Способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени


 


Владельцы патента RU 2575575:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Тюменский государственный нефтегазовый университет" (ТюмГНГУ) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов органа зрения для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени. Сущность способа: хирургически выделяют фрагмент теноновой капсулы, в которой на проточном цитофлюориметре определяют распределение CD-маркеров на поверхности клеток. Данное изобретение отличается высокой точностью, чувствительностью и специфичностью определения популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы. Объективность интерпретирования результатов позволяет использовать заявленный способ для разработки более эффективных методов профилактики и лечения стационарной миопии средней степени, в которых активно участвуют соединительнотканные структуры глаза. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени.

Как показали углубленные клинические исследования последних лет, соединительнотканные структуры глазного яблока играют ведущую роль в патогенезе практически всех патологических процессов органа зрения - аномалии развития, дистрофии, новообразования, повреждения и воспаления.

Для прижизненного исследования фиброзной оболочки глазного яблока А. Arciniegas с соавт. (1986), G.R. Bell (1993) и Е.Н. Иомдина (1992) предлагают использовать механико-математическую модель на основе анализа кривых зависимости напряжение-деформация, полученных для образцов изолированной и миопической склеры.

Известен способ оценки биомеханических свойств склеры определения отношения скорости распространения в склере акустических поверхностных волн в середине верхнего века в горизонтальном и вертикальном направлениях. При его отрицательном значении прогнозируют прогрессирование течения близорукости (патент RU 2068654 опубл. 10.11.1996).

Недостатком известного способа является низкая информативность, не позволяющая прижизненно оценить морфо-функциональные характеристики соединительнотканных оболочек глазного яблока.

Известен инструментальный метод, в котором в качестве прогностического критерия используется величина акустической плотности экваториальных отделов склеры, определяемая с помощью ультразвукового В-сканирования плотности экваториальных отделов склеры в стандартизированных условиях (патент RU 2055522, опубл. 10.03.1996).

Данная методика также не обладает достаточными возможностями для доклинической диагностики дистрофических изменений соединительнотканных оболочек глазного яблока.

Наиболее близким к заявляемому является способ использования в качестве объекта для прижизненного изучения патогенеза прогрессирующей миопии тенонову капсулу глаза - соединительнотканную оболочку, прилежащую к склере, образцы которой получают во время различных хирургических вмешательств (Иомдина Е.Н., Тарутта Е.П., Игнатьева Н.Ю., Костанян И.А., Минкевич Н.И., Какуев Д.Л., Радченко В.В., Шехтер А.Б., Данилов Н.А., Кварацхелия Н.Г., Чернышева С.Г. Фундаментальные исследования биохимических и ультраструктурных механизмов патогенеза прогрессирующей миопии // Российский офтальмологический журнал. - 2008. - Том 1, №3. - С. 7-12). Изучались образцы теноновой оболочки, взятые во время склероукрепляющих вмешательств с последующим применением комплекса фундаментальных методов - дифференциальной сканирующей калометрии (ДСК), трансмиссонной электронной микроскопии, электрофореза в агарозном геле, вестерн-блот-анализа, иммуногистохимии, биохимии.

Недостатком этого метода является трудоемкость, длительность его проведения, односторонность и вследствие этого низкая информативность и точность оценки клеточного состава теноновой капсулы (анализ только фибробластов), что не обеспечивает учета полноты анализа популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и их активационно-пролиферативного потенциала.

Задача, на решение которой направлено предлагаемое изобретение, состоит в разработке способа диагностики стационарной миопии средней степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока, повышающего точность и объективность результатов исследования, универсальность применения и стандартность проводимой оценки.

Указанный результат достигается тем, что в качестве способа прижизненной оценки морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока предлагается метод проточной цитометрии теноновой капсулы. А предлагаемый способ включает в себя использование проточного цитофлюориметра и многоцветного цитометрического анализа, которые дают возможность индентификации популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы и определения их активационно-пролиферативных характеристик.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом. Забор теноновой капсулы производится во время оперативного вмешательства при проведении склероукрепляющих операций. Затем теноновую капсулу помещают в криопробирки 2 мл (Costar) с раствором для замораживания (эмбриональная телячья сыворотка 90% + диметалсульфоксид 10% + криопротектор (90% Fetal Bovine Serum + 10% DMSO)). Замораживание производят в парах жидкого азота до -180°С со скоростью заморозки 1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания). Охлажденные криопробирки с материалом помещают в жидкий азот (t -180°С) в сосуды Дюара (СДС-35М ОАО «НПО ГЕЛИЙМАШ» г. Москва). Для проведения проточной цитометрии замороженный материал подвергают медленной разморозке в парах жидкого азота со скоростью +1°С в минуту с использованием программного биологического замораживателя Kryo 560-16 (Planer, Великобритания) для сохранения высокой жизнеспособности клеток.

Размороженный материал переносят в стерильную стеклянную центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%. Затем измельчают клеточные элементы в Medimashine (Becton Dichinson, Cod 79300, maximal volume 1 ml, нож BD medicors) до получения гомогенной клеточной суспензии. Осаждают строму в центрифуге при 1500 об/мин в течение 10 минут.

Надосадок, содержащий клетки теноновой капсулы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки. Супернатант удаляют, а к осадку, содержащему клетки теноновой капсулы, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и рессуспендируют. В полученной суспензии определяют фенотип клеток с использованием моноклональных антител (CD) согласно международному протоколу.

Предлагаемый способ апробирован при заборе теноновой капсулы у 5 пациентов с эмметропической рефракцией и у 5 пациентов со стационарной миопией средней степени. В таблице приведены усредненные результаты содержания популяций и субпопуляций клеток, полученных при исследовании фрагментов теноновой капсулы.

Выбор панели анализируемых CD-маркеров основывался на результатах проведенного аналитического обзора и анализа современной научно-технической, нормативной, методической литературы, затрагивающей раздел структурной организации клеток соединительной ткани организма человека, в частности теноновой капсулы глазного яблока.

Установлено, что тенонова капсула при стационарной миопии средней степени достоверно отличается от эмметропии следующим содержанием популяции и субпопуляции клеток: повышенным содержанием кератиноцитов с фенотипом CD49f+, тучных клеток с фенотипом CD249+, моноцитов (макрофагов) с фенотипом CD45+CD14+HLADR+, более низким содержанием фибробластов (фиброцитов) с фенотипами CD45-CD14-CD44+CD80+, клеток Лангенгарса с фенотипом CD207+, эндотелиальных клеток с фенотипами CD146+ и CD146+CD34+.

Таким образом, современный метод проточной цитометрии и многоцветный цитометрический анализ позволили одновременно проанализировать коллосальное количество различных клеток теноновой капсулы, локализовать отдельные их группы, классы, популяции, субклассы, субпопуляции и оценить их функциональное состояние с использованием моноклональных антител (CD-маркеров).

В конечном итоге объективность интерпретации полученных результатов анализа содержания популяций и субпопуляций клеток теноновой капсулы позволяет использовать заявленный способ для выявления значимых патогенетических механизмов формирования стационарной миопии средней степени, в которых активно участвуют соединительнотканные структуры глаза, а значит разработать более эффективные методы профилактики миопии и добиться более высоких результатов в их лечении.

Заявителю неизвестны технические решения, обладающие указанными отличительными признаками, обеспечивающие в совокупности достижение заданного результата, поэтому авторы считают, что заявляемый способ соответствует критериям: новизны, изобретательского уровня и промышленной применимости. Заявляемое способ может найти широкое применение в медицине, офтальмологии, аллергологии и иммунологии, общей и клинической фармакологии.

Способ диагностики стационарной миопии средней степени с прижизненным определением морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока, отличающийся тем, что при хирургии выделяют фрагмент теноновой капсулы, который измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, для оценки на проточном цитофлюориметре распределения CD-маркеров на поверхности клеток теноновой капсулы замороженный материал размораживают в парах азота, переносят в центрифужную пробирку, отмывают физраствором и центрифугируют, удаляют супернатант и отмывают второй раз физраствором, а затем добавляют к осадку физраствор и полученную тканевую суспензию измельчают с выделением клеточных элементов теноновой капсулы, в полученной суспензии определяют CD-маркеры и при превышении содержания CD49f+, CD249+, CD45+CD14+HLADR+ клеток и снижения содержания CD45-CD14-CD44+CD80+, CD207+, CD146+ и CD146+CD34+ клеток диагностируют стационарную миопию средней степени



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к устройствам, предназначенным для неинвазивного определения содержания глюкозы в крови с использованием электромагнитных волн. Устройство для определения содержания глюкозы в крови содержит отрезок металлической волноводной линии передачи, плоскопараллельную пластину, второй отрезок металлической волноводной линии передачи.

Изобретение касается способа определения правильности проведения теста в отношении образца биологической жидкости и/или составляющей биологической жидкости, внесенного для проведения теста в проточном тестовом элементе.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу оценки эффективности противотуберкулезной химиотерапии у детей и подростков, больных туберкулезом органов дыхания.
Изобретение относится к области медицины, а именно к реагенту для предварительной подготовки биологического образца in vitro диагностике инфекционного заболевания. Реагент для предварительной подготовки биологического образца к in vitro диагностике инфекционного заболевания методом ПЦР представляет собой водный раствор, содержащий спирт, щелочь и третичный амин в концентрациях, обеспечивающих повышение эффективности амплификации не менее чем на 2 цикла.
Изобретение относится к области медицины и касается способа дифференциальной диагностики поствакцинального и инфекционного бруцеллезного процессов у людей в условиях in vitro.

Изобретение относится к медицине и предназначено для определения эрозивных поражений слизистой оболочки желудка у детей с ювенильным артритом. Проводят комплексную оценку в баллах показателей жалоб, анамнеза, лабораторных показателей: отсутствие болей в животе - 4 балла, мужской пол пациента - 4 балла, возраст пациента старше 12 лет - 4 балла, наличие комбинированной противовоспалительной терапии - 4 балла, длительность комбинированной терапии от 1 до 3 лет - 3 балла, системный вариант ювенильного артрита - 2 балла, отсутствие аутоантител к H+K+/АТФ-азе париетальных клеток желудка - 4 балла, положительный тест «Colon View Hb/Нр» - 4 балла, уровень пепсиногена II больше нормы - 3 балла, снижение соотношения пепсиногена I к пепсиногену II - 3 балла, уровень гастрина-17 больше нормы - 2 балла.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики синдрома поликистозных яичников (СПКЯ) у подростков в возрасте от 14 до 17 лет включительно с помощью измерения соотношения 2-ОНЭ1/16α-ОНЭ1 в моче, отличающийся тем, что проводят количественное определение метаболитов эстрогенов 2-гидроксиэстрона и 16α-гидроксиэстрона в моче in vitro, вычисляют их соотношение и сравнивают полученные значения с установленными нормативами для здоровых сверстниц, при значении 0,71±0,03 диагностируют СПКЯ.

Группа изобретений относится к области мониторинга здоровья по части функции иммунной системы и измерения эффектов токсинов и других воздействий. Способ включает в себя предоставление аппарата, предоставление образца крови, установление базового значения молекулярного кислорода, приложение воздействия на упомянутый образец, получение данных об изменении концентрации молекулярного кислорода и скорости ее изменения, а также сравнение полученных данных с данными здорового индивидуума.

Настоящее изобретение относится к контейнеру, предназначенному для хранения множества тест-полосок, пригодных для анализа биологической жидкости, например крови.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования скорости рубцевания язв у больных неосложненной язвенной болезнью желудка, включающий определение отношения произведения процента жировой массы тела, скорости оседания эритроцитов и процентного содержания моноцитов к процентному содержанию лимфоцитов общего анализа крови, устанавливающий коэффициент рубцевания по формуле: где % ЖМТ - процент жировой массы тела, определяемый измерением кожно-жировых складок в 4 точках тела калиперометрией по методу Durnin - Womersley (1974); СОЭ, мм/ч; % моноциты; % лимфоциты - показатели общего анализа крови, если коэффициент рубцевания ≥8, прогнозируется скорость рубцевания язвы в желудке ≥0,044 см2/день, если коэффициент рубцевания <8, прогнозируется скорость рубцевания язвы в желудке <0,044 см2/день.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов. Сущность способа состоит в том, что в родах одновременно забирают кровь роженицы из периферической вены, пуповинную кровь, околоплодные воды и грудное молоко, а также кусочек плаценты, в которых методом ПЦР определяют наличие РНК вируса гепатита С или ДНК вируса гепатита В. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к посмертной патоморфологической диагностике бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга. Сущность способа состоит в том, что проводят микроскопическое, морфометрическое и гистохимическое исследование продольных гистологических срезов бифуркации артерии. При выявлении не менее трех признаков: увеличении длины сочленения артерий более 370 мкм, наличии метахромазии основного вещества в сочленении и адвентиции артерий, декомплексации и неравномерной толщины коллагеновых волокон, фрагментации и лизиса внутренней эластической мембраны и эластических волокон адвентиции, диагностируют бифуркационную недостаточность сосудов артериального круга большого мозга. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга за счет комплексной оценки изменений гистологических признаков. 1 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу неинвазивной диагностики развития тубулоинтерстициального фиброза (ТИФ) у пациентов с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС). Сущность способа состоит в том, что у пациентов с ФСГС исследуют мочу на масс-спектрографе, и при выявлении в моче белков TGF β2 и/или цистатина B диагностируют развитие ТИФ. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать развитие ТИФ. 4 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано в неврологии для диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. Изобретение представляет способ диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. Изобретение обеспечивает высокую точность и специфичность осуществления диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции на первом и третьем триместре гестации. Для этого измеряют титр антител к ЦМВ, и при его значении 1:1600, повышении содержания в периферической крови беременной на 5-6 неделе гестации АКТГ до 150,01±,6 нг/мл и на третьем триместре до 180,50±2,50 нг/мл, кортизола на 5-6 неделе гестации до 756,80±38,67 нмоль/л и на третьем триместре до 1320,20±25,00 нмоль/л создается угроза нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции. Способ включает измерение в мембранах эритроцитов титра антител к цитомегаловирусу, содержания активности аденилатциклазы в эритроцитах периферической крови и АТФ. При титре антител к цитомегаловирусу 1:1600, снижении содержания в периферической крови эритроцитов с активностью аденилатциклазы до 10,0±0,2%, АТФ до 0,52±0,04 млмоль/мл и оксигемоглобина до 96,3±1,7% оценивают угрозу формирования у беременной гемической анемии. 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза анемии, развивающейся у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ). Определяют уровень вирусной нагрузки (ВН, МЕ/мл) в сыворотке крови. Определяют концентрацию гемоглобина в крови перед началом КПТ (Нbисходн, г/дл). Определяют уровень фиброза по результатам непрямой фиброэластографии печени (F, кПа). Рассчитывают прогнозируемую величину минимальной концентрации гемоглобина (Hbmin, г/дл) с помощью метода множественной линейной регрессии по формуле. Значение Hbmin<12,0 г/дл свидетельствует о наличии риска развития анемии у больных ХГС, получающих КПТ. Значения Hbmin от 11,9 г/дл до 10,0 г/дл предполагают развитие легкой степени анемии. Значения Hbmin от 9,9 г/дл до 8,0 г/дл - умеренной степени анемии. Значения Hbmin <8,0 г/дл - тяжелой степени анемии. Способ позволяет точно и быстро провести прогноз развития анемии за счет учета оптимального комплекса показателей. 1 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности, к стандартным образцам иммуноглобулина человека, используемым для определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов человека и способам их получения. Группа изобретений раскрывает способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека, включающий термическую обработку образца на водяной бане, охлаждение термически обработанного образца при температуре (22±3)°C, определение антикомплементарной активности образца положительного контроля; а также стандартный образец иммуноглобулина человека, содержащий положительный контроль, полученный заявленным способом и отрицательный контроль с антикомплементарной активностью в диапазоне 10-45%. Группа изобретений может быть использована для оценки качества препаратов иммуноглобулинов человека и позволяет определять антикомплементарную активность с повышенной достоверностью получаемых результатов. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 11 пр.

Изобретение относится к диагностической медицине, а именно к измерению водного баланса организма человека. Для этого определяют количество воды, поступившей с пищей в организм человека к моменту времени ti, как величину, пропорциональную общему количеству глюкозы, поступившей в кровь человека к моменту времени ti, определяемому как сумма упомянутого количества глюкозы, поступившей в кровь человека за каждый интервал времени от первого - Δt1 до i-го - Δti. После начала приема пищи периодически через интервалы времени Δti измеряют концентрацию глюкозы Gi в крови человека и за указанный интервал времени Δti. Таким образом определяют приращение концентрации глюкозы ΔGi в крови, приращение количества глюкозы в плазме крови ΔG(pl)i, количество глюкозы ΔG(tis)i, поступившей в инсулин зависимые ткани, количество глюкозы ΔG(met)i, израсходованной на метаболические процессы в организме, и количество глюкозы ΔG(tm)i, израсходованной на метаболические процессы в инсулин зависимых тканях. На основе полученных данных определяют количество глюкозы ΔG(Σ)i, поступившей в кровь человека за данный интервал времени Δti, согласно формуле ΔG(Σ)i=ΔG(pl)i+ΔG(tis)i+ΔG(met)i-ΔG(tm)i. Изобретение обеспечивает возможность определения количества воды, поступившей с пищей в организм человека, независимо от ее состава и в любой промежуток времени с учетом индивидуальных особенностей организма человека по усвоению пищевых продуктов. 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.
Наверх