого тракта проведено исследование фекалий согласно примеру 1.

У обследуемого был выделен Е. faecium с антигемоглобиновой активностью 12,8 г/л. Согласно предлагаемому способу был сделан вывод о том, что данный энтерококк не является патогенным и не мог вызвать инфекцию мочевыводящих путей. Проведенное санитарно-микробиологическое исследование показало, что возбудитель заболевания является внутрибольничным штаммом, а источником инфицирования мочевых путей новорожденного явилась медицинская сестра.

Пример 3. При обследовании на дисбиоз у больной пиелонефритом З. 10 лет, выделен Е. faecalis с уровнем выраженности антигемоглобиновой активности 14,8 г/л. Согласно предлагаемому способу был сделан вывод о том, что выделенный энтерококк является патогенным и вызвал развитие пиелонефрита. Применен бактериофаг энтерококковый жидкий, несколько раз в день натощак. Дальнейшее наблюдение за пациенткой подтвердило правильность проведенных терапевтических мероприятий.

Таким образом, использование заявляемого способа позволяет дифференцировать энтерококки кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору, что способствует проведению своевременных и эффективных профилактических и терапевтических мероприятий.

Способ дифференциации энтерококков кишечной микрофлоры человека на нормальную и патогенную микрофлору, включающий забор исследуемого материала, его посев на селективные питательные среды, выделение и идентификацию чистых культур энтерококков, определение способности выделенных микроорганизмов к инактивации бактерицидных факторов, отличающийся тем, что в качестве бактерицидного фактора используют гемоглобин и к нормальной микрофлоре кишечника человека относят штаммы микроорганизмов видов E.faecalis и E.faecium, не обладающие способностью к инактивации гемоглобина (антигемоглобиновой активностью - AHbA), и E.faecalis, обладающие AHbA при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 12,0 г/л, а E. faecium при уровне выраженности данного признака, равном или меньше 13,7 г/л.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ связывания Mycobacteria и/или фрагментов Mycobacteria, присутствующих в водной жидкости, с твердой поверхностью.

Изобретение относится к микробиологии, а именно к санитарно-гигиеническому контролю за инфицированностью Listeria monocytogenes морской воды и морепродуктов. Способ определения сапрофитных бактерий, стимулирующих рост Listeria monocytogenes в морских микробных сообществах, предусматривает засев «газоном» одной половины чашки Петри с агаризованной средой СММ испытуемыми культурами, а другой половины чашки с ГРМ-агаром - тест-культурами листерий.

Изобретение касается способа выявления серологического родства микробов, имеющих общие детерминанты в составе липополисахаридов. Способ включает получение специфических антител на липополисахариды.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ определения наличия в биологических жидкостях, окружающей среде и продуктах питания бактерий Escherichia coli штамма O157:Н7, включающий дезинтеграцию бактерий ферментативной обработкой и лизис неионным детергентом, адсорбцию на парамагнитных частицах при помощи специфического моноклонального антитела, детекцию антигена бактерий Е.coli O157:Н7 при помощи специфического биотинилированного моноклонального антитела, связывание полученного комплекса с нековалентным коньюгатом ДНК-матрицы с нейтравидином, диссоциацию твердофазного комплекса "антитело-антиген Е.coli O157:Н7 - биотинилированное антитело-коньюгат" добавлением раствора глицин - HCl рН 2.6, ПЦР-амплификацию ДНК-матрицы и выявление наличия бактерий Е.coli O157:Н7 по скорости нарастания флуоресцентного сигнала.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии. Изобретение представляет собой питательную среду для визуального выявления Ureaplasma urealyticum, содержащую питательную основу, стимуляторы роста, мочевину, селективные компоненты, лошадиную сыворотку, pH индикатор и дистиллированную воду.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для определения микроорганизмов, вырабатывающих липазы в кондитерских изделиях. Способ определения в кондитерских изделиях микроорганизмов, вырабатывающих липазы, предусматривает отбор пробы, приготовление из пробы исходного разведения пробы и ряда десятикратных разведений с последующим высевом в две параллельные чашки Петри.

Способ дифференциации возбудителей чумы и псевдотуберкулеза по N-ацетил-β-D-глюкозаминидазной активности предусматривает получение суспензии агаровой культуры исследуемых бактерий в концентрации (1-5)×109 м.к., подготовку синтетического субстрата, в качестве которого используют 4-метилумбеллиферил-N-ацетил-β-D-глюкозаминид в количестве 50 мкМ.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается применения штамма Rickettsia sibirca subsp. sibirica.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается применения штамма Rickettsia slovaca. Представлено применение штамма Rickettsia slovaca "Карпунино-19/69", депонированного во Всероссийском музее риккетсиозных культур ФГБУ НИИЭМ им.

Представленное изобретение относится к области биотехнологии и касается способа обнаружения провируса лейкоза крупного рогатого скота. Охарактеризованный способ включает выявление фрагмента LTR (Long Terminal Repeat) - последовательности провируса лейкоза.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2108/Забайкальский/2010. Представленный штамм репродуцируется в первично трипсинизированной монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30) и почки свиньи (IB-RS-2). В течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений 6,25-6,75 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей. Представленный штамм может быть использован для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики ящура типа О. 4 з.п. ф-лы, 1 ил., 7 табл., 4 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается штамма риккетсий "Приморье - 25/81". Охарактеризованный штамм является представителем вида Rickettsia heilongjiangensis. Изолирован на территории РФ. Штамм является патогеном человека и депонирован во Всероссийском музее риккетсиозных культур ГУ НИИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи под №159. Изобретение может быть использовано для идентификации риккетсий группы клещевой пятнистой лихорадки и получения диагностических препаратов. 3 пр.

Изобретение относится к биохимии. Описана выделенная молекула нуклеиновой кислоты для обнаружения вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), которая содержит: 5′-agg pnn tgn atg pan tgg atg-3′ (SEQ ID NO: 10) или 5′-agg pnn tgn ntg ptn tgg atg-3′ (SEQ ID NO: 11) и набор, содержащий данную молекулу и инструкцию, где p = универсальный нуклеотид, который представляет собой 3-нитропиррол, 2′-дезоксинуклеозид и 5-нитроиндол или 6Н,8Н-3,4-дигидропиримидо[4,5-с][1,2]оксазин-7-он, и n = аналог цитидина, имеющий модификацию С-5. Представлена композиция для обнаружения ВИЧ, содержащая эффективное количество описанной молекулы, а также первый прямой праймер, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 14, и первый обратный праймер, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 15, и дополнительные реагенты. Представлен способ обнаружения ВИЧ в образце, включающий проведение ПЦР с использованием праймера, содержащего SEQ ID NO: 10, и праймера, содержащего SEQ ID NO: 11. 7 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано в гастроэнтерологии. Предложен способ определения чувствительности Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам. Проводят серию двукратных разведений антибактериальных препаратов в бульоне Шедлера с рН 7,6±0,2 в горизонтальных лунках 96-луночного планшета. Приготовленную взвесь бактерий вносят в лунки, культуру инкубируют в микроаэрофильных условиях в течение 24 часов при температуре 37°С. Добавляют реагент, используемый при постановке уреазного теста идентификации Helicobacter pylori. Измеряют оптическую плотность содержимого лунок планшета с помощью спектрофотометра, используя длину волны 630 нм. Минимальная подавляющая концентрация антибиотика определяется при построении графика соотношения концентрации антибиотика и оптической плотности и находится в точке выхода кривой на нулевой уровень значения оптической плотности. Способ обеспечивает повышение точности определения чувствительности культур Helicobacter pylori к антибактериальным препаратам. 2 ил., 6 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области микробиологии, ветеринарии, пищевой и фармацевтической промышленности. Предложена смывная нейтрализующая жидкость для отбора проб микроорганизмов при отрицательных температурах. Жидкость содержит 7,5 мас.% гипосульфита натрия, пропиленгликоль - 30,0 мас.% или 40,0 мас.% и, по необходимости, 10 мас.% глицерина. Изобретение обеспечивают возможность отбора проб при температурах до -30°С. Срок хранения проб без ухудшения жизнеспособности микроорганизмов в нейтрализующей жидкости без глицерина увеличивается до 3 суток, с добавкой глицерина - до 10 суток. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к методам определения пораженности грунтов микроорганизмами. Способ включает в себя помещение образца грунта в прибор для измерения деформации грунта со стрелочным индикатором, заливку дистиллированной водой или водой питьевого качества (контроль) или раствором специального состава (опыт). Осуществляют считывание показаний стрелочного индикатора прибора через определенные интервалы времени. Большая величина показаний стрелочного индикатора для опытного образца свидетельствует о наличии в грунте газообразующих микроорганизмов. Преимущество способа - сокращение времени исследований. 1 з.п. ф-лы, 2 ил. 1 пр.
Группа изобретений относится к микробиологии. Предложены жидкая микробиологическая питательная среда и ее применение. Жидкая микробиологическая питательная среда содержит: от 10 до 20 масс. частей дрожжевого экстракта, от 15 до 30 масс. частей пептона, от 35 до 75 масс. частей моно- и дисахаридов, до 3 масс. частей минеральных веществ, от 0,02 до 1 масс. части устойчивого желирующего вещества, а также воду. Питательная среда стерилизована в автоклаве или подвергнута ультравысокой температурной обработке (УВТ). При этом желирующее вещество является устойчивым к воздействию стерилизации в автоклаве или УВТ-обработки. Питательную среду, готовую к использованию, применяют для микробиологического скрининга в пищевой промышленности, при производстве животноводческих кормов, в косметологии, фарминдустрии, а также в области диагностики. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 1 пр.
Наверх