Штамм бактерий enterococcus faecium, обладающий способностью снижать образование биопленок грибами рода candida



Штамм бактерий enterococcus faecium, обладающий способностью снижать образование биопленок грибами рода candida
Штамм бактерий enterococcus faecium, обладающий способностью снижать образование биопленок грибами рода candida

 


Владельцы патента RU 2576008:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургский государственный аграрный университет" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм бактерий Enterococcus faecium 18 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им Г.Н. Габричевского» Роспотребнадзора под коллекционным номером 1252. Штамм обладает способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida и может быть использован для приготовления пробиотического препарата. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в микробиологической промышленности для получения пробиотического препарата, обладающего способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida.

Аналогов изобретения в патентной и научно-технической литературе не обнаружено.

Технический результат, на достижение которого направлено изобретение, заключается в получении нового бактериального штамма, обеспечивающего эффективное снижение способности образовывать биопленки грибами рода Candida.

Указанный технический результат достигнут получением нового штамма бактерий Enterococcus faecium 18.

Штамм Enterococcus faecium 18 выделен с использованием классических бактериологических методов из содержимого толстого кишечника здорового человека в 2014 году в лаборатории кафедры микробиологии и заразных болезней ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет».

Полученный штамм Enterococcus faecium 18 депонирован в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФГУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора». Коллекционный номер - №1252.

Штамм Enterococcus faecium 18 характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

Культурально-морфологические признаки

Овоидные (яйцевидные) неподвижные клетки, несколько вытянутые в длину, расположены попарно. Размер клеток 1,25×1,59 мкм. Окраска по Граму - положительная. Спор не образуют.

На желчно-эскулиновом агаре с азидом натрия (37°С, 24 ч) образует мелкие (точечные), 0,5-1 мм в диаметре, сероватого цвета (полупрозрачные), окруженные черным ореолом, округлые, выпуклые колонии с гомогенной внутренней структурой, S-форма. Рост обильный.

В Schaedler-бульоне (37°С, 24 ч) дает обильный рост, придонный осадок, который гомогенизируется при встряхивании.

На Schaedler-агаре (37°С, 24 ч) дает обильный рост с характерным молочнокислым запахом, колонии мелкие (1-2 мм), округлые, выпуклые, блестящие, гладкие, край колонии ровный.

На молочно-ингибиторной среде по Г.П. Калине (37°С, 24 ч) формирует мелкие (1-2 мм), серого цвета, с металлическим (стальным) блеском, округлые колонии. Края колонии ровные, поверхность выпуклая, влажная, блестящая. Рост обильный.

Физиолого-биохимические признаки

Факультативный анаэроб, оптимальные условия для культивирования - атмосферные. Температура культивирования - 37°С. На питательных средах вырастает в течение 18-24 часов.

Хемоорганотроф, метаболизм бродильного типа. Штамм осуществляет гомоферментативное молочнокислое брожение. Каталазу не продуцирует, желатину не разжижает. Ферментирует D-рибозу, D-рафинозу, лактозу, салицин, N-ацетил-D-глюкозамин, D-маннозу, сахарозу, D-мальтозу, метил-В-D-глюкопиранозид, D-трегалозу, D-галактозу. Продуцирует ферменты: L-аспартат-ариламидазу, аргининдигидролазу 1, альфа-галактозидазу, бета-галактозидазу, L-пирролидонил-ариламидазу, аргининдигидролазу 2.

Штамм желатиназу не продуцирует, продуцирует аминокислоту аргинин, ферментирует сорбозу, арабинозу, маннитол, мелибиозу.

Штамм Enterococcus faecium 18 идентифицирован с использованием полимеразной цепной реакции по видоспецифическому гену, кодирующему синтез супероксиддисмутазы (Jackson C.R., Fedorka-Cray P.J., Barrett J.B. Use of a genus- and species-specific multiplex PCR for identification of enterococci. J. Clin. Microbiol. 2004. 42(8): 3558-3565), как штамм вида Enterococcus faecium.

Генетические особенности штамма: методом ПЦР установлено, что в геноме штамма отсутствуют генетические детерминанты, кодирующие синтез факторов вирулентности: цитолизинов (cylM, cylB, cylA, cylLs); ген, обуславливающий протеолитическую активность (GelE); ген, ответственный за продукцию гиалуронидазы (Hyl); ген, кодирующий белки клеточной стенки (ESP); ген, отвечающий за синтез поверхностного белка-адгезина (ASA).

Штамм устойчив к ванкомицину, тейкопланину, гентамицину и имеет гены устойчивости к ванкомицину и тейкопланину (Van A, Van C1, Van С2-3).

Условия и состав среды для размножения: на Schaedler-агаре при 37°С (рН 7,2-7,6), в Schaedler-бульоне при 37°С в течение 18-24 часов.

Условия хранения: лиофильно высушенная культура при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 60% в течение 2-х лет или культура, выращенная в течение суток при 37°С в полужидкой среде СТА, в условиях бытового холодильника при температуре 4±2°С в течение 6 месяцев.

Способность штамма Enterococcus faecium 18 снижать образование биопленок грибами рода Candida определяется по степени связывания грибами рода Candida красителя «кристаллический фиолетовый» в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах (O′Toole G., Kaplan Н.В., Kolter R. Biofilm formation as microbial development. Annu. Rev. Microbiol. 2000, 54: 49-79) с помощью фотометра Stat Fax 2100 («Awareness Technology», США) после их совместного культивирования (Ермоленко Е.И., Ждан-Пушкина С.Х., Суворов А.Н. Взаимодействие Candida albicans и Lactobacillus plantarum in vitro. Проблемы медицинской микологии. 2004, т. 6, №2: 49-54). Уровень способности к образованию биопленок грибами рода Candida рассчитывается как отношение опыт/контроль и выражается в условных единицах (Валышев А.В., Валышева И.В., Гейде И.В. Образование биопленок фекальными штаммами энтеробактерий и дрожжевых грибов рода Candida. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2009, №4: С.44-46).

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1.

Изучали влияние штамма Enterococcus faecium 18, выделенного из кишечника здорового человека, на способность грибов рода Candida образовывать биопленки при совместном культивировании в жидкой питательной среде (Schaedler-бульон «Hi Media», Индия).

Готовили взвеси суточных агаровых культур 5 видов грибов: С. albicans (n=6), С. glabrata (n=6), С. tropicalis (n=6), С. kefyr (n=6), С. krusei (n=6) и штамма Enterococcus faecium 18 (мутность 2 по шкале Мак Фарланда).

Затем готовили 30 пробирок (5 видов грибов по 6 штаммов), в каждую вносили 5 мл Schaedler-бульона, 0,05 мл взвеси штамма Enterococcus faecium 18 и добавляли 0,05 мл взвеси исследуемого штамма гриба рода Candida (опытные пробы).

В 30 контрольных пробирок вносили только по 5 мл Schaedler-бульона и по 0,05 мл взвеси исследуемого штамма гриба рода Candida.

Опытные и контрольные пробы инкубировали при 37°С в микроаэрофильных условиях в течение 24 часов.

После инкубирования культуры грибов рода Candida из опытных и контрольных пробирок в объеме 0,01 мл высевали на среду Сабуро, посевы инкубировали при 37°С 24 часа, затем из выросших колоний грибов рода Candida готовили взвесь и определяли их способность образовывать биопленки по степени связывания ими красителя «кристаллический фиолетовый» в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах с помощью фотометра Stat Fax 2100 («Awareness Technology», США).

Уровень признака выражали в условных единицах.

Результаты исследований приведены в таблице 1.

Как видно из таблицы 1, средний уровень признака в контроле составляет у С. albicans 3,5±0,01, у non-albicans видов (С. glabrata, С. tropicalis, С. kefyr, С. krusei) 3,7±0,02, 2,9±0,02, 2,9±0,02, 2,8±0,02, соответственно.

В опытных пробах, после совместного культивирования грибов с Enterococcus faecium 18 уровень способности к образованию биопленок у всех исследуемых видов грибов рода Candida существенно снижался (в 2,1-3,7 раза).

Пример 2.

Аналогично примеру 1 проводили эксперименты по определению у разных видов грибов рода Candida уровня способности образовывать биопленки при культивировании с заявляемым штаммом Enterococcus faecium 18 и дикими штаммами Enterococcus faecium, выделенными из кишечного биотопа.

Результаты исследований приведены в таблице 2.

Как видно из таблицы 2, после совместного культивирования грибов рода Candida с Enterococcus faecium 18 уровень способности образовывать биопленки составил - у С. albicans 1,7±0,01; С. glabrata 1,0±0,01; С. tropicalis 0,95±0,01; С. kefyr 1,2±0,01; С. krusei 1,05±0,01, а после сокультивирования с дикими штаммами Enterococcus faecium уровень признака составил - у С. albicans от 1,9±0,01 до 3,5±0,01; С. glabrata от 1,2±0,01 до 2,0±0,01 С. tropicalis от 1,1±0,01 до 2,4±0,01 С. kefyr от 1,4±0,01 до 2,2±0,01 С. krusei от 1,1±0,01 до 2,1±0,01, что свидетельствует о высокой способности заявляемого штамма Enterococcus faecium 18 снижать образование биопленок у грибов рода Candida по сравнению с изученными дикими штаммами Enterococcus faecium.

Таким образом, заявляемый штамм Enterococcus faecium 18 отличается высокой способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida и может быть использован в производстве пробиотических препаратов, оказывающих профилактическое и лечебное действие при дисбиозах кишечника.

Штамм бактерий Enterococcus faecium, обладающий способностью снижать образование биопленок грибами рода Candida, депонированный в Государственной коллекции микроорганизмов нормальной микрофлоры ФБУН «МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского Роспотребнадзора», под коллекционным номером 1252.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм дрожжей Candida parapsilosis M10, обладающий высокой липолитической активностью, депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов под регистрационным номером Y-4055 и может быть использован для получения ферментного препарата липазы.

Предложены штамм Lactobacillus plantarum ВКПМ В-12076 и штамм Lactobacillus brevis ВКПМ В-12077, способные к синтезу гамма-аминомасляной кислоты и обладающие пробиотическими свойствами. Штаммы выделены из желудочно-кишечного тракта человека и депонированы в ВКПМ.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу снижения уровня O-гликозилирования молекул-предшественников инсулина или аналогов инсулина, синтезируемых Pichia sp.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к гипоаллергенному полипептиду семейства злаковых. Также раскрыты молекула ДНК, кодирующая вышеуказанный гипоаллергенный полипептид, рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий указанную молекулу ДНК, и клетка-хозяин, трансформированная посредством указанной молекулы ДНК или указанным вектором, для получения вышеуказанного гипоаллергенного полипептида.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения жирных кислот фармакологического и пищевого назначения и их производных общей формулы (I): Осуществляют подачу газа, включающего CO2, в реактор, содержащий по меньшей мере один вид фотосинтезирующих микроводорослей, способных к фотосинтезу с продуцированием биомассы, содержащей соединения (I).

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Представленный штамм вируса африканской чумы свиней 8-го серотипа, семейства Asfarviridae, род Asfivirus, адаптирован к перевиваемой культуре клеток COS-1 и депонирован в Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №.3096.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен бактериальный штамм Pseudomonas denitrificans ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» В-1299.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен новый бактериальный штамм Pseudomonas delhiensis KТ-13 ВКПМ В-11400 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Изобретение относится к фотобиотехнологии. Штамм микроводорослей Haematococcus pluvialis ВМ1 депонирован в Российской Коллекции Микроводорослей при учреждении Институт физиологии растений им.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ испытания чувствительности Mycobacterium tuberculosis к лекарственным средствам, применение индикатора для вышеуказанного способа, где индикатором является теллурит или смесь теллурита и мочевины, твердая среда для способа испытания чувствительности, применение твердой среды, нагревательный термостат для способа испытания чувствительности и бокс культивирования для способа испытания чувствительности.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ контроля размножения Pseudomonas и применение дезинфицирующего средства.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ борьбы с размножением Listeria monocytogenes, а также применение дезинфицирующего средства.

Изобретение относится к области микробиологии и касается применения штамма Bacillus cereus ГИСК №279 в качестве продуцента ингибитора цитокина ФНО-α. Штамм выделен из испражнений пациента с дисбактериозом кишечника и депонирован в Коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им.

Предложены штамм Lactobacillus plantarum ВКПМ В-12076 и штамм Lactobacillus brevis ВКПМ В-12077, способные к синтезу гамма-аминомасляной кислоты и обладающие пробиотическими свойствами. Штаммы выделены из желудочно-кишечного тракта человека и депонированы в ВКПМ.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для рекомбинантного получения α5-интерферона. Клетку E.

Изобретение относится к применению штамма Lactococcus lactis NCC 2287 (SL131; CNCM-I4154) и/или Lactococcus lactis NCC 2180 (SL60; CNCM-I4199) для производства полноценной пищевой композиции. Упомянутая композиция уменьшает симптомы аллергических реакций, возникающих в результате воздействия пищевых, находящихся в воздухе или кожных аллергенов у пациентов с аллергиями, вызванными соответственно пищевыми, находящимися в воздухе или кожными аллергенами.

Изобретение относится к области микробиологии. Предложен бактериальный штамм Pseudomonas denitrificans ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» В-1299.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен новый бактериальный штамм Pseudomonas delhiensis KТ-13 ВКПМ В-11400 - деструктор нефти и нефтепродуктов.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения левана микробиологическим способом. Способ предусматривает внесение штамма микроорганизма Azotobacter vinelandii штамм Д-08 в питательную среду, приготовленную путем разведения мелассы дистиллированной водой до концентрации 7 или 10% с последующим культивированием при температуре 28-30°C в течение 72 часов в термостатируемом шейкере при 250 об/мин.

Изобретение относится к клинической и санитарной микробиологии и может быть использовано при исследовании различного биологического материала, а также объектов окружающей среды на наличие как патогенных, так и условно-патогенных энтеробактерий.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Lactobacillus helveticus депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-11175 и может быть использован для производства кисломолочных продуктов и пробиотических препаратов. Изобретение позволяет сократить сроки сквашивания молока. 2 пр.
Наверх