Способ выделения бактериофага bordetella bronchiseptica


 


Владельцы патента RU 2577608:

Общество с ограниченной ответственностью "Научно-исследовательский инновационный центр микробиологии и биотехнологии" (RU)

Способ относится к областям микробиологии и биотехнологии. Способ выделения бактериофага Bordetella bronchiseptica включает индуцирующее мутагенное воздействие ультрафиолетового излучения с длиной волны 250-260 нм на клетки лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде. Время облучения ультрафиолетом составляет в 1 день 5-7 мин, во 2 день - 7-10 мин, в 3 день - 7-10 мин. Расстояние от облучаемых клеток лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica до ультрафиолетового излучателя в 1 день составляет 1 метр, во 2 день - 1 метр, в 3 день - 0,5 метра. Предложенный способ позволяет в более короткие сроки выделять бактериофаги из лизогенных бактериальных клеток Bordetella bronchiseptica без применения антибактериальных препаратов. 1 табл.

 

Способ относится к областям микробиологии и биотехнологии, а именно к выделению штаммов бактериофагов бактерий Bordetella bronchiseptica.

Известен способ получения бактериофагов (патент США US 7405066 В2. «Бактериофаги и их использование»), заключающийся в получении бактериофагов из лизогенных бактериальных клеток после 7-дневной инкубации при 34°C на среде RCA, содержащего 6 µg мл - 1 фуразолидон. После получения отчетливых негативных колоний, бактериофаги подвергают дополнительной очистке. Согласно описанию изобретения в процессе отбираются штаммы фагов, дефектные по генам, экспрессирующим белковые продукты, необходимые для возникновения лизогенного состояния чувствительных к ним бактериальных клеток.

Выделение бактериофагов указанном в прототипе способом имеет недостатки, связанные с:

- вероятным получением умеренных фагов;

- применением фуразолидона в качестве индуцирующего фактора, который может угнетать рост чувствительных к нему штаммов бактериальных клеток;

- большим количеством манипуляций, трудоемкостью процесса селекции;

- длительными сроками получения штаммов бактериофагов.

Цель изобретения - выделение бактериофагов из бактериальных штаммов Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде, для которых получение бактериофагов другими способами затруднено или невозможно без применения антибактериальных препаратов, а также сокращение сроков их выделения.

Указанная цель достигается тем, что способ выделения бактериофага Bordetella bronchiseptica включает индуцирующее мутагенное воздействие ультрафиолетового излучения с длиной волны 250-260 нм на клетки лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде, причем время облучения ультрафиолетом составляет в 1 день 5-7 мин, во 2 день - 7-10 мин, в 3 день - 7-10 мин, а расстояние от облучаемых клеток лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica до ультрафиолетового излучателя в 1 день составляет 1 метр, во 2 день - 1 метр, в 3 день - 0,5 метра.

Выделение бактериофагов из бактериальных клеток Bordetella bronchiseptica методом индуцирующего мутагенеза с применением ультрафиолетового излучения осуществляется следующим способом.

1 день: посев газоном суточной культуры Bordetella bronchiseptica на мясопептонный агар (МПА), подсушивание в термостате 10-15 мин, облучение бактерий ультрафиолетовыми лучами, длина волны λ которых составляет 250-260 нм с расстояния 1 м, экспозиция 5-7 мин. Далее инкубирование чашек Петри с обработанными бактериями в термостате при 37°C в течение 24 ч.

2 день: распределение шпателем выросших колоний бактерий по поверхности агара, облучение бактерий ультрафиолетовыми лучами (λ=250-260 нм) с расстояния 1 м, экспозиция 7-10 минут. Помещение чашек Петри в термостат (37°C) на 24 ч.

3 день: распределение шпателем выросших колоний бактерий по поверхности агара, облучение бактерий ультрафиолетовыми лучами (λ=250-260 нм) с расстояния 0,5 м, экспозиция 7-10 минут. Помещение чашек Петри в термостат (37°C) на 24 ч.

4 день: смыв выросших колоний мясопептонным бульоном с чашек Петри, помещение в пробирку со штаммами Bordetella bronchiseptica. Культивирование в термостате в течение 24 ч.

5 день: обработка хлороформом 1 часть хлороформа и 10 частей фаголизата в течение 15 минут, центрифугирование при 3000 мин-1 - 15 мин. Снятие надосадочной жидкости в стерильную пробирку.

После этого проводят исследование полученной суспензии методом нанесения капель на газон изучаемой культуры. Для этого на поверхность МПА в чашках Петри нанести 0,3 мл 18-20-ти часовой культуры Bordetella bronchiseptica, равномерно растереть шпателем по поверхности среды для получения газона. Для подсушивания поставить в термостат на 20 минут. На поверхность подсушенной среды нанести капли исследуемых бактериофагов и наклонить чашки Петри, чтобы капли стекли. Каждый сектор используется для одного бактериофага. В качестве контроля нанести каплю стерильного мясопептонный бульон (МПБ).

6 день: учет результатов. Присутствие бактериофага определить по наличию зон лизиса.

Выбор схемы облучения ультрафиолетовыми лучами бактериальных клеток Bordetella bronchiseptica обусловлен проведенным исследованием, которое доказало эффективность выбранного режима (таблица 1).

Предлагаемый способ выделения бактериофагов из бактериальных клеток Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде методом индуцирующего мутагенеза с применением ультрафиолетового излучения с указанным режимом, отличается от известных тем, что сокращает сроки их выделения и позволяет получать их без применения антибактериальных препаратов из лизогенных бактериальных штаммов Bordetella bronchiseptica, для которых получение бактериофагов другими способами затруднено или невозможно.

Таблица 1
Схема облучения ультрафиолетовыми лучами бактериальных клеток Bordetella bronchiseptica
№п/п Штаммы Проведенные опыты
№1 №2 №3 №4 №5 №6 №7 №8 №9
1 день: t=2-4 мин l=1 м 2 день: t=2-4 мин l=1 м 3 день: t=2-4 мин l=1 м 1 день: t=2-4 мин l=0,5 м
2 день: t=2-4 мин l=0,5 м 3 день: t=2-4 мин l=0,5 м
1 день: t=15-17 мин l=1,5 м 2 день: t=15-17 мин l=1,5 м 3 день: t=15-17 мин l=1,5 м 1 день: t=15-17 мин l=1 м 2 день: t=15-17 мин l=1 м 3 день: t=15-17 мин l=1 м 1 день: t=12-14 мин l=1 м 2 день: t=12-14 мин l=1 м 3 день: t=12-14 мин l=1 м 1 день: t=12-14 мин l=0,5 м 2 день: t=12-14 мин l=0,5 м 3 день: t=12-14 мин l=0,5 м 1 день: t=9-11 мин l=1 м 2 день: t=11-13 мин l=1 м 3 день: t=11-13мин l=0,5 м 1 день: t=10 мин l=1 м 2 день: t=10 мин l=1 м 3 день: t=10 мин l=0,5 м 1 день: t=5-7 мин l=1 м 2 день: t=7-10 мин l=1 м 3 день: t=7-10 мин l=0,5 м
1 B.br.100 УГСХА - - - - - - - - +
2 В.br.107 УГСХА - - - - - - - - +
3 B.br.110 УГСХА + - - - - - - + +
4 B.br.lll УГСХА - - - - - - - - +
5 B.br.113 УГСХА - - - - - - - - +
6 B.br.118 УГСХА - - - - - - - - -
7 B.br.122 УГСХА - - - - - - - - +
8 B.br.124 УГСХА - - - - - - - + +
9 B.br. 141 УГСХА - - - - - - - - -
10 B.br.183 УГСХА - - - - - - - - +
Примечание к таблице: «t» - время облучения, «l» - расстояние от облучаемой чашки Петри ультрафиолетовой лампы, «-» - отсутствие негативных колоний бактериофагов, «+» - наличие негативных колоний бактериофагов

Способ выделения бактериофага Bordetella bronchiseptica, включающий индуцирующее мутагенное воздействие ультрафиолетового излучения с длинной волны 250-260 нм на клетки лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica, выращенных на плотной агаровой среде, причем время облучения ультрафиолетом составляет в 1 день 5-7 мин, во 2 день - 7-10 мин, в 3 день - 7-10 мин, а расстояние от облучаемых клеток лизогенных бактериальных культур Bordetella bronchiseptica до ультрафиолетового излучателя в 1 день составляет 1 метр, во 2 день - 1 метр, в 3 день - 0,5 метра.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к медицине, а именно к ветеринарии, и может быть использована для получения одноразовой поливалентной комбинированной вакцины. Вакцина содержит антиген цирковируса свиней тип 2, являющийся белком, кодируемым последовательностью ДНК, которая по меньшей мере на 80% идентична ORF2 цирковируса свиней тип 2, и один вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней и один или несколько фармацевтически приемлемых носителей.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа О сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в коллекции ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером вирус ящура штамм О №2108/Забайкальский/2010.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена биодобавка в питательную среду для культивирования клеток животных и репродукции на них вирусов, представляющая собой экстракт из кабачков и мышц щуки.

Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Представленный штамм вируса африканской чумы свиней 8-го серотипа, семейства Asfarviridae, род Asfivirus, адаптирован к перевиваемой культуре клеток COS-1 и депонирован в Коллекции микроорганизмов ГНУ ВНИИВВиМ Россельхозакадемии под №.3096.

Изобретение относится к медицине, ветеринарии, санитарии и предназначено для дезодорации помещений. Дезодорирующее средство для помещений содержит концентрат селекционированных высокоспецифичных бактериофагов видов Klebsiella pneumoniae, Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Salmonella enterica, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris, Klebsiella pneumoniae, Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia enterocolitica, Pseudomonas aeruginosa.

Группа изобретений относится к способу определения штамма бактериофага, вариантам штамма бактериофага и их применению. Способ предусматривает получение коллекции штаммов бактериофагов, культивирование штамма Salmonella spp на стерильной культуральной среде, нанесение образцов культур на планшет, добавление суспензии испытываемого штамма бактериофага в концентрации 6,5 х 109 БОЕ при соотношении бактериальной суспензии к суспензии с фагом 1:1, 1:1,5 или 1:3 и инкубирование при 37°C в течение 4 ч.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложены применение живого метапневмовируса птиц (AMPV) и фармацевтической композиции, содержащей цитотоксическое количество такого вируса, в терапии злокачественных опухолей, а также способ терапии злокачественных опухолей с использованием указанной фармацевтической композиции.

Изобретение относится к области биотехнологии, генной инженерии и вирусологии. Предложен способ получения в растении или в его части химерных вирусоподобных частиц (VLP).

Настоящее изобретение относится к фармацевтической промышленности. Предложены способ получения вирусного антигена из оболочечного вируса и применение этого способа в производстве вакцинного препарата, содержащего указанный вирусный антиген.

Изобретение относится к микробиологии и касается штамма бактериофага Staphylococcus aureus. Предложенный штамм обеспечивает разрушение биопленок, образуемых бактериями рода Staphylococcus, и содержит ген, кодирующий альфа-субъединицу рибонуклеотидредуктазы 1b.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и касается штамма вируса африканской чумы свиней. Штамм выделен от убитого кабана в охотхозяйстве «Озерное» Медынского района Калужской области в 2014 г., паспортизирован с названием «Калуга-2014» и депонирован в Государственной Коллекции микроорганизмов ГНУ Всероссийского научно-исследовательского института ветеринарной вирусологии и микробиологии Россельхозакадемии под №3115. Штамм обладает высокой инфекционной активностью, накапливается в культурах клеток костного мозга свиней и лейкоцитах свиней в титре 6,0-7,0 lgГАЕ50/см3. Гибель зараженных свиней наступает с признаками острой формы АЧС через 6-8 суток после проявления клинических признаков болезни. Изобретение может быть использовано в качестве референс-штамма при проведении мониторинговых исследований в РФ с новыми изолятами вируса, циркулирующими в популяции кабанов, а также выделенными от домашних свиней. 3 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к способу выделения вирусоподобных частиц VLP. Получают растения или растительный материал, содержащий VLP, локализованные в апопласте. Получают смесь протопластов/сферопластов и апопластов посредством обработки растения или растительного материала мультикомпонентной ферментной смесью, разрушающей клеточные стенки, содержащей целлюлазу. Получают фракцию протопласта/сферопласта и фракцию апопласта из смеси протопластов/сферопластов и апопластов. Выделяют фракцию апопласта, причем фракция апопласта содержит VLP. Выделяют VLP из фракции апопласта. Предложенное изобретение позволяет с высокой эффективностью выделить вирусоподобные частицы. 3 н. и 40 з.п. ф-лы, 12 ил., 15 табл., 9 пр.

Настоящее изобретение относится к области бактериофаговой терапии для лечения и регулирования бактериальных инфекций. Представленная группа изобретений касается выделенного бактериофага, обладающего активностью против Pseudomonas aeruginosa, белков, кодируемых геномом такого бактериофага, фармацевтической композиции, содержащей такие белки, применяющейся для изготовления лекарственного средства для лечения инфекции, обусловленной Pseudomonas aeruginosa, способа диагностики бактериальной инфекции, вызванной Pseudomonas aeruginosa, и способа уменьшения или ингибирования колонизации или роста Pseudomonas aeruginosa на твердой поверхности. Представленная группа может быть использована в больницах для избирательного лечения инфекций, обусловленных Pseudomonas aeruginosa, не оказывая при этом влияния на нормальную окружающую флору. 12 н. и 18 з.п. ф-лы, 228 ил., 1 табл., 8 пр.
Изобретение относится к области защиты растений. Предложен способ повышения эффективности бакуловирусных препаратов. Способ включает заражение насекомых вирусом ядерного полиэдроза, для чего в течение 2-х дней гусениц I-III возрастов кормят питательной средой, содержащей 103-104 полиэдров на 1 мг среды. Через 2-5 дней после заражения пульверизатором осуществляют наружную обработку насекомого водным раствором консервативного короткого 18 нуклеотидов длиной антисмыслового фрагмента антиапоптозного гена IAP-3 вируса ядерного полиэдроза непарного шелкопряда с последовательностью 5′-CGACGTGGTGGCACGGCG-3′ в концентрации 10 пмоль/мкл. Изобретение обеспечивает увеличение скорости действия бакуловирусных препаратов.

Изобретение относится к области биотехнологии, вирусологии и медицине. Диагностический штамм вируса гриппа RN9/13-human A(H6N9) получен путем скрещивания апатогенного вируса гриппа птиц А/серебристая чайка/Сарма/51 с/06(H6N1) с холодоадаптированным вакцинным штаммом А/17/Ануи/2013/61(H7N9) на основе донора аттенуации А/Ленинград/134/17/57(H2N2). Штамм содержит нейраминидазу вируса гриппа подтипа N9 A/Ануи/1/2013(H7N9) и гемагглютинин вируса гриппа птиц А/серебристая чайка/Сарма/51с/06(H6N1). Штамм RN9/13-human A(H6N9) активно размножается в развивающихся куриных эмбрионах при оптимальной температуре 33°C, что позволяет накапливать вирусный материал для последующей очистки и концентрации. Штамм RN9/13-human A(H6N9) может применяться для выявления антител к нейраминидазе N9 вируса гриппа в сыворотках крови с использованием твердофазной реакции ингибирования нейраминидазной активности и реакции постадсорбционной микронейтрализации в культуре клеток MDCK. 2 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описан рекомбинантный аттенуированный штамм вируса осповакцины с нарушенными генами вирулентности ΔA56RΔB8RΔJ2RΔC3LΔN1L (1421ABJCN) на основе клонированного вируса осповакцины штамм ЛИВП. Техническим результатом предлагаемого изобретения является создание с использованием пяти плазмид интеграции высокоаттенуированного рекомбинантного штамма вируса осповакцины для получения более безопасной живой культуральной аттенуированной вакцины против натуральной оспы и других ортопоксвирусов, патогенных для человека. Указанный технический результат достигается получением рекомбинантного штамма Л-ИВП 1421ABJCN вируса осповакцины с нарушенными генами вирулентности A56R, B8R, J2R, C3L, NIL, предназначенного для получения живой культуральной аттенуированной вакцины против вируса натуральной оспы и других ортопоксвирусов. Изобретение может быть использовано в медицине, биотехнологии, в частности в генной инженерии для получения живой культуральной аттенуированной вакцины против натуральной оспы и других ортопоксвирусов, патогенных для человека. 9 ил., 5 табл., 12 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и касается набора олигонуклеотидов-праймеров для получения первичной структуры F гена вирусов болезни Ньюкасла класса I. Представленный набор состоит из трех пар олигонуклеотидов, имеющих следующую структуру (5′→3′): Представленные олигонуклеотиды не дают перекрестных реакций с родственными видами, позволяют ограничивать манипуляции одноступенчатой процедурой проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Разработанные праймеры позволяют получить полную информацию о F генах вирусов болезни Ньюкасла, их принадлежности к той или иной генетической линии вируса, наличии нуклеотидных/аминокислотных замен в геноме патогена. Изобретение может быть использовано в диагностических целях идентификации вируса болезни Ньюкасла в вирусологии и ветеринарии, а также для решения научно-исследовательских задач по изучению данного вируса. 1 ил., 2 табл., 3 пр.
Наверх