Пероральная терапия недостаточности витамина в12

Группа изобретений относится к медицине и может быть использована для нормализации уровня витамина В₁₂ у пациента с дефицитом витамина В₁₂ и средним уровнем витамина В₁₂ ниже 350 пг/мл. Для этого один раз в день в течение по меньшей мере 15 дней пациенту вводят одну или более пероральных лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, причем ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ составляет от 0,5 до 2 мг. При этом уровень витамина В₁₂ у пациента нормализуется в течение 15 дней. Также предложены способ нормализации содержания активной формы витамина В₁₂ у пациента, способ снижения уровня метилмалоновой кислоты (ММК) у пациента с повышенными уровнями ММК, способ снижения уровня гомоцистеина у пациента с повышенными уровнями гомоцистеина, а также способы нормализации межличностной изменчивости при лечении таких пациентов. Группа изобретений обеспечивает возможность нормализации уровня витамина В₁₂ и снижение уровня биомаркеров ММК и гомоцистеина у пациентов с дефицитом витамина В₁₂ в течение 15 или 90 дней перорального приема указанной композиции один раз в день. 5 н. и 10 з.п. ф-лы, 6 ил., 10 табл., 7 пр.

 

[01] Данная заявка испрашивает приоритет предварительной заявки США №61/307836, поданной 24 февраля 2010 года, которая включена в данном документе в качестве ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[02] Данное изобретение в целом относится к способам нормализации уровня содержания витамина В₁₂ у больных с низким уровнем витамина В₁₂, а также к способам нормализации межличностной изменчивости при лечении таких пациентов. Это изобретение также относится к способам снижения уровня метилмалоновой кислоты (ММК) и/или гомоцистеина и описывает фармацевтические композиции, подходящие для осуществления таких изменений.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[03] Витамин В₁₂ важен для нормального функционирования мозга и нервной системы, а также для кроветворения. Он участвует в метаболизме каждой клетки тела, особенно затрагивая синтез и регуляцию ДНК, а также синтез жирных кислот и производство энергии. Влияние витамина В₁₂ до сих пор не известно полностью.

[04] Цианокобаламин является стабильной и широко используемой формой витамина В₁₂. Витамин В₁₂ выделяется с желчью и в некоторой степени подвергается энтерогепатической рециркуляции. Поглощенный витамин В₁₂ транспортируется с помощью особых В₁₂-связывающих белков, транскобаламина I и II в различные ткани. Печень является основным органом для хранения витамина В₁₂.

[05] Дефицит витамина В₁₂ возникает из-за недостаточности рациона питания или недостаточности внутреннего фактора, из-за кишечных расстройств, таких как нарушение всасывания, резекция желудка, атрофия желудка, резекция подвздошной кишки и хронические воспалительные заболевания кишечника. Хроническое употребление таких препаратов как ингибиторы протонной помпы и метформин также вызывают дефицит витамина В₁₂. Дефицит витамина В₁₂ может потенциально вызвать серьезные и необратимые поражения, особенно мозга и нервной системы.

[06] Обычное лечение дефицита В₁₂ - внутримышечные (в/м) инъекции. Как правило, инъекции цианокобаламина в течение первого месяца в Соединенных Штатах Америки назначаются часто (например, от 6 до 9 инъекций), затем следуют инъекции для поддержания согласно предписанию врача. После начального периода лечения или непосредственно после клинической ремиссии лечение продолжают в течение жизни, часто по ежемесячному графику. Различные графики лечения и дозы описаны в литературе, начиная от частого введения доз и переходя к менее частым инъекциям для поддержания. См. Hvas et al., Haematologica 2006, 137: 2481-84.

[07] Цианокобаламин, предназначенный для перорального введения, также используется для лечения дефицита витамина В₁₂. Однако многие пациенты не реагируют на цианокобаламин, введенный таким образом. Одно исследование проводилось на пациентах с пернициозной анемией, и два исследования - на пациентах с нарушением всасывания кобаламина из пищи. Результаты показали, что 80-90% пациентов достигли нормальных сывороточных уровней витамина В₁₂ при 3-месячных исследованиях, и 95% пациентов были нормализованы при исследованиях, которые длились 2,5 года. Клинические улучшения были зарегистрированы только у 20-30% пациентов (Andres et al., Eur J Intern Med 2003, 18: 221-26). Краткосрочное исследование продолжительностью в 1 неделю с дозой 1000 мкг/день перорально витамина В₁₂ показало, что уровни витамина В₁₂ увеличились в среднем на 0,23 мкг/л (230 пг/мл) у 17 из 20 пожилых пациентов (Kaltenbach et al., Ann Med Interne 2003, 154: 91-95).

[08] Кроме того, способность пероральной терапии соответствовать парентеральной терапии витамином В₁₂ для быстрого и надежного восстановления уровня содержания или для поддержания резервов витамина В₁₂ для большинства или для всех пациентов все еще находится под вопросом. В результате, лечение с помощью в/м инъекций остается в широкой клинической практике в некоторых регионах, в том числе и Соединенных Штатах Америки. Ответы биомаркеров на пероральное введение витамина В₁₂ были проанализированы в недавнем систематическом обзоре 8 рандомизированных контролируемых исследований по изучению перорального введения витамина В₁₂ (Hoey et al., Am J Clin Nutr 2009, 89 (доп.): 1981S-96S). Были определены ответы кобаламина, ММК, гомоцистеина (ГЦ) и голотранскобаламина. Было установлено, что потребления витамина В₁₂ приводят к крайне переменным эффектам на концентрацию витамина В₁₂ в крови и что анализ на основе тендерных и возрастных подгрупп не смог объяснить данную изменчивость. Авторы отметили, что в некоторых статьях информация не представлена достаточным образом для того, чтобы передать четкую картину клинического ответа. Carmel (Food Nutr Bull 2008, 29: S177-S187) также прокомментировал исследования по введению витамина В₁₂, отметив, что зависимость от средних значений и групповой статистики в исследованиях добавок витамина В₁₂ часто может скрывать подмножества людей с небольшими улучшениями или с отсутствием таковых, а в трех проспективных исследованиях добавок витамина В₁₂ у лиц пожилого возраста, приведенных в этом документе, пациентов со слабым ответом, как правило, не обследовали более тщательно для определения причин таковых ответов.

[09] Внутримышечное введение витамина В₁₂ неудобно, относительно дорогостояще в случае привлечения медицинского персонала для дозировки, затруднительно для болезненных и пожилых людей, когда мышечной массы недостаточно, и может быть болезненным (Butler et al., Fam Pract 2006, 23: 279-85). Современная пероральная терапия недостаточности витамина В₁₂ по-прежнему рассматривается как менее надежная, чем парентеральное введение, и в этом случае рекомендуется чаще контролировать состояние пациента, чем в случае парентерального введения (Lane et al., Ann Pharmacother 2002; 36: 1268-72). Таким образом, существует постоянная потребность в более надежных и эффективных пероральных способах лечения дефицита витамина В₁₂, которые обладали бы низкой межличностной изменчивостью.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[10] Авторы настоящего изобретения обнаружили, что уровни витамина В₁₂, метилмалоновой кислоты (ММК) и/или гомоцистеина можно нормализовать на удивление быстро (например, в течение 15 дней лечения) у пациентов с дефицитом витамина В₁₂ и/или повышенным уровнем ММК и/или гомоцистеина при пероральном введении определенных составов, содержащих натриевую соль N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты (SNAC) и витамин В₁₂. Авторы изобретения также отметили, что все пациенты, которым вводили состав SNAC/витамин В₁₂ перорально, демонстрировали положительный ответ на данное лечение.

[11] В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу нормализации уровня витамина В₁₂ (например, в течение 15 дней лечения) у пациентов с дефицитом витамина В₁₂ путем ежедневного введения одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту (NAC) или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂. В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения пациент страдает от дефицита витамина В₁₂ из-за недостаточности рациона питания, недостаточности внутреннего фактора, кишечных расстройств, таких как нарушение всасывания, резекция желудка, атрофия желудка, резекция подвздошной кишки и хронические воспалительные заболевания кишечника.

[12] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу нормализации уровней голотранскобаламина (активной формы витамина В₁₂) (например, в течение 15 дней лечения) у пациентов с низким уровнем активной формы витамина В₁₂ путем ежедневного введения одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂.

[13] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения уровней ММК у пациента с повышенными уровнями ММК путем ежедневного введения одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂.

[14] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения уровней гомоцистеина у пациентов с повышенными уровнями гомоцистеина путем ежедневного введения одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂.

[15] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения межличностной изменчивости при пероральном лечении пациентов с дефицитом витамина В₁₂ и/или повышенными уровнями ММК и/или гомоцистеина. Для каждого пациента этот способ включает ежедневное введение одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂. В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения данный способ позволяет достичь у пациента показатель ответа, аналогичный или превосходящий таковой на фоне внутримышечного введения.

[16] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу улучшения показателя ответа у пациентов на пероральную терапию витамином В₁₂. Для каждого пациента этот способ включает ежедневное введение одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂. В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения пациенты страдают от низкого уровня витамина В₁₂ или дефицита витамина В₁₂.

[17] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (а) витамин В₁₂, (б) NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и (в) фолиевую кислоту. Эта фармацевтическая композиция может использоваться в любом из вышеупомянутых способов.

[18] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения или профилактики дефицита витамина В₁₂, вызванного применения пациентом ингибитора протонной помпы, путем перорального введения (а) ингибитора протонной помпы (например, омепразола или эзомепразола), (б) витамина В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемой соли (такой как SNAC) и необязательно (г) фолиевой кислоты. Все указанные компоненты могут находиться в одной или отдельных лекарственных формах. В одном предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения компоненты (б), (в) и необязательно (г) включены в одну лекарственную форму, и их вводят одновременно (например, одновременно или в течение 15 минут) с ингибитором протонной помпы. В другом предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения все вышеуказанные компоненты (т.е. компоненты (а), (б), (в) и необязательно (г)) включены в одну лекарственную форму. Еще один предпочтительный вариант воплощения настоящего изобретения представляет собой способ снижения или профилактики дефицита витамина В₁₂, вызванного применением ингибиторов протонной помпы пациентом, получающим ингибитор протонной помпы, путем (i) отмены ингибитора протонной помпы и (ii) введения (а) ингибитора протонной помпы (например, омепразола или эзомепразола), (б) витамина В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемой соли (такой как SNAC) и необязательно (г) фолиевой кислоты.

[19] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (а) ингибитор протонной помпы (например, омепразол или эзомепразол), (б) витамин В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и необязательно (г) фолиевую кислоту.

[20] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения или профилактики у пациента дефицита витамина В₁₂ на фоне метформина путем перорального введения (а) метформина, (б) витамина В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемой соли (такой как SNAC) и необязательно (г) фолиевой кислоты. Все указанные компоненты могут находиться в одной или отдельных лекарственных формах. В одном предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения компоненты (б), (в) и необязательно (г) включены в одну лекарственную форму, и их вводят одновременно (например, одновременно или в течение 15 минут) с метформином. В другом предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения все вышеуказанные компоненты (т.е. компоненты (а), (б), (в) и необязательно (г)) включены в одну лекарственную форму. Еще один предпочтительный вариант воплощения настоящего изобретения представляет собой способ снижения или профилактики дефицита витамина В₁₂ на фоне метформина у пациента, получавшего метформин, путем (i) отмены метформина и (ii) введения (а) метформина, (б) витамина В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемой соли (такой как SNAC) и необязательно (г) фолиевой кислоты.

[21] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей (а) метформин, (б) витамин В₁₂, (в) NAC или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и необязательно (г) фолиевую кислоту.

[22] В одном предпочтительном варианте воплощения способов настоящего изобретения ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли варьирует от примерно 50 до примерно 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ варьирует от примерно 0,5 до примерно 2 мг.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[23] Фигура 1 демонстрирует среднее (SD) процентное изменение концентраций кобаламина в сыворотке по сравнению с исходным уровнем (PCFB) в определенный день исследования у испытуемых, описанных в Примере 7.

[24] Фигура 2 демонстрирует среднее (SD) процентное изменение концентраций ММК в плазме по сравнению с исходным уровнем (PCFB) в определенный день исследования у испытуемых, описанных в Примере 7.

[25] Фигура 3 демонстрирует среднее (SD) процентное изменение концентраций гомоцистеина в плазме по сравнению с исходным уровнем (PCFB) в определенный день исследования у испытуемых, описанных в Примере 7.

[26] Фигура 4 представляет собой диаграмму рассеяния показателей концентрации голотранскобаламина по сравнению с концентрацией кобаламина в день 61 лечения у испытуемых, описанных в Примере 7.

[27] Фигура 5 представляет собой диаграмму рассеяния показателей концентрации голотранскобаламина по сравнению с концентрацией кобаламина в день 91 лечения у испытуемых, описанных в Примере 7.

[28] Фигура 6 представляет собой гистограмму средних (SD) концентраций кобаламина в определенный день исследования у испытуемых, описанных в Примере 7.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[29] Термин «примерно» или «приблизительно» означает нахождение определенного показателя в диапазоне допустимой погрешности, который определяется специалистом в данной области техники и частично зависит от того, каким образом измеряется или определяется показатель, т.е. ограничениями системы измерений. Например, «примерно» может означать нахождение в пределах 1 или более 1 стандартного отклонения в соответствии с практикой в данной области техники. И, наоборот, «примерно» в отношении формул может означать плюс или минус диапазон до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5%.

[30] В настоящем документе термин «SNAC» относится к N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприлату натрия. SNAC также известен как натрий-N-салицилоил-8-аминокаприлат, мононатрия 8-(N-салицилоамино)октаноат, мононатриевая соль N-(салицилоил)-8-аминооктановой кислоты, мононатрия N-{8-(2феноксибензоил)амино}октаноат, мононатриевая соль Е414, натрия 8-[(2-гидроксибензоил)амино]октаноат и салкапрозат.SNAC имеет структуру

[31] В дополнительных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов NAC или другая фармацевтически приемлемая соль SNAC может использоваться вместо SNAC. Например, можно использовать двунатриевую соль NAC. Помимо этого, можно использовать любую форму SNAC твердого состояния. Подходящие формы SNAC твердого состояния описаны в Публикации патента США №2009/0143330, который включен в настоящее описание в качестве ссылки.

[32] В дополнительных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов средства доставки, кроме SNAC (и ее свободной кислоты или других фармацевтически приемлемых солей), могут использоваться в сочетании с витамином В₁₂. Такие средства доставки можно либо комбинировать с NAC, либо использовать вместо нее или ее фармацевтически приемлемой соли. Примеры таких средств доставки включают, но не ограничиваются N-(10-[2-гидроксибензоил]амино)декановой кислотой (свободной кислотой SNAD), N-(8-[2-гидрокси-5-хлорбензоил]-амино)октановой кислотой (5-CNAC), 4-[(2-гидрокси-4-хлор-бензоил)-амино]бутановой кислотой (4-CNAB), 8-(2-гидроксифенокси)октилдиэтаноламином (HPOD), 8-(N-2-гидрокси-4-метоксибензоил)-аминокаприловой кислотой (4-МОАС) и их фармацевтически приемлемыми солями (например, их мононатриевые и двунатриевые соли). Термин «SNAD» относится к мононатриевой соли N-10-[2-гидроксибензоил-]амино)декановой кислоты. Другие подходящие средства доставки описаны, например, в Международной публикации под номерами WO 96/30036, WO 98/34632 и WO 2007/121318, а также в Патентах США под номерами 5650386, 5773647 и 5866536, каждый из которых включен в настоящее описание в качестве ссылки.

[33] Термин «витамин В₁₂» относится к любому элементу группы кобальтсодержащих соединений, известных как кобаламины, которые включают, но не ограничиваются цианокобаламином, гидроксикобаламином, метилкобаламином и 5-дезоксиаденозилкобаламином. В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения витамином В₁₂ является цианокобаламин.

[34] В определенных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов сывороточный уровень витамина В₁₂ у пациента составляет ниже примерно 500 пг/мл. Например, сывороточный уровень витамина В₁₂ у пациента может быть ниже примерно 400, примерно 350, примерно 300, примерно 250 или примерно 200 пг/мл.

[35] В определенных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов у пациента уровень голотранскобаламина (активной формы витамина В₁₂) в плазме составляет ниже примерно 100 пмоль/л. Например, у пациента уровень активной формы витамина В₁₂ в плазме может быть ниже примерно 50 или примерно 25 пмоль/л.

[36] В определенных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов у пациента уровень ММК в сыворотке составляет по меньшей мере около 150 нмоль/л. Например, у пациента уровень ММК в сыворотке может быть, по меньшей мере около 175 нмоль/л, по меньшей мере около 200 нмоль/л или по меньшей мере около 225 нмоль/л.

[37] В определенных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов у пациента уровень гомоцистеина в плазме составляет по меньшей мере 13 мкмоль/л. Например, у пациента уровень гомоцистеина в плазме может составить, по меньшей мере, 14 мкмоль/л.

[38] В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения межличностной изменчивости при пероральном лечения пациентов с низким содержанием витамина В₁₂ и дефицитом витамина В₁₂; этот способ предусматривает для каждого пациента ежедневное введение одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту (NAC) или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂.

[39] В способах настоящего изобретения пероральную лекарственную форму NAC (или ее фармацевтически приемлемой соли) и витамина В₁₂ предпочтительно вводят ежедневно по меньшей мере 15, 30, 60 или 90 дней.

[40] Еще в одном аспекте настоящее изобретение относится к способу улучшения показателя ответа пациентов на пероральное лечение витамином В₁₂ путем ежедневного введения каждому пациенту одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту (NAC) или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и витамин В₁₂. В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения пациенты страдают от низкого содержания витамина В₁₂ и дефицита витамина В₁₂.

[41] В одном из вариантов воплощения настоящего изобретения любой из описанных здесь способов позволяет достичь у пациента показатель ответа, аналогичный или превосходящий показатель, наблюдаемый на фоне внутримышечного введения.

[42] В другом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим (а) витамин В₁₂, (б) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту (NAC) или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и (в) необязательно одно или более дополнительных биологически активных веществ, целесообразных в любом из описанных здесь способов. Примеры подходящих дополнительных активных веществ включают, но не ограничиваются фолиевой кислотой. В одном варианте воплощения настоящего изобретения массовое соотношение NAC (или ее фармацевтически приемлемой соли, например, SNAC) к витамину В₁₂ в фармацевтической композиции составляет от примерно 25:1 до примерно 500:1.

[43] В одном варианте воплощения настоящее изобретение относится к пероральной фармацевтической композиции, содержащей (а) витамин В₁₂, (в) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту (NAC) или ее фармацевтически приемлемую соль (такую как SNAC) и (в) фолиевую кислоту. Весовое соотношение и количество витамина В₁₂ и SNAC (или другой формы NAC) может соответствовать описанным здесь показателям. В одном варианте воплощения настоящего изобретения пероральная фармацевтическая композиция включает от примерно 0,01 мг до примерно 25 мг витамина В₁₂, от примерно 1 мг до примерно 1400 мг SNAC и от примерно 100 до примерно 1000 мкг фолиевой кислоты. В другом варианте воплощения настоящего изобретения пероральная фармацевтическая композиция включает от примерно 6 мкг до примерно 10 мг витамина В₁₂, от примерно 10 мг до примерно 250 мг SNAC и от примерно 100 до примерно 800 мкг фолиевой кислоты.

[44] В дополнительных вариантах воплощения настоящего изобретения количество фолиевой кислоты в составе варьирует от примерно 0,05 мкг до примерно 1000 мкг. Например, от примерно 1 мкг до примерно 800 мкг, от примерно 10 мкг до примерно 800 мкг, от примерно 100 мкг до примерно 800 мкг, от примерно 250 мкт до примерно 800 мкг, от примерно 250 мкг до примерно 500 мкг или от примерно 400 мкг до примерно 800 мкг. Например, количество фолиевой кислоты в композиции может составлять примерно 200 мкг, примерно 250 мкг, примерно 300 мкг, примерно 400 мкг, примерно 500 мкг, примерно 600 мкг, примерно 700 мкг или примерно 800 мкг.

[45] В дополнительных вариантах воплощения любого из описанных здесь способов пациент означает лицо без ответа на существующее пероральное лечение недостаточности витамина B₁₂ (или, например, пероральное лечение препаратом, содержащим витамин В₁₂, но не содержащим SNAC).

[46] В других вариантах воплощения любого из описанных здесь способов настоящее изобретение относится к введению лекарственной формы - таблетки.

[47] В дополнительных вариантах воплощения настоящего изобретения лекарственная форма, например лекарственная форма - таблетка, может содержать от примерно 0,01 мг до примерно 25 мг витамина В₁₂ и от примерно 1 мг до примерно 600 мг SNAC. Например, лекарственная форма может содержать от примерно 0,02 мг до примерно 25 мг витамина В₁₂ или от примерно 0,1 мг до примерно 20 мг витамина В₁₂, или от примерно 0,5 мг до 10 мг витамина В₁₂ и от примерно 10 мг до примерно 200 мг SNAC, или от примерно и от примерно 10 мг до примерно 250 мг SNAC в каждой таблетке.

[48] В одном варианте воплощения настоящего изобретения лекарственная форма, например лекарственная форма - таблетка, содержит от примерно 0,5 до примерно 1,5 мг витамина В₁₂ и от примерно 50 до примерно 150 мг SNAC, например примерно 1 мг витамина В₁₂ и примерно 100 мг SNAC.

[49] В других вариантах воплощения настоящего изобретения весовое соотношение витамина В₁₂ к SNAC составляет от примерно 2:1 до примерно 1:700, например, от примерно 1:2 до примерно 1:600, от примерно 1:2 до примерно 1:200, от примерно 1:2 до примерно 1:100, от примерно 1:3 до примерно 1:20 или от примерно 1:4 до примерно 1:10. В одном варианте воплощения настоящего изобретения весовое соотношение витамина В₁₂ к SNAC составляет примерно 1 к 100.

[50] В других вариантах воплощения настоящего изобретения лекарственная форма (например, таблетка) необязательно содержит вспомогательные вещества, эмульгаторы, стабилизаторы, подсластители, ароматизаторы, разбавители (например, двухосновный фосфат кальция), связующие вещества (например, повидон), красители и/или солюбилизирующие агенты, смазочные материалы (такие как стеарат магния) или любую их комбинацию. Подходящие вспомогательные вещества, эмульгаторы, стабилизаторы, подсластители, ароматизаторы, разбавители, красители и солюбилизирующие агенты включают вещества, описанные в Handbook of Pharmaceutical Excipients (fourth edition), Raymond C. Rowe, Paul J. Sheskey и Paul J. Weller.

[51] Например, лекарственная форма необязательно содержит от примерно 1 до примерно 150 мг двухосновного фосфата кальция и необязательно содержит от примерно 0,5 до примерно 10 мг повидона. В качестве дополнительного примера двухосновный фосфат кальция присутствует в количестве от примерно 50 до примерно 150 мг, повидон присутствует в количестве от примерно 1 до примерно 8 мг. В некоторых вариантах воплощения настоящего изобретения двухосновный фосфат кальция присутствует в количестве от примерно 75 до примерно 125 мг, повидон присутствует в количестве от примерно 1,5 до примерно 5 мг. Например, двухосновный фосфат кальция присутствует в количестве от примерно 90 до примерно 100 мг, а повидон - в количестве от примерно 1,5 до примерно 5 мг. В образцовой лекарственной форме двухосновный фосфат кальция присутствует в количестве примерно 95 мг, а повидон - в количестве примерно 2 мг. Еще в одном варианте воплощения настоящего изобретения стеарат магния присутствует в количестве от примерно 0,5 до примерно 5 мг, а именно от примерно 1 до примерно 3 мг, например примерно 2 мг.

[52] Не ограниваясь каким-либо конкретным способом работы, полагают, что поглощение витамина В₁₂ желудочно-кишечном тракте зависит от наличия достаточных белков внутреннего фактора, выделяемых из париетальных клеток желудка. Средняя диета обеспечивает поступление витамина В₁₂ в количестве примерно 10 мкг/день в связанной с белком форме, доступной для поглощения после нормального пищеварения. Витамин В₁₂ связывается с внутренним фактором при прохождении через желудок; разделение происходит в подвздошной кишке, и витамин В₁₂ проникает в клетки слизистой оболочки, где поглощается в процессе, опосредованном рецепторами. Затем он транспортируется транскобаламин-связывающими белками. Небольшое количество (приблизительно 1% от общего потребленного количества) поглощается путем простой диффузии, но этот механизм адекватен только при очень больших дозах. Также полагают, что SNAC позволяет витамину В₁₂ обойти обычный опосредованный рецепторами процесс.

[53] Термин «лечение» или «лечащий» означает любое лечение заболевания или нарушения у млекопитающих, включая профилактику или защиту от болезни или нарушения, т.е. неразвитие клинических симптомов; купирование заболевания или нарушения, т.е. прекращение или подавление развития клинических симптомов; и/или облегчение заболевания или нарушения, т.е. обеспечение регресса клинических симптомов.

[54] Пациент может страдать от дефицита витамина В₁₂ из-за нарушения всасывания, которое может быть связано со следующими состояниями: (1) анемия Аддисона (пернициозная), (2) желудочно-кишечная патология, дисфункция или хирургическое вмешательство, включая глютеновую энтеропатию или целиакию, дисбактериоз тонкого кишечника, (3) полная или частичная резекции желудка, (4) инвазия широким лентецом, (5) злокачественное заболевание поджелудочной железы или кишечника или (6) дефицит фолиевой кислоты. Например, у пациента может быть (1) пищевая недостаточность витамина В₁₂, (2) пернициозная анемия, (3) нарушение всасывания витамина В₁₂ из-за функциональных нарушений внутреннего поглощения, резекции желудка, воспалительного заболевания кишечника, возрастных нарушений диетического поглощения витамина В₁₂, чрезмерного развития бактериальной микрофлоры кишечника или постоянного применения ингибиторов протонной помпы или метформина, или (4) состояния, влияющие на тонкий кишечник, например тропическая спру, болезнь Крона, хронический алкоголизм, хирургия в области живота или кишечника, которая влияет на производство внутреннего фактора. Проявления дефицита витамина В₁₂ включают пернициозную анемию и неврологическую дегенерацию. Кроме того, недостаточный уровень витамина В₁₂ связывают с такими состояниями здоровья, как угнетение когнитивной функции, болезнь Альцгеймера, депрессия и плохое состояние костей. Пациент также может страдать от дефицита витамина В₁₂ из-за постоянного применения некоторых лекарственных средств, например, ингибиторов протонной помпы или метформина, которые приводят к дефициту витамина В₁₂.

[55] Способы настоящего изобретения также целесообразны для обеспечения пациентов, которым витамин В₁₂ необходим в объеме, превышающем норму, например, в связи с беременностью, тиреотоксикозом, гемолитической анемией, кровотечениями, злокачественными опухолями, печеночной и почечной недостаточностью.

[56] Термин «белок внутреннего фактора» относится к гликопротеину, производимому париетальными клетками желудка. Этот гликопротеин способствует впоследствии усвоению витамина В₁₂ в подвздошной кишке.

[57] Нормальные концентрации витамина В₁₂ в сыворотке обычно варьируют, например, от примерно 200-900 пг/мл при средней нормальной концентрации в плазме около 450 пг/мл. См., например, AHFS Drug Information: McEvoy, G.K. ed. American Society of Health-System Pharmacists, 2007). Концентрации витамина В₁₂ в сыворотке менее 200 пг/мл указывают на дефицит витамина В₁₂, а концентрации витамина В₁₂ в сыворотке в пределах от примерно 200 до примерно 350 пг/мл в сочетании с повышенными уровнями ММК и общего гомоцистеина можно считать признаками накопления истощающейся ткани. См., например, Carmel R, et al., Hematology Am. Soc. Hematol. Educ. Program, 62-81, 2003. Таких пациентов можно лечить описанными здесь способами. Если уровни витамина В₁₂ в сыворотке ниже примерно 350-400 пг/мл, можно говорить о пограничном дефиците витамина В₁₂ у пациентов. См., например, Cravens D, et al., Journal of Family Practice, 56(1) 62-63, 2007; Ramsay, ID et al., Clin. Exp. Dermatol., 15(4), 277-81, 1990. Таких пациентов можно лечить описанными здесь способами.

[58] Подходящие ингибиторы протонной помпы включают, но не ограничиваются омепразолом, гидроксиомепразолом, эзомепразолом, тенатопразолом, лансопразолом, пантопразолом, рабепразолом, донтопрозолом, хабепразолом, перпразолом, рансопразолом, парипразолом, леминопразолом, тимопразолом, дисульпразолом и их фармацевтически приемлемыми солями. В одном варианте воплощения настоящего изобретения пероральная лекарственная форма содержит от примерно 5 до примерно 60 мг любого из указанных ингибиторов протонной помпы (например, омепразол, эзомепразол или пантопразол). В одном из предпочтительных вариантов воплощения настоящего изобретения пероральная лекарственная форма содержит 10, 20 или 40 мг ингибитора протонной помпы. В другом варианте воплощения настоящего изобретения ежедневная доза любого из указанных ингибиторов протонной помпы (например, омепразол, эзомепразол или пантопразол) варьирует от примерно 5 до примерно 60 мг в сутки. В одном предпочтительном варианте воплощения настоящего изобретения ежедневная доза составляет 10, 20 или 40 мг ингибитора протонной помпы.

[59] Пероральные лекарственные формы, содержащие ингибитор протонной помпы или метформин, могут содержать ингибитор протонной помпы или метформин в слое, обособленном от NAC (или ее соли) и витамина В₁₂. Это позволяет слою ингибитора протонной помпы или метформина обеспечивать другое высвобождение (например, немедленное или пролонгированное высвобождение), чем высвобождение слоя витамин В₁₂/NAC.

[60] Предпочтительно испытуемым или пациентом, для которого введение пероральной фармацевтической композиции является эффективным терапевтическим режимом в связи с заболеванием или нарушением, является человек, но может быть и любое животное, в том числе лабораторные животные в контексте исследования либо скрининга или эксперимента. Таким образом, как нетрудно понять специалисту в данной области техники, способы и композиции настоящего изобретения особенно подходят для применения для любого животного, особенно для млекопитающих (например, для человека), включая, но ни в коем случае не ограничиваясь человеком, домашними животными, например кошками и собаками, сельскохозяйственными животными, включая, но не ограничиваясь коровами, лошадьми, козами, овцами и свиньями, дикими животными (как в дикой природе, так и в условиях зоопарка), подопытными животными, например мышами, крысами, кролями, козами, овцами, свиньями, собаками, кошками и т.п., птицами, такими как куры, индейки, певчие птицы и т.д., т.е. для применения в ветеринарии.

[61] Следующие примеры приведены в качестве конкретных иллюстраций изобретения. Однако следует понимать, что изобретение не ограничивается конкретными деталями, изложенными в примерах. При отсутствии иных указаний все части и проценты, приведенные в примерах, а также в оставшейся части спецификации, указаны по весу.

[62] Кроме того, любой диапазон чисел, указанный в описании или нижеприведенных пунктах, где приведено описание или утверждение различных аспектов изобретения, например, представлен определенный набор свойств, единицы измерения, условия, физическое состояние или проценты, включает в настоящее описание в буквальном смысле путем ссылки или иным образом любое количество, входящее в указанный диапазон, в том числе любое подмножество чисел или диапазонов, включенных в любой указанный диапазон.

Пример 1. Приготовление N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты и SNAC

[63] Способ приготовления N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты и SNAC предусматривает следующие этапы: исходным материалом является салициламид, который конвертируется до образования карсалама (1,3-бензоксазин-2,4-дион). Второй этап предполагает алкилирование карсалама. Предпоследним шагом является гидролиз с целью расщепления этиловой защитной группы в конце алкильной цепи и открытия гетероциклического кольца, формирующего свободную кислоту SNAC. На заключительном этапе образуется натриевая соль свободной кислоты SNAC в результате реакции с 1% избыточным стехиометрическим количеством основания натрия гидроксида. После охлаждения осажденный продукт изолируют путем центрифугирования и высушивают в вакууме перед упаковкой. Технологический контроль синтетической схемы приведен в Таблице 1.

Пример 2. Приготовление витамина В₁₂ в форме таблеток

[64] Матрицу и пуансон для изготовления таблеток проверяют на предмет чистоты и наличия порошка магния стеарата на поверхностях пуансона. Витамин В₁₂, SNAC, носитель, вспомогательное вещество, эмульгатор, стабилизатор, подсластитель, ароматизатор, разбавитель, краситель, солюбилизирующий агент просеивают через сито №35 и переносят в герметичный контейнер. 50 мг витамина В₁₂ взвешивают и тщательно перемешивают с 11 г носителя, наполнителя, эмульгатора, стабилизатора, подсластителя, ароматизатора, разбавителя, красителя и/или солюбилизирующего агента. Изготавливают 100 таблеток витамина В₁₂, каждая из которых содержит 0,5 мг витамина В₁₂ и 110 мг носителя, наполнителя, эмульгатора, стабилизатора, подсластителя, ароматизатора, разбавителя, красителя и/или солюбилизирующего агента. Эти таблетки используют в качестве контроля.

Пример 3. Приготовление витамина В₁₂ и SNAC в форме таблеток

[65] 50 мг витамина В₁₂ и 1 г SNAC взвешивают и тщательно перемешивают с 10 г носителя, наполнителя, эмульгатора, стабилизатора, подсластителя, ароматизатора, разбавителя, красителя и/или солюбилизирующего агента. Изготавливают 100 таблеток витамина В₁₂, каждая из которых содержит 0,5 мг витамина В₁₂, 10 мг SNAC и 100 мг носителя, наполнителя, эмульгатора, стабилизатора, подсластителя, ароматизатора, разбавителя, красителя и/или солюбилизирующего агента. Этот процесс повторяют для изготовления партий таблеток, содержащих 1,0 мг, 0,8 мг, 0,6 мг, 0,4 мг и 0,2 витамина В₁₂ соответственно.

[66] Эти таблетки содержат спецификации для выпуска компонента SNAC, как показано в Таблице 2:

Пример 4. Приготовление таблеток для тестирования на крысах

[67] Таблетки с четырьмя типами различных ингредиентов были изготовлены следующим образом:

[68] (1) 8,8 мг витамина В₁₂, 35 мг SNAC взвесили, тщательно перемешали и изготовили в форме таблетки для введения крысам; (2) 8,8 мг витамина В₁₂, 35 мг SNAC и 5 мг капмула ПГ-8 (пропиленгликоля монокаприлат) взвесили, тщательно перемешали и изготовили в форме таблетки; (3) 8,8 мг витамина В₁₂, 35 мг SNAC и 0,9 мг повидона взвесили, тщательно перемешали и изготовили в форме таблетки. Каждый из четырех процессов повторяли для производства большего количества таблеток.

Пример 5. Введение крысам линии Спраг-Доули

[69] Самцы крыс линии Спраг-Доули (325-350 г) получали внутривенно витамин В₁₂ (0,5 мг/кг) в качестве монотерапии или в сочетании с пероральным введением таблеток, изготовленных по Примеру 4, в дозе 50 мг/кг, витамин В₁₂ в качестве монотерапии или в сочетании с SNAC в дозе 200 мг/кг. Образцы крови были взяты через 0, 3, 10, 20, 30, 60, 120, 240 и 360 минут после введения. Образцы плазмы проанализировали на предмет содержания витамина В₁₂ способом РИА. Модельные независимые фармакокинетические (ФК) показатели, полученные после введения комбинации витамина B₁₂/SNAC, сопоставили с данными, полученными после введения только витамина В₁₂. Результаты представлены в Таблице 3.

Пример 6. Приготовление таблеток для тестирования на человеке

[70] Таблетки были изготовлены из цианокобаламина, SNAC, Коллидона 90F, безводного Эмкомпресса (USP/EP) и магния стеарата (NF/BP/EP/JP). Каждая таблетка содержит следующие ингредиенты, как указано в Таблице 4:

Пример 7. Открытое рандомизированное исследование

[71] В этом исследовании эффективность и безопасность пероральной формулы витамина В₁₂ (1 мг) настоящего изобретения и внутримышечного (в/м) введения цианокобаламина (1 мг) оценивали у пациентов с незначительным дефицитом витамина B₁₂.

Дизайн исследования

[72] Это исследование проведено в форме открытого рандомизированного 60-дневного исследования с 30-дневным расширенным периодом среди испытуемых с дефицитом витамина В₁₂. Испытуемых распределили для получения лечения в соответствии с графиком рандомизации, подготовленным статистиком в начале исследования. Схема рандомизации была стратифицирована для обеспечения сбалансированного количества мужчин и женщин в каждой группе. Пациенты были рандомизированы для получения либо 1000 мкг перорально в форме таблетки один раз в день в течение 90 дней, либо 1000 мкг цианокобаламина в форме в/м инъекции в дни 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 и 90.

[73] Испытуемые самостоятельно принимали одну таблетку натощак, по меньшей мере за один час до утреннего приема пищи, запивая 50 мл воды. Внутримышечное введение исследуемого препарата проводили сотрудники исследования в научно-исследовательском учреждении утром натощак, по меньшей мере за один час до утреннего приема пищи в дни исследования 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 и 90. У испытуемых, распределенных для получения таблеток, соблюдение режима лечения проверяли на основании записей в дневнике испытуемого. Образцы крови для фармакодинамических анализов (переменных эффективности) были взяты у всех испытуемых в момент оценки исходного состояния перед началом лечения (день 1), а также в дни 15, 31, 61 и 91. Сбор образцов проводили примерно через 24 ч после введения последней дозы, до введения дозы в этот день, а также натощак.

Материалы

[01] Стерильный цианокобаламин для инъекций, USP 1000 мкг/мл, использовали в форме индивидуальных 1 мл ампул.

[02] Состав таблеток, вводимых испытуемым, представлен в Таблице 5.

Испытуемые

[03] В целом 50 взрослых мужчин и женщин были рандомизированы для получения исследуемого препарата. Двадцать два из 24-х испытуемых (91,7%), рандомизированных для получения таблеток, завершили исследование в плановом порядке. Двадцать шесть испытуемых были рандомизированы для получения в/м инъекций витамина В₁₂, и 26 (100%) пациентов завершили исследование в плановом порядке. Эти испытуемые страдали от незначительного дефицита витамина В₁₂.

[04] В соответствии с критериями включения в исследование к участию допускали мужчин или женщин, клинические лабораторные данные которых указывали на дефицит витамина В₁₂, который определяли по уровню кобаламина в сыворотке ниже 350 пг/мл. Для участия в исследовании испытуемые должны были находиться в возрасте 60 лет или старше; либо в возрасте 18 лет или старше с нарушениями желудочно-кишечного тракта, включая, но не ограничиваясь хирургией желудочно-кишечного тракта (например, резекция желудка, шунтирование желудка), резекцией подвздошной кишки, атрофией желудка, целиакией, болезнью Крона или продолжительным применением (>3 месяцев) ингибиторов протонной помпы или соблюдением диеты (например, вегетарианство или строгое вегетарианство). Дополнительные критерии включения в исследование: хорошее общее состояние здоровья, о чем свидетельствует неотягощенный анамнез, медицинский осмотр, клинические лабораторные исследования, основные показатели жизнедеятельности, ЭКГ и нормальная функция почек, которая определяется по клиренсу креатинина, рассчитываемого по формуле Кокрофта-Голта, так как нарушение функции почек может повышать показатели гомоцистеина (ГЦ), метилмалоновой кислоты (ММК) и голотранскобаламина (Herrmann et ah, Clin Chem Lab Med 2003; 41: 1478-88). Критерии исключения из исследования: проводимое лечение, назначенное медицинским работником, в связи с дефицитом витамина В₁₂ и/или симптомов; ежедневное применение нейтрализующих антацидов (например, Маалокс®); неспособность принимать пероральное лекарственное средство; любой клинически значимый лабораторный показатель на момент скрининга; гиперчувствительность или аллергическая реакция на витамин В₁₂; участие в клиническом исследовании нового химического соединения в течение 30 дней после введения первой дозы исследуемого препарата; уровни фолиевой кислоты ниже нормы, установленной клинической лабораторией.

[05] Факторы, которые препятствуют диагностике и лечению дефицита витамина В₁₂, включают дефицит фолатов, почечную недостаточность и дефицит витамина В₆. Дефицит фолатов может вызвать множество тех же симптомов, которые возникают на фоне дефицита витамина В₁₂, например повышенный уровень ГЦ. Почечная недостаточность может повышать уровни ММК в крови, а дефицит витамина В₆ или гипотиреоз может приводить к повышенному общему уровню ГЦ. Указанные клинические параметры дефицита витамина В₁₂, связанные с иными причинами, могли бы препятствовать достижению ответа на лечение недостаточности витамина В₁₂. Пациенты с указанными выше дефицитными состояниями были исключены из исследования.

[06] Испытуемые записывали сопутствующие препараты (в том числе витамины, травяные добавки и антациды) и побочные явления в дневниках, выданных им в первый день исследования. Испытуемые, рандомизированные для получения перорального лечения, также записывали информацию о приеме препарата (дату и время) и времени приема пищи до и после применения каждой дозы.

Виды лечения

[07] Таблетку 1000 мкг для перорального применения принимали натощак однократно, запивая 50 мл воды. Испытуемые вводили каждую дозу самостоятельно каждый день в течение 90 дней после ночного голодания за 1 час до утреннего приема пищи. Испытуемые не употребляли жидкость по меньшей мере за 1 час до и в течение 1 часа после приема препарата.

[08] Цианокобаламин 1000 мкг вводили в/м в форме 1 мл из ампулы, содержащей 1000 мкг/мл препарата. Исследуемый препарат вводили сотрудники исследования в научно-исследовательском учреждении утром натощак, по меньшей мере за 1 час до утреннего приема пищи в дни исследования 1, 3, 7, 10, 14, 21, 30, 60 и 90.

Обработка образцов крови

[09] Уровни кобаламина (В₁₂) в сыворотке определяли с помощью валидизированного способа иммуноферментного анализа на микрочастицах (MEIA) с диапазоном калибровки 100-2000 пг/мл. Процедуры разведения образцов были валидизированы до 4-кратного разведения. Уровни ММК в сыворотке определяли с помощью валидизированного способа ЖХ/МС/МС с диапазоном калибровки 5-200 нг/мл. Уровни ГЦ в плазме определяли с помощью валидизированного способа иммуноферментного анализа с поляризацией флуоресценции (FIPA) с диапазоном калибровки 2,5-50 мкмоль/л; а уровни голотранскобаламина (активный В₁₂) в плазме определяли с помощью валидизированного способа MEIA с диапазоном калибровки 8-128 пмоль/л. Процедуры разведения образцов были валидизированы до 32-кратного разведения.

Оценка безопасности

[10] Оценка безопасности включала мониторинг побочных явлений (ПЯ), показатели общего анализа крови, биохимического анализа крови и анализа мочи, данные о применении сопутствующих лекарств, основные показатели жизнедеятельности, ЭКГ и результаты медицинского осмотра.

[11] ЭКГ в 12 отведениях в состоянии покоя проводили на этапе скрининга, а также во время визита в связи с завершением исследования до выхода пациента из исследования. Записываемые параметры ЭКГ включали ЧСС (уд./мин), интервал PR (мс), длительность QRS (мс), интервал QT (мс), интервал QTc (мс, коррекция по Базетту). Медицинский осмотр проводили на этапе скрининга, а также во время визита в связи с завершением исследования до выхода пациента из исследования.

Оценка эффективности

[12] Основной переменной эффективности были уровни кобаламина в сыворотке в день 61. Первичную конечную точку эффективности сравнивали с соотношением испытуемых в каждой группе лечения, у которых нормализовались уровни кобаламина (≥350 пг/мл) в день 61. Вторичные переменные эффективности были определены как уровни кобаламина в сыворотке в день 91, уровни ММК в сыворотке в день 61 и день 91, а также уровни общего ГЦ в плазме в день 61 и день 91.

[13] Вторичные конечные точки эффективности: сравнение соотношения испытуемых в каждой группе лечения, у которых нормализовались уровни кобаламина ≥350 пг/мл) в день 91; сравнение среднего процентного изменения сывороточного кобаламина у испытуемых относительно исходного уровня в каждой группе лечения в день 61 и день 91; сравнение среднего процентного изменения уровней ММК в сыворотке у испытуемых в каждой группе лечения в день 61 и день 91 относительно исходного уровня; сравнение среднего времени до нормализации сывороточного кобаламина (≥350 пг/мл) у испытуемых в каждой группе лечения в день 61 и день 91. Поисковые переменные и конечные точки эффективности: уровни голотранскобаламина в плазме в день 61 и день 91, измеряемые путем сравнения соотношения испытуемых в каждой группе лечения, у которых уровни голотранскобаламина в плазме нормализовались (≥40 пмоль/л) в день 61 и день 91; взаимосвязь между уровнями кобаламина и голотранскобаламина в день 61 и день 91.

Статистический анализ

[14] Программирование и статистические анализы проводили с использованием SAS (версия 9.1, SAS Institute, г. Кери, штат Северная Каролина, США).

[15] Для анализа использовали три популяции. Популяция в соответствии с назначенным лечением (ITT) включала всех рандомизированных испытуемых в исследование независимо от того, получили ли они исследуемый препарат. При проведении анализа в популяции ITT учитывали рандомизацию пациентов по группам лечения. Популяция, данные которой соответствовали протоколу, включала всех рандомизированных испытуемых, которые получили по меньшей мере 90% назначенного им лечения в рамках исследования, в отношении которых не было отсутствующих данных об уровне сывороточного кобаламина на момент оценки исходного состояния и в день 61, а также которые соответствовали всем критериям включения и не соответствовали ни одному критерию исключения из исследования. Основные виды анализа проводили в отношении популяции ITT.

[16] Популяция для оценки безопасности включала всех рандомизированных испытуемых, которые по меньшей мере один раз получили исследуемый препарат и которые прошли по меньшей мере одно последующее обследование безопасности. Испытуемых включали в эту группу в соответствии с полученным фактическим лечением. Все анализы на предмет безопасности проводили в отношении популяции для оценки безопасности.

[17] В ходе анализа первичной конечной точки эффективности сравнивали соотношение испытуемых в каждой группе лечения, у которых на момент проведения визита в день 61 нормализовались уровни кобаламина (т.е. кобаламин ≥350 пг/мл). Определили количество и соотношение испытуемых, у которых нормализовался указанный показатель. 90% доверительный интервал разницы соотношений (таблетка - в/м введение витамина В₁₂) рассчитали и представили с использованием точных процедур. Вывод о не меньшей эффективности был сделан в том случае, когда нижняя граница двустороннего 90% точного доверительного интервала для разницы двух соотношений (таблетка - в/м введение витамина В₁₂) превышает -0,15.

[18] При проведении анализа всех вторичных конечных точек использовали только имеющиеся данные (т.е. отсутствующие данные после введения первой дозы исследуемого препарата условно не начисляли). Для всех тестов вторичных гипотез р-значение <0,05 указывало на статистически значимый результат. Корректировку на множественность не проводили. Для испытуемых с отсутствием исходных данных последний показатель на момент скрининга использовали в качестве исходного уровня для расчета изменения относительно исходного уровня и процентного изменения по сравнению с исходным уровнем.

[19] Изменение относительно исходного уровня (CFB) определяют как (Х-В). Процентное изменение относительно исходного уровня (PCFB) определяют как PCFB=100(X-B)/B, где В - исходный уровень (до введения дозы исследуемого препарата в день 1), а X - показатель в день 61 или день 91 в зависимости от ситуации.

[20] Соотношение испытуемых, у которых нормализовались уровни кобаламина (т.е. кобаламин ≥350 пг/мл) в день 91, должны были анализировать с использованием той же самой методики, которая описана выше в отношении первичного анализа (т.е. в день 61). PCFB уровней кобаламина в дни 61 и 91 анализировали способом ANCOVA, где группа лечения и исходный уровень кобаламина учтены как фиксированные эффекты. В отношении каждого результата и каждого момента времени тестировали среднюю разницу между группами. PCFB уровней ММК и ГЦ в дни 61 и 91 анализировали способом ANCOVA, где группа лечения и исходный уровень ММК или ГЦ учтены как фиксированные эффекты. В отношении каждого результата и каждого момента времени тестировали среднюю разницу между группами.

[21] Время до первой нормализации кобаламина (≥350 пг/мл) после дня 1 до дня 61 и после дня 1 до дня 91 анализировали с помощью логарифмического рангового критерия. Были рассчитаны кривые Каплана-Мейера, соотношение рисков и его 95% доверительный интервал. Первый день исследования определен как нулевой момент.

[22] Соотношение испытуемых, у которых нормализовались уровни голотранскобаламина (≥40 пмоль/л) в день 61 и день 91, анализировали с использованием способологии, описанной выше в отношении первичного анализа. Изучали взаимосвязь между уровнями кобаламина и голотранскобаламина в день 61 и день 91, а также PCFB в день 61 и день 91. Анализ взаимосвязи представлен графически.

Результаты

Демографические данные и исходное состояние пациентов

[23] В целом 50 здоровых испытуемых [11 (22,0%) мужчин, 39 (78,0%) женщин] были рандомизированы для получения исследуемого препарата. Средний (SD) возраст составил 53,2 (15,33) года; 40 испытуемых (80,0%) относились к европеоидной расе, а 10 (20,0%) - к негроидной расе. Средние (SD) уровни кобаламина в сыворотке на момент скрининга были аналогичными среди испытуемых, рандомизированных для перорального получения витамина В₁₂ [285,5 (54,27) пг/мл] по сравнению с испытуемыми, рандомизированными для получения в/м инъекций витамина В₁₂ [262,0 (54,61) пг/мл].

Эффективность

[24] Соотношение испытуемых в каждой группе лечения, у которых нормализовались уровни кобаламина (≥350 пг/мл) в день 61 (первичная конечная точка эффективности) и в день 91 (вторичная конечная точка эффективности), представлены в Таблице 6 (популяция ITT). Результаты были сопоставимы для обеих популяций.

[01] Нормализация уровней сывороточного кобаламина (т.е. уровни кобаламина ≥350 пг/мл) была достигнута в день 15 у всех испытуемых в каждой группе лечения.

[02] Не установлено статистического различия между группами лечения в отношении среднего процентного изменения уровней сывороточного кобаламина относительно исходного уровня (PCFB) в день 61 (р=0,1326) и день 91 (р=0,4273). В день 61 среднее (SD) процентное изменение уровней кобаламина составило 452,5 (353,19) и 714,6 (732,11) у испытуемых в группах лечения с пероральным и в/м введением витамина В₁₂ соответственно. В день 91 среднее (SD) процентное изменение уровней кобаламина составило 526,9 (350,62) и 608,9 (446,68) у испытуемых в группах лечения с пероральным и в/м введением витамина В₁₂ соответственно. Результаты были идентичны для популяции ITT и популяции, данные которой соответствуют протоколу. Фигура 1 демонстрирует среднее PCFB уровней кобаламина в определенный день исследования в популяции ITT. Как видно из Фигуры 1, группа перорального введения витамина В₁₂ неожиданно продемонстрировала нормализованные уровни сывороточного кобаламина в первый момент времени (день 15). Нормализованные средние уровни витамина В₁₂ в сыворотке сохранялись у этих испытуемых на протяжении всего исследования до дня 91 включительно.

[03] Испытуемые в группе лечения с пероральным введением витамина В₁₂ неожиданно продемонстрировали нормализованные уровни активной формы витамина В₁₂ в первый момент времени (день 15). Нормализованные средние уровни активной формы витамина В₁₂ сохранялись у этих испытуемых на протяжении всего исследования до дня 91 включительно.

[04] Не установлено статистического различия между группами лечения в отношении среднего PCFB уровней ММК в сыворотке в день 61 (р=0,6179). В день 61 среднее (SD) процентное изменение уровней ММК составило -30,55 (26,655) и -28,17 (24,754) у испытуемых в группах лечения с пероральным введением витамина В₁₂ и в/м введением витамина В₁₂ соответственно.

[05] В день 91 средний PCFB сывороточного ММК был выше в группе лечения с пероральным введением по сравнению с этим показателем в группе с в/м введением витамина В₁₂ (р=0,0334). В день 91 среднее (SD) процентное изменение уровней ММК составило -39,29 (24,939) и -26,58 (25,643) у испытуемых в группах лечения с пероральным введением витамина В₁₂ и в/м введением витамина В₁₂, соответственно. Фигура 2 демонстрирует среднее PCFB уровней ММК в определенный день исследования в популяции ITT. Испытуемые в группе лечения с пероральным введением витамина В₁₂ неожиданно продемонстрировали нормализованные уровни метилмалоновой кислоты в первый момент времени (день 15). Нормализованные средние уровни ММК сохранялись у этих испытуемых на протяжении всего исследования до дня 91 включительно.

[06] Не установлено статистического различия между группами лечения в отношении среднего PCFB уровней ГЦ в алазе в день 61 (р=0,6368) и день 91 (р=0,5140). В день 61 среднее (SD) процентное изменение уровней ГЦ составило -21,94 (19,034) и -17,49 (24,099) у испытуемых в группах лечения с пероральным введением витамина В₁₂ и в/м введением витамина В₁₂ соответственно. В день 91 среднее (SD) процентное изменение уровней ГЦ составило -14,36 (28,375) и -8,805 (28,5406) у испытуемых в группах лечения с пероральным введением витамина В₁₂ и в/м введением витамина В₁₂ соответственно. Фигура 3 демонстрирует среднее PCFB уровней ГЦ в определенный день исследования в популяции ITT. Испытуемые в группе лечения с пероральным введением витамина В₁₂ неожиданно продемонстрировали нормализованные уровни гомоцистеиновой кислоты в первый момент времени (день 15). Нормализованные средние уровни гомоцистеиновой кислоты сохранялись у этих испытуемых на протяжении всего исследования до дня 91 включительно.

[07] Соотношение испытуемых в каждой группе лечения, у которых нормализовались уровни голотранскобаламина в плазме (≥40 пмоль/л) в день 61 и день 91 (поисковая конечная точка), представлено в Таблице 7 (популяция ITT).

[08] У всех (100%) испытуемых в обеих группах лечения и обеих популяциях уровни голотранскобаламина в плазме составили ≥40 пмоль/л в день 61 и день 91.

[09] Диаграммы рассеяния данных об уровнях голотранскобаламина относительно уровней кобаламина в дни 61 и 91 у испытуемых в каждой группе лечения в популяции ITT представлены на Фигурах 4 и 5. В целом, у испытуемых в каждой группе лечения по мере увеличения уровней кобаламина наблюдается повышение уровней голотранскобаламина в день 61 и день 91.

[10] В Таблицах 5 и 6 представлены отдельные данные об уровнях кобаламина, голотранскобаламина, ММК и ГЦ после в/м и перорального лечения соответственно. Фигура 6 представляет гистограмму средней (SD) концентрации кобаламина в сыворотке в момент оценки исходного состояния (день 1) и в дни 15, 31, 61, и 91 после лечения. У всех включенных в исследование пациентов по результатам скринингового теста, проведенного клинической лабораторией, показатели кобаламина составили <350 пг/мл.

При использовании валидизированного способа определения уровня кобаламина у 13 пациентов в группе применения препарата Элиджен® В12 и у 14 пациентов из группы с в/м введением этот показатель составил > или=350 пг/мл. Большинство этих пациентов были в пределах 10% от 350 пг/мл. У всех этих пациентов в день 61 наблюдали нормализацию уровней кобаламина и голотранскобаламина, которая сохранялась в день 91. Биомаркеры, ММК и ГЦ были снижены у пациентов с повышенными показателями на момент скрининга (испытуемые 102, 103, 202, 203 и 239 в группе в/м лечения и 101, 228, 232 и 233 в группе перорального лечения). Снижение наблюдали у большинства пациентов, у которых концентрация биомаркеров находилась в пределах нормы.

Профиль безопасности

[11] В ходе этого исследования в целом 50 взрослых здоровых мужчин и женщин получили исследуемый препарат по меньшей мере однократно. В целом, в ходе исследования 28 (56,0%) испытуемых сообщили по меньшей мере об одном ПЯ. Все ПЯ классифицировали как ПЯ, возникшие на фоне лечения. Тринадцать (54,2%) и 15 (57,7%) испытуемых сообщили по меньшей мере об одном ПЯ после перорального введения витамина В₁₂ и в/м введения витамина В₁₂ соответственно. Три (11,5%) пациента, каждый из которых получал витамин В₁₂ в/м, сообщали о серьезных побочных явлениях (СПЯ). Ни один из испытуемых не прекратил лечение в рамках исследования по причине ПЯ.

[12] Обзор побочных явлений, сообщенных в ходе этого исследования, представлен в Таблице 10.

[13] Ни один испытуемый не прекратил лечение по причине ПЯ. Три испытуемых (все были рандомизированы для в/м введения витамина В₁₂) испытали серьезные побочные явления во время исследования.

Заключение

[14] Исследование показало, что и пероральное, и в/м лечение витамином В₁₂ обеспечило нормализацию кобаламина (>350 пг/мл) у всех представителей данной популяции пациентов с незначительным дефицитом витамина В₁₂ в течение 15 дней или в течение меньшего периода. Кроме того, этот эффект сохранялся в течение 3-месячного периода исследования. Популяция исследования включала пациентов, у которых можно было бы ожидать возрастной дефицит витамина В₁₂, а также пациентов с основным заболеванием желудочно-кишечного тракта, которое влияет на поглощение витамина В₁₂. Несмотря на нормализацию кобаламина у всех испытуемых, между двумя режимами лечения существуют очевидные различия. Стандартный в/м режим, используемый в этом исследовании, предусматривал многочисленные инъекции в течение первого месяца и обеспечил более высокие показатели кобаламина по сравнению с пероральным введением витамина В₁₂. При смене частоты в/м инъекций и переходе на ежемесячный режим введения препарата средние показатели кобаламина демонстрировали тенденцию к снижению в период между месяцами 2 и 3. При этом ежедневное пероральное введение витамина В₁₂ обеспечило улучшение показателей кобаламина на протяжении всего исследования, и в день 91 средние значения в двух группах лечения были аналогичными (2057±935 пг/мл и 1914±946 пг/мл на фоне в/м и перорального введения витамина В₁₂ соответственно). Все пациенты, прошедшие на сегодняшний день анализы в рамках данного исследования, демонстрировали позитивный ответ на лечение SNAC/витамином В₁₂.

[15] Принципы, предпочтительные варианты воплощения настоящего изобретения и режимы использования настоящего изобретения были описаны в вышеприведенной спецификации. Однако изобретение, которое планируется защитить настоящим документом, нельзя толковать как изобретение, ограниченное конкретными вышеуказанными формами, поскольку их следует рассматривать как иллюстративные, а не ограничительные. Вариации и изменения могут применяться специалистами в данной области техники не отходя от сущности изобретения.

[16] Содержание всех упомянутых здесь патентов, патентных заявок и публикаций включено в настоящее описание путем ссылки во всей своей полноте в допустимых пределах.

1. Способ нормализации уровня витамина В₁₂ у пациента с дефицитом витамина В₁₂ и средним уровнем витамина В₁₂ ниже 350 пг/мл, включающий введение один раз в день в течение по меньшей мере 15 дней одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, причем ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ составляет от 0,5 до 2 мг, при этом уровень витамина В₁₂ у пациента нормализуется в течение 15 дней.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что средний уровень витамина В₁₂ у пациента ниже 200 пг/мл.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что ежедневно вводят одну лекарственную форму, содержащую 100 мг натрия N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприлата и 1 мг цианокобаламина.

4. Способ нормализации содержания активной формы витамина В₁₂ у пациента, нуждающегося в этом, причем у указанного пациента уровень активной формы витамина В₁₂ ниже 100 пмоль/л, где указанный способ включает введение один раз в день в течение по меньшей мере 15 дней одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, причем ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ составляет от 0,5 до 2 мг, при этом уровень активной формы витамина В₁₂ у пациента нормализуется в течение 15 дней.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что уровень активной формы витамина В₁₂ у пациента ниже 50 пмоль/л.

6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что ежедневно вводят одну лекарственную форму, содержащую 100 мг натрия N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприлата и 1 мг цианокобаламина.

7. Способ снижения уровней метилмалоновой кислоты (ММК) у пациента с повышенными уровнями ММК, причем у указанного пациента уровень ММК составляет по меньшей мере 150 нмоль/л, где указанный способ включает введение один раз в день в течение по меньшей мере 90 дней одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, причем ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ составляет от 0,5 до 2 мг, при этом уровни ММК у пациента нормализуются в течение 15 дней.

8. Способ по п. 7, отличающийся тем, что уровень ММК у пациента составляет по меньшей мере 175 нмоль/л.

9. Способ по п. 7, отличающийся тем, что уровень содержания витамина В₁₂ у пациента ниже 350 пг/мл.

10. Способ по п. 7, отличающийся тем, что ежедневно вводят одну лекарственную форму, содержащую 100 мг натрия N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприлата и 1 мг цианокобаламина.

11. Способ снижения уровней гомоцистеина у пациента с повышенными уровнями гомоцистеина, причем у указанного пациента уровень гомоцистеина составляет по меньшей мере 13 нмоль/л, где указанный способ включает введение один раз в день в течение по меньшей мере 15 дней одной или более пероральных лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, причем ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В₁₂ составляет от 0,5 до 2 мг, при этом уровень гомоцистеина у пациента нормализуется в течение 15 дней.

12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что уровень гомоцистеина у пациента составляет по меньшей мере 14 нмоль/л.

13. Способ по п. 11, отличающийся тем, что уровень содержания витамина В₁₂ у пациента ниже 350 пг/мл.

14. Способ по п. 11, отличающийся тем, что ежедневно вводят одну лекарственную форму, содержащую 100 мг натрия N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприлата и 1 мг цианокобаламина.

15. Способ снижения межличностной изменчивости при пероральном лечении пациентов с дефицитом витамина В₁₂, включающий для каждого пациента введение один раз в день в течение по меньшей мере 15 дней одной или более лекарственных форм, содержащих (i) N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль и (ii) витамин В₁₂, при этом ежедневное общее количество N-[8-(2-гидроксибензоил)амино]каприловой кислоты или ее фармацевтически приемлемой соли составляет от 50 до 250 мг, а ежедневное общее количество витамина В12 составляет от 0,5 до 2 мг.