Стабильная жидкая композиция этанерцепта
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению стабильной жидкой композиции этанерцепта, и может быть использовано в медицине. Получают жидкую композицию этанерцепта - слитого белка рекомбинантного sTNFR p75:Fc, состоящую по существу из этанерцепта и стабилизатора: метионина, лизина и/или гистидина. При этом стабилизатор присутствует в количестве от 0,1 до 250 мМ. Изобретение позволяет получить композицию с увеличенной стабильностью этанерцепта при хранении по сравнению с композицией, не имеющей стабилизаторов, вследствие уменьшения побочных продуктов этанерцепта, которые образуются в результате денатурации во время хранения. 13 з.п. ф-лы, 10 табл., 4 пр.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится к жидкой композиции этанерцепта (слитый белок рекомбинантного sTNFR (растворимый рецептор фактора некроза опухоли) p75:Fc) и более конкретно к жидкой композиции, содержащей один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей, в количестве, достаточном для уменьшения побочных продуктов этанерцепта во время хранения.
Предшествующий уровень техники
Этанерцепт представляет собой биологический модулятор воспаления, который действует как конкурентный ингибитор TNF-α (фактор некроза опухоли-α), связывающийся с рецептором TNF-α клеточной поверхности, для ингибирования TNF-α-опосредованных иммунных ответов. Этанерцепт представляет собой макромолекулу с молекулярной массой приблизительно 150 кДа и является гомодимером двух Fc-слитых белков, связанных дисульфидной связью, причем каждый Fc-слитый белок состоит из человеческого растворимого TNF-рецептора р75, соединенного с Fc-участком человеческого иммуноглобулина G подкласса 1 (Goldenberg, Clinical Therapeutics, 21(1): 75-87, 1999; Moreland et al., Ann. Intern. Med., 130(6): 478-486, 1999).
Этот прототипичный слитый белок впервые был синтезирован в начале 1990-х годов Брюсом А. Ботлером в Юго-западном медицинском центре Техасского университета и был выпущен на рынок компанией Amgen под товарным знаком Enbrel в 2002 году. Этанерцепт представляет собой ингибитор TNF-α, применяемый для лечения ревматоидного артрита, псориаза и анкилозирующего спондилита и находящийся на этапе клинических исследований для лечения васкулита, болезни Альцгеймера и болезни Крона.
Как и белковые лекарственные средства, лекарственные средства на основе антител имеют очень короткий период полужизни, и химическая и физическая денатурация может быть легко вызвана неблагоприятной температурой, напряжением сдвига, вибрацией, замораживанием-оттаиванием, воздействием УФ, чрезмерным изменением рН, органическими растворителями и микробной контаминацией. Химическая денатурация включает диссоциацию димера, окисление, дезамидирование, изомеризацию и полимеризацию, на которые оказывают влияние аминокислоты, составляющие антитело, и условия растворителя, в котором содержится антитело (соль, рН и температура). Физическая денатурация включает потерю третичной структуры, ковалентную/нековалентную агрегацию и адгезию мономеров, на которые оказывают влияние гидрофобные участки на поверхности белка, изменяемые под действием условий окружающих сред, в которых содержится антитело, таких как растворители, сложные белковые структуры, таких как распределение заряда и температурная стабильность. Физическая или химическая денатурация антитела приводит к потере его физиологических активностей. Поскольку денатурация представляет собой необратимый процесс, антитела, будучи денатурированными, не могут восстановить свои нативные свойства до первоначального состояния, что приводит к уменьшению их терапевтической эффективности. Было также отмечено, что агрегация мономеров вызывает иммунные ответы. Поэтому были проведены многочисленные исследования композиций антител, содержащих физиологически эффективное количество без агрегатов (Ishikawa et al., Biol. Pharm. Bull., 33(8): 1413-1417, 2010; Levin et al., The Development of Therapeutic Monoclonal Antibody Products, editors. Boston (MA): BioProcess Technology Consultants, Inc, Chapter 9).
Доступно много способов предотвращения денатурации белка в жидких композициях. В некоторых белковых лекарственных средствах проблемы стабильности решают путем лиофилизации. Например, в патенте США №7592004 раскрыта лиофилизированная композиция даклизумаба, стабилизированная с использованием 5-25 мМ гистидинового буферного раствора (рН 5,5-6,5), 0,005-0,03% неионного поверхностно-активного вещества, полисорбата и 100-300 мМ невосстанавливающего сахара, сахарозы. В публикации патента США №2010-0158925 раскрыта лиофилизированная композиция цетуксимаба, стабилизированная с использованием гистидинового буферного раствора и лактобионовой кислоты. Однако процесс лиофилизации оказывает воздействия замораживания и высушивания, такие как образование кристаллов льда, изменение рН и высокая концентрация растворенного вещества, и эти воздействия могут вызывать денатурацию антител. Кроме того, поскольку при производстве для процесса лиофилизации необходим лиофилизатор большой емкости, при больших объемах производства стоимость производства является высокой. Растворение лиофилизированного продукта в стерильной водной среде для восстановления перед использованием также причиняет неудобство.
В качестве альтернативы для устранения этих ограничений к жидкой композиции добавляют стабилизатор для улучшения стабильности антител. Поверхностно-активные вещества, сывороточные альбумины, полисахариды, аминокислоты, полимеры, соли или им подобные известны в качестве стабилизаторов для белков, включая антитела (Wang, Int. J. Pharm., 185: 129-188, 1999; Wang et al., J. Pharm. Sci., 96(1): 1-26, 2007).
В публикации патента США №2011-0070231 раскрыта стабильная жидкая композиция антитела IgG, где стабильная фармацевтическая жидкая композиция содержит 50 мг/мл или более даклизумаба в 20-60 мМ сукцинатного буферного раствора (рН 5,5-6,5), 0,02-0,04% полисорбата и 75-150 мМ хлорида натрия.
В публикации патента США №2011-0020328 раскрыто терапевтически эффективное количество композиции анти-CD20 антитела, где фармацевтически стабильная композиция содержит 10-100 мМ ацетата натрия, 25-100 мМ хлорида натрия, 0,5-5% аргинина в форме свободного основания, 0,02-0,2 мМ ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) и 0,01-0,2% полисорбата 80, и ее рН составляет 5,0-7,0.
В патенте США №7785592 раскрыта стабильная композиция, в которой 75 мг/мл или более паливизумаба стабилизировано с использованием гистидинового буферного раствора и глицина без ионных солей и поверхностно-активного вещества, и ее стабильность поддерживается при 2-8°C в течение по меньшей мере 15 месяцев.
В патенте США №6991790 раскрыта стабильная водная фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество антитела, ацетатный буферный раствор с приблизительным рН 4,8-5,5, поверхностно-активное вещество и полиол без изотонического агента, такого как хлорид натрия.
В патенте США №7648702 раскрыта жидкая композиция, в которой слитый белок человеческого рецептора фактора некроза опухоли р75, связанный с Fc-участком человеческого иммуноглобулина G1 (IgG1), стабилизирован с использованием приблизительно 10-200 мМ L-аргинина в качестве агента, предупреждающего агрегацию. В этом патенте представлена единственная методика, где в качестве активного ингредиента применяют этанерцепт.
Однако для получения стабильных композиций следует использовать подходящие стабилизаторы, принимая во внимание физико-химические свойства каждого активного ингредиента. Когда стабилизаторы применяют в комбинации, конкуренция между ними и неблагоприятные воздействия могут привести к нежелательным эффектам. Более того, концентрации антител должны быть в пределах диапазона, подходящего для стабилизации, а их концентрации относительно выше, чем концентрации белковых лекарственных средств. Таким образом, требуется много усилий и осторожности, чтобы стабилизировать антитела в растворах (Shire et al., J. Pharm. Sci., 93(6): 1390-1402, 2004).
Было проведено несколько исследований стабильных жидких композиций этанерцепта, и единственный способ стабилизации этанерцепта, который известен авторам изобретения, представляет собой применение L-аргинина в жидкой композиции. Следовательно, существует острая необходимость в разработке новой жидкой композиции, которая способна стабильно поддерживать активность этанерцепта в течение длительного периода и которая является более эффективной в стабилизации этанерцепта, чем известная композиция, содержащая L-аргинин.
Раскрытие изобретения
Техническая задача
Авторы настоящего изобретения приложили много усилий для разработки способа получения жидкой композиции, способной стабильно поддерживать активность этанерцепта. В результате они обнаружили, что один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина и гистидина, демонстрирует значительные эффекты по стабилизации этанерцепта в растворе, тем самым выполняя задачу настоящего изобретения.
Техническое решение
Цель настоящего изобретения заключается в том, чтобы обеспечить водную композицию, содержащую стабилизаторы для уменьшения образования побочных продуктов этанерцепта во время хранения в растворе и поддержания его активности в течение длительного периода времени.
Полезные свойства изобретения
Жидкая композиция по настоящему изобретению может эффективно предупреждать образование побочных продуктов этанерцепта и стабильно поддерживать его фармацевтическую эффективность во время длительного хранения. Следовательно, перед введением не требуется процедура восстановления, и стерильная композиция может быть введена пациентам для обеспечения безопасности пациентов. Таким образом, ожидается, что ее будут применять в областях, требующих лечения этанерцептом.
Наилучший способ осуществления изобретения
В одном аспекте настоящего изобретения, для достижения указанной выше цели предложена жидкая композиция, содержащая один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей.
Композиция по настоящему изобретению может быть жидкой композицией этанерцепта, содержащей этанерцепт и один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей.
Композиция демонстрирует повышенную стабильность при хранении вследствие уменьшения побочных продуктов этанерцепта, которые образуются в результате денатурации во время хранения.
В качестве стабилизаторов метионин, лизин, гистидин или их фармацевтически приемлемые соли могут присутствовать в композиции в количестве от 0,1 до 250 мМ.
Этанерцепт в композиции может присутствовать в количестве от 1 до 100 мг/мл.
Композиция может дополнительно содержать одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из буфера, изотонического агента, эксципиента и консерванта.
Буфер может быть выбран из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрата, фумарата, глюконата, оксалата, лактата, ацетата, гистидина и Трис, и может присутствовать в количестве от 0,1 до 100 мМ.
Изотонический агент может быть выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, борной кислоты, бората натрия, маннита, глицерина, пропиленгликоля, полиэтиленгликоля, мальтозы, сахарозы, эритрита, арабита, ксилита, сорбита и глюкозы, и может присутствовать в количестве от 1 до 1000 мМ.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Композиция этанерцепта по настоящему изобретению может представлять собой жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
Далее настоящее изобретение будет описано подробно.
В настоящем изобретении впервые показано, что метионин, лизин, гистидин и их фармацевтически приемлемые соли оказывают эффекты по уменьшению образования побочных продуктов этанерцепта в растворе и стабильному поддержанию его активности во время длительного хранения, и, таким образом, предложено их новое применение в качестве стабилизаторов фармацевтически эффективного количества этанерцепта.
Для получения стабильных композиций следует применять подходящие стабилизаторы, принимая во внимание физико-химические свойства каждого активного ингредиента. В соответствии с отличием по типам, концентрации и комбинациям веществ, включаемых в композицию, конкуренция между веществами в композиции может привести к нежелательным эффектам. Следовательно, трудно получить стабильную специфическую композицию лекарственного средства.
В свете изложенного выше уровня техники авторы настоящего изобретения обнаружили, что жидкая композиция, содержащая один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина и гистидина и их фармацевтически приемлемых солей, увеличивает стабильность этанерцепта при хранении по сравнению с композицией, не имеющей стабилизаторов, вследствие уменьшения побочных продуктов этанерцепта во время хранения в растворе.
Конкретно, в одном воплощении настоящего изобретения для выявления оптимального стабилизатора для получения стабильной жидкой композиции этанерцепта добавляют разнообразные аминокислоты, поверхностно-активные вещества и полимеры, чтобы проверить их стабилизирующие эффекты. В результате было обнаружено, что лизин, гистидин, метионин или их комбинация оказывают значительные эффекты по стабилизации этанерцепта путем предупреждения его денатурации во время хранения в растворе при высокой температуре.
Далее было обнаружено, что композиция по настоящему изобретению проявляет эффекты по стабилизации этанерцепта, которые были эквивалентны или превышали таковые у композиции, содержащей L-арганин, которая является известной стабильной композицией этанерцепта (патент США №7648702). В частности, было обнаружено, что метионин оказывает превосходный эффект по стабилизации этанерцепта, лучший чем L-аргинин.
Конкретно, побочные продукты этанерцепта, образующиеся во время хранения, были исследованы путем эксклюзионной HPLC (высокоэффективная жидкостная хроматография) (SE-HPLC). В результате, по сравнению с суммарным количеством примесей в композиции этанерцепта, которая была получена с использованием L-аргинина в качестве стабилизатора в патенте США №7648702, композиция, полученная с использованием лизина в качестве стабилизатора, демонстрировала похожее количество примесей, а композиция, полученная с использованием гистидина или метионина в качестве стабилизатора, демонстрировала меньшее количество примесей (см. таблицу 2). Анализ HPLC гидрофобного взаимодействия (HI-HPLC) также показал похожие результаты. Эти результаты показывают, что гистидин, лизин и метионин предупреждают денатурацию этанерцепта с ингибированием образования его побочных продуктов (см. таблицу 3).
Следовательно, жидкая композиция по настоящему изобретению может стабильно поддерживать фармацевтическую эффективность этанерцепта в течение длительного периода времени вследствие эффективного уменьшения образования побочных продуктов этанерцепта.
Как он применяется здесь, термин "этанерцепт (слитый белок рекомбинантного sTNFR p75:Fc)" относится к белку, который представляет собой гомодимерную форму двух Fc-слитых белков, связанных дисульфидными связями, где каждый Fc-слитый белок, состоящий из человеческого растворимого TNF-рецептора массой 75 килодальтон (р75), соединен с Fc-участком человеческого IgG1.
Конкретно, этанерцепт представляет собой гомодимерную форму двух Fc-слитых белков, связанных 3 дисульфидными связями, где каждый Fc-слитый белок, состоящий из внеклеточного лиганд-связывающего участка человеческого растворимого TNF-рецептора р75, связан с Fc-участком человеческого IgG1. Fc-компонент этанерцепта содержит СН2-домен, СН3-домен и шарнирную область, но не содержит СН1-домен IgG1. Этанерцепт может иметь молекулярную массу приблизительно 150 килодальтон (кДа). Этот этанерцепт может в настоящее время продаваться под товарным знаком ENBREL® (Amgen Inc., Thousand Oaks, CA.) и имеет номер CAS 185243-69-0.
Этанерцепт может быть получен с помощью технологии рекомбинантных ДНК, но не ограничивается этим.
Этанерцепт по настоящему изобретению представляет собой биологический модулятор воспаления, который действует как конкурентный ингибитор TNF-α, связывающийся с рецептором TNF-α клеточной поверхности, для ингибирования TNF-α-опосредованных иммунных ответов, и применяется для лечения ревматоидного артрита, псориаза и анкилозирующего спондилита и находится на этапе клинических исследований для лечения васкулита, болезни Альцгеймера и болезни Крона.
В жидкой композиции по настоящему изобретению этанерцепт содержится в терапевтически эффективном количестве. Предпочтительно, этанерцепт присутствует в количестве от 1 до 100 мг/мл.
Как он применяется здесь, термин "стабилизированная жидкая композиция" или "стабильная жидкая композиция" относится к композиции, которая сохраняет физическую и химическую идентичность и целостность терапевтически активного ингредиента, этанерцепта, во время хранения в растворе. Аналитическое измерение стабильности этанерцепта может быть осуществлено путем анализа стабильности белка, хорошо известного в данной области техники. Стабильность может быть измерена при заданной температуре в заданный момент времени. Для быстрого анализа композицию можно хранить при более высокой или "повышенной" температуре, например 40°C, в течение периода времени от 2 недель до 1 месяца или дольше, и в это время измерять ее стабильность в зависимости от времени.
Как он применяется здесь, термин "стабилизатор" относится к конкретному химическому веществу, которое взаимодействует с биологической молекулой и/или общим фармацевтическим эксципиентом в композиции для улучшения ее стабильности. Обычно стабилизатор защищает белки от воздействия, индуцированного границей раздела воздух/раствор, и воздействия, индуцированного раствором/поверхностью, которые вызывают агрегацию белка. В настоящем изобретении стабилизатор представляет собой компонент, который уменьшает образование побочных продуктов этанерцепта во время хранения в растворе для поддержания его активности в течение длительного периода времени, и предпочтительно представляет собой один или более чем один, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей.
Что касается аминокислот, то как L-формы, так и D-формы включены в объем настоящего изобретения. Не только сами аминокислоты, такие как метионин, лизин и гистидин, но также их аналоги, сольваты, гидраты и стереоизомеры и их фармацевтически приемлемые соли находятся в пределах объема настоящего изобретения до тех пор, пока они демонстрируют по существу такой же эффект.
Как он применяется здесь, термин "фармацевтически приемлемые соли" относится к соединениям, которые получены в форме солей аминокислот, таких как метионин, лизин и гистидин, в пределах той области, где сохраняются их функции как стабилизаторов по настоящему изобретению. Конкретно, они могут образовывать соль путем присоединения кислоты, и, например, они могут образовывать соль с неорганической кислотой (например, соляной кислотой, бромистоводородной кислотой, фосфорной кислотой, азотной кислотой, серной кислотой и им подобными), органической карбоновой кислотой (например, уксусной кислотой, галогеноуксусной кислотой, такой как трифторуксусная кислота, пропионовой кислотой, малеиновой кислотой, янтарной кислотой, яблочной кислотой, лимонной кислотой, винной кислотой, салициловой кислотой), сахарной кислотой (глюкуроновой кислотой, галактуроновой кислотой, глюконовой кислотой, аскорбиновой кислотой), кислым полисахаридом (например, гиалуроновой кислотой, хондроитинсульфатом, аргининовой кислотой), органической сульфоновой кислотой, включая сахарный эфир сульфоновой кислоты, такой как хондроитинсульфат (например, метансульфоновой кислотой, n-толуолсульфоновой кислотой).
Как он применяется здесь, термин "аналоги" относится к соединениям, которые демонстрируют такие же функции, что и аминокислоты, такие как метионин, лизин и гистидин, применяемые в качестве стабилизаторов по настоящему изобретению. В настоящем изобретении аминокислоты, такие как метионин, лизин и гистидин, включают их аналоги. В настоящем изобретении примеры аналогов могут включать аналоги метионина, а именно селенометионин, гидроксиметилбутановую кислоту, этионин и трифторметионин, но не ограничиваются ими.
Как он применяется здесь, термин "побочные продукты" относится к нежелательным продуктам, которые уменьшают соотношение терапевтически активного ингредиента, этанерцепта, в композиции. Типичные побочные продукты включают "низкомолекулярные продукты", возникающие в результате денатурации этанерцепта путем дезаминирования или гидролиза, "высокомолекулярные продукты", такие как олигомеры и агрегаты или их смеси.
Как он применяется здесь, термин "высокомолекулярные продукты" включает фрагменты этанерцепта, которые затем агрегируются вследствие денатурации (например, возникшие в результате деградации полипептида вследствие дезаминирования или гидролиза), или их смеси. Обычно высокомолекулярные продукты представляют собой комплексы, имеющие более высокие молекулярные массы, чем терапевтический мономер этанерцепта, и могут иметь молекулярную массу более чем приблизительно 150 кДа.
Как он применяется здесь, термин "низкомолекулярные продукты" включает, например, терапевтические полипептиды, образованные в результате дезаминирования или гидролиза, а именно фрагменты этанерцепта. Обычно низкомолекулярные продукты представляют собой комплексы, имеющие более низкие молекулярные массы, чем терапевтический мономер этанерцепта, и могут иметь молекулярную массу меньше чем приблизительно 150 кДа.
Жидкая композиция по настоящему изобретению содержит один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей. Конкретно, жидкая композиция содержит метионин, лизин или гистидин в качестве стабилизатора, или два стабилизатора, таких как метионин и лизин, метионин и гистидин или лизин и гистидин, или три стабилизатора, таких как метионин, лизин и гистидин. В упомянутой выше композиции, содержащей комбинации аминокислот, дополнительно могут быть добавлены фармацевтически приемлемые соли метионина, лизина, гистидина, соответственно, или метионин, лизин и гистидин могут представлять собой модифицированные формы фармацевтически приемлемых солей, соответственно. Жидкая композиция содержит предпочтительно метионин, лизин, гистидин, метионин и лизин, метионин и гистидин или лизин и гистидин и более предпочтительно метионин в качестве стабилизатора.
Метионин представляет собой незаменимую аминокислоту и имеет химическую формулу C5H11NO2S и молекулярную массу 149,21. Метионин представляет собой неполярную аминокислоту и содержит тиоэфирную группу (-S-СН3) в своей боковой цепи. Он имеет значение pK1 2,28, значение pK2 9,21 и значение изоэлектрической точки (pI) 5,74. Метионин предупреждает окисление антител в жидких композициях для стабилизации антител путем конкурирования с остатками метионина в антителах для реакции со свободными гидроксильными радикалами (Lam et al., J. Pharm. Sci., 86(11): 1250-1255,1997; Wang, Int.J. Pharm., 185: 129-188, 1999).
Лизин представляет собой незаменимую аминокислоту и имеет химическую формулу C6H14N2O2 и молекулярную массу 146,19. Лизин представляет собой основную аминокислоту и имеет значение pK1 2,18, значение pK2 8,95, значение pK3 10,53 и значение pI 9,74.
Гистидин представляет собой незаменимую аминокислоту с имидазольной функциональной группой, имеющей положительный заряд, в своей боковой цепи и имеет химическую формулу C6H9N3O2 и молекулярную массу 155,15. Гистидин представляет собой основную аминокислоту и имеет значение pK1 1,82, значение pK2 9,17, значение pK3 6,0 и значение pI 7,59.
В противоположность этому, L-аргинин, содержащийся в известных имеющихся в продаже композициях этанерцепта, представляет собой незаменимую аминокислоту и имеет химическую формулу C6H14N4O2 и молекулярную массу 174,2. Аргинин представляет собой основную аминокислоту и имеет значение pK1 2,17, значение pK2 9,04, значение pK3 12,48 и значение pI 10,76. То есть метионин, лизин и гистидин, применяемые в качестве стабилизатора в настоящем изобретении, полностью отличаются от аргинина как известного стабилизатора для этанерцепта по строению, химической формуле, физико-химическим свойствам и склонности к ионизации. В настоящем изобретении впервые продемонстрировано, что такие аминокислоты, как метионин, лизин и гистидин, представляют собой подходящие стабилизаторы для этанерцепта.
Содержание стабилизатора в жидкой композиции по настоящему изобретению составляет от 0,1 до 250 мМ, предпочтительно от 1 до 100 мМ и более предпочтительно от 5 до 50 мМ.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать любое вещество, которое обычно содержится в композициях белковых лекарственных средств и лекарственных средств на основе антител, для увеличения стабильности этанерцепта в соответствии с одним или более чем одним стабилизатором, выбранным из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей, кроме тех, которые ухудшают функцию настоящего изобретения. Например, L-аргинин, известный в качестве стабилизатора для этанерцепта, может быть добавлен к жидкой композиции по настоящему изобретению.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать буфер в дополнение к стабилизатору. Как он применяется здесь, термин "буфер" относится к компоненту, который улучшает изотоничность и химическую стабильность композиции и действует для поддержания физиологически подходящего рН. Буфер предупреждает быстрое изменение рН жидкой композиции для поддержания рН раствора для стабилизации этанерцепта. Предпочтительные примеры буфера включают цитрат, фосфат, сукцинат, тартрат, фумарат, глюконат, оксалат, лактат, ацетат, гистидин и трис, но не ограничиваются ими. В конкретном воплощении буфер представляет собой фосфатный буфер. Буфер может быть применен как один, так и в комбинации двух или более чем двух из них.
В различных воплощениях настоящего изобретения композиция должна иметь рН приблизительно 5-7,5 или рН приблизительно 5,8-6,8. В конкретном воплощении композиция имеет рН приблизительно 6,0-6,6. Подразумевается, что диапазоны от промежуточных значений до упомянутых выше значений рН, например приблизительно рН 5,2 до приблизительно рН 6,4 (например, рН 6,2), также составляют часть настоящего изобретения. Например, подразумевается, что диапазоны значений с использованием комбинации любых из упомянутых выше значений как верхнего и/или нижнего пределов включены. Если необходимо, рН может быть отрегулирован методами, известными в данной области техники. Например, рН может быть доведен до любого желаемого диапазона путем добавления HCl или путем добавления гистидина, если необходимо.
В другом воплощении буфер присутствует в концентрации от 0,1 до 100 мМ, предпочтительно от 1 до 50 мМ и более предпочтительно от 5 до 25 мМ. Подразумевается, что диапазоны от промежуточных значений до упомянутых выше концентраций также составляют часть настоящего изобретения. Например, подразумевается, что диапазоны концентраций с использованием комбинации любых из упомянутых выше концентраций как верхнего и/или нижнего пределов включены. В конкретном воплощении буфер должен присутствовать в количестве, достаточном для поддержания физиологически достаточного рН.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать изотонический агент в дополнение к стабилизатору. Как он применяется здесь, термин "изотонический агент" относится к компоненту, который действует для частичного поддержания изотоничности композиции и уровня белка и частичного поддержания уровня, соотношения или пропорции терапевтически активного полипептида, присутствующего в композиции. Изотонический агент обладает таким же осмотическим давлением, как плазма крови и, таким образом, может быть введен субъекту путем внутривенной инфузии без изменения осмотического давления плазмы крови субъекта. Действительно, в одном воплощении настоящего изобретения изотонический агент присутствует в количестве, достаточном, чтобы сделать композицию подходящей для внутривенной инфузии. Часто изотонический агент служит также и как наполнитель. Как таковой, изотонический агент может давать белку возможность преодолеть различные воздействия, такие как замораживание и деформация сдвига.
Изотонический агент служит для поддержания подходящего осмотического давления в организме, когда этанерцепт в растворе введен в организм. Примеры изотонических агентов могут включать широко применяемые хлорид натрия, хлорид калия, борную кислоту, борат натрия, маннит, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, мальтозу, сахарозу, эритрит, арабит, ксилит, сорбит и глюкозу, но не ограничиваются ими. В конкретном воплощении изотонический агент представляет собой NaCl. Эти изотонические агенты могут быть использованы как поодиночке, так и в комбинации из двух или более чем двух из них.
В еще одном воплощении изотонический агент (например, NaCl) присутствует в концентрации от 1 до 1000 мМ, предпочтительно от 10 до 500 мМ и более предпочтительно от 50 до 250 мМ. Подразумевается, что диапазоны от промежуточных значений до упомянутых выше концентраций также составляют часть настоящего изобретения. Например, подразумевается, что диапазоны концентраций с использованием комбинации любых из упомянутых выше концентраций как верхнего и/или нижнего пределов включены. Изотонический агент должен присутствовать в количестве, достаточном для поддержания осмоса композиции.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый эксципиент, и примеры эксципиента могут включать сахара и полиолы, поверхностно-активные вещества, полимеры или им подобные. Примеры сахаров и полиолов могут включать сахарозу, трегалозу, лактозу, мальтозу, галактозу, маннит, сорбит, глицерин, примеры поверхностно-активных веществ могут включать неионные поверхностно-активные вещества, такие как полисорбат 20, полисорбат 80 и полоксамер, а примеры полимеров могут включать декстран, полиэтиленгликоль, карбоксиметилцеллюлозу, гиалуроновую кислоту и циклодекстрин.
Жидкая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать консервант. Консервант представляет собой химическое вещество, которое добавляют в фармацевтические композиции в качестве антимикробного агента. Примеры консервантов могут включать бензалкония хлорид, бензетоний, хлоргексидин, фенол, м-крезол, бензиловый спирт, метилпарабен, пропилпарабен, хлорбутанол, о-крезол, п-крезол, хлоркрезол, нитрат фенил ртути, тимеросал и бензойную кислоту, но не ограничиваются ими. Эти консерванты могут быть использованы как поодиночке, так и в комбинации из двух или более чем двух из них.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 100 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 100 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 100 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 1 до 50 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 1 до 100 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 1 до 50 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 1 до 100 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
В конкретном воплощении композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия. Более конкретно, композиция по настоящему изобретению представляет собой стабильную жидкую композицию, содержащую от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 1 до 50 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 1 до 50 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 50 мМ фосфатного буфера и от 1 до 500 мМ хлорида натрия, при рН 6,0-6,6.
Композицию по настоящему изобретению можно применять для лечения заболевания, при котором этанерцепт является терапевтически эффективным. Этанерцепт представляет собой биологический модулятор воспаления для ингибирования TNF-α-опосредованных иммунных ответов, и композицию по настоящему изобретению применяют для лечения ревматоидного артрита, псориаза, анкилозирующего спондилита, васкулита, болезни Альцгеймера или болезни Крона, но не ограничиваясь ими. Композицию по настоящему изобретению можно вводить пероральным или парентеральным путем, т.е. подкожным, внутримышечным, внутрибрюшинным, интраабдоминальным, чрескожным путем, и/или внутривенно, но не ограничиваясь этим.
В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ увеличения стабильности этанерцепта с использованием жидкой композиции, содержащей один или более чем один стабилизатор, выбранный из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей.
Жидкая композиция может увеличивать стабильность этанерцепта при хранении вследствие уменьшения побочных продуктов этанерцепта, которые образуются в результате денатурации во время хранения.
Принцип изобретения
Здесь и далее настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на примеры. Однако данные примеры предназначены лишь для иллюстративных целей, и подразумевается, что изобретение не ограничено этими примерами.
Пример 1. Исследование стабильности водной композиции этанерцепта в зависимости от добавления стабилизатора
Для выявления оптимального стабилизатора для получения стабильной водной композиции этанерцепта гистидин добавляли в качестве стабилизатора к 5 мМ раствору фосфата, к которому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл, и к этому добавляли хлорид натрия в качестве изотонического агента для получения композиции 1.
Кроме того, к 10 мМ раствору фосфата добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл и к этому добавляли хлорид натрия в качестве изотонического агента. Затем добавляли каждый из лизина, аргинина, метионина, глицина, полисорбата 20, полисорбата 80, полоксамера 188, пропиленгликоля, протамина сульфата, сахарозы и гуанидина HCl для получения композиций 2-12.
Наконец, хлорид натрия добавляли в качестве изотонического агента к 10 мМ раствору фосфата, к которому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл, для получения композиции, не содержащей стабилизатора. Составы стабилизаторов композиций показаны в следующей ниже таблице 1. Каждые 0,5 мл полученной композиции помещали в 1,0 мл стеклянные шприцы, запечатывали и хранили при 50°C.
| Таблица 1 | |
| Состав стабилизатора | |
| Композиция 1 | Гистидин 10 мМ |
| Композиция 2 | Лизин 25 мМ |
| Композиция 3 | Аргинин 25 мМ |
| Композиция 4 | Метионин 25 мМ |
| Композиция 5 | Глицин 1% |
| Композиция 6 | Твин 20 0,1% |
| Композиция 7 | Твин 80 0,1% |
| Композиция 8 | F68 0,1% |
| Композиция 9 | Пропиленгликоль 0,1% |
| Композиция 10 | Протамина сульфат 0,03% |
| Композиция 11 | Сахароза 2% |
| Композиция 12 | Гуанидин HCl 0,2% |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | - |
После 7 суток хранения при 50°C композиции 1-12 и композицию, не содержащую стабилизатора, согласно таблице 1 анализировали путем SE-HPLC для исследования типов низкомолекулярных продуктов и высокомолекулярных продуктов, таких как олигомеры и агрегаты, возникающие в результате денатурации этанерцепта, и общее количество этих продуктов представляли как суммарную примесь. Кроме того, структурные изменения этанерцепта исследовали путем HI-HPLC. В HI-HPLC относящиеся к этанерцепту вещества разделялись на 4 пика, включая пред-пик, пик 1, пик 2 и пик 3. Пред-пик и пик 1 представляют низкомолекулярные продукты, пик 2 представляет этанерцепт, а пик 3 представляет димеры с низкой агрегацией или активностью. Таким образом, общее количество пред-пика, пика 1 и пика 3 представляли как суммарную примесь. Результаты показаны в таблицах 2 и 3, соответственно.
| Таблица 2 | ||
| Суммарная примесь согласно SE-HPLC (%) | ||
| Сутки 0 | Сутки 7 | |
| Композиция 1 | 4,6 | 22,2 |
| Композиция 2 | 4,7 | 24,8 |
| Композиция 3 | 4,6 | 24,2 |
| Композиция 4 | 4,6 | 20,8 |
| Композиция 5 | 4,6 | 28,5 |
| Композиция 6 | 4,7 | 29,4 |
| Композиция 7 | 4,6 | 29,0 |
| Композиция 8 | 4,6 | 28,8 |
| Композиция 9 | 4,7 | 27,8 |
| Композиция 10 | 4,6 | 29,4 |
| Композиция 11 | 4,8 | 28,4 |
| Композиция 12 | 4,7 | 27,5 |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | 4,7 | 30,2 |
| Таблица 3 | ||
| Суммарная примесь согласно HI-HPLC (%) | ||
| Сутки 0 | Сутки 7 | |
| Композиция 1 | 14,7 | 33,7 |
| Композиция 2 | 14,6 | 34,9 |
| Композиция 3 | 15,0 | 34,3 |
| Композиция 4 | 15,2 | 30,3 |
| Композиция 5 | 14,8 | 36,6 |
| Композиция 6 | 15,2 | 35,5 |
| Композиция 7 | 15,2 | 36,2 |
| Композиция 8 | 15,4 | 35,5 |
| Композиция 9 | 15,2 | 35,1 |
| Композиция 10 | 15,0 | 36,9 |
| Композиция 11 | 14,9 | 35,1 |
| Композиция 12 | 15,1 | 34,8 |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | 14,4 | 41,9 |
Как видно из результатов SE-HPLC, показанных в таблице 2, при хранении при 50°C в течение 7 суток композиция 1, содержащая гистидин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 22,2%, композиция 2, содержащая лизин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 24,8%, композиция 3, содержащая аргинин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 24,2%, композиция 4, содержащая метионин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 20,8%. Все они показали очень низкую суммарную примесь по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора, показавшей суммарную примесь 30,2%. При сравнении этих композиций с композицией 3, в которой использован L-аргинин в качестве стабилизатора (патент США №7648702), композиция 2, содержащая лизин, показала похожую суммарную примесь 24,8%, а композиция 1, содержащая гистидин, и композиция 4, содержащая метионин, показали уменьшенную суммарную примесь, 22,2% и 20,8%, соответственно.
Результаты HI-HPLC, показанные в таблице 3, похожи на результаты SE-HPLC. Композиция, не содержащая стабилизатора, показала суммарную примесь 41,9%. Напротив, каждая из композиций 1, 2, 3 и 4 показала суммарную примесь 33,7%; 34,9%; 34,3% и 30,3%, соответственно, что указывает на то, что гистидин, лизин, L-аргинин и метионин, добавленные к каждой композиции, оказывают эффекты по предупреждению денатурации этанерцепта. В частности, композиция 4, содержащая метионин, показала самую низкую суммарную примесь, указывая на то, что метионин является наиболее эффективным в стабилизации этанерцепта.
Следовательно, в настоящем изобретении продемонстрировано, что лизин, гистидин и метионин оказывают эффекты по стабилизации этанерцепта путем предотвращения его денатурации, которые эквивалентны таковым L-аргинина или сильнее их, и, в частности, метионин является более эффективным в стабилизации этанерцепта, чем L-аргинин.
Пример 2. Исследование стабильности водной композиции этанерцепта в зависимости от концентрации метионина
Для выявления оптимальной концентрации метионина для стабилизации этанерцепта 120 мМ хлорида натрия добавляли к 10 мМ раствору фосфата, и к этому добавляли каждый из 25 мМ и 12,5 мМ метионина, после чего этанерцепт до концентрации 50 мг/мл был добавлен для того, чтобы получить композиции 13 и 14, соответственно. В соответствии с получением имеющейся в продаже водной композиции этанерцепта, 25 мМ L-аргинина добавляли к 100 мМ хлорида натрия и 1% сахарозы в 10 мМ растворе фосфата, и этанерцепт добавляли до концентрации 50 мг/мл для того, чтобы получить контроль. Каждые 0,5 мл композиции помещали в 1,0 мл стеклянные шприцы, запечатывали и хранили при 40°C, 25°C и 4°C. Составы полученных водных композиций показаны в следующей ниже таблице 4.
| Таблица 4 | |
| Состав | |
| Композиция 13 | Этанерцепт 50 мг/мл, раствор фосфата 10 мМ, NaCl 120 мМ, метионин 25 мМ (рН 6,3) |
| Композиция 14 | Этанерцепт 50 мг/мл, раствор фосфата 10 мМ, NaCl 120 мМ, метионин 12,5 мМ (рН 6,3) |
| Контроль | Этанерцепт 50 мг/мл, раствор фосфата 25 мМ, NaCl 100 мМ, сахароза 1%, L-аргинин 25 мМ (рН 6,3) |
После того как композицию 13, композицию 14 и контроль хранили при 40°C в течение 1 и 3 недель и при 25°C и 4°C в течение 4 и 8 недель каждую, их суммарную примесь измеряли путем SE-HPLC и HI-HPLC, как в примере 1. Результаты показаны в таблицах 5 и 6, соответственно.
| Таблица 5 | |||||||||
| Суммарная примесь согласно SE-HPLC (%) | |||||||||
| 40°C | 25°C | 4°C | |||||||
| 0 недель | 1 неделя | 3 недели | 0 недель | 4 недели | 8 недель | 0 недель | 4 недели | 8 недель | |
| Композиция 13 | 5,5 | 11,5 | 20,5 | 5,5 | 14,8 | 18,8 | 5,5 | 8,8 | 10,2 |
| Композиция 14 | 5,5 | 12,5 | 22,0 | 5,5 | 16,0 | 19,9 | 5,5 | 8,9 | 10,5 |
| Контроль | 5,5 | 13,4 | 23,3 | 5,5 | 16,2 | 20,4 | 5,5 | 8,8 | 10,3 |
| Таблица 6 | |||||||||
| Суммарная примесь согласно HI-HPLC (%) | |||||||||
| 40°C | 25°C | 4°C | |||||||
| 0 недель | 1 неделя | 3 недели | 0 недель | 4 недели | 8 недель | 0 недель | 4 недели | 8 недель | |
| Композиция 13 | 10,0 | 15,9 | 21,6 | 10,0 | 15,3 | 18,5 | 10,0 | 11,0 | 11,9 |
| Композиция 14 | 9,9 | 17,0 | 23,3 | 9,9 | 16,7 | 19,8 | 9,9 | 11,3 | 11,6 |
| Контроль | 10,2 | 18,0 | 25,5 | 10,2 | 17,4 | 20,6 | 10,2 | 10,0 | 11,9 |
Как видно из результатов, показанных в таблицах 5 и 6, композиция 13 и композиция 14, содержащие метионин в качестве стабилизатора, показали низкую продукцию примесей при всех условиях хранения при 40°C, 25°C и 4°C по сравнению с контрольной группой, полученной в соответствии со способом получения имеющейся в продаже водной композиции этанерцепта. Конкретно, результаты SE-HPLC и HI-HPLC показывают, что композиция 13, содержащая 25 мМ метионина, и композиция 14, содержащая 12,5 мМ метионина, показали более низкую продукцию примесей при 40°C и 3 неделях и при 25°C и 8 неделях и похожую продукцию примесей при 4°C и 8 неделях по сравнению с контролем. Эти результаты указывают на то, что композиция по настоящему изобретению, содержащая метионин, представляет собой более стабильную композицию для поддержания активности этанерцепта в течение длительного периода времени, чем имеющаяся в продаже композиция.
В заключение, в настоящем изобретении продемонстрировано, что водная композиция этанерцепта, содержащая метионин, предупреждает денатурацию этанерцепта для поддержания его активности в течение длительного периода времени, и метионин является очень эффективным в качестве стабилизатора в водной композиции этанерцепта.
Пример 3. Исследование стабильности водной композиции этанерцепта, содержащей гистидин и лизин или гистидин и метионин
5 мМ гистидина и 25 мМ лизина в качестве стабилизатора добавляли к 10 мМ раствору фосфата, к которому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл, и к этому добавляли хлорид натрия в качестве изотонического агента для получения композиции 15.
Кроме того, 5 мМ гистидина и 25 мМ метионина добавляли в качестве стабилизатора к 10 мМ раствору фосфата, к которому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл, и к этому добавляли хлорид натрия в качестве изотонического агента для получения композиции 16.
Наконец, хлорид натрия добавляли в качестве изотонического агента к 10 мМ раствору фосфата и к этому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл для получения композиции, не содержащей стабилизатора.
Каждые 0,5 мл полученной композиции помещали в 1,0 мл стеклянные шприцы, запечатывали и хранили при 50°C.
Составы стабилизаторов в композициях показаны в следующей ниже таблице 7.
| Таблица 7 | |
| Состав стабилизатора | |
| Композиция 15 | Гистидин 5 мМ + лизин 25 мМ |
| Композиция 16 | Гистидин 5 мМ + метионин 25 мМ |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | - |
На 7 сутки после хранения при 50°C композиции 15, 16 и композицию, не содержащую стабилизатора, согласно таблице 7 анализировали путем SE-HPLC как в примере 1 для измерения их суммарной примеси. Результаты показаны в таблице 8.
| Таблица 8 | ||
| Суммарная примесь согласно SE-HPLC (%) | ||
| 0 суток | 7 суток | |
| Композиция 15 | 4,7 | 21,5 |
| Композиция 16 | 4,7 | 20,9 |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | 4,7 | 30,2 |
Как видно из результатов SE-HPLC, показанных в таблице 8, при хранении при 50°C в течение 7 суток композиция 16, содержащая гистидин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 21,5% и показала значительно меньшую суммарную примесь по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора, показавшей суммарную примесь 30,2%. И композиция 16 показала очень низкую суммарную примесь по сравнению с композицией 1, содержащей 10 мМ гистидина, показавшей суммарную примесь 22,2%, и композицией 2, содержащей 25 мМ лизина, показавшей суммарную примесь 24,8%.
То есть в настоящем изобретении продемонстрировано, что композиция, содержащая гистидин и лизин, обладает в высшей степени прекрасными эффектами по предупреждению денатурации этанерцепта вследствие уменьшения количества суммарной примеси при хранении по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора, и каждой композицией, содержащей гистидин, лизин и метионин, соответственно.
Кроме того, как видно из результатов SE-HPLC, показанных в таблице 8, при хранении при 50°C в течение 7 суток композиция 16, содержащая гистидин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 20,9%, которая значительно меньше по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора, показавшей суммарную примесь 30,2%. В частности, композиция 16 показала низкую суммарную примесь по сравнению с композицией 15, содержащей гистидин и лизин в качестве стабилизатора.
То есть настоящее изобретение продемонстрировало, что композиция, содержащая гистидин и метионин, обладает значительными эффектами по предупреждению денатурации этанерцепта вследствие уменьшения количества суммарной примеси при хранении по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора.
Пример 4. Исследование стабильности водной композиции этанерцепта, содержащей метионин и лизин
12,5 мМ метионина и 12,5 мМ лизина в качестве стабилизатора добавляли к 10 мМ раствору фосфата, к которому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл, и к этому добавляли хлорид натрия в качестве изотонического агента для получения композиции 17.
Кроме того, хлорид натрия в качестве изотонического агента добавляли к 10 мМ раствору фосфата и к этому добавляли этанерцепт до концентрации 50 мг/мл для получения композиции, не содержащей стабилизатора.
Каждые 0,5 мл полученной композиции помещали в 1,0 мл стеклянные шприцы, запечатывали и хранили при 50°C. Составы стабилизаторов в композициях показаны в следующей ниже таблице 9.
| Таблица 9 | |
| Состав стабилизатора | |
| Композиция 17 | Метионин 12,5 мМ+ лизин 12,5 мМ |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | - |
Через 7 суток после хранения при 50°C композицию 17 и композицию, не содержащую стабилизатора, согласно таблице 9 анализировали путем SE-HPLC как в примере 1 для измерения их суммарной примеси. Результаты показаны в таблице 10.
| Таблица 10 | ||
| Суммарная примесь согласно SE-HPLC (%) | ||
| 0 суток | 7 суток | |
| Композиция 17 | 5,2 | 27,0 |
| Композиция, не содержащая стабилизатора | 5,2 | 32,8 |
Как видно из результатов SE-HPLC, показанных в таблице 10, при хранении при 50°C в течении 7 суток композиция 17, содержащая метионин и лизин в качестве стабилизатора, показала суммарную примесь 27%, которая значительно меньше по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора, показавшей суммарную примесь 32,8%.
То есть в настоящем изобретении продемонстрировано, что композиция, содержащая метионин и лизин, обладает значительными эффектами по стабилизации этанерцепта вследствие уменьшения количества суммарной примеси по сравнению с композицией, не содержащей стабилизатора.
1. Стабильная жидкая композиция этанерцепта, состоящая по существу из этанерцепта и одного или более чем одного стабилизатора, выбранного из группы, состоящей из метионина, лизина, гистидина и их фармацевтически приемлемых солей, где стабилизатор присутствует в количестве от 0,1 до 250 мМ, и где указанная композиция имеет увеличенную стабильность этанерцепта при хранении по сравнению с композицией, не имеющей стабилизаторов, вследствие уменьшения побочных продуктов этанерцепта, которые образуются в результате денатурации во время хранения.
2. Стабильная жидкая композиция по п. 1, где стабилизатор представляет собой метионин и/или его фармацевтически приемлемые соли.
3. Стабильная жидкая композиция по п. 1, где этанерцепт присутствует в количестве от 1 до 100 мг/мл.
4. Стабильная жидкая композиция по п. 1, дополнительно содержащая одно или более чем одно вещество, выбранное из группы, состоящей из буфера, изотонического агента, эксципиента или консерванта.
5. Стабильная жидкая композиция по п. 4, где буфер выбран из группы, состоящей из цитрата, фосфата, сукцината, тартрата, фумарата, глюконата, оксалата, лактата, ацетата, гистидина и Трис.
6. Стабильная жидкая композиция по п. 4, где буфер присутствует в количестве от 0,1 до 100 мМ.
7. Стабильная жидкая композиция по п. 4, где изотонический агент выбран из группы, состоящей из хлорида натрия, хлорида калия, борной кислоты, бората натрия, маннита, глицерина, пропиленгликоля, полиэтиленгликоля, мальтозы, сахарозы, эритрита, арабита, ксилита, сорбита и глюкозы.
8. Стабильная жидкая композиция по п. 4, где изотонический агент присутствует в количестве от 1 до 1000 мМ.
9. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
10. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
11. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
12. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
13. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ гистидина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
14. Стабильная жидкая композиция по п. 1, содержащая от 1 до 100 мг/мл этанерцепта, от 0,1 до 250 мМ метионина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 250 мМ лизина или его фармацевтически приемлемых солей, от 0,1 до 100 мМ фосфатного буфера и от 1 до 1000 мМ хлорида натрия.
