Получение трансплантата из дермы животного с применением раствора сульфида натрия


 


Владельцы патента RU 2575831:

ТУТОГЕН МЕДИКАЛ ГМБХ (DE)

Группа изобретений относится к области фармацевтики и касается способа получения трансплантата из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, включающего в себя следующие стадии: a) подготовка дермы животного; b) обработка дермы животного водным щелочным раствором, содержащим от 0,01 до 1,5% масс. сульфида натрия; c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором; d) одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода; e) обезвоживание дермы. Другим объектом изобретения является трансплантат, получаемый указанным способом, и применение его в хирургии грыжи или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки. Группа изобретений обеспечивает простоту и быстроту способа получения трансплантата, который в значительной степени соответствует нативной структуре дермы. 3 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 табл.,1 пр.

 

Настоящее изобретение относится к способу получения трансплантата из дермы животного, в частности из дермы свиньи, а также к полученному таким образом трансплантату.

Тканевые трансплантаты используют во многих случаях применения, например, при стоматологических операциях для восстановления челюстной кости или для регенерации мягких тканей, для восполнения костных дефектов в случае опухоли, при операциях по восстановлению сухожилий и связок, а также при исправлении врожденных дефектов. Кроме того, они могут быть использованы также при операциях на позвоночнике, при ревизии протезов тазобедренного сустава или при лечении дефектов брюшной стенки.

Принципиально различают три вида тканевых трансплантатов, а именно аутогенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор и реципиент представляют собой одно и то же лицо, причем трансплантат, как правило, применяют на месте, отличающемся от места отбора, аллогенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор и реципиент представляют собой разные особи одного вида, а также ксеногенные тканевые трансплантаты, в случае которых донор, например, свинья, относится к другому виду, чем реципиент, например, человек. Вследствие ограниченной возможности использования аллогенных и особенно аутогенных тканевых трансплантатов ксеногенные тканевые трансплантаты представляют особенный интерес. При этом особенно предпочтительными являются тканевые трансплантаты, полученные от свиньи, например из дермы свиньи, так как они физиологически лучше соответствуют характеристикам тела человека, чем, например, тканевые трансплантаты, полученные от приматов. При этом имеется почти неограниченная возможность использования свиной кожи.

Существенный аспект при получении тканевых трансплантатов состоит в том, чтобы в готовом трансплантате сохранить в возможно большей степени нативную структуру ткани, с тем чтобы он, например, в отношении внутренней поверхности, удобства применения и эластичности по меньшей мере в значительной степени сохранял свойства нативной ткани. Однако известными в настоящее время способами невозможно получать трансплантаты из дермы животного, в частности из дермы свиньи или свиной дермы, с удовлетворительным сохранением нативной структуры ткани. Как правило, такие тканевые трансплантаты получают способом, по которому ткань сначала обрабатывают 1 M раствором гидроксида натрия, чтобы разрыхлить структуру ткани, удалить из дермы щетину и обезволосить дерму. Однако эта стадия обработки сильно повреждает коллагеновый матрикс кожи, так что нативная структура дермы значительно ухудшается.

Таким образом, задача настоящего изобретения состоит в разработке способа получения трансплантата, по которому из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, просто, быстро и с низкими затратами может быть получен тканевый трансплантат, морфология которого по меньшей мере в значительной степени соответствует нативной структуре дермы.

По настоящему изобретению эта задача решается благодаря способу получения трансплантата из дермы животного, предпочтительно из дермы свиньи, в который входят следующие стадии:

a) подготовка дермы животного;

b) обработка дермы животного водным раствором, содержащим сульфид натрия;

c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором;

d) при необходимости одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода;

e) обезвоживание дермы.

Это решение основано на знании того факта, что при обработке дермы животного раствором, содержащим сульфид натрия, так же, как при обработке сравнительно концентрированным раствором гидроксида натрия, может достигаться разрыхление структуры ткани, удаление щетины из матрикса дермы и обезволашивание дермы, при этом неожиданно таким образом, что в отличие от обработки сравнительно концентрированным раствором гидроксида натрия повреждение кожного коллагенового матрикса дермы почти полностью предотвращается. На этой основе способом по настоящему изобретению из дермы животного просто, быстро и с низкими затратами может быть получен стерильный и не содержащий клеток ксеногенный трансплантат, который в отношении своей морфологической структуры по меньшей мере в значительной степени соответствует нативной структуре ткани. В частности, в случае способа по настоящему изобретению можно отказаться от химической обработки ткани химическими агентами, вызывающими перекрестное сшивание содержащихся в коллагене протеинов с потерей нативной структуры ткани, такими, как формальдегид, глутаровый альдегид и т.п. Такое перекрестное сшивание протеинов ткани представляет собой недостаток, так как такое перекрестное сшивание отрицательно влияет на свойства врастания трансплантата в ткань реципиента. Во многих случаях такое перекрестное сшивание белков может вести даже к тому, что трансплантат вообще не врастает в ткань реципиента, а капсулируется, не выполнив ранее предусмотренной функции стабилизации ткани.

Для надежного предотвращения образования сероводорода при осуществлении способа по настоящему изобретению в предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено на технологической стадии b) применять водный щелочной раствор, содержащий сульфид натрия. С применяемым в этом варианте осуществления щелочным раствором, содержащим сульфид натрия и имеющим в любом случае значение pH больше 7, и предпочтительно с соответствующими растворами, значение pH которых составляет по меньшей мере 10 и предпочтительно по меньшей мере 12, принципиально могут быть получены хорошие результаты.

В настоящем изобретении принципиально не ограничено количество сульфида натрия, содержащегося в водном растворе, применяемом на технологической стадии b). Водный раствор, применяемый на технологической стадии b), предпочтительно содержит от 0,01 до 10% масс., особенно предпочтительно от 0,1 до 5% масс., более предпочтительно от 0,5 до 3% масс., наиболее предпочтительно от 0,75 до 1,5% масс. и в высшей степени предпочтительно приблизительно 1% масс. сульфида натрия.

Для установки указанных ранее предпочтительных значений pH в щелочной области согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено, что на технологической стадии b) применяют водный раствор, который наряду с сульфидом натрия содержит от 0,001 до 0,5 M, предпочтительно от 0,005 до 0,4 M, особенно предпочтительно от 0,01 до 0,3 M, более предпочтительно от 0,05 до 0,2 M, наиболее предпочтительно от 0,075 до 0,125 M и в высшей степени предпочтительно приблизительно 0,1 M гидроксида натрия.

Вместо гидроксида натрия для установки значений pH специалистами в данной области техники могут быть использованы известные основания, такие как, например, любой гидроксид щелочного или щелочно-земельного металла, такой как гидроксид калия, гидроксид лития, гидроксид магния, гидроксид кальция, аммиак и т.п.

Раствор сульфида натрия на технологической стадии b) принципиально должен быть использован в достаточно большом количестве и в течение достаточно длительного времени, чтобы дерма была эффективно разрыхлена, а содержащиеся в ней щетина и волосы были почти полностью удалены. В связи с этим хорошие результаты достигаются, в частности, в случае, когда дерму обрабатывают водным раствором, содержащим сульфид натрия, в течение от 1 до 48 часов, предпочтительно от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и наиболее предпочтительно от 14 до 20 часов. При этом водный раствор, содержащий сульфид натрия, предпочтительно используют в количестве от 5- до 15-кратного объема в расчете на объем дермы. Более предпочтительно водный раствор, содержащий сульфид натрия, применяют в количестве от 6- до 14-кратного объема, особенно предпочтительно от 7- до 13-кратного объема, более предпочтительно от 8- до 12-кратного объема, наиболее предпочтительно от 9- до 11-кратного объема и в высшей степени предпочтительно приблизительно в 10-кратном объеме в расчете на объем дермы.

Обработка раствором, содержащим сульфид натрия, на технологической стадии b) принципиально может быть осуществлена за один раз или за несколько раз последовательно, причем дерму между отдельными стадиями обработки раствором, содержащим сульфид натрия, обрабатывают и/или промывают водой. Однако по настоящему изобретению оказалось предпочтительным проводить на технологической стадии b) только однократную обработку дермы раствором, содержащим сульфид натрия, предпочтительно при упомянутой ранее продолжительности обработки.

В предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено проводить обработку раствором сульфида натрия на технологической стадии b) во вращающемся барабане. Благодаря этому достигается равномерная и полная инкубация дермы с сульфидом натрия. Например, вращающийся барабан может быть расположен горизонтально для вращения вокруг его оси. По практическим соображениям в барабане предусмотрены присоединительные элементы, по которым технологические растворы могут быть поданы в барабан и отведены из барабана. Кроме того, в барабане также могут быть предусмотрены присоединительные элементы, позволяющие при необходимости устанавливать в барабане повышенное или пониженное давление. Кроме того, предпочтительным является исполнение барабана с рубашкой, чтобы во внутреннем пространстве барабана можно было поддерживать постоянную температуру благодаря присоединительным элементам, предусмотренным в рубашке. Наконец, также предпочтительным является исполнение барабана, обеспечивающее возможность электронного регулирования скорости его вращения.

Благодаря обработке дермы водным солевым раствором на технологической стадии c) после технологической стадии b) еще оставшиеся целыми клетки разрушаются под действием осмотического стресса. При этом могут быть использованы любые приемлемые для этой цели соли, такие как, в частности, галогениды щелочных и щелочно-земельных металлов. По критерию цены особенно приемлемыми для этой цели являются хлориды щелочных и щелочно-земельных металлов, такие как, в частности, хлорид натрия.

В связи с этим хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда дерму на технологической стадии c) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 50% масс., предпочтительно от 2 до 20% масс., более предпочтительно от 5 до 15% масс. и наиболее предпочтительно 10% масс. хлорида натрия. Указанные количества являются предпочтительными также при использовании иных галогенидов щелочных и щелочно-земельных металлов, таких как хлорид калия, хлорид лития, хлорид магния, хлорид кальция и т.п.

Согласно следующему предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения дерму на технологической стадии c) несколько раз обрабатывают солевым раствором, каждый раз перемежая с обработкой и/или промывкой водой. Такая обработка с переменой ванн с солевым раствором и водой благоприятствует транспортировке клеточных компонентов из структуры ткани за счет диффузионных процессов вследствие переменного осмотического соотношения в ткани и, таким образом, улучшает эффект обработки в солевой ванне. При этом хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда дерму на технологической стадии c) обрабатывают водным солевым раствором от двух до десяти раз, предпочтительно от трех до пяти раз и особенно предпочтительно четыре раза, причем дерму между стадиями обработки солевым раствором каждый раз обрабатывают водой.

При этом продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии c) составляет предпочтительно от 1 до 48 часов, причем по меньшей мере одну из этих стадий обработки проводят предпочтительно в течение от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и в высшей степени предпочтительно от 14 до 20 часов, например в течение 16 часов.

Технологическую стадию c) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).

Для уничтожения бактерий и вирусов, содержащихся в ткани, и для отбеливания ткани в предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено при необходимости осуществлять технологическую стадию d) предпочтительно с применением водного раствора, содержащего от 1 до 10% масс., предпочтительно от 2 до 5% масс. и более предпочтительно приблизительно 3% масс. пероксида водорода.

При этом дерму на технологической стадии d) предпочтительно обрабатывают несколько раз водным раствором пероксида водорода, предпочтительно от двух до пяти раз и более предпочтительно три раза, причем дерму между стадиями обработки раствором пероксида водорода каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.

При этом хорошие результаты получают предпочтительно в случае, когда продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии d) составляет предпочтительно от 5 до 60 часов, более предпочтительно от 10 до 36 часов и наиболее предпочтительно от 20 до 30 часов, например 24 часа.

Технологическую стадию d) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).

Для достижения на технологической стадии e) особенно эффективного обезвоживания, которое делает возможным последующее хранение дермы в замороженном состоянии без изменения ее структуры, согласно следующему предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено обезвоживать дерму на технологической стадии e) обработкой органическим растворителем, осуществляемой от двух до десяти раз, предпочтительно от четырех до восьми раз и более предпочтительно шесть раз. При этом особенно хорошие результаты получают в случае, когда органический растворитель выбран из группы, в которую входят ацетон, метанол, этанол и изопропиловый спирт.

Согласно особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения на технологической стадии e) в качестве органического растворителя применяют ацетон, так как он не только обезвоживает дерму, но также и обезжиривает и даже инактивирует содержащиеся вирусы.

При этом хорошие результаты в отношении степени обезвоживания предпочтительно получают в случае, когда дерму на технологической стадии e) обрабатывают органическим растворителем несколько раз. Дерму обрабатывают органическим растворителем предпочтительно от двух до десяти раз, более предпочтительно от четырех до восьми раз и наиболее предпочтительно шесть раз. Кроме того, для достижения начального медленного удаления воды или щадящего обезвоживания на первой стадии предпочтительным является использование органического растворителя, разбавленного водой, например, 70%-ного раствора ацетона, с тем чтобы на следующих стадиях обработки использовать органический растворитель, разбавленный до высокой концентрации, например 90%-ный раствор ацетона, используемый на второй стадии обработки, а затем использовать концентрированный органический растворитель, такой как неразбавленный ацетон.

При этом продолжительность отдельных стадий обработки на технологической стадии e) составляет предпочтительно от 1 до 48 часов, причем по меньшей мере одну из этих стадий обработки проводят предпочтительно в течение от 5 до 48 часов, более предпочтительно от 12 до 36 часов и в высшей степени предпочтительно от 20 до 30 часов, например в течение 24 часов.

Технологическую стадию e) предпочтительно осуществляют также во вращающемся барабане, описанном ранее в качестве предпочтительного для технологической стадии b).

После завершения обезвоживания органический растворитель, оставшийся в дерме, предпочтительно удаляют циркуляционной воздушной сушкой при температуре от 25 до 60°C, например при 35°C.

Как было пояснено, настоящий способ является предпочтительно приемлемым для получения трансплантата из дермы свиньи. Однако он является также приемлемым для любых других видов дермы животного, таких как, например, дерма крупного рогатого скота.

Согласно другому особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения в технологическую стадию a), в частности в случае дермы свиньи, входят следующие стадии:

a1) очистка кожи туши животного, в частности свиньи, водой, содержащей при необходимости детергент, причем вода имеет температуру в интервале от комнатной температуры до 40°C максимально;

a2) снятие кожи со спинной части туши свиньи;

a3) удаление щетины с кожи, подготовленной на стадии a2);

a4) удаление из дермы субкутиса и эпидермиса посредством двоильной машины.

По настоящему изобретению было найдено, что на качество получаемого трансплантата помимо способа химической обработки большое влияние оказывает также способ подготовки дермы животного. В частности, по настоящему изобретению было установлено, что кожа свиньи, полученная в скотобойне традиционным способом, дает трансплантаты со сравнительно плохими свойствами. Это объясняется тем, что при традиционном способе убоя свиней после убоя ошпаривают горячей водой с температурой около 65°C для очистки и дезинфекции по поверхности перед последующим опаливанием щетины. Вследствие этой термической обработки коллаген, содержащийся в коже свиньи, необратимо повреждается или денатурируется.

Во избежание этого согласно указанному ранее особенно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения предусмотрено, что кожу туши свиньи очищают щадящим образом, а именно теплой водой, имеющей температуру не выше 40°C и содержащей при необходимости мягкий детергент. Другими словами, в случае способа по настоящему изобретению термическую обработку кожи не осуществляют горячей средой с температурой выше 40°C.

В способе по настоящему изобретению предпочтительно используют только вырезку кожи со спинной части туши животного, предпочтительно свиньи, так как эта часть по сравнению с кожей брюшины отличается усиленной структурой кожи и наибольшей толщиной. Таким образом, на технологической стадии a2) от цельной шкуры отделяют и отбрасывают брюшные части и используют только кожу спинной части с поверхностью приблизительно 800 x 1200 мм.

Затем на технологической стадии a3) щетину со шкуры предпочтительно удаляют механически, предпочтительно лезвием, перед разрезанием шкуры, например, на куски площадью приблизительно 400×600 мм. Толщина кожи на этой стадии составляет приблизительно от 2,5 до 3 мм. Подготовленная таким образом кожа может быть подана непосредственно на технологическую стадию a4) или сначала на хранение при температуре не выше -20°C.

После этого на технологической стадии a4) из дермы удаляют субкутис и эпидермис предпочтительно посредством двоильной машины. Для этой цели двоильная машина предпочтительно содержит бесконечный нож, который можно сравнить с полотном ленточной пилы без зубцов и который приводится в действие двумя шестернями и направляется дополнительными роликами. Нож предпочтительно расположен горизонтально и движется со скоростью нескольких метров в секунду. Такая двоильная машина позволяет плавно регулировать толщину отделяемого слоя. При этом дерму подают к ножу посредством двух валков и разделяют на два куска вдоль поперечного сечения.

В предпочтительном варианте настоящего изобретения предложено на технологической стадии a4) сначала удалять из дермы субкутис, а затем удалять эпидермис. На первой промежуточной стадии удаления из дермы субкутиса машину регулируют, например, на толщину отделяемого слоя, равную 2 мм. Затем предварительно отрезанный кусок кожи вводят в машину жировой стороной вверх, при этом отделяют и затем отбрасывают выходящую сверх толщины 2 мм жировую часть и часть соединительной ткани, включая корни волос. Кроме того, толщина расслоения альтернативно может быть задана приблизительно равной 1,5 или 1,0 мм.

На следующей промежуточной стадии удаления эпидермиса из дермы толщину отделяемого слоя на двоильной машине устанавливают равной 0,5 мм и полученную на предыдущей промежуточной стадии кожу еще раз вводят в двоильную машину для последующего отделения и удаления эпидермиса.

Подготовленная таким образом кожа может быть подана непосредственно на технологическую стадию b) или сначала на хранение при температуре не выше -20°C или альтернативно в 25%-ном растворе хлорида натрия при 4°C.

В заключение, после осуществления предварительной обработки и химической обработки дермы согласно технологических стадий от a) до d) из обезвоженной на стадии e) дермы вырезают и/или вырубают штампом трансплантат при необходимости с применением шаблона. При этом трансплантаты могут быть вырезаны прямоугольной, круглой или овальной формы. Кроме того, при необходимости трансплантаты могут быть вырублены штампом также по сетчатому образцу.

Затем трансплантаты предпочтительно попарно помещают в плоские пакеты из ламинированной синтетической пленки или двухслойной пленки из пластмассы и алюминиевой фольги и запаивают. При этом трансплантаты упаковывают предпочтительно в сухом состоянии. Однако трансплантаты после осуществления вторичного увлажнения могут быть упакованы также во влажном состоянии.

В заключение, упакованные трансплантаты могут быть обработаны для стерилизации гамма-излучением, например гамма-излучением с дозой энергии от 17 до 22 кГр. Если сухие трансплантаты облучают предпочтительно при температуре от 20 до 40°C, то облучение влажных трансплантатов осуществляют предпочтительно при температуре от -20 до -80°C.

Другим объектом настоящего изобретения является трансплантат, получаемый способом по настоящему изобретению.

Например, трансплантат по настоящему изобретению может иметь прямоугольную форму размерами, например, от 50×100 мм до 350×350 мм, круглую форму диаметром от 30 до 100 мм или овальную форму размерами, например, от 100×155 мм до 250×350 мм.

Кроме того, настоящее изобретение относится к применению описанного ранее трансплантата в хирургии грыжи, например для лечения грыжи в рубце, или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки.

При лечении грыжи трансплантат по настоящему изобретению сшивается с прилежащей интактной тканью и вначале служит в качестве покрова, закрывающего дефект. В ходе заключительного моделирования ткани трансплантат служит в качестве направляющей шины для собственных клеток пациента, которые заселяют коллагеновую структуру трансплантата. Благодаря превращению трансплантата, т.е. разложению коллагена трансплантата и параллельному образованию собственной ткани пациента, дефект закрывается новообразующейся соединительной тканью.

Далее настоящее изобретение более подробно поясняется неограничительным примером осуществления.

ПРИМЕР

Парную тушу свиньи перед снятием шкуры очищали по поверхности теплой водой, имевшей температуру 40°C и содержавшей от 0,1 до 1% масс. додецилсульфата натрия (SDS). От цельной шкуры отделяли и отбрасывали брюшные части и далее обрабатывали только шкуру спинной части с поверхностью приблизительно 800×1200 мм.

Затем щетину со свиной шкуры удаляли механически лезвием перед разрезанием шкуры на куски площадью приблизительно 400×600 мм. Затем кожу вводили жировой стороной вверх в двоильную машину с установленной толщиной отделяемого слоя, равной 2 мм, для отделения выходящей сверх толщины 2 мм жировой части и части соединительной ткани, включая корни волос. При этом двоильная машина содержала горизонтально расположенный бесконечный нож, приводимый двумя шестернями и дополнительными роликами.

В заключение, толщину отделяемого слоя на двоильной машине устанавливали равной 0,5 мм и кожу еще раз вводили в двоильную машину для отделения эпидермиса. Таким образом, получали дерму толщиной 1,5 мм.

Затем дерму обрабатывали во вращающемся барабане согласно приведенной далее схеме обработки.

Стадия Действие Время, ч Цель
1 Промывка водой (3 раза)
2 Выдержка в воде 0,5
3 Выдержка в воде 0,5
4 Обработка 1%-ным водным раствором сульфида натрия с 0,1 M раствором NaOH 16 Удаление волос
5 Промывка водой (3 раза) Диффузия, осмос
6 Выдержка в воде 1
7 Выдержка в 10%-ном растворе NaCl 3
8 Выдержка в воде 1
9 Выдержка в 10%-ном растворе NaCl 16
10 Промывка водой (3 раза) Диффузия, осмос
11 Выдержка в воде 1
12 Выдержка в 10%-ном растворе NaCl 3
13 Выдержка в воде 1
14 Выдержка в 10%-ном растворе NaCl 16
15 Промывка водой (3 раза)
16 Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода 24 Инактивация бактерий и вирусов, обецвечивание пигментов
17 Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода 24
18 Выдержка в 3%-ном растворе пероксида водорода 24
19 Промывка водой (3 раза) Вымывание H2O2
20 Выдержка в 70%-ном растворе ацетона 2
21 Выдержка в 90%-ном растворе ацетона 2 Медленнее обезвоживание
22 Выдержка в 100%-ном ацетоне 2 Обезвоживание/ обезжиривание
23 Выдержка в 100%-ном ацетоне 16 Обезвоживание/ обезжиривание
24 Выдержка в 100%-ном ацетоне 24 Обезвоживание/ обезжиривание
25 Выдержка в 100%-ном ацетоне 24 Инактивация вирусов
26 Сушка при 35°C 24 Удаление ацетона

В заключение, после химической обработки из дермы вырубали штампом овальные трансплантаты размерами 160×250 мм каждый, попарно помещали в сухие пакеты из ламинированной синтетической пленки и запаивали, а затем при 35°C облучали гамма-излучением с дозой энергии 20 кГр.

Полученные таким образом трансплантаты имели нативную структуру почти идентичной морфологии.

1. Способ получения трансплантата из дермы животного, включающий в себя следующие стадии:
a) подготовка дермы животного;
b) обработка дермы животного водным щелочным раствором, содержащим сульфид натрия, который содержит от 0,01 до 1,5% масс. сульфида натрия;
c) одно- или многократная обработка дермы водным солевым раствором;
d) одно- или многократная обработка дермы водным раствором пероксида водорода;
e) обезвоживание дермы.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии b) применяют водный раствор, который наряду с сульфидом натрия содержит от 0,001 до 0,5 М, предпочтительно от 0, 005 до 0,4 М, особенно предпочтительно от 0,01 до 0,3 М, более предпочтительно от 0,05 до 0,2 М, наиболее предпочтительно 0,075 до 0,125 М и в высшей степени предпочтительно 1 М гидроксида натрия.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии b) в течение от 1 до 48 часов, предпочтительно от 5 до 36 часов, более предпочтительно от 12 до 24 часов и наиболее предпочтительно от 14 до 20 часов обрабатывают водным раствором, содержащим сульфид натрия, в количестве от 5- до 15-кратного объема, предпочтительно от 6- до 14-кратного объема, особенно предпочтительно от 7- до 13-кратного объема, более предпочтительно от 8- до 12-кратного объема и наиболее предпочтительно от 9- до 11-кратного объема в расчете на дерму.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии с) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 50% масс., предпочтительно от 2 до 20% масс., более предпочтительно от 5 до 15% масс. и наиболее предпочтительно 10% масс. соли, причем соль представляет собой предпочтительно галогенид щелочного или щелочно-земельного металла, особенно предпочтительно хлорид щелочного или щелочно-земельного металла, такого как хлорид калия, хлорид лития, хлорид магния или хлорид кальция.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии c) обрабатывают водным солевым раствором от двух до десяти раз, предпочтительно от трех до пяти раз и более предпочтительно четыре раза, причем дерму между стадиями обработки солевым раствором каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии d) обрабатывают водным раствором, содержащим от 1 до 10% масс., предпочтительно от 2 до 5% масс. и более предпочтительно 3% масс. пероксида водорода.

7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии d) обрабатывают водным раствором пероксида водорода от двух до пяти раз и предпочтительно три раза, причем дерму между стадиями обработки раствором пероксида водорода каждый раз обрабатывают и/или промывают водой.

8. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дерму на стадии e) обезвоживают обработкой от двух до десяти раз, предпочтительно от четырех до восьми раз и более предпочтительно шесть раз органическим растворителем, выбранным из группы, в которую входят ацетон, метанол, этанол и изопропиловый спирт.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что на стадии а) осуществляют подготовку свиной дермы.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что подготовка дермы на стадии а) включает в себя следующие стадии:
a1) очистка шкуры туши свиньи водой, содержащей при необходимости детергент, причем вода имеет температуру в интервале от комнатной температуры до 40°C максимально;
a2) снятие шкуры со спинной части туши свиньи;
a3) удаление щетины с шкуры, подготовленной на стадии a2);
a4) удаление из дермы субкутиса и эпидермиса посредством двоильной машины.

11. Трансплантат, получаемый способом по любому из предыдущих пунктов.

12. Применение трансплантата по п. 11 в хирургии грыжи, для лечения грыжи в рубце или для лечения расхождения краев операционной раны брюшной стенки.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно к реаниматологии. Проводят селективную сорбцию эндотоксина через сосудистый доступ, инфузионную терапию с введением антибиотика.

Изобретение относится к способу получения пента-1,2,3,4,6-(2-глицидилоксиэтокси)-этилового эфира глюкозы и использованию его в композиции для химической сшивки коллагенсодержащих эндопротезов биологического происхождения, что может быть использовано в медицине.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано при проведении профилактики интраоперационной лимфогематогенной интоксикации при перитоните.
Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, хирургии, физиотерапии, и может быть использовано для лечения постинъекционных инфильтратов у онкологических больных.
Изобретение относится к медицине, а именно к анестезиологии, и касается проведения премедикации при плановом хирургическом лечении. Для этого пациенту вечером накануне плановой операции назначают per os феназепам 1,0 мг; затем в преднаркозной палате за 30 мин до операции после катетеризации периферической вены внутримышечно вводят супрастин в дозе 0,3 мг/кг массы тела пациента и атропин в дозе 0,01 мг/кг массы тела пациента.

Изобретение относится к области медицины, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано при лечении приобретенных дефектов, таких как кисты, ложные суставы, переломы костей, сопровождающиеся образованием дефектов, а также атрофии костной ткани.
Изобретение относится к медицине, а именно хирургии, и может быть использовано для усиления гемоциркуляции в шовной полосе межкишечного анастомоза в эксперименте.
Изобретение относится к химии и представляет собой продукт слияния, который включает полисахариды Т1 и Т2, при этом моносахариды, из которых образованы полисахариды Т1 и Т2, соединены друг с другом альфа-1,4-гликозидными связями.

Изобретение относится к медицине, а именно нейрохирургии, и может быть использовано при лечении пациентов с секвестрированными грыжами межпозвонковых дисков пояснично-крестцового отдела позвоночника.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для профилактики интраоперационных кровотечений на фоне введения гепарина до операции.

Изобретение относится к медицине и касается способа коррекции патологических состояний кожи человека, связанных со старением, включающего использование аутогенных фибробластов пациента с дальнейшим введением их пациенту, где производят отбор материала и выращивание клеток с последующим выделением культуры фибробластов пациента, производят генетические исследования культуры фибробластов путем определения последовательности ДНК и активности генов, выбранных из группы, включающей TGFB1, TGFBR2, COL1A1, COL1A2, SOD1, SOD2, GPX1, GPX3, CLCA2, после чего производят сопоставительный анализ полученных результатов с нормальными последовательностями ДНК и данными нормального уровня экспрессии соответствующих генов, создают генетические конструкции, содержащие кДНК тех генов, активность которых у пациента изменена или в структуре ДНК которых у пациента имеются отклонения, и внедряют эти генетические конструкции в культуру фибробластов пациента, затем вводят пациенту эти модифицированные аутогенные фибробласты.
Изобретение относится к медицине, а именно к спортивной медицине и фармакологии, и касается повышения общей физической работоспособности спортсменов сложно-координационных видов спорта.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть применено для регенерации тканей мезодермального происхождения с использованием фибробластов взрослого организма.

Группа изобретений относится к медицине, ортопедии, нехирургическому лечению опорно-двигательного аппарата больного, а именно асептического некроза головки бедренной кости (БК) путем осуществления комплекса воздействий.
Изобретение относится к хирургии и может быть использовано для лечения трофических язв. Для этого используют аутосыворотку, полученную из 20,0-25,0 мл крови, после центрифугирования и отделения ее от белково-тромбоцитарного свертка обкалывают края под дно раны, а белково-тромбоцитарный сверток используют для непосредственного наложения на рану.

Изобретение относится к спортивной медицине и фармакологии и может быть использовано для повышения общей физической работоспособности спортсменов скоростно-силовых видов спорта.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к биологически активной добавке к пище. Биологически активная добавка к пище, обладающая адаптогенным и тонизирующим действием, включающая цельную кровь пантовых оленей, пантовый концентрат по ТУ 9860-010-29734071-11, мед, фруктовую эссенцию, аскорбиновую кислоту и препарат «Цитросепт грейпфрутовый», взятые при определенном соотношении компонентов.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для противоопухолевой иммунотерапии. Для этого больному вводят дендритные клетки (ДК), получаемые из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови больного (аутологичные ДК), при этом ДК больному вводят поэтапно.
Представленная группа изобретений относится к медицине, а именно к дерматологии и хирургии, и может быть применено для восстановления кожного покрова у пациентов с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей.
Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для восстановления кожного покрова с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для лечения пациентов с онкологическими заболеваниями кожи, такими как меланома, базально-клеточный рак, плоскоклеточный рак. Для этого проводят определение размеров опухоли и в зависимости от ее размера проведение внутрикожных инъекций вокруг очага пораженной ткани до и/или после удаления опухоли, отступив 2-3 мм от ее края, или непосредственно в ткань опухоли, путем введения равномерно при обратном ходе иглы шприца 1-3 раза в неделю в виде 6-20 инъекций курсом 4-14 процедур лекарственного средства в виде 1,0-2,5 мл раствора белково-полипептидного комплекса в фармацевтически приемлемом носителе с содержанием (концентрацией) комплекса в нем 0,05-0,4 мг. При этом в качестве активного действующего вещества используют белково-полипептидный комплекс, полученный из гомогената эмбриональной нервной и кожной тканей копытных сельскохозяйственных животных и содержащий отрицательно заряженные слабокислые и нейтральные белки и полипетиды с молекулярной массой от 5 до 200 кДа и с содержанием фракции со средней молекулярной массой в пределах от 10 до 120 кДа не менее 80%, общей концентрацией белка 0,2-4,2 мг/мл, с максимумом поглощения ультрафиолетового спектра раствора при длине волны 280±5 нм, наличием пика при длине волны 274-284 нм в УФ-видимой области спектра, наличием специфических полос в интервале значений pl от 4,2 до 8,4 при изоэлектрофокусировке в 5%-ном полиакриламидном геле. Также предложен способ лечения пациентов с онкологическими заболеваниями кожи, такими как меланома, базально-клеточный рак, плоскоклеточный рак, где указанный белково-пептидный комплекс используют в идее наружных аппликаций. Группа изобретений обеспечивает лечение указанных заболеваний кожи. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 ил., 6 пр.
Наверх