Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей



Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей
Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей

 


Владельцы патента RU 2577134:

АБЛИНКС НВ (BE)

Изобретение относится к области биохимии, в частности к аминокислотным последовательностям, которые направлены против и/или которые могут специфически связывать белок F hRSV. Заявлены соединения или конструкции, в частности белки и полипептиды, которые включают или, по существу, состоят из одной или трех таких аминокислотных последовательностей. Также изобретение относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим указанные аминокислотные последовательности и полипептиды, к фармацевтическим композициям, способам лечения и профилактики заражения hRSV. Полипептиды и композиции по изобретению проявляют улучшенную стабильность, меньшую иммуногенность и/или улучшенную аффинность и/или авидность в отношении белка F hRSV. 16 н. и 12 з.п. ф-лы, 21 ил., 16 табл., 22 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые направлены на и/или которые могут специфически связывать (как определено в данном описании) белок F hRSV, а также к соединениям иди конструкциям, и в частности, белкам и полипептидам, которые включают или, по существу, состоят из одной или нескольких таких аминокислотных последовательностей (также называемым в данном описании «аминокислотная(ые) последовательностей) по изобретению», «соединение(я) по изобретению», «конструкция(и) по изобретению» и «полипептид(ы) по изобретению», соответственно).

Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам, кодирующим такие аминокислотные последовательности (также называемым в данном описании «нуклеиновая(ые) кислота(ы) по изобретению» или «нуклеотидная(ые) последовательностей) по изобретению»; к способам получения таких аминокислотных последовательностей и полипептидов; к клеткам-хозяевам, экспрессирующим или способным экспрессировать такие аминокислотные последовательности или полипептиды; к композициям, и в частности, фармацевтическим композициям, которые включают такие аминокислотные последовательности, полипептиды, соединения или конструкции, нуклеиновые кислоты и/или клетки-хозяева; и к применениям таких аминокислотных последовательностей, полипептидов, соединений или конструкций, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев и/или композиций, в частности, для профилактических и/или лечебных целей, таких как профилактические и/или лечебные цели, упоминаемые в данном описании.

Другие аспекты, преимущества и применения изобретения станут ясными из дальнейшего описания.

Уровень техники

Респираторно-синцитиальный вирус человека (hRSV) является членом семейства Paramyxoviridae и является оболочечным вирусом с двумя основными гликопротеинами поверхности, которые образуют шипы на вирусной частице. Один из таких гликопротеинов (белок G) является прикрепляющим белком, который опосредует связывание вируса с поверхностью клетки. Другой гликопротеин (белок F или слияния) опосредует слияние вирусной и клеточной мембран, допуская проникновение вирусного нуклеокапсида в цитоплазму клетки. Ингибирование стадий, опосредуемых или G- или F-гликопротеинами, блокирует начальные стадии инфекционного цикла и нейтрализует инфекционность вируса. Поэтому антитела, направленные против или G или F и ингибирующие их соответствующую активность, могут нейтрализовать инфекционность вируса и могут защитить от заражения hRSV. Белок F является высококонсервативным и образует тримерные выступы, которые претерпевают конформационные изменения после активации.

В зимние месяцы hRSV является основной причиной тяжелых инфекций нижних дыхательных путей (бронхиолита и пневмонии) у новорожденных и детей младшего возраста и вызывает ежегодные эпидемии. Вирус также является причиной тяжелых заболеваний среди людей пожилого возраста, и взрослых предрасположенных к сердечно-легочным расстройствам и/или иммуносупрессивным состояниям, которые также находятся в группе риска тяжелого течения заболевания hRSV. Иммунная реакция не предотвращает повторных заражений.

Не существует вакцины, способной предотвратить заражение hRSV. Единственным доступным на рынке лекарственным средством являются гуманизированные моноклональные антитела (Синагис® (Synagis®)), направленные против одного из гликопротеинов вируса (белка F), который используют для профилактики у детей, которые находятся в группе повышенного риска развития тяжелого инфекционного заболевания hRSV. Ограниченное применение Синагиса® имеет место, по меньшей мере, частично, из-за высокой стоимости указанного продукта. Существует отчетливая потребность в улучшенных и/или более дешевых профилактических и/или терапевтических средствах для предупреждения и или лечения заражений hRSV.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям (также называемым «аминокислотная(ые) последовательность(и) по изобретению», полипептидам (также называемым «полипептид(ы) по изобретению») и терапевтическим соединениям и композициям, которые направлены против белка F hRSV и имеют улучшенные профилактические, терапевтические и/или фармакологические свойства в дополнение к другим выгодным свойствам (таким как, например, более легкое получение и/или уменьшенная стоимость товара) по сравнению с аминокислотными последовательностями и антителами предшествующего уровня техники. Такие улучшенные и выгодные свойства станут более ясными из дальнейшего описания. Без ограничений, аминокислотные последовательности, полипептиды и терапевтические соединения и композиции по изобретению могут показывать улучшенную стабильность, меньшую иммуногенность, улучшенное связывание с белком F hRSV, улучшенную аффинность и/или авидность в отношении белка F hRSV, улучшенную эффективность и/или активность нейтрализации hRSV (как определено в данном описании), улучшенную селективность в отношении белка F hRSV, и/или они могут быть способны частично или, предпочтительно, полностью блокировать взаимодействие белка F hRSV с хозяйской клеткой-мишенью или ее мембраной. Они могут быть способны к нейтрализации hRSV путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения инфективности hRSV, путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения слияния hRSV с (клеточной мембраной) хозяйской клетки-мишени и/или путем модуляции, ингибирования и/или предотвращения проникновения hRSV в хозяйскую клетку-мишень (как определено в данном описании). Они могут быть перекрестно реагирующими с и/или способными к нейтрализации различных вирусных штаммов hRSV и/или различных «ускользнувших» мутантов hRSV.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к ряду тяжей из аминокислотных остатков (как определено в данном описании), которые особенно подходят для связывания со специфическим эпитопом белка F hRSV. Такие тяжи аминокислотных остатков могут присутствовать в и/или могут быть введены в аминокислотные последовательности по изобретению, в частности, таким образом, что они образуют антигенсвязывающий сайт (или его часть) аминокислотной последовательности по изобретению. Полученные аминокислотные последовательности будут способны связывать специфический эпитоп на белке F hRSV, который находится, образует часть или перекрывает (т.е. в первичной или третичной структуре) или находится в непосредственной близости к (т.е. в первичной или третичной структуре) антигенному сайту II на белке F hRSV (т.е. аминокислотным остаткам 250-275 белка F hRSV).

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают, по меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, один тяж из которых выбран из следующего:

a) SEQ ID NO:102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, которая включает указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121; и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности по изобретению, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), e) и f).

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, первый тяж из которых выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c)SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Аминокислотные последовательности, включающие один или несколько таких специфических тяжей из аминокислотных остатков, проявляют улучшенные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанные далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV.

Аминокислотная последовательность по изобретению может, в частности, представлять собой доменное антитело (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве доменного антитела), однодоменное антитело (или аминокислотная последовательность которая подходит для использования в качестве однодоменного антитела) «dAb» (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве dAb) или нанотело® (определенное в данном описании и включающее, но не ограниченное указанным, VHH-последовательность); другие отдельные вариабельные домены или любой подходящий фрагмент любого из них.

В этом отношении аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Такие предпочтительные гипервариабельные участки (последовательности CDR2) также называются «CDR2 по изобретению».

Предпочтительно, аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102 или

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

и/или

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121 или

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102 или

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включает, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102. Предпочтительно, аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включает SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

Настоящее изобретение также относится к ряду гуманизированных аминокислотных последовательностей, которые, в частности, подходят для связывания белка F hRSV. Аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют уменьшенную иммуногенность при введении человеку. Кроме того, аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют другие улучшенные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), в отношении белка F hRSV, улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV, по сравнению с соответствующими им аминокислотными последовательностями дикого типа (описанными в заявке РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочки вируса и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», поданной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

Соответственно, в другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 60-76.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 146-153.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

Настоящее изобретение относится к ряду аминокислотных последовательностей и/или нанотел®, оптимизированных по последовательности, которые проявляют повышенную стабильность при хранении во время исследований стабильности, и которые особенно подходят для связывания белка F hRSV. Аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют уменьшенную пироглутаматную посттрансляционную модификацию N-конца и, следовательно, имеют повышенную стабильность продукта. Кроме того, аминокислотные последовательности по настоящему изобретению проявляют другие улучшенные свойства, такие как меньшая иммуногенность, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, в виде величины IC50, описанных далее в данном описании) в отношении белка F hRSV, улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV, по сравнению с их соответствующими исходными аминокислотными последовательностями (описанными в заявке РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочки вируса и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», зарегистрированной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

Аминокислотные последовательности и нанотела® по изобретению предпочтительно находятся в, по существу, изолированной форме (как определено в данном описании) или образуют часть белка или полипептида по изобретению (также называемых в данном описании «полипетид по изобретению» или «белок по изобретению»), которые могут включать или, по существу, состоять из одной или нескольких аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению, и которые могут, необязательно, также содержать одну или несколько других аминокислотных последовательностей или нанотел® (все необязательно соединенные через один или несколько подходящих линкеров).

Соответственно, в другом аспекте изобретение также относится к белку или полипептиду (также называемых в данном описании «белок по изобретению» или «полипетид по изобретению», соответственно), который включает или, по существу, состоит из одной или нескольких аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (или их подходящих фрагментов).

Например, и без ограничения, одну или несколько аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению можно использовать в качестве связывающей единицы в таком белке или полипептиде, так что получается моновалентный, поливалентный или полипаратопный полипептид по изобретению, соответственно, все описанные в данном описании. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который представляет собой моновалентную конструкцию, включающую или, по существу, состоящую из аминокислотной последовательности и/или нанотела® по изобретению. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который является поливалентным полипептидом, таким как, например, двухвалентный или трехвалентный полипептид. Настоящее изобретение также относится к полипептиду, который является полипаратопным полипептидом, таким как, например, бипаратопный или трипаратопный полипептид.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (описанных выше).

В одном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают, по меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

1) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых один тяж выбран из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121; и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности, которая образует часть поливалентного полипептида, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), е) и f).

Предпочтительные поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых первый тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 102 или

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

и/или

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121 или

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительно, поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102 или

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102, предпочтительно, которые включают SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60-76.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 62, 65,67,68,75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65 и 76.

Предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 62. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 65. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 76.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 146-153.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85;

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный полипептид, который включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 77-79 и 158;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 77-79 и 158, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и/или глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 77-79 и 158.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 78 и 79;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 78 и 79, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и/или глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 78 или 79.

В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 77. В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78. В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:

79. В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 158.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 159-161;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 159-161, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 159-161.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 159-161;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 159-161, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда полипептид имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 159, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 160, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 161, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 159-161.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 142-145 и 162-165;

b) полипептиды, которые имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 142-145 и 162-165, при условии, что

i) первые аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 142-145 и 162-165.

Полипептиды с указанными последовательностями проявляют выгодные свойства для применения в качестве профилактических, терапевтических и/или фармакологически активных средств, такие как улучшенная стабильность, меньшая иммуногенность, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, в виде величины IC50, описанных далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV.

Изобретение также относится к соединениям или конструкциям, и в частности, белкам или полипептидам (также называемым в данном описании «соединение(я) по изобретению»), которые включают или, по существу, состоят из одной или нескольких аминокислотных последовательностей, нанотел® и/или полипептидов по изобретению (или их подходящих фрагментов), и, необязательно, также включают одну или несколько других групп, остатков, частиц или связывающих единиц. Как станет яснее для специалиста из дальнейшего раскрытия, такие дополнительные группы, остатки, частицы, связывающие единицы или аминокислотные последовательности могут, или не могут, придавать дополнительную функциональность аминокислотной последовательности, нанотелу® или полипептиду по изобретению (и/или соединению или конструкции, в которых они присутствуют), и могут, или не могут, модифицировать свойства аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению.

Также в объем изобретения входит применение частей, фрагментов, аналогов, мутантов, вариантов, аллелей и/или производных аминокислотных последовательностей и/или полипептидов по изобретению, и/или применение белков или полипептидов, включающих или, по существу, состоящих из одной или нескольких таких частей, фрагментов, аналогов, мутантов, вариантов, аллелей и/или производных, до тех пор, пока они подходят для применений, предусмотренных в данном описании. Такие части, фрагменты, аналоги, мутанты, варианты, аллели и/или производные, как правило, будут содержать (по меньшей мере, частично) функциональный антигенсвязывающий сайт для связывания против антигенного сайта II на белке F hRSV; и предпочтительнее, будут способны к специфическому связыванию с антигенным сайтом II на белке F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, в виде величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании. Такие части, фрагменты, аналоги, мутанты, варианты, аллели и/или производные, как правило, также будут обладать эффективностью нейтрализации hRSV и/или активностью, как определено в данном описании. Некоторые неограничительные примеры таких частей, фрагментов, аналогов, мутантов, вариантов, аллелей, производных, белков и/или полипептидов станут яснее из дальнейшего описания. Также можно получить другие фрагменты или полипептиды по изобретению путем соответствующего комбинирования (т.е. путем соединения или генетического слияния) одной или нескольких (более мелких) частей или фрагментов, описанных в данном описании.

Изобретение также относится к нуклеиновым кислотам или нуклеотидным последовательностям, кодирующим аминокислотную последовательность по изобретению, нанотело® по изобретению и/или полипептид по изобретению (или их подходящие фрагменты). Такая нуклеиновая кислота также будет называться в данном описании «нуклеиновая(ые) кислота(ы) по изобретению» и может находиться, например, в форме генетической конструкции, что также описано в данном описании. Соответственно, настоящее изобретение также относится к нуклеиновой кислоте или нуклеотидной последовательности, находящейся в форме генетической конструкции.

Изобретение также относится к хозяину или клетке-хозяину, которая экспрессирует (или которая в подходящих окружающих условиях способна экспрессировать) аминокислотную последовательность по изобретению, нанотело® по изобретению, полипептид по изобретению и/или соединение или конструкцию по изобретению; и/или которая содержит нуклеиновую кислоту по изобретению. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные примеры таких хозяев или клеток-хозяев станут понятными из дальнейшего описания.

Изобретение также относится к продукту или композиции, содержащим или включающим, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность по изобретению (или ее подходящий фрагмент), по меньшей мере, одно нанотело® по изобретению, по меньшей мере, один полипептид по изобретению, по меньшей мере, одно соединение или конструкцию по изобретению, по меньшей мере, одну моновалентную конструкцию по изобретению и/или, по меньшей мере, одну нуклеиновую кислоту по изобретению, и, необязательно, один или несколько других компонентов таких композиций, известных per se, т.е. зависящих от предполагаемого использования композиции. Такие продукт или композиция могут, например, представлять собой фармацевтическую композицию (как описано в данном описании) или ветеринарную композицию. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные примеры таких продуктов или композиций станут понятными из дальнейшего описания.

Изобретение также относится к способам получения аминокислотных последовательностей, нанотел®, полипептидов, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев, продуктов и композиций, описанных в данном описании.

Изобретение также относится к применениям и использованию аминокислотных последовательностей, нанотел®, полипептидов, соединений, нуклеиновых кислот, клеток-хозяев, продуктов и композиций, описанных в данном описании, а также к способам предупреждения и/или лечения инфекции дыхательных путей, вызванной hRSV. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные применения и использование станут понятными из дальнейшего описания.

Аминокислотные последовательности, нанотела®, полипептиды, соединения и композиции по настоящему изобретению вообще можно использовать для блокирования взаимодействия белка F hRSV с хозяйской клеткой-мишенью и/или ее мембраной для нейтрализации hRSV (различных штаммов и/или «ускользнувших» мутантов hRSV) для модуляции, ингибирования и/или предотвращения заражения hRSV (различными штаммами и/или «ускользающими» мутантами hRSV), для модуляции, ингибирования и/или предотвращения слияния (различных штаммов и/или «ускользнувших» мутантов hRSV) с хозяйской клеткой-мишенью (ее клеточной мембраной) и/или для модуляции, ингибирования и/или предотвращения проникновения hRSV (различных штаммов и/или «ускользнувших» мутантов hRSV) в хозяйскую клетку-мишень.

Как таковые, аминокислотные последовательности, нанотела®, полипептиды, соединения и композиции по настоящему изобретению можно использовать для предупреждения и/или лечения заболеваний и расстройств, связанных с заражением hRSV. Примеры таких заболеваний и расстройств, связанных с заражением hRSV, для специалиста станут понятными из данного раскрытия и включают, например, следующие заболевания и расстройства: респираторное заболевание, инфекция верхних дыхательных путей, инфекция нижних дыхательных путей, бронхиолит (воспаление мелких дыхательных путей в легких), пневмония, одышка, кашель, (рецидивирующий) стридор и астма.

Соответственно, настоящее изобретение относится к способу предупреждения и/или лечения респираторного заболевания, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, бронхиолита (воспаления мелких дыхательных путей в легких), пневмонии, одышки, кашля, (рецидивирующего) стридора и астмы, вызванных hRSV, причем указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в этом, фармацевтически активного количества, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности по изобретению, нанотела® по изобретению, полипептида по изобретению, соединения или конструкции по изобретению или моновалентной конструкции по изобретению или композиции по изобретению.

Изобретение также относится к применению аминокислотной последовательности по изобретению, нанотела® по изобретению, полипептида по изобретению, соединения или конструкции по изобретению или моновалентной конструкции по изобретению при получении фармацевтической композиции для предупреждения и/или лечения респираторного заболевания, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, бронхиолита (воспаления мелких дыхательных путей в легких), пневмонии, одышки, кашля, (рецидивирующего) стридора и/или астмы и/или для применения в одном или нескольких способах, описанных в данном описании.

Изобретение также относится к аминокислотной последовательности по изобретению, нанотелу® по изобретению, полипептиду по изобретению, соединению или конструкции по изобретению или моновалентной конструкции по изобретению для предупреждения и/или лечения респираторного заболевания, инфекции верхних дыхательных путей, инфекции нижних дыхательных путей, бронхиолита (воспаления мелких дыхательных путей в легких), пневмонии, одышки, кашля, (рецидивирующего) стридора и/или астмы.

Другие применения и использование аминокислотных последовательностей, нанотел®, полипептидов и соединений и композиций по изобретению станут понятными из дальнейшего описания.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Конкурентный ELISA: Fab Синагиса® конкурируют с очищенными связывающими RSV нанотелами® и Fab Numax за связывание с белком FTM-, как описано в примере 8. Нанотело® 202А5 представляет собой иррелевантное нанотело®, связывающее НА гриппа.

Фиг.2. Связывание моновалентных, двухвалентных и трехвалентных нанотел® с белком FTM-, как описано в примере 10.

Фиг.3А и В. Активность (нейтрализация RSV) моновалентных, двухвалентных и трехвалентных конструкций для нейтрализации штаммов RSV Long и В-1, как описано в примере 11.

Фиг.4. Анализ нейтрализации Long RSV и «ускользнувших» мутантов R7C2/1; R7C2/11 и R7.936/4 моновалентными нанотелами® 782 (А), 15Н8 (В), NC41 (С) в интервале концентраций от примерно 2 мкМ до 6 нМ и трехвалентными нанотелами® RSV400 (D), RSV404 (Е), RSV407 (F) и RSV403 (G) в интервале концентраций от примерно 20 нМ до 100 пМ. Аппроксимирующая кривая построена только для результатов по моновалентным нанотелам®.

Фиг.5. Нейтрализация штаммов RSV Long и RSV B-1 трехвалентными нанотелами® NC41 с линкерами различной длины, как описано в примере 15.

Фиг.6. Общее схематическое представление гуманизированных остатков, введенных в выбранные варианты NC41. Точки показывают присутствие остатка дикого типа; буквы соответствуют гуманизированному остатку. Нумерация соответствует нумерации по Кабату.

Фиг.7. Выравнивание последовательностей предпочтительных гуманизированных нанотел® по изобретению.

Фиг.8. Нейтрализация штамма RSV Long и штамма RSV В-1 моновалентными и трехвалентными гуманизированными вариантами NC41. На фигуре 8А нейтрализация двумя трехвалентными гуманизированными вариантами NC41 (RSV414 и RSV426) сравнивается с нейтрализацией соответствующими моновалентными нанотелами®. Фигура 8В показывает нейтрализацию вариантами трехвалентных NC41 (RSV414. RSV426 и RSV427).

Фиг.9. Нейтрализация штаммов RSV Long и RSV B-1 RSV407 и RSV434.

Фиг.10. Испытание на эффективность (профилактическую) RSV407 на модели хлопкового хомяка, описанное в примере 21. Хомякам вводят интраназально различные концентрации RSV407 (день -1) за 24 часа до заражения RSV (день 0). Титр вируса (слева, среднее±ср.-кв.ош., n=6) и уровень вирусной РНК (справа) определяют в жидкости от промывки легких на пиковом уровне виремии, имеющем место в день 4 после заражения (*=Р<0,05 по двухстороннему критерию Стьюдента против необработанных).

Фиг.11. Испытание на эффективность (терапевтическую) RSV434 на модели хлопкового хомяка, описанное в примере 21. Хомяков инфицируют RSV (день 0) и обрабатывают 0, 1, 2, 4 и 20 мг/кг RSV434 в день 2 и 3 интраназально инстилляцией (n=6). Титр вируса в жидкости от промывки носа (А) и промывки легких (В) определяют на пиковом уровне виремии (день 4 после заражения). Горизонтальные линии показывают пределы обнаружения.

Подробное описание изобретения

В настоящем описании, примерах и формуле изобретения используются перечисленные далее термины и определения.

a) Если не указано или не определено иное, все используемые термины имеют свои обычные в технике значения, которые будут понятны специалисту. Ссылка дается, например, на стандартные руководства, упомянутые в разделе a) на странице 46 WO 08/020079.

b) Если не указано иное, термины «иммуноглобулиновая последовательность», «последовательность», «нуклеотидная последовательность» и «нуклеиновая кислота» имеют значения, описанные в разделе b) на странице 46 WO 08/020079.

c) Если не указано иное, все способы, стадии, методы и манипуляции, которые конкретно подробно не описаны, могут быть осуществлены и осуществляются так, как известно per se, что будет понятно специалисту. Например, снова можно сослаться на стандартные руководства и указанный в них общий уровень техники и на другие ссылки, цитированные в них; а также, например, на такие обзоры, как Presta, Adv. Drug Deliv. Rev. 2006, 58(5-6):640-56; Levin and Weiss, Mol. Biosyst. 2006, 2(1):49-57; Irving et al., J. Immunol. Methods, 2001, 248(1-2), 31-45; Schmitz et al., Placenta, 2000, 21 Suppl. A, S106-12, Gonzales et al., Tumour Biol., 2005, 26(1), 31-43, в которых описываются методы белковой инженерии, такие как «созревание аффинности», и другие методы улучшения специфичности и других нужных свойств белков, таких как иммуноглобулины.

d) Аминокислотные остатки будут указываться согласно стандартному трехбуквенному или однобуквенному коду аминокислот. Ссылка дается на таблицу А-2 на странице 48 WO 08/020079.

e) Когда говорят, что нуклеотидная последовательность или аминокислотная последовательность «включает» другую нуклеотидную последовательность или аминокислотную последовательность, соответственно, или «по существу, состоит из» другой нуклеотидной последовательности или аминокислотной последовательности, это имеет значение, указанное в разделе i) на страницах 51-52 WO 08/020079.

f) Термин «в по существу изолированной форме» имеет значение, указанное для него в разделе j) на страницах 52 и 53 WO 08/020079.

g) Термины «домен» и «связывающий домен» имеют значения, указанные для них в разделе k) на странице 53 WO 08/020079.

h) Термины «антигенная детерминанта» и «эпитоп», которые в данном описании могут использоваться как взаимозаменяемые, имеют значения, указанные для них в разделе 1) на странице 53 WO 08/020079.

i) Как описано также в разделе т) на странице 53 WO 08/020079, говорят, что аминокислотная последовательность (такая как нанотело®, антитело, полипептид по изобретению или вообще антигенсвязывающий белок или полипептид или их фрагмент), которая может (специфически) связываться с, которая имеет аффинность и/или которая имеет специфичность в отношении специфических антигенной детерминанты, эпитопа, антигена или белка (или в отношении, по меньшей мере, одной его части, фрагмента или эпитопа), обозначается как «направленная на» или «направленная против» указанных детерминанты, эпитопа, антигена или белка.

j) Термин «специфичность» имеет значение, указанное для него в разделе n) на страницах 53-56 WO 08/020079; и как указано там, относится к ряду различных типов антигенов или антигенных детерминант, с которыми могут связываться определенная антигенсвязывающая молекула или антигенсвязывающий белок (такие как нанотело® или полипептид по изобретению). Специфичность антигенсвязывающего белка можно определить на основании аффинности и/или авидности, как описано на страницах 53-56 WO 08/020079 (включенной в данное описание в качестве ссылки), где также описываются некоторые предпочтительные методы измерения связывания между антигенсвязывающей молекулой (такой как нанотело® или полипептид по изобретению) и подходящим антигеном. Типично антигенсвязывающие белки (такие как аминокислотные последовательности, нанотела® и/или полипептиды по изобретению) будут связываться со своим антигеном с константной диссоциации (KD) 10-5-10-12 моль/л или менее, и предпочтительно, 10-7-10-12 моль/л или менее, и предпочтительнее, 10-8-10-12 моль/л (т.е. с константой ассоциации (KA) 105-1012 л/моль или более, и предпочтительно, 107-1012 л/моль или более, и предпочтительнее, 108-1012 л/моль). Любая величина KD, превышающая 10-4 моль/л (или любая величина KA меньше 104 М-1 (л/моль)) рассматривается как указывающая на неспецифическое связывание. Предпочтительно моновалентная иммуноглобулиновая последовательность по изобретению будет связываться с нужным антигеном с аффинностью менее 500 нМ, предпочтительно, менее 200 нМ, предпочтительнее, менее 10 нМ, такой как, например, от 10 до 5 нМ. Специфическое связывание антигенсвязывающего белка с антигеном или антигенной детерминантой можно определить любым подходящим способом, известным per se, включая, например, анализ по Скэтчерду и/или конкурентные-связывающие анализы, такие как радиоиммуноанализы (РИА), иммуноферментные анализы (EIA) и конкурентные сэндвич-анализы, и их различные варианты, per se известные в технике; а также другие методы, указанные в данном описании. Как будет понятно для специалиста и как описано на страницах 53-56 WO 08/020079, константа диссоциации может быть действительной или кажущейся константой диссоциации. Способы определения константы диссоциации будут понятны для специалиста и включают, например, методы, упомянутые на страницах 53-56 WO 08/020079.

k) Время полужизни аминокислотной последовательности, соединения или полипептида по изобретению вообще можно определить так, как описано в разделе о) на странице 57 WO 08/020079, и как указанно там, относится ко времени, необходимому для снижения концентрации аминокислотной последовательности, соединения или полипептида в сыворотке на 50%, in vivo, например, из-за разрушения аминокислотной последовательности, соединения или полипептида и/или клиренса или секвестрации аминокислотной последовательности, соединения или полипептида природными механизмами. Время полужизни in vivo аминокислотной последовательности, соединения или полипептида по изобретению можно определить любым способом, известным per se, таким как с помощью фармакокинетического анализа. Подходящие методы будут понятны для специалиста в данной области техники и могут, например, являться такими, какие описанные в разделе о) на странице 57 WO 08/020079. Как также упомянуто в разделе о) на странице 57 WO 08/020079, время полужизни можно выразить с использованием таких параметров, как t1/2-альфа, t1/2-бета и площадь под кривой (AUC). Ссылка дается, например, на экспериментальную часть, описанную ниже, а также на известные руководства, такие как Kenneth A. et al: Chemical Stability of Pharmaceuticals: A Handbook for Pharmacists, и Peters et al, Pharmacokinetic analysis: A Practical Approach (1996). Также можно сослаться на «Pharmacokinetics», M Gibaldi & D Perron, published by Marcel Dekker, 2nd Rev. edition (1982). Термины «увеличение времени полужизни» или «увеличенное времени полужизни» также определены в разделе о) на странице 57 WO 08/020079 и относятся, в частности, к увеличению t1/2-бета с увеличением или без увеличения t1/2-альфа и/или AUC или обоих параметров.

1) Что касается мишени или антигена, термин «сайт взаимодействия» на мишени или антигене обозначает сайт, эпитоп, антигенную детерминанту, часть, домен или тяж из аминокислотных остатков на мишени или антигене, который представляет собой сайт для связывания с рецептором или другим партнером по связыванию, каталитический сайт, сайт расщепления, сайт для аллостерического взаимодействия, сайт, вовлеченный в полимеризацию (такую как гомомеризация или гетеродимеризация) мишени или антигена; или любой другой сайт, эпитоп, антигенную детерминанту, часть, домен или тяж из аминокислотных остатков на мишени или антигене, который вовлечен в биологическое действие или механизм мишени или антигена. В более общем значении «сайт взаимодействия» может представлять собой любой сайт, эпитоп, антигенную детерминанту, часть, домен или тяж из аминокислотных остатков на мишени или антигене, с которым аминокислотная последовательность или полипептид по изобретению может связываться так, что мишень или антиген (и/или любой путь, взаимодействие, передача сигнала, биологический механизм или биологическое действие, в которые вовлечены мишень или антиген) модулируется (как определено в данном описании).

m) Аминокислотная последовательность или полипептид обозначаются как«специфические для» первой мишени или антигена по сравнению со второй мишенью или антигеном, когда они связываются с первым антигеном с аффинностью (как описано выше и соответственно выражено в виде величины KD, величины KA, константы скорости Koff и/или константы скорости Kon), которая, но меньше мере, в 10 раз, такой как, по меньше мере, в 100 раз, и предпочтительно, по меньше мере, в 1000 раз и до 10000 раз или более лучше чем аффинность, с которой указанные аминокислотная последовательность или полипептид связываются со вторыми мишенью или антигеном. Например, аминокислотная последовательность или полипептид может связываться с первыми мишенью или антигеном с величиной KD, которая, по меньшей мере, в 10 раз меньше, например, по меньшей мере, в 100 раз меньше, и предпочтительно, по меньшей мере, в 1000 раз меньше, например, в 10000 раз или даже более меньше, чем KD, с которой указанные аминокислотная последовательность или полипептид связываются со вторыми мишенью или антигеном. Предпочтительно, когда аминокислотная последовательность или полипептид являются «специфическими для» первой мишени или антигена по сравнению со второй мишенью или антигеном, они направлены против (как определено в данном описании) указанной первой мишени или антигена, но не направлены против указанной второй мишени или антигена.

n) Термины «(перекрестная) блокировка», «(перекрестно) блокированный» и «(перекрестная) блокада» используются в данном описании как взаимозаменяемые для обозначения способности аминокислотной последовательности или другого связывающего агента (такого как полипептид по изобретению) препятствовать связыванию других аминокислотных последовательностей или связывающих агентов по изобретению с заданной мишенью. Предел, до которого аминокислотная последовательность или другие связывающие агенты по изобретению способны препятствовать связыванию других факторов с мишенью, и, следовательно, можно ли говорить о перекрестной блокировке по изобретению, можно определить с использованием анализов конкурентного связывания. В одном особенно подходящем количественном анализе перекрестной блокировки используют аппарат Biacore, который может измерять степень взаимодействия с использованием технологии поверхностного плазменного резонанса. В другом подходящем количественном анализе перекрестной блокады используют основанный на ELISA подход для измерения конкуренции между аминокислотными последовательностями или другими связывающими агентами в плане их связывания с мишенью.

Далее в общих чертах описывается подходящий анализ Biacore для определения того, осуществляет ли аминокислотная последовательность или другой связывающий агент перекрестную блокировку или способен ли он к перекрестной блокаде по изобретению. Следует иметь в виду, что анализ можно использовать с любыми аминокислотными последовательностями или другими связывающими агентами, описанными в данном описании. На аппарате Biacore (например, Biacore 3000) работают в соответствии с рекомендациями изготовителя. Так, в одном анализе на перекрестную блокировку белок-мишень соединяют с чипом CMS Biacore с использованием стандартной реакции сочетан6ия аминов с образованием поверхности, покрытой мишенью. Типично с чипом могут сочетаться 200-800 резонансных единиц мишени (количество, которое дает вполне измеряемые уровни связывания, но которое легко может быть насыщено используемыми концентрациями испытываемого реагента). Две испытываемые аминокислотные последовательности (обозначенные А* и В*), оцениваемые на их способность перекрестно блокировать друг друга, смешивают в молярном отношении сайтов связывания один к одному в подходящем буфере, и получают испытываемую смесь. При расчете концентрации на основе количества сайтов связывания за молекулярную массу аминокислотной последовательности принимается общая молекулярная масса аминокислотной последовательности, деленная на число сайтов связывания мишени на такой аминокислотной последовательности. Концентрация каждой аминокислотной последовательности в испытываемой смеси должна быть достаточно высокой для легкого насыщения сайтов связывания для такой аминокислотной последовательности на молекулах мишени, иммобилизованных на чипе Biacore. Аминокислотные последовательности в смеси находятся в одинаковой молярной концентрации (на основе количества связывания), и такая концентрация типично может составлять от 1,00 до 1,5 мкмоль (на основе количества сайта связывания). Также получают отдельные растворы, содержащие одну А* и одну В*. А* и В* в таких растворах должны находится в одинаковых буферах и в такой же концентрации, как в испытываемой смеси. Испытываемую смесь пропускают над поверхностью чипа Biacore, покрытого мишенью, и регистрируют общее количество связывания. Затем чип обрабатывают таким образом, чтобы удалить связанные аминокислотные последовательности без повреждения связанной с чипом мишени. Обычно это осуществляют обработкой чипа 30 мМ HCl в течение 60 секунд. Затем над поверхностью, покрытой мишенью, пропускают один раствор А*, и регистрируют количество связывания. Чип снова обрабатывают для удаления всех связанных аминокислотных последовательностей без повреждения связанной с чипом мишени. Затем над поверхностью, покрытой мишенью, пропускают один раствор В*, и регистрируют количество связывания. Затем вычисляют максимальное теоретическое связывание смеси А* и В*, и получают сумму связываний с мишенью каждой аминокислотной последовательности, когда она одна проходит над поверхностью. Если фактическое зарегистрированное связывание смесей меньше, чем такой теоретический максимум, тогда две аминокислотные последовательности являются перекрестно блокирующими друг друга. Таким образом, как правило, перекрестно блокирующая аминокислотная последовательность или другой связывающий агент по изобретению представляет собой последовательность или агент, которые будут связываться с мишенью в вышеописанном анализе перекрестного связывания Biacore, так что во время анализа и в присутствии второй аминокислотной последовательности или другого связывающего агента по изобретению зарегистрированное связывание составляет от 80% до 0,1% (например, 80%-4%) от максимального теоретического связывания, специфически, от 75% до 0,1% (например, 75%-4%) от максимального теоретического связывания, и более специфически, от 70% до 0,1% (например, 70%-4%) от максимального теоретического связывания (как только что определено выше) двух аминокислотных последовательностей или связывающих агентов в сочетании. Анализ Biacore, описанный выше, является первичным анализом, используемым для определения того, являются ли аминокислотные последовательности или другие связывающие агенты перекрестие блокирующими друг друга согласно изобретению. В редких случаях отдельные аминокислотные последовательности или другие связывающие агенты могут не связываться с мишенью, присоединенной к чипу CMS Biacore с помощью реакции сочетания аминов (это обычно имеет место, когда соответствующий сайт связывания на мишени маскируется или разрушается при связывании с чипом). В таких случаях перекрестную блокировку можно определить с использованием меченного варианта мишени например, варианта, меченного His по N-концу. В таком определенном формате к чипу Biacore будут присоединять анти-His аминокислотную последовательность, и тогда меченная His мишень может быть пропущена над поверхностью чипа и захвачена анти-His аминокислотной последовательностью. Анализ перекрестной блокировки может быть осуществлен, по существу, так, как описано выше, за исключением того, что после каждого цикла регенерации чипа нужно снова наносить новую меченную His мишень на поверхность, покрытую анти-His аминокислотной последовательностью. Кроме приведенного в качестве примера использования мишени, меченной His по N-концу, можно, с другой стороны, использовать мишень, меченную His по С-концу. Более того, для такого анализа перекрестной блокировки можно использовать различные другие метки и комбинации связывающих метки белков, которые известны в технике (например, метку НА с антителами против НА; метку FLAG с антителами против FLAG; биотиновую метку со стрептавидином).

Далее в общих чертах описывается анализ ELISA для определения того, блокируются ли перекрестно или способны ли к перекрестной блокировке (как определено в данном описании) аминокислотная последовательность или другой связывающий агент, направленные на мишень. Следует иметь в виду, что анализ можно использовать с любыми аминокислотными последовательностями (или другими связывающими агентами, такими как полипептиды по изобретению), описанными в данном описании. Основным принципом анализа является необходимость иметь аминокислотную последовательность или другой связывающий агент, которые направлены на мишень, которая нанесена на лунки планшета для ELISA. В раствор добавляют избыточное количество второй, возможно, перекрестно блокирующей, аминокислотной последовательности против мишени (т.е. не связанной с планшетом для ELISA). Затем в лунки добавляют ограниченное количество мишени. Нанесенная аминокислотная последовательность и аминокислотная последовательность в растворе конкурируют за связывание ограниченного числа молекул мишени. Планшет промывают для удаления избытка мишени, которая не связана нанесенной аминокислотной последовательностью, и также для удаления второй аминокислотной последовательности в находящейся в фазе раствора, а также любых комплексов, образовавшихся между второй аминокислотной последовательностью находящейся в растворе и мишенью. Затем измеряют количество связанной мишени с использованием реагента, который подходит для детекции мишени. Аминокислотная последовательность в растворе, которая способна перекрестно блокировать нанесенную аминокислотную последовательность, будет способна вызывать снижение числа молекул мишени, которые нанесенная аминокислотная последовательность может связывать, относительно числа молекул мишени, которые нанесенная аминокислотная последовательность может связывать в отсутствие второй аминокислотной последовательности в растворе. В случае, когда первая аминокислотная последовательность, например, Ab-Х, выбрана как иммобилизованная аминокислотная последовательность, ее наносят на лунки планшета для ELISA, после чего планшеты блокируют подходящим раствором для блокады для минимизации неспецифического связывания реагентов, которые затем добавляют. Затем в планшет для ELISA добавляют избыточное количество второй аминокислотной последовательности, т.е. Ab-Y, так что количество молей сайта связывания Ab-Y на лунку, по меньшей мере, в 10 раз превышало количество молей сайта связывания Ab-Х на лунку, которые используют при покрытии планшета для ELISA. Затем добавляют мишень так, что количество молей мишени на лунку, было по меньшей мере, в 25 раз меньше, чем количество молей сайтов связывания мишени Ab-Х, которые использовали для покрытия каждой лунки. После подходящего периода инкубации планшет для ELISA промывают, и добавляют реагент для детекции мишени для измерения количества мишени, специфически связавшейся с нанесенной аминокислотной последовательностью которая направлена на мишень (в данном случае Ab-Х). Фоновый сигнал для анализа определяют как сигнал, полученный в лунках покрытых аминокислотной последовательностью (в данном случае Ab-Х), второй аминокислотной последовательностью в растворимой фазе (в данном случае Ab-Y), только буфером для мишени (т.е. без мишени) и реагентами для детекции мишени. Положительный контрольный сигнал для анализа определяют как сигнал, полученный в лунках покрытых аминокислотной последовательностью (в данном случае Ab-Х), содержащих только буфер для второй аминокислотной последовательностью в растворимой фазе (т.е. без второй аминокислотной последовательностью в растворе), мишень и реагенты для детекции мишени. Анализ ELISA можно провести таким образом, чтобы иметь положительный контрольный сигнал, по меньшей мере, в 6 раз выше фонового сигнала. Для того, чтобы избежать любых артефактов (например, существенно различной аффинности между Ab-Х и Ab-Y в отношении мишени), вытекающих из выбора, какую аминокислотную последовательность использовать в качестве покрывающей аминокислотной последовательности и какую в качестве второй (конкурирующей) аминокислотной последовательности, анализ перекрестной блокировки можно проводить в двух форматах: 1) формат 1, когда Ab-Х представляет собой аминокислотную последовательность, которой покрывают планшет для ELISA, и Ab-Y представляет собой конкурентную аминокислотную последовательность, которая находится в растворе, и 2) формат 2, когда Ab-Y представляет собой аминокислотную последовательность, которой покрывают планшет для ELISA, и Ab-Х представляет собой конкурентную аминокислотную последовательность, которая находится в растворе. Ab-Х и Ab-Y определяют как перекрестно блокирующие, если, или в формате 1 или в формате 2, аминокислотная последовательность направленная на мишень в фазе раствора способна вызывать снижение детируемого сигнала мишени на 60-100%, в частности, на 70-100%, и в частности, на 80-100%, (т.е. количества мишени, связанной с нанесенной аминокислотной последовательностью) по сравнению с детектируемым сигналом мишени, полученным в отсутствие аминокислотной последовательности направленной на мишень в растворимой фазе (т.е. в лунках положительного контроля).

о) Аминокислотная последовательность является «перекрестно реагирующей» для двух различных антигенов или антигенных детерминант (таких как, например, сывороточный альбумин от двух различных видов млекопитающих, например, человеческий сывороточный альбумин и сывороточный альбумин макаки крабоеда (cyno), таких как, например, белок F различных штаммов hRSV, например, белок F различных «ускользнувших» мутантов hRSV), если она специфична (как определено в данном описании) для обоих таких различных антигенов или антигенных детерминант.

р) Как также описано в данном описании, общее число аминокислотных остатков в нанотеле® может находиться в интервале 110-120, предпочтительно, 112-115, и наиболее предпочтительно, составляет 113. Однако следует отметить, что части, фрагменты, аналоги или производные (как также описано в данном описании) нанотела® особо не ограничиваются как по их длине, так и/или размеру, до тех пор, пока такие части, фрагменты, аналоги или производные соответствуют другим требованиям, изложенным в данном описании, и также предпочтительно подходят для целей, описанных в данном описании.

q) Как описано также в разделе q) на страницах 58 и 59 WO 08/020079 (включенной в данное описание в качестве ссылки), аминокислотные остатки нанотела® нумеруют согласно общей нумерации для доменов VH, предложенной Kabat et al. («Sequence of proteins of immunological interest», US Public Health Services, NIH Bethesda, MD, Publication No. 91), которую применяют к доменам VH верблюжьих в статье Riechmann and Muyldermans, J. Immunol. Methods, 2000, Jun 23; 240 (1-2): 185-195 (см., например, фигуру 2 в указанной публикации), и соответственно FR1 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 1-30, CDR1 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 31-35, FR2 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 36-49, CDR2 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 50-65, FR3 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 66-94, CDR3 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 95-102, и FR4 нанотела® включает аминокислотные остатки в позициях 103-113.

r) В контексте настоящего изобретения термин «хозяйская клетка-мишень" (для вируса) относится к определенной клетке, которая или является клеткой или получена от живого субъекта, и которая чувствительна к заражению указанным вирусом.

s) Термин «инфективность вируса», используемый в данном описании, относится к доле живых субъектов, которые, когда на них воздействует указанный вирус, фактически становятся зараженными указанным вирусом.

t) Термин «нейтрализация вируса», используемый в данном описании, относится к модуляции и/или уменьшению и/или предотвращению и/или ингибированию инфективности (определенной в данном описании) вируса путем связывания нейтрализующего соединения с вирионом, измеряемого с использованием подходящего анализа in vitro, клеточного анализа или анализа in vivo (такого как, например, анализ микронейтрализации, описанный Anderson et al., 1985 (J. Clin. Microbiol., 22:1050-1052), и в 1988 (J. Virol., 62:4232-4238), модификаций указанных анализов, таких как описанные в примере 6; анализа уменьшения бляшкообразования, описанного, например, Johnson et al., 1977 (J. Int. Dis., 176:1215-1224), и его модификаций и анализов, упомянутых в данном описании). В частности, «нейтрализация вируса» может означать или модуляцию или уменьшение или предотвращение или ингибирование инфективности (определенной в данном описании) вируса, измеренные с использованием подходящего анализа in vitro, клеточного анализа или анализа in vivo (такого как упомянутые в данном описании), на, по меньшей мере, 1%, предпочтительно, по меньшей мере, 5%, например, по меньшей мере, на 10% или, по меньшей мере, на 25%, например, по меньшей мере, на 50%, по меньшей мере, на 60%, по меньшей мере, на 70%, по меньшей мере, на 80% или 90%, по сравнению с нормальной (т.е. встречающейся в природе) инфективностью (определенной в данном описании) вируса в том же анализе в тех же условиях, но в отсутствие аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению.

u) Термины «активность аминокислотной последовательности по изобретению», «активность нанотела® по изобретению», «активность полипептида по изобретению» и/или «активность соединения или конструкции по изобретению», используемые в данном описании, относятся к способности указанных аминокислотной последовательности по изобретению, нанотела® по изобретению, полипептида по изобретению и/или соединения или конструкции по изобретению нейтрализовать определенный вирус (такой как, например, hRSV), модулировать, ингибировать и/или предотвращать инфективность вируса, модулировать, ингибировать и/или предотвращать слияние вируса с хозяйской клеткой-мишенью (ее клеточной мембраной) и/или модулировать, ингибировать и/или предотвращать проникновение вируса в хозяйскую клетку-мишень (как определено в данном описании). Активность можно измерить любым подходящим анализом, известным в технике или описанным в данном описании, таким как, например, анализы микронейтрализации, описанные в разделе «Примеры», и/или анализы, указанные выше в пункте t).

v) Термин «присоединение вируса», используемый в данном описании, означает присоединение вируса (например, hRSV) к мишени клетке-хозяину непосредственно (например, за счет взаимодействия с вирусным рецептором) или косвенно (например, путем опосредования взаимодействия с вирусным рецептором одного или нескольких других белков или молекул).

w) Термин «слияние вируса», используемый в данном описании, означает слияние вируса (например, hRSV) с хозяйской клеткой-мишенью непосредственно (например, за счет взаимодействия с соединениями мембраны мишени клетки-хозяина) или косвенно (например, путем опосредования взаимодействия одного или нескольких других белков или молекул с соединениями мембраны мишени клетки-хозяина).

х) Термин «проникновение вируса», используемый в данном описании, охватывает любой опосредуемый вирусом биологический путь, который необходим для осуществления проникновения вируса в хозяйскую клетку-мишень и/или слияния вируса с хозяйской клеткой-мишенью.

y) «Тяж из аминокислотных остатков» обозначает два или больше аминокислотных остатков, которые прилегают друг к другу, находятся или в тесной близости друг с другом, т.е. в первичной или третичной структуре аминокислотной последовательности. В контексте настоящего изобретения «тяж из аминокислотных остатков» будет (по меньшей мере, частично) ответственен за связывание аминокислотной последовательности, нанотела®, полипептида, соединения или конструкции по изобретению с антигенным сайтом II на белке F hRSV.

z) Когда сравнивают два тяжа из аминокислотных остатков (или две последовательности CDR), термин «различие по аминокислотам» относится к вставке, делении или замене одного аминокислотного остатка в позиции тяжа из аминокислотных остатков (или последовательности CDR), определенной в b), d) или f), при сравнении с тяжом аминокислотных остатков (или последовательностью CDR), соответственно, в а), с) или е); причем следует иметь в виду, что тяж из аминокислотных остатков (или последовательность CDR) в b), d) и f) может содержать одно, два или максимум три таких различия по аминокислотам по сравнению с тяжом аминокислотных остатков, соответственно, в а), с) или е).

«Различие по аминокислотам» может представлять собой любые одну, две или максимум три замены, делеции и/или вставки или их любую комбинацию, которые или улучшают свойства аминокислотной последовательности по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств аминокислотной последовательности по изобретению. В связи с этим, полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей один или несколько тяжей из аминокислотных остатков без одной, двух или максимум трех замен, делеции и/или вставок, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса; и/или полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, иметь одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей один или несколько тяжей из аминокислотных остатков без одной, двух или максимум трех замен, делеции и/или вставок. Специалист в данной области сможет определить и выбрать подходящие замены, делеции и/или вставки или их подходящие комбинации на основании данного раскрытия и, необязательно, после нескольких стандартных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен, делений или вставок и определение их влияния на свойства аминокислотных последовательностей, полученных таким образом.

Например, и в зависимости от организма-хозяина, используемого для экспрессии аминокислотной последовательности по изобретению, такие делеции и/или замены можно создать таким образом, что удаляются один или несколько сайтов для посттрансляционной модификации (например, один или несколько сайтов гликозилирования), что будет в пределах возможностей специалиста в данной области техники.

В предпочтительном аспекте изобретения «различие по аминокислотам» представляет собой замену аминокислот. Замена аминокислот может представлять собой любые одну, две или максимум три замены, которые или улучшают свойства аминокислотной последовательности по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств аминокислотной последовательности по изобретению. В связи с этим полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей один или несколько тяжей из аминокислотных остатков без одной, двух или максимум трех замен, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса; и/или полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, иметь одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей один или несколько тяжей из аминокислотных остатков без одной, двух или максимум трех замен, делеции и/или вставок. Специалист в данной области сможет определить и выбрать подходящие замены на основании данного раскрытия и, необязательно, после нескольких рутинных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен и определение их влияния на свойства нанотел®, полученных таким образом.

Замена аминокислоты в одном или нескольких тяжах аминокислотных остатков может представлять собой консервативную замену аминокислоты. «Консервативные» замены аминокислот, как правило, представляют собой замены аминокислот, при которых аминокислотный остаток заменяют другим аминокислотным остатком схожей химической структуры, и который оказывает, или не оказывает, незначительное влияние на функцию, активность или другие биологические свойства полученной аминокислотной последовательности. Такие консервативные замены аминокислот хорошо известны в данной области техники, например, из WO 04/037999, GB-A-3357768, WO 98/49185, WO 00/46383 и WO 01/09300; и (предпочтительные) типы и/или комбинации таких замен можно выбрать на основании соответствующих указаний в WO 04/037999, а также WO 98/49185 и других ссылках, цитированных в указанных работах.

Такие консервативные замены предпочтительно представляют собой замены, при которых одну аминокислоту из описанных далее групп (а) - (е) заменяют другим аминокислотным остатком из той же группы: (а) небольшие алифатические неполярные или слабополярные остатки: Ala, Ser, Thr, Pro и Gly; (b) полярные отрицательно заряженные остатки и их (незаряженные) амиды: Asp, Asn, Glu и Gin; (с) полярные положительно заряженные остатки: His, Arg и Lys; d) крупные алифатические неполярные остатки: Met, Leu, Не, Val и Cys; и (е) ароматические остатки: Phe, Tyr и Trp.

Особенно предпочтительными консервативными заменами являются следующие замены: Ala на Gly или на Ser; Arg на Lys; Asn на Gin или на His; Asp на Glu; Cys на Ser; Gin на Asn; Glu на Asp; Gly на Ala или на Pro; His на Asn или на Gin; He на Leu или на Val; Leu на Не или на Val; Lys на Arg, на Gin или на Glu; Met на Leu, на Tyr или на Не; Phe на Met, на Leu или на Tyr; Ser на Thr; Thr на Ser; Trp на Туг; Tyr на Trp; и/или Phe на Val, на Не или на Leu. Замена аминокислоты в одном или нескольких тяжах аминокислотных остатков может дать аминокислотную последовательность с повышенной аффинностью для связывания с белком F hRSV. Это можно осуществить такими методами, как неспецифический или сайт-направленный мутагенез, и/или другими методами созревания аффинности, известными per se, такими как, например, описанные в WO 09/004065, WO 05/003345, WO 06/023144, EP 527809, EP 397834.

Без ограничения, правила замен аминокислотных остатков в CDR (которым следуют частично или полностью) могут быть такими, как описанные далее (т.е. замена аминокислотами со схожей химией боковых цепей):

- К заменяют R;

- R заменяют К;

- А заменяют S или Т;

- S заменяют А или Т;

- Т заменяют А или S;

- I заменяют L или V;

- L заменяют I или V;

- V заменяют I или L;

- F заменяют Y;

- Y заменяют F;

- N заменяют D;

- D заменяют N;

- Q заменяют Е;

- Е заменяют Q;

- G заменяют А;

- M заменяют L;

- H, C, W и Р сохраняют неизменными.

Более того, и также без ограничения, правила замен аминокислотных остатков в CDR (которым следуют частично или полностью) могут быть, с другой стороны такими, каким следуют для замены в позициях 27-35 и позициях 50-58 (с использованием системы нумерации по Кабату), где для позиций 27-35

- исходный аминокислотный остаток в позиции 27 (использована нумерация по Кабату) заменяют F; G; R; S; 2 из F, G, R, S; 3 из F, G, R, S; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 28 (использована нумерация по Кабату) заменяют А; I; S; Т; 2 из А, I, S, Т; 3 из A, I, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 29 (использована нумерация по Кабату) заменяют F; G; L; S; 2 из F, G, L, S; 3 из F, G, L, S; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 30 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; G; S; Т; 2 из D, G, S, Т; 3 из D, G, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 31 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; I; N; S; Т; 2 из D, I, N, S, Т; 3 из D, I, N, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 32 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; N; Y; 2 из D, N, Y; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 33 (использована нумерация по Кабату) заменяют А; G; Т; V; 2 из А, G, Т, V; 3 из А, G, Т, V; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 34 (использована нумерация по Кабату) заменяют I; M; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 35 (использована нумерация по Кабату) заменяют A; G; S; 2 из A, G, S; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

и позиции 50-58, если исходная аминокислотная последовательность имеет аминокислотную последовательность в позиции 52а (использована нумерация по Кабату),

- исходный аминокислотный остаток в позиции 50 (использована нумерация по Кабату) заменяют А; С; G; S; Т; 2 из А, С, G, S, Т; 3 из А, С, G, S, Т; 4 из А, С, G, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 51 (использована нумерация по Кабату) заменяют I;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 52 (использована нумерация по Кабату) заменяют N; R; S; Т; 2 из N, R, S, Т; 3 из N, R, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 52а (использована нумерация по Кабату) заменяют R; S; Т; W; 2 из R, S, Т, W; 3 из R, S, Т, W; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 53 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; G; N; S; Т; 2 из D, G, N, S, Т; 3 из D, G, N, S, Т; 4 из D, G, N, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 54 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; G; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 55 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; G; S; 2 из D, G, S; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 56 (использована нумерация по Кабату) заменяют I; N; R; S; Т; 2 из I, N, R, S, Т; 3 из I, N, R, S, Т; 4 из I, N, R, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 57 (использована нумерация по Кабату) заменяют Т;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 58 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; H; N; S; Y; 2 из D, H, N, S, Y; 3 из D, H, N, S, Y; 4 из D, H, N, S, Y; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

и при этом для позиций 50-58, если исходная аминокислотная последовательность не имеет аминокислотной последовательности в позиции 52а (использована нумерация по Кабату),

- исходный аминокислотный остаток в позиции 50 (использована нумерация по Кабат) заменяют A; G; R; S; Т; 2 из A, G. R, S, Т; 3 из Л, G, R, S, Т; 4 из A, G, R, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 51 (использована нумерация по Кабату) заменяют I;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 52 (использована нумерация по Кабату) заменяют N; S; Т; 2 из N, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 53 (использована нумерация по Кабату) заменяют N; R; S; Т; Y; 2 из N, R, S, Т, Y; 3 из N, R, S, Т, Y; 4 из N, R, S, Т, Y; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 54 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; G; R; S; 2 из D, G, R, S; 3 из D, G, R, S; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 55 (использована нумерация по Кабату) заменяют G;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 56 (использована нумерация по Кабату) заменяют G; N; R; S; Т; 2 из D, N, R, S, Т; 3 из D, N, R, S, Т; 4 из D, N, R, S, Т; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 57 (использована нумерация по Кабату) заменяют Т;

- исходный аминокислотный остаток в позиции 58 (использована нумерация по Кабату) заменяют D; N; Т; Y; 2 из D, N, Т, Y; 3 из D, N, Т, Y; или всеми ими, предпочтительно, всеми ими,

после чего одну или несколько потенциально применимых замен (или их комбинации), определенные таким образом, можно ввести в указанную последовательность CDR (любым способом, известным per se, как описано в данном описании далее), и полученную(ые) аминокислотную(ые) последовательностей) можно испытывать на аффинность в отношении белка F hRSV и/или на другие желательные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV. Таким образом, при ограниченном использовании метода проб и ошибок специалист может определить другие подходящие замены в CDR (или их подходящие комбинации), основываясь на описанном раскрытии. Аминокислотные последовательности, включающие тяж из аминокислотных остатков, которые имеют одну, две или максимум три замены, вставки или делеции, и нуклеотидные последовательности, кодирующие их, можно получить любым способом, известным per se, например, с использованием одного или нескольких методов, указанных на страницах 103 и 104 WO 08/020079.

Полученные аминокислотные последовательности по изобретению должны предпочтительно связываться с белком F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании; и/или нейтрализовать hRSV с эффективностью и/или активностью, как определено в данном описании.

аа) Когда сравнивают две аминокислотные последовательности, термин «различие в аминокислоте» относится к вставке, делеции или замене одного аминокислотного остатка в позиции первой аминокислотной последовательности по сравнению со второй аминокислотной последовательностью; при этом следует иметь в виду, что такие две аминокислотные последовательности могут содержать одно, два или максимум три таких различия в аминокислоте. «Различие по аминокислотам» может представлять собой любые одну, две или максимум три замены, делеции или вставки в аминокислотной последовательности, т.е. в одном или нескольких каркасных участках или одном или нескольких CDR (которые могут находиться в CDR по изобретению (т.е. в CDR2) или в другом CDR (т.е. в CDR1, CDR2 или CDR3)), или их любое сочетание, которые или улучшают свойства аминокислотной последовательности по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств аминокислотной последовательности по изобретению. В связи с этим, полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с аминокислотной последовательностью без одной, двух или максимум трех замен, делеции или вставок, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса; и/или полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, иметь активность, которая является одинаковой, примерно одинаковой или более высокой при сравнении с аминокислотной последовательностью без одной, двух или максимум трех замен, делеции и/или вставок. Специалист вообще сможет определить и выбрать подходящие замены, делеции или вставки или их подходящие комбинации на основании данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен, делеций или вставок и определение их влияния на свойства аминокислотной последовательности, полученной таким образом.

В одном аспекте изобретения «различие по аминокислотам» представляет собой замену аминокислоты. Замена аминокислоты может представлять собой одну, две или максимум три замены в одном или нескольких каркасных участках или одном или нескольких CDR (которые могут находиться в CDR по изобретению (т.е. в CDR2) или в другом CDR (т.е. в CDR1, CDR2 или CDR3)), или их любое сочетание, которые или улучшают свойства аминокислотной последовательности по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств аминокислотной последовательности по изобретению. В связи с этим, полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с аминокислотной последовательностью без одной, двух или максимум трех замен, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса; и/или полученная аминокислотная последовательность по изобретению должна, по меньшей мере, иметь активность, которая является одинаковой, примерно одинаковой или более высокой при сравнении с аминокислотной последовательностью без одной, двух или максимум трех замен. Специалист вообще сможет определить и выбрать подходящие замены на данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен и определение их влияния на свойства аминокислотных последовательностей, полученных таким образом.

Как указано выше, замены, вставки или делеций могут находиться в одном или нескольких каркасных участках и/или одном или нескольких CDR. Как обсуждается выше (см. выше пункт z)), замена аминокислоты в одном или нескольких CDR может представлять собой любу замену, такую как «консервативная замена» (как определено в данном описании), она может производиться по некоторым правилам (как определено в данном описании), и/или она может привести к улучшенным свойствам у полученных аминокислотных последовательностей.

Когда такие замены, вставки или делеций выполняют в одном или нескольких каркасных участках, они могут быть сделаны в одном или нескольких характерных остатках (определенных, например, в WO 08/020079, таблицы А-3-А-8) и/или в одной или нескольких других позициях в каркасных участках, хотя замены, вставки или делеций в характерных остатках вообще менее предпочтительны (тем не менее, они являются подходящими гуманизирующими заменами, как описано в данном описании). Как примеры, не являющиеся ограничительными, замена может представлять собой, например, консервативную замену (как описано в данном описании), и/или аминокислотный остаток может быть заменен другим аминокислотным остатком, который встречается в природе в той же позиции в другом VH-домене (см., например, WO 08/020079, таблицы А-5-А-8), хотя изобретение вообще этим не ограничивается.

Замены, вставки или делеции, выполненные (предпочтительно) в одном или нескольких каркасных участках, могут представлять собой гуманизирующие замены (т.е. с заменой одного или нескольких аминокислотных остатков в аминокислотной последовательности встречающейся в природе VHH-последовательности (и предпочтительно, в каркасных последовательностях) на один или несколько аминокислотных остатков, которые находятся в соответствующей(их) позиции(ях) в VH-домене из обычного 4-цепочечного антитела из человеческого организма). Некоторые предпочтительные, но не ограничительные, гуманизирующие замены (и их подходящие комбинации) станут понятнее для специалиста на основании данного раскрытия. Потенциально применимые гуманизирующие замены могут быть установлены путем сравнения последовательности каркасных участков одной аминокислотной последовательности по изобретению, определенной в а), с соответствующей каркасной последовательностью одной или нескольких близко родственных VH-последовательностей человека, после чего одну или несколько потенциально применимых гуманизирующих замен (или их комбинаций), определенных таким образом, можно вводить в указанную аминокислотную последовательность по изобретению, определенную в а) (любым способом, известным per se, а также описанным в данном описании), и полученную гуманизированную аминокислотную последовательность можно проверить на аффинность в отношении белка F hRSV, на стабильность, на легкость и уровень экспрессии и/или на другие желательные свойства, определенные в данном описании. В связи с этим, путем ограниченного использования метода проб и ошибок, специалист может определить другие подходящие гуманизирующие замены (или их подходящие комбинации) на основе данного раскрытия.

Гуманизирующие замены следует выбирать так, чтобы полученные аминокислотная последовательность и/или нанотело® еще сохраняли благоприятные свойства нанотел®, как определено в данном описании. Специалист вообще сможет определить и выбрать подходящие гуманизирующие замены или подходящие комбинации гуманизирующих замен на основе данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, которые могут, например, включать введение ограниченного числа возможных гуманизирующих замен и определение их влияния на свойства нанотел®, полученных таким образом.

Вообще в результате гуманизации аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению могут стать более «подобными человеческим», причем в то же время все еще сохраняются благоприятные свойства нанотел® по изобретению, описанные в данном описании. В результате такие гуманизированные аминокислотная последовательность и/или нанотело® могут иметь некоторые преимущества, такие как уменьшенная иммуногенность по сравнению с соответствующим встречающимся в природе VHH-Доменом. Вновь на основе данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, специалист сможет выбрать гуманизирующие замены или подходящие комбинации гуманизирующих замен, которые оптимизируют или достигают нужного или подходящего баланса между благоприятными свойствами, приданными гуманизирующими заменами, с одной стороны, и благоприятными свойствами встречающихся в природе VHH-доменов, с другой стороны.

Аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению можно соответственно гуманизировать в любом(ых) каркасном(ых) остатке(ах), таком(их) как один или несколько характерных остатков (как определено в данном описании), или в одном или нескольких других каркасных остатках (т.е. нехарактерных остатках) или в их любой комбинации. Одной предпочтительной заменой для нанотел® «группы P,R,S-103» или «группы K.ERE» (как определено в WO 08/020079) является замена Q108 на L108.

В зависимости от организма-хозяина, используемого для экспрессии аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению, такие делеции и/или замены также можно создавать таким образом, что один или несколько сайтов для посттрансляционной модификации (таких как один или несколько сайтов гликозилирования) удаляются, насколько будет в пределах возможностей специалиста в данной области техники. С другой стороны, замены или вставки можно создавать так, чтобы ввести один или несколько сайтов для присоединения функциональных групп (как описано в данном описании), например, для создания возможности сайт-специфического пегелирования (вновь как описано в данном описании).

Как можно видеть из данных по энтропии VHH и вариабельности VHH, приведенных в таблицах А-5-А-8 в WO 08/020079, некоторые аминокислотные остатки в каркасных участках являются более консервативными, чем другие. Вообще, хотя изобретение в своем самом широком смысле указанным не ограничивается, любые замены, делеции или вставки предпочтительно осуществляют в позициях, которые являются менее консервативными. Также, как правило, замены аминокислот предпочтительнее делеций или вставок аминокислот. Любые замены аминокислот, применяемые к полипептидам, описанным в данном описании, также могут быть основаны на анализе частоты встречаемости различных вариантов аминокислот между гомологичными белками различных видов, разработанном Schuiz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978, на анализе потенциалов структурообразования, разработанном Chou and Fasman, Biochemistry, 13:211, 1974, и Adv. Enzymol., 47:45-149, 1978, и на анализе картины гидрофобно в белках, разработанном Eisenberg et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:140-144, 1984; Kyte & Doolittle, J. Molec. Biol., 157:105-132, 1981, и Goldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem., 15:321-353, 1986; все указанные работы включены в данное описание в качестве ссылок. Сведения о первичной, вторичной и третичной структуре нанотел даются в данном описании и в работах известного уровня техники, цитированных выше. Также для такой цели кристаллическая структура VHH-домена от ламы приводится, например, в Desmyter et al., Nature Structural Biology, Vol.3, 9, 803 (1996); Spinelli et al., Natural Structural Biology (1996), 3, 752-757; и Descanniere et al., Structure, Vol.7, 4, 361 (1999). Другие сведения о некоторых аминокислотных остатках, которые в обычных VH-доменах образуют поверхность VH/VL, и возможные камелизирующие замены в таких позициях, можно найти в работах известного уровня техники, цитированных выше.

Аминокислотные последовательности и/или нанотела® с одной, двумя или максимум тремя такими заменами, вставками или делениями и кодирующие их нуклеотидные последовательности можно получить любым способом, известным per se, например, с использованием одного или нескольких методов, упомянутых на страницах 103 и 104 WO 08/020079.

Полученные аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению должны предпочтительно связываться с белком F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании; и/или нейтрализовать hRSV с эффективностью и/или активностью, как определено в данном описании.

bb) Когда сравнивают два полипептида, термин «различие по аминокислоте» относится к вставке, делеций или замене одного аминокислотного остатка в позиции первого полипептида по сравнению со вторым полипептидом; следует иметь в виду, что такие два полипептида могут содержать одно, два или максимум три таких различия по аминокислоте.

«Различие по аминокислотам» может представлять собой любые одну, две или максимум три замены, делеции или вставки в полипептиде, т.е. в одном или нескольких каркасных участках или одном или нескольких CDR (которые могут находиться в CDR по изобретению (т.е. в CDR2) или в другом CDR (т.е. в CDR1, CDR2 или CDR3)), или их любую комбинацию, которые или улучшают свойства полипептида по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств полипептида по изобретению. В связи с этим, полученный полипептид по изобретению должен, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с полипептидом без одной, двух или максимум трех замен, делеции или вставок, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса; и/или полученный полипептид по изобретению должен, по меньшей мере, иметь активность, которая является одинаковой, примерно одинаковой или более высокой при сравнении с полипептидом без одной, двух или максимум трех замен, делеции и/или вставок. Полученный полипептид должен предпочтительно связывать белок F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании; и/или нейтрализовать hRSV с эффективностью и/или активностью, как определено в данном описании. Специалист в данной области сможет определить и выбрать подходящие замены, делеции или вставки или их подходящие комбинации на основании данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа стандартных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен, делеции или вставок и определение их влияния на свойства полипептида, полученного таким образом.

В одном аспекте изобретения «различие по аминокислотам» представляет собой замену аминокислоты. Замена аминокислоты может представлять собой любую одну, любые две или максимум любые три замены в каркасных участках или одном или нескольких CDR (которые могут находиться в CDR по изобретению (т.е. присутствовать в CDR2) или в другом CDR (т.е. в CDR1, CDR2 или CDR3)), или их любую комбинацию, которые или улучшают свойства полипептида по изобретению, или которые, по меньшей мере, не слишком ухудшают нужные свойства или баланс или комбинацию нужных свойств полипептида по изобретению. В связи с этим, полученный полипептид по изобретению должен, по меньшей мере, связывать белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью при сравнении с полипептидом без одной, двух или максимум трех замен, делеций или вставок, причем указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса; и/или полученный полипептид по изобретению должен, по меньшей мере, иметь активность, которая является одинаковой, примерно одинаковой или более высокой при сравнении с полипептидом без одной, двух или максимум трех замен, делеций и/или вставок. Полученный полипептид должен предпочтительно связывать белок F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании; и/или нейтрализовать hRSV с эффективностью и/или активностью, как определено в данном описании. Специалист вообще сможет определить и выбрать подходящие замены на основании раскрытия в данном описании и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, которые могут включать, например, введение ограниченного числа возможных замен и определение их влияния на свойства полипептидов, полученных таким образом.

Как указано выше, замены, вставки или делеций могут находиться в одном или нескольких каркасных участках и/или одном или нескольких CDR. Как обсуждается выше (см. пункт z)), замены, вставки или делеций в CDR могут представлять собой любые возможные замены, вставки или делеций, такие как «консервативная замена» (как определено в данном описании), они могут осуществляться по определенным правилам (как определено в данном описании), и/или они могут привести к улучшенным свойствам у полученных полипептидов.

Когда такие замены, вставки или делеций выполняют в одном или нескольких каркасных участках, они могут быть сделаны в одном или нескольких характерных остатках (определенных, например, в WO 08/020079, таблицы А-3-А-8) и/или в одной или нескольких других позициях в каркасных остатках, хотя замены, вставки или делеций в характерных остатках вообще менее предпочтительны (тем не менее, они являются подходящими гуманизирующими заменами, как описано в данном описании). Как примеры, не являющихся ограничительными, замена может представлять собой, например, консервативную замену (как описано в данном описании), и/или аминокислотный остаток может быть заменен другим аминокислотным остатком, который встречается в природе в той же позиции в другом VHH-домене (см. WO 08/020079, таблицы А-5 - А-8), хотя изобретение вообще этим не ограничивается.

Замены, вставки или делеции, выполненные (предпочтительно) в одном или нескольких каркасных участках, могут представлять собой гуманизирующие замены. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные, гуманизирующие замены (и их подходящие комбинации) станут понятнее для специалиста на основании данного раскрытия. Потенциально применимые гуманизирующие замены могут быть установлены путем сравнения последовательности каркасных участков одной из аминокислотных последовательностей, содержащихся в полипептиде по изобретению, определенных в а), с соответствующей каркасной последовательностью одной или нескольких близко родственных VH-последовательностей человека, после чего одну или несколько потенциально применимых гуманизирующих замен (или их комбинаций), определенных таким образом, можно вводить в указанный полипептид по изобретению, определенный в а) (любым способом, известным per se, а также описанным в данном описании), и полученную последовательность полипептида можно проверить на аффинность в отношении белка F hRSV, на стабильность, на легкость и уровень экспрессии и/или на другие желательные свойства, определенные в данном описании. В связи с этим, путем ограниченного использования метода проб и ошибок, специалист может определить другие подходящие гуманизирующие замены (или их подходящие комбинации) на основе данного раскрытия.

Гуманизирующие замены следует выбирать так, чтобы полученные гуманизированные последовательности полипептида еще сохраняли благоприятные свойства нанотел®, содержащихся в полипептиде, как определено в данном описании. Специалист вообще сможет определить и выбрать подходящие гуманизирующие замены или подходящие комбинации гуманизирующих замен на основе данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, которые могут, например, включать введение ограниченного числа возможных гуманизирующих замен и определение их влияния на свойства нанотел®, содержащихся в полипептиде, полученном таким образом.

Вообще в результате гуманизации полипептид по изобретению может стать более «подобным полипептиду человека», причем в то же время все еще сохраняются благоприятные свойства нанотел® по изобретению, содержащиеся в полипептиде, которые описаны в данном описании. В результате такие гуманизированные полипептиды могут иметь некоторые преимущества, такие как уменьшенная иммуногенность, по сравнению с полипептидами, которые содержат в себе соответствующие встречающиеся в природе VHH-домены. Вновь на основе данного раскрытия и, необязательно, после ограниченного числа обычных экспериментов, специалист сможет выбрать гуманизирующие замены или подходящие комбинации гуманизирующих замен, которые оптимизируют или достигают нужного или подходящего баланса между благоприятными свойствами, приданными гуманизирующими заменами, с одной стороны, и благоприятными свойствами встречающихся в природе VHH-доменов, с другой стороны.

Полипептиды по изобретению могут быть соответственно гуманизированы в любом(ых) каркасном(ых) остатке(ах), таком(их) как один или несколько характерных остатков (как определено в данном описании), или в одном или нескольких других каркасных остатках (т.е. нехарактерных остатках) или в их любой подходящей комбинации. Одной предпочтительной гуманизирующей заменой для нанотел® «группы P,R,S-103» или «группы KERE» является замена Q108 на L108.

В зависимости от организма-хозяина, используемого для экспрессии полипептида по изобретению, такие делеции и/или замены также можно создавать таким образом, что один или несколько сайтов для посттрансляционной модификации (таких как один или несколько сайтов гликозилирования) удаляются, как это будет в пределах возможностей специалиста в данной области техники. С другой стороны, замены или вставки можно создавать так, чтобы ввести один или несколько сайтов для присоединения функциональных групп (как описано в данном описании), например, для создания возможности сайт-специфического пегелирования (вновь как описано в данном описании).

Как можно видеть из данных по энтропии VHH и вариабельности VHH, приведенных в таблицах А-5-А-8 в WO 08/020079, некоторые аминокислотные остатки в каркасных участках являются более консервативными, чем другие. Вообще, хотя изобретение в своем самом широком смысле указанным не ограничивается, любые замены, делеции или вставки предпочтительно осуществляют в позициях, которые являются менее консервативными. Также, как правило, замены аминокислот предпочтительнее делений или вставок аминокислот. Любые замены аминокислот, применяемые к полипептидам, описанным в данном описании, также могут быть основаны на анализе частоты встречаемости различных вариантов аминокислот между гомологичными белками различных видов, разработанном Schuiz et al., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, 1978, на анализе потенциалов структурообразования, разработанном Chou and Fasman, Biochemistry, 13: 211, 1974, и Adv. Enzymol., 47: 45-149, 1978, и на анализе картины гидрофобности в белках, разработанном Eisenberg et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:140-144, 1984; Kyte & Doolittle, J. Molec. Biol., 157:105-132, 1981, и Goldman et al., Ann. Rev. Biophys. Chem., 15:321-353, 1986; все указанные работы включены в данное описание в качестве ссылок. Сведения о первичной, вторичной и третичной структуре нанотел® приводятся в данном описании и в работах известного уровня техники, цитированных выше. Также для такой цели кристаллическая структура VHH-домена от ламы приводится, например, в Desmyter et al., Nature Structural Biology, Vol.3, 9, 803 (1996); Spinelli et al., Natural Structural Biology (1996), 3, 752-757; и Descanniere et al., Structure, Vol.7, 4, 361 (1999). Другие сведения о некоторых аминокислотных остатках, которые в обычных доменах VH образуют поверхность раздела VH/VL, и возможные камелизирующие замены в таких позициях, можно найти в работах известного уровня техники, цитированных выше.

Полипептиды с одной, двумя или максимум тремя заменами, вставками или делениями и кодирующие их нуклеотидные последовательности можно получить любым способом, известным per se, например, с использованием одного или нескольких методов, упомянутых на страницах 103 и 104 WO 08/020079.

Полученные полипептиды по изобретению должны предпочтительно связываться с белком F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), определенной в данном описании; и/или нейтрализовать hRSV с эффективностью и/или активностью, как определено в данном описании.

cc) Фигуры, список последовательностей и экспериментальная часть/примеры приводятся только для дополнительного пояснения изобретения и никоим образом не должны интерпретироваться или истолковываться как ограничивающие объем изобретения и/или прилагаемой формулы изобретения, если в данном описании не указано недвусмысленно иное.

Для связывания со своим эпитопом на белке F hRSV аминокислотная последовательность обычно будет содержать, в пределах своей аминокислотной последовательности, один или несколько аминокислотных остатков или один или несколько тяжей из аминокислотных остатков (определенных в данном описании; т.е. при этом каждый «тяж» включает два или больше аминокислотных остатков, которые являются прилегающими друг к друга или находятся в тесной близости друг к другу, т.е. в первичной или третичной структуре аминокислотной последовательности), через которые аминокислотная последовательность по изобретению может связываться со своим эпитопом на белке F hRSV. Такие аминокислотные остатки или тяжи аминокислотных остатков образуют, таким образом «сайт» для связывания эпитопа на белке F hRSV (также называемого в данном описании «антигенсвязывающим сайтом», что также определено в данном описании).

Настоящее изобретение относится к ряду тяжей из аминокислотных остатков (определенных в данном описании), которые особенно подходят для связывания с антигенным сайтом II на белке F hRSV (описание антигенных сайтов в белке F hRSV дается в ссылке Lopez et al., 1998, J. Virol., 72: 6922-6928). Такие тяжи аминокислотных остатков могут присутствовать в и/или могут быть включены в аминокислотную последовательность по изобретению, в частности, таким образом, что они образуют антигенсвязывающий сайт (часть) аминокислотной последовательности по изобретению. Полученные аминокислотные последовательности будут связываться с эпитопом на белке F hRSV, который находится в, образует часть или перекрывается (т.е. в первичной или третичной структуре) или находится в непосредственной близости от (т.е. в первичной или третичной структуре) антигенного сайта II на белке F hRSV. Также полученные аминокислотные последовательности будут предпочтительно такими, что они могут конкурировать с Синагисом® за связывание с белком F hRSV; и/или такими, что они могут связываться с тем же эпитопом или сайтом связывания на белке F hRSV или с эпитопом, близким к указанному сайту связывания, и/или перекрывать указанный сайт связывания.

Настоящее изобретение относится к тяжу аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 102), который особенно подходит для связывания с белком F hRSV. Такой тяж из аминокислотных остатков (или варианты SEQ ID NO: 102, как определено в данном описании) может присутствовать в и/или может быть включен в аминокислотную последовательность по изобретению, в частности, таким образом, что он образует антигенсвязывающий сайт (часть) аминокислотной последовательности по изобретению. Тяж из аминокислотных остатков синтезирован как последовательность CDR2 тяжелоцепочечного антитела или VHH-последовательности (NC41; SEQ ID NO: 5), которая направлена на белок F hRSV и которую далее модифицируют с помощью библиотеки для генерации гуманизированных нанотел® NC41 (как описано в разделе «Примеры»). В более частном случае глициновый остаток (Gly, G) в позиции 6 CDR2 NC41 заменяют на остаток аспарагиновой кислоты (Asp, D). Неожиданно, для аминокислотной последовательности, которая включает такой тяж из аминокислотных остатков (SEQ ID NO: 102), отмечают улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), улучшенную аффинность и/или улучшенную авидность в отношении белка F hRSV и/или улучшенную эффективность и/или активность в отношении нейтрализации hRSV. Такой тяж из аминокислотных остатков (или варианты SEQ ID NO: 102, как определено в данном описании) в данном описании также называют «последовательности CDR2 по изобретению».

Соответственно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают, по меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, один тяж из которых выбран из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121 и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности по изобретению, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), е) и f).

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, первый тяж из которых выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Аминокислотные последовательности, включающие один или несколько вышеуказанных специфических тяжей из аминокислотных остатков, проявляют улучшенные свойства, такие как, например, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV и/или улучшенной эффективности и/или активности в отношении нейтрализации hRSV.

В более частном случае аминокислотные последовательности по изобретению, включающие один или несколько вышеуказанных специфических тяжей из аминокислотных остатков, могут связываться с белком с F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), предпочтительно, такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константной диссоциации (KD) 1000 нМ - 1 нМ или меньше, предпочтительно, 100 нМ - 1 нМ или меньше, предпочтительнее, 15 нМ - 1 нМ или даже 10 нМ - 1 нМ меньше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости kon от 104 М-1-1 до примерно 107 M-1.c-1, предпочтительно, от 105 М-1-1 до 107 М-1-1, предпочтительнее, примерно 106 М-1-1 или больше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости koff от 10-2 с-1 (t1/2=0,69 с) до 10-4 с-1 (что дает почти необратимый комплекс с t1/2 от нескольких суток), предпочтительно, от 10-3 с-1 до 10-4 с-1 или ниже.

Некоторые предпочтительные величины IC50 для связывания аминокислотных последовательностей по изобретению с белком с F hRSV станут понятнее из дальнейшего описания и приведенных примеров.

Анализы для определения IC50 включают конкурентные анализы, такие как конкурентный ELISA (например, конкуренции с Синагисом® или его фрагментом Fab), или, предпочтительнее, анализы нейтрализации, такие как анализ микронейтрализации, описанный Anderson et al. (1985, J. Clin. MicrobioL, 22:1050-1052; 1988, J. ViroL, 62:4232-4238), модификации указанного анализа, такие как описанные в примере 6; или анализ уменьшения бляшкообразования, описанный, например, Johnson et al. (1997, J. Int. Dis., 176:1215-1224), и его модификации.

Например, в конкурентном анализе с фрагментом Fab Синагиса® аминокислотные последовательности по изобретению могут иметь величины IC50 от 1 нМ до 100 нМ, предпочтительно, от 10 нМ до 50 нМ или меньше.

Например, в анализе микронейтрализации на hRSV Long (таком, как описанный, например, в примере 6), аминокислотные последовательности по изобретению могут иметь величины IC50 от 100 нМ до 1000 нМ, предпочтительно, от 100 нМ до 500 нМ или меньше.

Следует отметить, что изобретение не ограничивается ни происхождением аминокислотной последовательности по изобретению (или нуклеотидной последовательности по изобретению, используемой для ее экспрессии), ни способом, которым аминокислотная последовательность или нуклеотидная последовательность по изобретению синтезирована или получена. Таким образом, аминокислотные последовательности по изобретению могут представлять собой аминокислотные последовательности, встречающиеся в природе (от любых подходящих видов), или синтетические или полусинтетические аминокислотные последовательности.

Следует отметить, что изобретение в своем самом широком смысле не ограничивается конкретной структурной ролью или функцией, которые указанные тяжи аминокислотных остатков могут иметь в аминокислотной последовательности по изобретению, до тех пор, пока такие тяжи аминокислотных остатков позволяют аминокислотной последовательности по изобретению связываться с антигенным сайтом II на белке F hRSV с определенной аффинностью и/или активностью (как определено в данном описании). Таким образом вообще изобретение в своем самом широком смысле включает аминокислотные последовательности, которые способны связываться с антигенным сайтом II на белке F hRSV и которые включают один или несколько тяжей из аминокислотных остатков, как определено в данном описании (и в частности, подходящую комбинацию из двух или большего числа таких тяжей из аминокислотных остатков), которые соответственно соединены друг с другом через одну или несколько других аминокислотных последовательностей, так что полная аминокислотная последовательность образует связывающий домен и/или связывающую единицу, которая способна связываться с антигенным сайтом II на белке F hRSV.

Такая аминокислотная последовательность может представлять собой, например, подходящий «белковый остов», который включает, по меньшей мере, один тяж из аминокислотных остатков, определенный в данном описании (т.е. как часть своего антигенсвязывающего сайта). Подходящие остовы для рассматриваемых аминокислотных последовательностей будут понятны для специалиста и включают, например, без ограничения, связывающие остовы, основанные на или образованные из иммуноглобулинов, белковые остовы, образованные из доменов белка А (таких как Affibodies™), фибронектина, липокалина, CTLA-4, Т-клеточных рецепторов, сконструированных анкириновых повторах, авимерах и доменах PDZ (Binz et al., 2005, Nat. Biotech., 23:1257) и связывающих группах на основе ДНК или РНК, включая, но не ограничиваясь указанным, аптамеры ДНК или РНК (Urich et al., 2006, Comb. Chem. High Throughput Screen, 9(8):619-32).

Вновь любая аминокислотная последовательность по изобретению, которая включает один или несколько тяжей из аминокислотных остатков, определенных в данном описании для аминокислотных последовательностей по изобретению, предпочтительно такова, что она может специфически связываться (как определено в данном описании) с белком F hRSV, и в более частном случае такова, что она может связываться с белком F hRSV с такой аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), какая определена в данном описании. Любая аминокислотная последовательность по изобретению, которая включает один или несколько тяжей из аминокислотных остатков, определенных в данном описании для аминокислотных последовательностей по изобретению, предпочтительно такова, что она может нейтрализовать hRSV с такой активностью (измеренной в подходящем анализе, как определено в данном описании), какая определена в данном описании.

Более того, специалисту также будет понятно, что возможно «привить» один или несколько CDR, определенных в данном описании для аминокислотных последовательностей по изобретению, на другие «остовы», включая, но не ограничиваясь указанным, человеческие остовы или неиммуноглобулиновые остовы. Подходящие остовы и методы для такой прививки CDR будут понятны для специалиста и хорошо известны в технике, см., например, US 7180370, WO 01/27160, EP 0605522, EP 0460167, US 7054297, Nicaise et al., Protein Science (2004), 13:1882-1891; Ewert et al., Methods, 2004 Oct. 34(2):184-199; Kettleborough et al., Protein Eng. 1991, Oct. 4(7):773-783; O'Brien and Jones, Methods Mol. Biol. 2003, 207:81-100; и Skerra, J. Mol. Recognit. 2000, 13:167-187, and Saerens et al., J. Mol. Biol. 2005 Sep, 23, 352(3):597-607, и другие ссылки, цитированные в указанных работах. Например, известные per se методы прививки мышиных или крысиных CDR на человеческие каркасы и остовы могут быть использованы аналогично для получения химерных белков, включающих одну или несколько последовательностей CDR, определенных в данном описании для аминокислотных последовательностей по изобретению, и один или несколько каркасных участков или последовательностей человека.

В одном конкретном, но не ограничивающем аспекте аминокислотная последовательность по изобретению может представлять собой аминокислотную последовательность, которая включает иммуноглобулиновую укладку цепи или аминокислотную последовательность, которая, в подходящих условиях (таких как физиологические условия) способна формировать иммуноглобулиновую укладку цепи (т.е. путем укладки). Среди прочего можно сослаться на обзор Halaby et al. (1999, J. Protein Eng., 12:563-71). Предпочтительно, когда уложенные должным образом так, что формируется иммуноглобулиновая укладка цепи, тяжи аминокислотных остатков могут должным образом образовывать антигенсвязывающий сайт для связывания специфического антигенного сайта II на белке F hRSV; и предпочтительнее, способны связываться с антигенным сайтом II на белке F hRSV с такой аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, описанных далее в данном описании), какая определена в данном описании.

В другом конкретном, но не ограничивающем аспекте аминокислотные последовательности по изобретению представляют собой иммуноглобулиновые последовательности, в частности, но без ограничения, аминокислотные последовательности по изобретению могут представлять собой аминокислотные последовательности, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно); или любой подходящий фрагмент такой аминокислотной последовательности, который еще связывает антигенный сайт II на белке F hRSV.

В такой аминокислотной последовательности по изобретению каркасные последовательности могут представлять собой любые каркасные последовательности, и примеры подходящих каркасных последовательностей будут понятны для специалиста, например, на основании стандартных руководств и также раскрытия и сообщений известного уровня техники, упомянутых в данном описании.

Каркасные последовательности предпочтительно представляют собой каркасные последовательности иммуноглобулина (подходящую комбинацию) или каркасные последовательности, полученные из каркасных последовательностей иммуноглобулина (например, гуманизацией или камелизацией). Например, каркасные последовательности могут представлять собой каркасные последовательности, полученные из вариабельного домена легкой цепи (например, VL-последовательность) и/или из вариабельного домена тяжелой цепи (например, VH-последовательность). Когда аминокислотная последовательность по изобретению представляет собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, она может представлять собой последовательность вариабельного домена тяжелой цепи, полученную из обычного четырехцепочечного антитела (такую как, без ограничения, VH-последовательность, которая получена из человеческого антитела), или представлять собой так называемую VHH-последовательность (определенную в данном описании), которая получена из так называемого «тяжелоцепочечного антитела» (определенного в данном описании). В одном особенно предпочтительном аспекте каркасные последовательности представляют собой или каркасные последовательности, полученные из VHH-последовательности (в которой указанные каркасные последовательности могут быть, необязательно, частично или полностью гуманизированы), или обычные VH-последовательности, которые камелизированы (как определено в данном описании).

Для общего представления о тяжелоцепочечных антителах и их вариабельных доменах обращаются, среди прочего, к работам известного уровня техники, цитированным в данном описании, а также к уровню техники, который упоминается на странице 59 WO 08/020079, и к списку ссылок, приведенному на страницах 41-43 поданной в Международное патентное ведомство заявки WO 06/040153, и указанные работы и ссылки включены в данное описание в качестве ссылок.

Каркасные последовательности предпочтительно могут быть такими, что аминокислотная последовательность по изобретению представляет собой доменное антитело (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве доменного антитела); представляет собой «dAb» (или аминокислотную последовательность, которая подходит для использования в качестве dAb); или представляет собой нанотело® (включая, но не ограничиваясь указанным, VHH-последовательность). Вновь подходящие каркасные последовательности будут понятны для специалиста, например, па основе стандартных руководств и также раскрытия и работ известного уровня техники, упомянутых в данном описании.

В частности, каркасные последовательности, присутствующие в аминокислотных последовательностях по изобретению, могут содержать один или несколько характерных остатков (определенных в WO 08/020079 (таблицы А-3-А-8)), так что аминокислотная

последовательность по изобретению представляет собой нанотело®. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные примеры таких каркасных последовательностей (их подходящих комбинаций) станут понятны из дальнейшего раскрытия (см., например, таблицу А-6). Вообще нанотела® (в частности, VHH-последовательности и частично гуманизированные нанотела®) могут, в частности, характеризоваться присутствием одного или нескольких «характерных остатков» в одной или нескольких каркасных последовательностях (как, например, также описано в WO 08/020079, страница 61, строка 24 - страница 98, строка 3).

Как уже описано в данном описании, аминокислотную последовательность и структуру нанотела® можно рассматривать, однако, не ограничиваясь этим, как включающую четыре каркасных участка или «FR», которые называются в технике и в данном описании как «каркасный участок 1» или «FR1», как «каркасный участок 2» или «FR2», как «каркасный участок 3» или «FR3» и как «каркасный участок 4» или «FR4», соответственно, и указанные каркасные участки прерываются тремя гипервариабельными участками или «CDR», которые называются в технике как «гипервариабельный участок 1» или «CDR1», как «гипервариабельный участок 2» или «CDR2» и «гипервариабельный участок 3» или «CDR3», соответственно. Некоторые предпочтительные каркасные последовательности и CDR (и их комбинации), которые присутствуют в нанотелах® по изобретению, описаны в данном описании.

Таким образом, вообще, нанотело® можно определить как аминокислотную последовательность (общей) структуры

FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4,

в которой FR1-FR4 относятся к каркасным участкам 1-4, соответственно, и в которой CDR1-CDR3 относятся к гипервариабельным участкам, соответственно, и в которой присутствуют один или несколько характерных остатков, как описано в данном описании далее.

В связи с этим аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), в которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Такие предпочтительные гипервариабельные участки (последовательности CDR2) также называют «CDR2 по изобретению».

Предпочтительно аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), в которых CDR2 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR-3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и/или

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Даже предпочтительнее, аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам; или

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

И) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102.

В другом конкретном аспекте аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, один тяж из аминокислотных остатков (последовательность CDR), выбранный из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

c) SEQ ID NO: 121;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительно аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, два тяжа из аминокислотных остатков (последовательности CDR), из которых один тяж выбран из группы, состоящей из тяжей из аминокислотных остатков, определенных в а) и Ь), и из которых другой тяж выбран из группы, состоящей из тяжей из аминокислотных остатков, определенных в с) и d).

В другом конкретном аспекте аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, один тяж из аминокислотных остатков (последовательность CDR), выбранный из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 121.

Предпочтительно аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению включают SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

Предпочтительные комбинации последовательностей CDR1, CDR2 и CDR3 также показаны в таблице А-6.

Аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи, которая получена из обычного четырехцепочечного антитела, или могут, по существу, состоять из последовательности вариабельного домена тяжелой цепи, которая получена из тяжелоцепочечного антитела. Аминокислотные последовательности по изобретению могут, по существу, состоять из доменного антитела (или аминокислотной последовательности, которая подходит для использования в качестве доменного антитела), однодоменного антитела (или аминокислотной последовательности, которая подходит для использования в качестве однодоменного антитела) или «dAb» (или аминокислотной последовательности, которая подходит для использования в качестве dAb) или нанотела®.

Для общего представления об (одно)доменных антителах обращаются к работам известного уровня техники, цитированным в данном описании, а также к ЕР 0368684. В случае термина «dAb» следует обратиться, например, к Ward et al., (1989, Nature, 341:544-6), к Holt et al., 2003, Trends Biotechnol., 21:484-490, а также, например, к WO 06/0302220, WO 06/003388 и другим опубликованным заявкам на патент Domantis Ltd. Также следует отметить, будучи менее предпочтительными в контексте настоящего изобретения из-за того, что они происходят не от млекопитающих, однодоменные антитела или одновариабельные домены могут быть получены от некоторых видов акул (например, так называемые «домены IgNAR», см., например, WO 05/18629).

В частности, аминокислотная последовательность по изобретению может, по существу, состоять из или может представлять собой нанотело® (определенное в данном описании) или его подходящий фрагмент. [Примечание: нанотело®, нанотела® и наноклон® являются зарегистрированными товарными знаками Ablynx N.V.]

Нанотело® можно определить как аминокислотную последовательность (общей) структуры

FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4,

в которой FR1-FR4 относятся к каркасным участкам 1-4, соответственно, и в которой CDR1-CDR3 относятся к гипервариабельным участкам, соответственно, и в которой один или несколько характерных остатков являются такими, как они определены в WO 08/020079 (таблицы А-3-А-8).

В более частном случае нанотело® может представлять собой аминокислотную последовательность (общей) структуры

FR1 - CDR1 - FR2 - CDR2 - FR3 - CDR3 - FR4,

в которой FR1-FR4 относятся к каркасным участкам 1-4, соответственно, и в которой CDR1-CDR3 относятся к гипервариабельным участкам, соответственно, и которая

i) имеет, по меньшей мере, 80% идентичность по аминокислотам с, по меньшей мере, одной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 60-76, 138-141 и 146-157 (см, таблицу А-4), в которых в целях определения степени идентичности по аминокислотам аминокислотные остатки, которые образуют последовательности CDR, не принимают во внимание; в связи с этим также обращаются к таблице А-6, в которой дается список каркасных последовательностей 1 (SEQ ID NO: 81-97 и 166), каркасных последовательностей 2 (SEQ ID NO: 99-100), каркасных последовательностей 3 (SEQ ID NO: 103-120 и 167-168) и каркасных последовательностей 4 (SEQ ID NO: 123 и 169) нанотел® SEQ ID NO: 60-76,138-141 и 146-157 (см. таблицу А-4);

и в которой

ii) предпочтительно один или несколько аминокислотных остатков в позициях 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 и 108 согласно нумерации по Кабату выбраны из характерных остатков, указанных в таблицах А-3-А-8 в WO 08/020079.

Также для общего представления о нанотелах® обращаются к работам известного уровня техники, цитированных в данном описании, например, к описанию в WO 08/020079 (страница 16).

Такие нанотела® можно получить любым подходящим способом из любого подходящего источника, и они могут например, представлять собой встречающиеся в природе VHH-последовательности (т.е. от подходящего вида верблюжьих) или синтетические или полусинтетические аминокислотные последовательности.

Вновь такие нанотела® можно получить любым подходящим способом из любого подходящего источника, и они могут например, представлять собой встречающиеся в природе VHH-последовательности (т.е. от подходящего вида верблюжьих) или синтетические или полусинтетические аминокислотные последовательности, включая, но не ограничиваясь указанным, «гуманизированные» (как определено в данном описании) нанотела®, «камелизированные» (как определено в данном описании) иммуноглобулиновые последовательности (и в частности, камелизированные последовательности вариабельных доменов тяжелой цепи), а также нанотела®, которые получены такими методами, как «созревание аффинности» (например, исходя из синтетических, случайных или встречающихся в природе иммуноглобулиновых последовательностей), прививка CDR, изменение поверхности, объединение фрагментов, полученных из различных иммуноглобулиновых последовательностей, сборка с помощью ПЦР (PCR) с использованием перекрывающихся праймеров, и подобными методами создания иммуноглобулиновых последовательностей, хорошо известными специалисту; или любым подходящим сочетанием любых вышеуказанных способов, описанных далее в данном описании. Также, когда нанотело® включает VHH-последовательность, указанное нанотело® можно соответственно гуманизировать, как описано далее в данном описании, так что получают одно или несколько дополнительно (частично или полностью) гуманизированных нанотел® по изобретению. Подобным образом, когда нанотело® включает синтетическую или полусинтетическую последовательность (такую как частично гуманизированная последовательность), указанное нанотело® можно, необязательно, соответствующим образом гуманизировать далее, вновь как описано в данном описании, и вновь так, что получают одно или несколько дополнительно (частично или полностью) гуманизированных нанотел® по изобретению.

В частности, гуманизированные нанотела® могут представлять собой аминокислотные последовательности, которые вообще определены как нанотело® в предыдущих абзацах, но в которых присутствует, по меньшей мере, один аминокислотный остаток (и в частности, по меньшей мере, один из каркасных остатков), который является и/или соответствует гуманизирующей замене (как определено в данном описании). Некоторые предпочтительные, но не ограничительные, гуманизирующие замены (и их подходящие комбинации) станут понятны для специалиста на основании данного раскрытия. Кроме того, или с другой стороны, можно установить другие потенциально применимые гуманизирующие замены, сравнивая последовательность каркасных участков встречающейся в природе VHH-последовательности с соответствующей каркасной последовательностью одной или нескольких близкородственных человеческих VH-последовательностей, после чего одну или несколько потенциально применимых гуманизирующих замен (или их комбинаций), определенных таким образом, можно ввести в VHH-последовательность (любым способом, известным per se), и полученные гуманизированные VHH-последовательности можно проверить на аффинность в отношении мишени, на стабильность, на легкость и уровень экспрессии и/или на другие нужные свойства. В связи с этим на основании данного раскрытия путем ограниченного использования метода проб и ошибок специалист может определить другие подходящие гуманизирующие замены (или их подходящие комбинации). Также на основании вышеописанного нанотело® (каркасные участки) можно гуманизировать частично или полностью.

В связи с этим некоторые предпочтительные нанотела® по изобретению представляют собой нанотела®, которые специфически связывают (как описано далее в данном описании) белок F hRSV и которые

i) представляют собой гуманизированный вариант аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5 (см. таблицу А-1); и/или

ii) имеют, по меньшей мере, 80% идентичность по аминокислотам с, по меньшей мере, одной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 5 (см. таблицу А-1) и/или с, по меньшей мере, одной из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 60-76, 138-141 и 146-157 (см. таблицу А-4), в которых в целях определения степени идентичности по аминокислотам аминокислотные остатки, которые образуют последовательности CDR, не принимают во внимание;

и в которых

iii) предпочтительно один или несколько аминокислотных остатков в позициях 11, 37, 44, 45, 47, 83, 84, 103, 104 и 108 согласно нумерации по Кабату выбраны из характерных остатков, указанных в таблицах А-3-А-8 в WO 08/020079.

Настоящее изобретение относится к ряду гуманизированных и/или аминокислотных последовательностей с оптимизированной последовательностью и/или нанотел®, которые особенно подходят для связывания белка F hRSV. Следовательно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению выбирают из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин.(Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению выбирают из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительно, аминокислотная последовательности и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательности и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76.

Настоящее изобретение также относится к ряду гуманизированных и/или с оптимизированной последовательностью аминокислотных последовательностей и/или нанотел®, которые выбраны из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® выбирают из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, Е) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

Аминокислотные последовательности и/или нанотела® по настоящему изобретению проявляют уменьшенную иммуногенность при введении человеку. Кроме того, аминокислотные последовательности и/или нанотела® по настоящему изобретению проявляют улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, как описано далее в данном описании) в отношении белка F hRSV, no сравнению с соответствующими им исходными аминокислотными последовательностями (как описано в заявке РСТ РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочек вируса, и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», зарегистрированной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

Во время получения нанотел по изобретению методом ОФ-ВЭЖХ на аминоконце обнаруживают высокий уровень пироглутамата (pGlu). Уровни pGlu свыше 15% детектируют после ферментации, и уровень pGlu постоянно возрастал при хранении во время исследований стабильности. Такая модификация ведет к неоднородности конечного продукта, и ее необходимо избежать. Поэтому регулирование/предупреждение образования pGlu критично для сохранения терапевтических белков с присущими им характеристиками. Специфические составы жидкостей и/или условия хранения необходимы для белков с N-концевой глутаминовой кислотой, причем таким образом минимизируется образование пироглутаминовой кислоты.

В настоящем изобретении возможность посттрансляционной модификации pGlu N-конца устраняют путем замены N-концевой глутаминовой кислоты (Е) [НООС-(СН2)2-белок] на аспарагиновую кислоту (D) [НООС-СН2-белок], что ведет к повышенной стабильности продукта. Соответственно, настоящее изобретение также относится к аминокислотным последовательностям и нанотелам, описанным выше, в которых глутаминовая кислота в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату) заменена на аспарагиновую кислоту.

Настоящее изобретение относится к ряду оптимизированных по последовательности аминокислотных последовательностей и/или нанотел®, которые проявляют повышенную стабильность при хранении во время исследований стабильности. Следовательно, в одном аспекте настоящее изобретение относится к аминокислотным последовательностям и/или нанотелам®, выбранным из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

1) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, в которой в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65, в которой в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76, в которой в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-153, в которой в позиции 1 Glu заменен на Asp.

Предпочтительно, аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 138. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 139. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 140. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 141. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность и/или нанотело® по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 154-157.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и при этом в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и при этом в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и при этом в позиции 1 Glu заменен на Asp.

В другом аспекте аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala18Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и при этом в позиции 1 Glu заменен на Asp.

Предпочтительно аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Argl05Gln и Glnl08Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Alal4Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu. Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

Аминокислотные последовательности и/или нанотела® по настоящему изобретению проявляют улучшенные свойства, такие как, например, улучшенная стабильность, уменьшенная иммуногенность, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, как описано далее в данном описании), улучшенной аффинности и/или улучшенной авидности в отношении белка F hRSV, и/или улучшенной эффективности и/или активности для нейтрализации hRSV по сравнению с соответствующими им аминокислотными последовательностями дикого типа (как описано в заявке РСТ РСТ/ЕР 2009/056975, озаглавленной «Аминокислотные последовательности, направленные на белки оболочки вируса, и включающие их полипептиды для лечения вирусных заболеваний», зарегистрированной Ablynx N.V. 5 июня 2009).

В более частном случае аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению могут связываться с белком F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, как описано далее в данном описании), предпочтительно, такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константной диссоциации (KD) 1000 нМ - 1 нМ или меньше, предпочтительно, 100 нМ - 1 нМ или меньше, предпочтительнее, 15 нМ - 1 нМ или даже 10 нМ - 1 нМ меньше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости kon от 104 М-1-1 до примерно 107 М-1-1, предпочтительно, от 105 М-1-1 до 107 M-1.c-1, предпочтительнее, примерно 106 M-1.c-1 или больше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости koff от 10-2 с-1 (t1/2=0,69 с) до 10-4 с-1 (что дает почти необратимый комплекс с t1/2 от нескольких суток), предпочтительно, от 10-3 с-1 до 10-4 с-1 или ниже.

Некоторые предпочтительные величины IC50 для связывания аминокислотных последовательностей по изобретению с белком с F hRSV станут понятнее из дальнейшего описания и приведенных примеров.

Анализы для определения IC50 включают конкурентные анализы, такие как конкурентный ELISA (например, конкуренции с Синагисом® или его фрагментом Fab), или, предпочтительнее, анализы нейтрализации, такие как анализ микронейтрализации, описанный Anderson et al. (1985, J. Clin. MicrobioL, 22: 1050-1052; 1988, J. ViroL, 62:4232-4238), модификации указанного анализа, такие как описанные в примере 6; или анализ уменьшения бляшкообразования, описанный, например, Johnson et al. (1997, J. Int. Dis., 176:1215-1224), и его модификации.

Например, в конкурентном анализе с фрагментом Fab Синагиса® аминокислотные последовательности по изобретению могут иметь величины IC50 от 1 нМ до 100 нМ, предпочтительно, от 10 нМ до 50 нМ или меньше.

Например, в анализе микронейтрализации на hRSV Long (таком, как описанный, например, в примере 6), аминокислотные последовательности по изобретению могут иметь величины IC50 от 100 нМ до 1000 нМ, предпочтительно, от 100 нМ до 500 нМ или меньше.

Аминокислотные последовательности и нанотела® по изобретению предпочтительно находятся в, по существу, изолированной форме (как определено в данном описании) или образуют часть полипептида по изобретению (также называемого в данном описании «полипептид по изобретению» или «конструкция по изобретению»; оба термина используются как взаимозаменяемые), которые могут включать или, по существу, состоять из одной или нескольких аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению, и которые могут, необязательно, также включать одну или несколько других аминокислотных последовательностей или нанотел® (все необязательно соединенные через один или несколько более подходящих линкеров).

Соответственно, в другом аспекте изобретение относится к полипептиду (также называемому в данном описании «полипептид по изобретению»), который включает или, по существу, состоит из одной или нескольких аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (или их подходящих фрагментов).

Способ создания/отбора и/или получения полипептида по изобретению, исходя из аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению, также в данном описании называется «форматированием» указанных аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению, и об аминокислотной последовательности или нанотеле® по изобретению, которые становятся частью полипептида по изобретению, говорят, что они «форматированы» или находятся «в формате» указанного полипептида по изобретению. Примеры путей, которыми аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению могут быть форматированы, и примеры таких форматов будут понятны для специалиста на основании данного раскрытия; и такие форматированные аминокислотные последовательности или нанотела® по изобретению образуют дополнительный аспект изобретения.

Например, и без ограничения, одну или несколько аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению можно использовать в качестве связывающей единицы в таком полипептиде, который может, необязательно, содержать одну или несколько дополнительных аминокислотных последовательностей, которые могут служить в качестве связывающей единицы (т.е. против того же или другого эпитопа на белке F hRSV и/или против одного или нескольких антигенов, белков или мишеней, отличных от белка F hRSV), так что получается моновалентный, поливалентный, полипаратопный или полиспецифический полипептид по изобретению, соответственно, все описанные в данном описании. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который является моновалентным полипептидом или конструкцией, включающей или, по существу, состоящей из аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению. Таким образом, настоящее изобретение также относится к полипептиду, который представляет собой поливалентный полипептид или конструкцию, такой как, например, двухвалентные или трехвалентные полипептид или конструкция. Настоящее изобретение также относится к полипептиду, который представляет собой полиспецифический полипептид или конструкцию, такой как, например, биспецифические или триспецифические полипептид или конструкция. Настоящее изобретение также относится к полипептиду, который представляет собой полипаратопный полипептид или конструкцию, такой как, например, бипаратропные или трипаратропные полипептид или конструкция.

Соответственно, в предпочтительном, но не ограничительном аспекте аминокислотные последовательностей или нанотела® по изобретению включают, по меньшей мере, одну дополнительную аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению, так что получается полипептид по изобретению, который включает, по меньшей мере, две, например, две, три, четыре, пять или больше аминокислотных последовательностей или нанотел®, где указанные аминокислотные последовательности или нанотела® могут необязательно соединяться через одну или несколько линкерных последовательностей (определенных в данном описании). Полипептиды по изобретению, которые включают две или больше аминокислотных последовательностей или нанотел®, из которых, по меньшей мере, одна, и предпочтительно, все представляют собой аминокислотные последовательности или нанотела® по изобретению, также будут называться в данном описании «поливалентными» полипептидами по изобретению, и аминокислотные последовательности или нанотела®, присутствующие в таких полипептидах, также будут называться в данном описании как находящиеся в «поливалентном формате». Например, «двухвалентный» полипептид по изобретению включает две аминокислотные последовательности и/или нанотела®, необязательно соединенные через линкерную последовательность, в то время как «трехвалентный» полипептид по изобретению включает три аминокислотные последовательности и/или нанотела®, необязательно соединенные через две линкерные последовательности, и т.д., при этом, по меньшей мере, одна из аминокислотных последовательностей и/или нанотел®, присутствующих в полипептиде, и другие, до всех, аминокислотные последовательности и/или нанотела®, присутствующие в полипептиде, представляет(ют) собой аминокислотные последовательности и/или нанотела® по изобретению.

В поливалентном полипептиде по изобретению две или больше аминокислотных последовательностей и/или нанотел® могут быть одинаковыми или различными и могут быть направлены против одного и того же антигена или антигенной детерминанты (например, против одной(их) и той(тех) же части(ей) или эпитопа(ов) или против различных частей или эпитопов) или, с другой стороны, могут быть направлены против различных антигенов или антигенных детерминант или их любой подходящей комбинации. Например, двухвалентный полипептид по изобретению может включать (а) две идентичные аминокислотные последовательности или нанотела®; (b) первые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против первой антигенной детерминанты белка или антигена, и вторые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против той же антигенной детерминанты указанного белка или антигена, которые отличаются от первых аминокислотной последовательности или нанотела®, (с) первые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против первой антигенной детерминанты белка или антигена, и вторые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против другой антигенной детерминанты указанного белка или антигена; или (d) первые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против первой антигенной детерминанты белка или антигена, и вторые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго белка или антигена (т.е. отличающегося от указанного первого антигена). Подобным образом, трехвалентный полипептид по изобретению может, например и без ограничения указанным, включать (а) три идентичные аминокислотные последовательности или нанотела®; (b) две идентичные аминокислотные последовательности или нанотела® против первой антигенной детерминанты антигена и третьи аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против другой антигенной детерминанты того же антигена; (с) две идентичные аминокислотные последовательности или нанотела® против первой антигенной детерминанты антигена и третьи аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена, отличающегося от указанного первого антигена; (d) первые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против первой антигенной детерминанты первого антигена, вторые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второй антигенной детерминанты указанного первого антигена, и третьи аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена, отличающегося от указанного первого антигена; или (е) первые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против первого антигена, вторые аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена, отличающегося от указанного первого антигена, и третьи аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против третьего антигена, отличающегося от указанных первого и второго антигена.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению (описанных выше).

В одном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают, мо меньшей мере, тяж из аминокислотных остатков, выбранный из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают два или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых один тяж выбран из следующего:

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяж из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один тяж выбран из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121 и

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

так что тяж из аминокислотных остатков, который соответствует одному из а) и b), должен всегда присутствовать в аминокислотной последовательности, которая образует часть поливалентного полипептида, и так что второй тяж из аминокислотных остатков выбран из одного из с), d), е) и f).

Предпочтительные поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из аминокислотных последовательностей, которые включают три или больше тяжей из аминокислотных остатков, из которых первый тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

второй тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и третий тяж из аминокислотных остатков выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В еще одном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из

a) SEQ ID NO: 102;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В еще одном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых CDR2 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 102 или

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и, по меньшей мере, один из CDR1 или CDR3 выбран из

- CDR1, выбранного из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

- CDR3, выбранного из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121 или

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительно, поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые, по существу, состоят из 4 каркасных участков (FR1-FR4, соответственно) и 3 гипервариабельных участков (CDR1-CDR3, соответственно), из которых

- CDR1 выбран из группы, состоящей из

a) SEQ ID NO: 98;

b) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR2 выбран из группы, состоящей из

c) SEQ ID NO: 102 или

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 102, при условии, что

i) указанный тяж из аминокислотных остатков имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 6 (позиции 54, определенной согласно нумерации по Кабату) и

ii) аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

и

- CDR3 выбран из группы, состоящей из

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В конкретном аспекте поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102.

В другом конкретном аспекте поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, один тяж из аминокислотных остатков (последовательность CDR), выбранный из

c) SEQ ID NO: 98;

d) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 98, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам;

e) SEQ ID NO: 121;

f) тяжа из аминокислотных остатков, который имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 121, при условии, что аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность, включающая указанный тяж из аминокислотных остатков, имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью, включающей указанный тяж из аминокислотных остатков без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, два тяжа из аминокислотных остатков (последовательности CDR), из которых один тяж выбран из группы, состоящей из тяжей из аминокислотных остатков, определенных в с) и d), и из которых другой тяж выбран из группы, состоящей из тяжей из аминокислотных остатков, определенных в е) и f).

В конкретном аспекте поливалентные (такие как двухвалентные или трехвалентные) полипептиды могут включать или, по существу, состоять из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) или, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 102 и, по меньшей мере, один тяж из аминокислотных остатков (последовательность CDR), выбранных из SEQ ID NO: 98 и SEQ ID NO: 121; или аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают, по меньшей мере, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 102 и SEQ ID NO: 121.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению (описанных выше). В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению (описанных выше). В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению (описанных выше).

Изобретение также относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или пан отел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

И) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 65 и 76.

Изобретение также относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105; так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- A1al4Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68,75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

И) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 65 и 76.

Изобретение также относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105; так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Argl05Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

Изобретение также относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, описанному выше, в котором глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранной из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена па аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu. Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой двухвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой двухвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68,75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой двухвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из SEQ ID NO: 65 и 76.

Изобретение также относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой двухвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, двух идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105; так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из двух аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

Изобретение также относится к двухвалентному полипептиду, описанному выше, в котором глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении изобретение также относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gm108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к поливалентному, предпочтительно, двухвалентному или трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к двухвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68,75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 65 и 76.

Изобретение также относится к трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный полипептид и включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, трех идентичных аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

1) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105; так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из, по меньшей мере, трех аминокислотных последовательностей или нанотел®, выбранных из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей или нанотел®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

Предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 62. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 65. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 76. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 75. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 147. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 149. Другой предпочтительный поливалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из трех аминокислотных последовательностей или нанотел® с SEQ ID NO: 153.

Изобретение также относится к трехвалентному полипептиду, описанному выше, в котором глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении изобретение также относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, выбранных из одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательности или нанотела®, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 77-79 и 158;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 77-79 и 158, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и/или глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 77-79 и 158;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 77-79 и 158, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 77-79 и 158.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 78 и 79;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 78 и 79, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и/или глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 78 и 79; или

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 78 и 79, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78, аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 78. Другие предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 79.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 159-161;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 159-161, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 159-161.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 159-161;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 159-161, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 159-161;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 159-161, при условии, что

i) аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда полипептид имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 159, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 160, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 161, аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, предпочтительно имеют аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительные трехвалентные полипептиды по изобретению включают или, по существу, состоят из одного из SEQ ID NO: 159-161.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu:

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 77. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 78. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 79. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 158-161.

Во время получения полипептидов по изобретению методом ОФ-ВЭЖХ на аминоконце обнаруживают высокий уровень пироглутамата (pGlu). Уровни pGlu свыше 15% детектируют после ферментации, и уровень pGlu постоянно возрастает при хранении во время исследований стабильности. Такая модификация ведет к неоднородности конечного продукта, и ее необходимо избежать. Поэтому регулирование/предупреждение образования pGlu критично для сохранения терапевтических белков с присущими им характеристиками. Специфические составы жидкостей и/или условия хранения необходимы для белков с N-концевой глутаминовой кислотой, причем таким образом минимизируется образование пироглутаминовой кислоты.

В настоящем изобретении возможность посттрансляционной модификации pGlu N-конца устраняют путем замены N-концевой глутаминовой кислоты (Е) [НООС-(СН2)2--белок] на аспарагиновую кислоту (D) [НООС-СН2-белок], что ведет к повышенной стабильности продукта. Соответственно, настоящее изобретение также относится к полипептидам, описанным выше, в которых глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

Настоящее изобретение относится к ряду полипептидов, оптимизированных по последовательности, которые проявляют повышенную стабильность при хранении во время исследований стабильности. Соответственно, изобретение относится к трехвалентному полипептиду, описанному выше, в котором первая аминокислота (глутаминовая кислота) заменена на аспарагиновую кислоту.

В одном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, выбранному из следующих полипептидов:

a) SEQ ID NO: 142-145 и 162-165;

b) полипептиды, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одним из SEQ ID NO: 142-145 и 162-165, при условии, что

i) первая аминокислотная последовательность или нанотело®, содержащиеся в указанном полипептиде, имеют аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1; и

ii) полипептид связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или полипептид имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с полипептидом без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам.

Предпочтительный трехвалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 142. Другой предпочтительный трехвалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 143. Другой предпочтительный трехвалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 144. Другой предпочтительный трехвалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 145. Другой предпочтительный трехвалентный полипептид по изобретению включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 162-165.

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 77, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 78, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 79, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 158, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 159, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 160, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту(Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 161, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту(Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту(Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту(Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному, полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту (Glu1Asp).

В другом предпочтительном аспекте изобретение относится к трехвалентному полипептиду, включающему или, по существу, состоящему из SEQ ID NO: 53, в которой, по меньшей мере, в одном (предпочтительно, в двух, предпочтительнее, во всех трех) нанотеле®/нанотелах®, которое(ые) образует(ют) часть SEQ ID NO: 53, мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln.

В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 142. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 143. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 144. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из аминокислотной последовательности SEQ ID NO:

145. В другом предпочтительном аспекте полипептид по изобретению, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 162-165.

Полипептиды с аминокислотными последовательностями и последовательности полипептидов, описанные выше, проявляют выгодные для использования в качестве профилактических, терапевтических и/или фармакологически активных средств свойства, такие как, например, улучшенная стабильность, меньшая иммуногенность, улучшенные характеристики связывания (соответственно измеренные и/или выраженные в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, как описано далее в данном описании), улучшенную аффинность и/или улучшенную авидность в отношении белка F hRSV и/или улучшенную эффективность и/или улучшенную активность для нейтрализации F hRSV.

В более частном случае такие полипептиды и соединения по изобретению могут связываться с белком F hRSV с аффинностью (соответственно измеренной и/или выраженной в виде величины KD (действительной или кажущейся), величины KA (действительной или кажущейся), константы скорости kon и/или константы скорости koff или, с другой стороны, величины IC50, как описано далее в данном описании), предпочтительно, такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константной диссоциации (KD) 100 нМ - 0,1 нМ или меньше, предпочтительно, 10 нМ - 0,1 нМ или меньше, предпочтительнее, 1 нМ - 0,1 нМ или меньше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости kon от 104 М-1-1 до примерно 107 М-1-1, предпочтительно, от 105 М-1-1 до 107 М-1-1, предпочтительнее, примерно 106 М-1-1 или больше;

и/или такой, что они

- связываются с белком с F hRSV с константой скорости koff от 10-2 с-1 (t1/2=0,69 с) до 10-4 с-1 (что дает почти необратимый комплекс с t1/2 несколько суток), предпочтительно, от 10-3 с-1 до 10-4 с-1, предпочтительнее, от 5×10-3 с-1 до 10-4 с-1, или ниже.

Некоторые предпочтительные величины IC50 для связывания полипептидов по изобретению с белком F hRSV станут понятнее из дальнейшего описания и примеров в данном описании.

Анализы для определения IC50 включают конкурентные анализы, такие как конкурентный ELISA (например, конкуренции с Синагисом® или его фрагментом Fab), или, предпочтительнее, анализы нейтрализации, такие как анализ микронейтрализации, описанный Anderson et al. (1985, J. Clin. Microbiol., 22:1050-1052), модификации указанного анализа, такие как описанные в примере 6; или анализ уменьшения бляшкообразования, описанный Johnson et al. (1997, J. Int. Dis., 176:1215-1224), и его модификации.

Например, в конкурентном анализе с Синагисом® полипептиды по изобретению могут иметь величины IC50 от 1 нМ до 100 нМ, предпочтительно, от 10 нМ до 50 нМ или меньше.

Например, в анализе микронейтрализации штамма hRSV Long (таком, как описанный, например, в примере 6), полипептиды по изобретению могут иметь величины IC50 от 10 пМ до 1000 пМ, предпочтительно, от 10 пМ до 250 пМ, предпочтительнее, от 50 пМ до 200 пМ, или меньше. В анализе микронейтрализации полипептиды по изобретению могут иметь величины IC50, которые, по меньшей мере, такие же, и предпочтительно, лучше, по меньшей мере, в десять раз лучше, предпочтительно, в двадцать раз лучше, предпочтительнее, в пятьдесят раз лучше, даже предпочтительнее, в шестьдесят, семьдесят, восемьдесят или больше раз лучше при сравнении с величиной IC50, полученной с Синагисом®.

Изобретение также относится к моновалентному полипептиду или конструкции (также называемым «моновалентным полипептидом по изобретению» или «моновалентной конструкцией по изобретению»), включающим или, по существу, состоящим из одной аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению. Предпочтительные моновалентные конструкции по изобретению включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 60-76, такой как одна из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, такой как, например, SEQ ID NO: 65 или 75; одной из SEQ ID NO: 138-141; одной из SEQ ID NO: 146-153 или одной из SEQ ID NO: 154-157. Такие моновалентные конструкции, а также аминокислотные последовательности или нанотела® по изобретению можно использовать для получения полипептида по изобретению, такого как, например, поливалентные полипептиды по изобретению, описанные выше.

Полипептиды по изобретению вообще можно получить способом, который включает, по меньшей мере, стадию соответственного соединения аминокислотной последовательности, нанотела® или моновалентной конструкции по изобретению с одной или несколькими другими аминокислотными последовательностями, нанотелами® или моновалентными конструкциями по изобретению, необязательно, через один или несколько подходящих линкеров, так, что получают полипептид по изобретению. Полипептиды по изобретению также можно получить способом, который вообще включает, по меньшей мере, стадии получения нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по изобретению, экспрессии указанной нуклеиновой кислоты подходящим способом и извлечение экспрессированного полипептида по изобретению. Такие способы можно осуществлять приемами, известными per se, которые будут ясны для специалиста, например, на базе способов и методов, описанных в данном описании далее.

Способ получения поливалентных, полипаратопных и/или полиспецифических аминокислот или полипептидов по изобретению может включать, по меньшей мере, стадии соединения двух или большего числа моновалентных аминокислотных последовательностей или моновалентных конструкций по изобретению и, например, одного или нескольких линкеров подходящим образом. Моновалентные конструкции (и линкеры) можно соединять способом, известным в технике, а также описанным в данном описании далее. Предпочтительные методы включают соединение нуклеотидных последовательностей, которые кодируют моновалентные конструкции (и линкеры), для получения генетической конструкции, которая экспрессирует поливалентные, полипаратопные и/или полиспецифические аминокислотную последовательность или полипептид. Методы соединения аминокислотных последовательностей или нуклеотидных последовательностей будут ясны для специалиста, и снова даются ссылки на стандартные руководства, такие как Sambrook et al. и Ausubel et al., указанные выше, а также на примеры, приведенные ниже.

Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению аминокислотной последовательности, нанотела® или моновалентной конструкции по изобретению при получении поливалентного полипептида по изобретению. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности, нанотела® или моновалентной конструкции по изобретению с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, нанотелом® или моновалентной конструкцией по изобретению, необязательно, через один или несколько линкеров. Кроме того, аминокислотную последовательность, нанотело® или моновалентную конструкцию используют в качестве связывающего домена или связывающей единицы при предоставлении и/или получении поливалентного полипептида, включающего две (например, в двухвалентном полипептиде), три (например, в трехвалентном полипептиде) или больше (например, в поливалентном полипептиде) связывающих единиц. В этом отношении аминокислотную последовательность, нанотело® или моновалентную конструкцию по изобретению можно использовать в качестве связывающего домена или связывающей единицы при предоставлении и/или получении поливалентного полипептида, и предпочтительно, двухвалентного или трехвалентного полипептида по изобретению, включающего две, три или больше связывающих единиц. Предпочтительно связывающие домены или связывающие единицы соединяют через линкер, так что поливалентный полипептид, предпочтительно, показывает внутримолекулярное связывание по сравнению с межмолекулярным связыванием. Также предпочтительно поливалентный полипептид может одновременно связываться с двумя или всеми тремя сайтами связывания на белке F hRSV.

Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению (описанных выше) при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности или нанотела® по изобретению с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью или нанотелом® по изобретению, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76; или

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

и) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит, из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, выбранной из описанных выше, в которой аминокислота (глутаминовая кислота) в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении поливалентного полипептида. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 138. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 139. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 140. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 141. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении поливалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 154-157.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении поливалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении поливалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении поливалентного полипептида.

Настоящее изобретение также относится к применению двух аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (описанных выше) при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению, необязательно, через линкер.

Соответственно, в предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных), аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO; 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через линкер.

В предпочтительном аспекте две аминокислотные последовательности, используемые при получении двухвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через линкер.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62,65. 67, 68, 75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через линкер.

В предпочтительном аспекте две аминокислотные последовательности, используемые при получении двухвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через линкер.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазмонного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через линкер.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности, используемые при получении двухвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности, используемые при получении двухвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению двух (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, выбранной из описанных выше, в которой аминокислота (глутаминовая кислота) в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении двухвалентного полипептида. Способ получения двухвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении двухвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 138. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении двухвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 139. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении двухвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 140. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении двухвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 141. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении двухвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 154-157.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении двухвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три

или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении двухвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении двухвалентного полипептида.

Настоящее изобретение также относится к применению трех аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению (описанных выше) при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение аминокислотных последовательностей и/или нанотел® по изобретению, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 60-76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с SEQ ID NO: 60-76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанная позиция определена согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте три аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 60-76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68,75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через один или два линкера.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68,75 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте три аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 62, 65, 67, 68, 75 и 76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и/или аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через один или два линкера.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 65 и 76;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 65 и 76, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 54, глутамин (Gin, Q) в позиции 105, лейцин (Leu, L) в позиции 78 и аргинин (Arg, R) в позиции 83 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанных аминокислотных последовательностей друг с другом, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте три аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 65. В другом предпочтительном аспекте три аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 76.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105 (указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или два линкера.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, выбранных из следующего:

a) SEQ ID NO: 146-149 и 151-153;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет пролин (Pro, P) в позиции 14, аргинин (Arg, R) в позиции 19, лейцин (Leu, L) в позиции 20 и/или лейцин (Leu, L) в позиции 108 и, кроме того, аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и/или глутамин (Gin, Q) в позиции 105, так что когда аминокислотная последовательность имеет не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с

- SEQ ID NO: 146, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 147, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 148, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 149, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83, глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85 и глутамин (Gin, Q) в позиции 105;

- SEQ ID NO: 151, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83;

- SEQ ID NO: 152, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85;

- SEQ ID NO: 153, аминокислотная последовательность предпочтительно имеет аргинин (Arg, R) в позиции 83 и глутаминовую кислоту (Glu, E) в позиции 85

(указанные позиции определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, необязательно, через один или два линкера.

В предпочтительном аспекте аминокислотные последовательности, используемые при получении трехвалентного полипептида, включают или, по существу, состоят из одной из SEQ ID NO: 146-149 и 151-153.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению трех (предпочтительно, идентичных) аминокислотных последовательностей, которые включают или, по существу, состоят из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Gly54Asp;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 62 при получении SEQ ID NO: 77. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 62 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 62 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 65 при получении SEQ ID NO: 78. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 65 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 65 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 76 при получении SEQ ID NO: 79. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 76 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 76 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 75 при получении SEQ ID NO: 158. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 75 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 75 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 147 при получении SEQ ID NO: 159. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 147 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 147 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 149 при получении SEQ ID NO: 160. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 149 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 149 через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 153 при получении SEQ ID NO: 161. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 153 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями с SEQ ID NO: 153 через линкер 15GS (SEQ ID NO:128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, выбранной из описанных выше, в которой аминокислота (глутаминовая кислота) в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В этом отношении настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, выбранной из следующего:

a) SEQ ID NO: 138-141 и 154-157;

b) аминокислотные последовательности, которые имеют не более 3, предпочтительно, не более 2, предпочтительнее, не более 1 различия по аминокислотам с одной из SEQ ID NO: 138-141 и 154-157, при условии, что

i) аминокислотная последовательность имеет аспарагиновую кислоту (Asp, D) в позиции 1 (указанная позиция определены согласно нумерации по Кабату); и

ii) аминокислотная последовательность связывает белок F hRSV с одинаковой, примерно одинаковой или более высокой аффинностью (указанную аффинность измеряют методом поверхностного плазменного резонанса), и/или аминокислотная последовательность имеет одинаковую, примерно одинаковую или более высокую активность (как определено в данном описании) при сравнении с аминокислотной последовательностью без 3, 2 или 1 различия по аминокислотам,

при получении трехвалентного полипептида. Способ получения трехвалентного полипептида будет включать соединение указанной аминокислотной последовательности с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями, необязательно, через один или несколько линкеров.

В предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении трехвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 138. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении трехвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 139. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении трехвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 140. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении трехвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 141. В другом предпочтительном аспекте аминокислотная последовательность, используемая при получении трехвалентного полипептида, включает или, по существу, состоит из одной из SEQ ID NO: 154-157.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 62, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 65, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 76, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 75, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 147, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 149, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению при получении трехвалентного полипептида аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 153, в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь, девять, десять, одиннадцать или двенадцать) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Glu44Gly, Ala74Ser, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть, семь, восемь или девять) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три или четыре) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы один или несколько (например, два, три, четыре, пять, шесть или семь) аминокислотных остатков, выбранных из следующего: Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu, и в которой глутаминовая кислота в позиции 1 заменена на аспарагиновую кислоту, при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению аминокислотной последовательности, которая включает или, по существу, состоит из SEQ ID NO: 5, в которой мутированы следующие аминокислотные остатки:

- Glu1Asp;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Val5Leu, Ala14Pro, Glu44Gly, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln, Gln108Leu и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Gly78Leu, Ala83Arg, Asp85Glu, Arg105Gln и Gly54Asp;

- Glu1Asp и Gly54Asp;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu и Gln108Leu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Ala83Arg;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Asp85Glu;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg и Arg105Gln;

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Asp85Glu и Arg105Gln; или

- Glu1Asp, Ala14Pro, Ser19Arg, Ile20Leu, Gln108Leu, Ala83Arg, Asp85Glu и Arg105Gln,

при получении трехвалентного полипептида.

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 138 при получении SEQ ID NO: 142. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 138 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 5) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 139 при получении SEQ ID NO: 143. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 139 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 62) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 140 при получении SEQ ID NO: 144. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 140 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 65) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 154 при получении SEQ ID NO: 162. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO; 154 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 75) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 155 при получении SEQ ID NO: 163. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 155 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 147) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 156 при получении SEQ ID NO: 164. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 156 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 149) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

В другом предпочтительном аспекте настоящее изобретение относится к применению SEQ ID NO: 157 при получении SEQ ID NO: 165. Способ получения поливалентного полипептида будет включать соединение аминокислотной последовательности с SEQ ID NO: 157 с, по меньшей мере, двумя другими аминокислотными последовательностями (предпочтительно, SEQ ID NO: 153) через линкер 15GS (SEQ ID NO: 128).

Полипептиды по изобретению, которые содержат, по меньшей мере, две аминокислотные последовательности и/или нанотела®, из которых, по меньшей мере, одна аминокислотная последовательность или нанотело® направлены против первого антигена (т.е. против белка F hRSV) и, по меньшей мере, одна аминокислотная последовательность или нанотело® направлены против второго антигена (т.е. отличающегося от белка F hRSV), также будут назваться «полиспецифическими» полипептидами по изобретению, и аминокислотные последовательности или нанотела®, присутствующие в таких полипептидах, также будут назваться в данном описании как находящиеся в «полиспецифическом формате». Так, например, «биспецифический» полипептид по изобретению представляет собой полипептид, который включает, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению, направленные против первого антигена (т.е. белка F hRSV), и, по меньшей мере, одну другую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена (т.е. отличающегося от белка F hRSV), в то время как «триспецифический» полипептид по изобретению представляет собой полипептид, который включает, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению, направленные против первого антигена (т.е. белка F hRSV), по меньшей мере, одну другую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена (т.е. отличающегося от белка F hRSV), и, по меньшей мере, одну другую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против третьего антигена (т.е. отличающегося как от белка F hRSV, так и от второго антигена); и т.д.

Соответственно, в своей самой простой форме биспецифический полипептид по изобретению представляет собой двухвалентный полипептид по изобретению (как определено в данном описании), включающий первую аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению, направленные против белка F hRSV, и вторую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена, в котором указанные первая и вторая аминокислотная последовательность или нанотело® могут необязательно соединяться через линкерную последовательность (как определено в данном описании); в то время как триспецифический полипептид по изобретению в своей самой простой форме представляет собой трехвалентный полипептид по изобретению (как определено в данном описании), включающий первую аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению, направленные против белка F hRSV, вторую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против второго антигена, и третью аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против третьего антигена, в котором указанные первая, вторая и третья аминокислотная последовательность или нанотело® могут соединяться, необязательно, через одну или несколько, и в частности, две, линкерные последовательности.

В конкретном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный биспецифический полипептид. Трехвалентный биспецифический полипептид по изобретению в своей самой простой форме может представлять собой трехвалентный полипептид по изобретению (как определено в данном описании), включающий две идентичные аминокислотные последовательности или нанотела® против белка F hRSV и третью аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против другого антигена, в котором указанные первая, вторая и третья аминокислотная последовательность или нанотело® могут соединяться, необязательно, через одну или несколько, и в частности, две, линкерные последовательности.

Предпочтительный, но не ограничительный пример полиспецифического полипептида по изобретению включает, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению и, по меньшей мере, одно нанотело®, которое обеспечивает повышенное время полужизни. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные примеры таких нанотел® включают нанотела®, направленные против сывороточных белков, таких как человеческий сывороточный альбумин, тироксинсвязывающий белок, (человеческий) трансферрин, фибриноген, иммуноглобулин, такой как IgG, IgE или IgM, или один из других сывороточных белков, перечисленных в WO 04/003019.

Например, в экспериментах на мышах могут быть использованы нанотела® против мышиного сывороточного альбумина (MSA), в то время как для фармацевтического применения можно использовать нанотела®, направленные против человеческого сывороточного альбумина.

Другое воплощение настоящего изобретения представляет собой полипептидную конструкцию, описанную выше, при этом указанный, по меньшей мере, один (человеческий) сывороточный белок представляет собой любой белок из (человеческого) сывороточного альбумина, (человеческого) сывороточного иммуноглобулина, (человеческого) тироксинсвязывающего белка, (человеческого) трансферрина, (человеческого) фибриногена, и т.д.

Соответственно, в конкретном аспекте полипептид по изобретению представляет собой биспецифический полипептид, включающий первую аминокислотную последовательность или нанотело® по изобретению против белка F hRSV и вторую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против (человеческого) сывороточного альбумина, в котором указанные первая и вторая аминокислотная последовательность или нанотело® могут соединяться необязательно через линкерную последовательность.

В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению представляет собой трехвалентный биспецифический полипептид, включающий две идентичные аминокислотные последовательности или нанотела® по изобретению против белка F hRSV и третью аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против (человеческого) сывороточного альбумина, в котором указанные первая, вторая и третья аминокислотная последовательность или нанотело® могут соединяться необязательно через одну или несколько, и в частности две, линкерные последовательности.

В другом конкретном аспекте полипептид по изобретению представляет собой четырехвалентный биспецифический полипептид, включающий три идентичные аминокислотные последовательности или нанотела® по изобретению против белка F hRSV и четвертую аминокислотную последовательность или нанотело®, направленные против (человеческого) сывороточного альбумина, в котором указанные первая, вторая, третья и четвертая аминокислотная последовательность или нанотело® могут соединяться необязательно через одну или несколько, и в частности две или три, линкерные последовательности.

Согласно конкретному, но не ограничительному аспекту изобретения полипептиды по изобретению содержат, кроме одной или нескольких аминокислотных последовательностей или нанотел® по изобретению, по меньшей мере, одно нанотело® против человеческого сывороточного альбумина. Такие нанотела® против человеческого сывороточного альбумина могут быть такими, какие в общих чертах описаны в заявках Ablynx N.V., цитированных выше (см., например, WO 04/062551). В частности, некоторые предпочтительные нанотела®, обеспечивающие повышенное время полужизни, и которые можно использовать в полипептидах по изобретению, включают нанотела® ALB-1-ALB-10, раскрытые в WO 06/122787 (см. таблицы II и III), из которых особенно предпочтительны ALB-8 (SEQ ID NO: 62 в WO 06/122787).

В другом аспекте изобретение относится к соединению или конструкции, и в частности, белку или полипептиду (также называемым в данном описании как «соединение по изобретению»), которые включают или, по существу, состоят из одной или нескольких аминокислотных последовательностей, нанотел® и/или полипептидов по изобретению (или их подходящих фрагментов) и, необязательно, также включают одну или несколько других групп, остатков, частиц или связывающих единиц. Как будет понятно специалисту из дальнейшего раскрытия, такие другие группы, остатки, частицы, связывающие единицы или аминокислотные последовательности могут, или не могут, придавать дополнительную функциональность аминокислотной последовательности, нанотелу® и/или полипептиду по изобретению (и/или соединению, конструкции или полипептиду, в которых присутствуют) и могут, или не могут, модифицировать свойства аминокислотной последовательности, нанотела® и/или полипептида по изобретению.

Такие группы, остатки, частицы или связывающие единицы могут представлять собой, например, химические группы, остатки, частицы, которые сами по себе могут, или не могут быть биологически и/или фармакологически активными. Например, и без ограничения, такие группы могут соединяться с одной или несколькими аминокислотными последовательностями, нанотелами® и/или полипептидами по изобретению, так что образуется «производное» аминокислотной последовательности, нанотела® и/или полипептида по изобретению, как описано далее в данном описании.

Также в объем настоящего изобретения входят соединения или конструкции, которые включают или, по существу, состоят из одного или нескольких производных, как описано в данном описании, и, необязательно, также включают одну или несколько других групп, остатков, частиц или связывающих единиц, соединенных необязательно через один или несколько линкеров. Предпочтительно, указанные одна или несколько других групп, остатков, частиц или связывающих единиц представляют собой аминокислотные последовательности.

В соединениях, конструкциях или полипептидах, описанных выше, одна или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® и/или полипептидов по изобретению и одна или несколько групп, остатков, частиц или связывающих единиц могут быть соединены непосредственно друг с другом и/или через один или несколько подходящих линкеров или спейсеров. Например, когда одна или несколько групп, остатков, частиц или связывающих единиц представляют собой аминокислотные последовательности, линкеры также могут представлять собой аминокислотные последовательности, так что полученное соединение, конструкция или полипептид представляет собой слитый белок или слитый полипептид.

Соединение или конструкция по изобретению может включать аминокислотную последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению, которые слиты по своему аминоконцу, по своему карбоксиконцу или как по своему аминоконцу, так и по своему карбоксиконцу с, по меньшей мере, одной другой аминокислотной последовательностью, т.е. так, что получается слитый белок, включающий указанную аминокислотную последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению и одну или несколько других аминокислотных последовательностей.

Одна или несколько других аминокислотных последовательностей могут представлять собой любые подходящие и/или нужные аминокислотные последовательности. Другие аминокислотные последовательности могут, или не могут, заменять, изменять или иначе влиять на (биологические) свойства аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению и могут, или не могут, не добавлять дополнительную функциональность аминокислотной последовательности, нанотелу® или полипептиду по изобретению. Предпочтительно другая аминокислотная последовательность является такой, что она придает одно или больше нужных свойств или функциональностей аминокислотной последовательности, нанотелу® или полипептиду по изобретению.

Примеры таких аминокислотных последовательностей будут ясны для специалиста и могут, вообще, включать все аминокислотные последовательности, которые используются при слиянии пептидов на основе обычных антител и их фрагментов (включая, но не ограничиваясь указанным, ScFv и однодоменные антитела). Дается ссылка на обзор Holliger and Hadson, Nature Biotechnology, 23, 9,1126-1136 (2005).

Например, такая аминокислотная последовательность может представлять собой аминокислотную последовательность, которая повышает время полужизни, растворимость или абсорбцию, уменьшает иммуногенность или токсичность, или ослабляет нежелательные побочные действия и/или придает другие полезные свойства соединению и/или устраняет или ослабляет нежелательные свойства соединений по изобретению при сравнении с аминокислотной последовательностью, нанотелом® или полипептидом по изобретению самими по себе. Некоторыми неограничительными примерами таких аминокислотных последовательностей являются сывороточные белки, такие как человеческий сывороточный белок (см., например, WO 00/27435) или гаптеновые молекулы (например, гаптены, которые узнаются антителами в кровотоке, см., например, WO 98/22141).

Другая аминокислотная последовательность также может представлять собой второй сайт связывания, который может быть направлен против любого нужного белка, полипептида, антигена, антигенной детерминанты или эпитопа (включая, но не ограничиваясь указанным, те же белок, полипептид, антиген, антигенную детерминанту или эпитоп, на которые направлены аминокислотная последовательность или нанотело® по изобретению, или другие белок, полипептид, антиген, антигенную детерминанту или эпитоп). Например, другая аминокислотная последовательность может предоставить второй сайт связывания, который направлен на сывороточный белок (такой как, например, человеческий сывороточный альбумин или другой сывороточный белок, такой как IgG), с тем, чтобы обеспечить повышенное время полужизни в сыворотке. Такие аминокислотные последовательности включают, например, нанотела®, а также небольшие пептиды и связывающие белки, описанные в WO 91/01743, WO 01/45746 и WO 02/076489, и dAb, описанные в WO 03/002609 WO 04/00319. Также можно сослаться на Harmsen et al., Vaccine, 23(41), 4926-42, 2005, также на ЕР 0368684, а также на WO 08/028977, WO 08/043821, WO 08/043822, Albynx N.V., и на WO 08/06280.

Такие аминокислотные последовательности могут быть направлены, в частности, против сывороточного альбумина (и в более частном случае, человеческого сывороточного альбумина) и/или против IgG (и в более частном случае, человеческого IgG). Например, такие аминокислотные последовательности могут представлять собой аминокислотные последовательности, которые направлены против (человеческого) сывороточного альбумина, и аминокислотные последовательности, которые могут связываться с аминокислотными остатками на (человеческом) сывороточном альбумине, которые не вовлечены в связывание сывороточного альбумина с FcRn (см., например, WO 06/0122787), и/или аминокислотные последовательности, которые способны связываться с аминокислотными остатками на сывороточном альбумине, которые не составляют часть домена III сывороточного альбумина (вновь см., например, WO 06/0122787);

аминокислотные последовательности, которые имеют или могут обеспечить повышенное время полужизни (см., например, WO 08/028977); аминокислотные последовательности против человеческого сывороточного альбумина, которые являются перекрестно реагирующими с сывороточным альбумином от, по меньшей мере, одного вида млекопитающих, и в частности, от, по меньшей мере, одного вида приматов (такого как, без ограничения, обезьяны рода макак (такие как, в частности, собакоголовые обезьяны (Масаса fascicularis) и/или макаки-резуса (Масаса mulatta)) и павианов (Papio ursinus), вновь ссылка дается на WO 08/028977); аминокислотные последовательности, которые могут связываться с сывороточным альбумином независимо от рН (см., например, WO 08/043821), и/или аминокислотные последовательности, которые представляют собой условные связующие (см., например, WO 08/043822).

Согласно другому воплощению, одна или несколько других аминокислотных последовательностей могут включать одну или несколько частей, фрагментов или доменов обычных 4-цепочечных антител (и в частности, человеческих антител) и/или тяжелоцепочечных антител. Например, хотя, как правило, менее предпочтительно, аминокислотная последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению могут соединяться с обычным (предпочтительно, человеческим) VH- или VL-домсном или с природным или синтетическим аналогом VH- или VL-домена, вновь необязательно через линкерную последовательность (включая, но не ограничиваясь указанным, другие (одно)доменные антитела, такие как dAb, описанные Ward et al.).

Соответственно, в соединении или конструкции по изобретению указанные одна или несколько групп, остатков, частиц или связывающих единиц могут быть выбраны из группы, состоящей из доменных антител, аминокислотных последовательностей, которые подходят для использования в качестве доменных антител, однодоменных антител, аминокислотных последовательностей, которые подходят для использования в качестве однодоменных антител, «dAb», аминокислотных последовательностей, которые подходят для использования в качестве dAb, или нанотел®.

В одном конкретном аспекте изобретения соединение, конструкция или полипептид по изобретению, включающие, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению, могут иметь повышенное время полужизни при сравнении с соответствующими аминокислотной последовательностью, нанотелом® или полипептидом по изобретению. Некоторые предпочтительные, но не ограничительные примеры таких соединений, конструкций и полипептидов станут понятны для специалиста из дальнейшего раскрытия и, например, включают аминокислотные последовательности, нанотела® или полипептиды по изобретению, которые химически модифицированы для повышения их времени полужизни (например, путем пегилирования); или соединения по изобретению, которые включают, по меньшей мере, одну аминокислотную последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению, которые соединены с, по меньшей мере, одной частицей (и в частности, по меньшей мере, одной аминокислотной последовательностью), которая повышает время полужизни аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению. Примеры таких соединений по изобретению, которые включают такие удлиняющие время полужизни частицы, станут понятны для специалиста из дальнейшего раскрытия и, например, включают без ограничения, соединения, в которых одна или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® или полипептидов по изобретению соответственно соединены с одним или несколькими сывороточными белками или их фрагментами (такими как сывороточный альбумин или его подходящие фрагменты) или с одной или несколькими связывающими единицами, которые могут связываться с сывороточными белками (такими как, например, нанотела® или (одно)доменные антитела, которые могут связываться с сывороточными белками, такими как сывороточный альбумин, сывороточные иммуноглобулины, такие как IgG, или трансферрин); соединения, в которых аминокислотная последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению соединены с белком Fc (таким как человеческий Fc) или его подходящими частью или фрагментом; или соединения, в которых одна или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® или полипептидов по изобретению соответственно соединены с одним или несколькими небольшими белками или пептидами, которые связываться с сывороточными белками (такими как, без ограничения, белки и пептиды, описанные в WO 91/01743, WO 01/45746, WO 02/076489).

По меньшей мере, одна аминокислотная последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению также может соединяться с одним или несколькими (предпочтительно, человеческими) CH1-, CH2- и/или CH3-доменами, необязательно, через линкерную последовательность. Например, аминокислотная последовательность, нанотело® или полипептид по изобретению, соединенные с подходящим CH1-доменом, могут, например, использоваться - вместе с подходящими легкими цепями - для создания фрагментов/структур антител, аналогичных обычным фрагментам F(ab')2, но в которых один или (в случае фрагмента F(ab')2) один или оба VH-домена заменены аминокислотной последовательностью, нанотелом® или полипептидом по изобретению. Также две аминокислотные последовательности или два нанотела® по изобретению могут соединяться с CH3-доменом (необязательно через линкер) с предоставлением конструкции с повышенным временем полужизни in vivo.

Согласно одному конкретному аспекту, одна или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® или полипептидов по изобретению могут быть соединены (необязательно через подходящий линкер или шарнирный участок) с одним или несколькими константными доменами (например, 2 или 3 константными доменами, которые можно использовать как часть/для образования части Fc), с частью Fc и/или одной или несколькими частями, фрагментами или доменами антител, которые придают одну или несколько эффекторных функций аминокислотной последовательности, нанотелу® или полипептиду по изобретению, и/или могут придать способность связываться с одним или несколькими рецепторами Fc. Например, для такой цели, и без ограничения указанным, одна или несколько других аминокислотных последовательностей могут включать один или несколько CH2- и/или CH3-доменов антитела, таких как из тяжелоцепочечного антитела (как описано в данном описании), и предпочтительнее, из обычного человеческого 4-цепочечного антитела; и/или могут образовывать (часть) участка Fc, например, из IgG (например, из IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4), из IgE или из другого человеческого Ig, такого как IgA, IgD или IgM. Например, в WO 94/04678 описываются тяжелоцепочечные антитела, включающие VHH-домен верблюжьих или его гуманизированное производное (т.е. нанотело®), в которых CH2-и/или CH3-домен верблюжьих заменен человеческими CH2- и CH3-доменами, с тем, чтобы получить иммуноглобулин, который состоит из 2 тяжелых цепей, каждая из которых включает нанотело® и человеческие Сн2- и Сн3-домены (но не CH1 -домен), и такой иммуноглобулин может функционировать без наличия каких-либо легких цепей. Другие аминокислотные последовательности, которые могут быть подходящим образом соединены с аминокислотными последовательностями, нанотелами® или полипептидами по изобретению так, чтобы обеспечить эффекторную функцию, будут ясны для специалиста и могут быть выбраны на основании нужной(ых) эффекторной(ых) функции(й). Ссылаются, например, на WO 04/058820, WO 99/42077, WO 02/056910 и WO 05/017148, а также па обзор Holliger and Hudson, цитировано выше, и на WO 09/068628. Сочетание аминокислотной последовательности, нанотела® или полипептида по изобретению с частью Fc также может привести к повышенному времени полужизни при сравнении с соответствующими аминокислотной последовательностью, нанотелом® или полипептидом по изобретению. Для некоторых применений также подходящим или даже предпочтительным может быть использование части Fc и/или константных доменов (т.е. СН2- и/или СН3-доменов), которые придают повышенное время полужизни без какой-либо биологически значимой эффекторной функции. Другие подходящие конструкции, включающие одну или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® или полипептидов по изобретению и один или несколько константных доменов с повышенным временем полужизни in vivo, будут ясны для специалиста и могут, например, включать аминокислотные последовательности, нанотела® или полипептиды, соединенные с Сн3-доменом, необязательно, через линкерную последовательность. Вообще слитый белок или производные с повышенным временем полужизни предпочтительно будут иметь молекулярную массу свыше 50 кД - пороговая величина для ренальной абсорбции.

В другом конкретном, но не ограничительном аспекте для того, чтобы образовать соединение по изобретению, одну или несколько аминокислотных последовательностей, нанотел® или полипептидов по изобретению можно соединить (необязательно через подходящий линкер или шарнирный участок) с встречающимися в природе, синтетическими или полусинтетическими константными доменами (или их аналогами, вариантами, мутантами, частями или фрагментами), которые имеют ослабленную склонность (или не имеют ее) к самоассоциации в димеры (т.е. при сравнении с константными доменами, которые встречаются в природе в обычных 4-цепочечных антителах). Такие мономерные (т.е. несамоассоциирующиеся) варианты цепи Fc или их фрагменты будут ясны для специалиста. Например, Helm et al., J. Biol. Chem., 1996, 271 7494, описывают мономерные варианты цепи Fc, которые можно использовать в полипептидных цепях по изобретению.

Также такие мономерные варианты цепи Fc являются предпочтительно такими, что они еще способны к связыванию с комплементом или релевантным(и) рецептором(ами) Fc (в зависимости от части Fc, из которой они образованы) и/или они все еще обладают некоторыми или всеми эффекторными функциями той части Fc, из которой они образованы (или они имеют пониженный уровень этих функций который все еще подходят для предполагаемого использования). С другой стороны, в такой полипептидной цепи по изобретению мономерную цепь Fc можно использовать для придания повышенного времени полужизни полипептидпой цепи в случае, когда мономерная цепь Fc также может не иметь, или по существу не иметь, эффекторных функций.

Вообще аминокислотные посл