Способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека, и стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека

Авторы патента:

Кривых Максим Андреевич (RU)

Корнилова Ольга Геннадьевна (RU)

Кудашева Эльвира Юрьевна (RU)

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2577703:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр экспертизы средств медицинского применения" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НЦЭСМП" Минздрава России) (RU)

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности, к стандартным образцам иммуноглобулина человека, используемым для определения антикомплементарной активности иммуноглобулинов человека и способам их получения. Группа изобретений раскрывает способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека, включающий термическую обработку образца на водяной бане, охлаждение термически обработанного образца при температуре (22±3)°C, определение антикомплементарной активности образца положительного контроля; а также стандартный образец иммуноглобулина человека, содержащий положительный контроль, полученный заявленным способом и отрицательный контроль с антикомплементарной активностью в диапазоне 10-45%. Группа изобретений может быть использована для оценки качества препаратов иммуноглобулинов человека и позволяет определять антикомплементарную активность с повышенной достоверностью получаемых результатов. 2 н.п. ф-лы, 4 ил., 11 пр.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения контролей стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека; а также к стандартным образцам иммуноглобулина человека, предназначенным для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека.

Изобретение может быть использовано для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека в процессе производства для оценки качества как при выпуске, так и в ходе их исследований с целью подтверждения соответствия требованиям нормативной документации (сертификационные испытания).

Иммуноглобулины человека представляют собой лекарственные средства, содержащие концентрированный раствор иммунологически активной белковой фракции, выделенной фракционированием этиловым спиртом при температуре ниже 0°C из плазмы крови здоровых доноров. Одним из проявлений побочного действия препаратов иммуноглобулинов при внутривенном введении является спонтанная активация системы комплемента на Fc-участке агрегированных и поврежденных при фракционировании молекул иммуноглобулина, что приводит в свою очередь к активации макрофагов и высвобождению вазоактивных субстанций и соответствующих клинических проявлений [1]. Показателем качества, характеризующим указанное свойство, является «Антикомплементарная активность».

Критическими параметрами, влияющими на конечный результат определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека, являются:

- источник получения комплемента морских свинок;

- активность применяемой гемолитической сыворотки;

- партия эритроцитов барана и их пробоподготовка;

- состав используемого буферного раствора, его температура и pH.

Вариабельность перечисленных параметров указывает на необходимость использования стандартного образца при определении антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека. Положительный и отрицательный контроли стандартного образца подтверждают достоверность полученных результатов в различных диапазонах значений антикомплементарной активности.

Аналогов разработанному авторами способу получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека на уровне техники не выявлено.

Ближайшим к заявляемому стандартному образцу является «Стандарт иммуноглобулина человека (антикомплементарная активность и молекулярные параметры), биологический референс-препарат, серия 1» [«Human immunoglobulin (АСА and molecular size), BRP batch 1»], утвержденный Европейским директоратом по качеству лекарственных средств и здравоохранения (European Directorate for the Quality of Medicines, EDQM) в 2011 г. В настоящее время он используется при определении антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека [2]. Перед использованием данный стандартный образец растворяют в заданном объеме (105,4 мл) воды для инъекций. В результате получают раствор с содержанием иммуноглобулина примерно 50 мг/мл, при этом возникает необходимость подтверждения содержания белка в полученном растворе. Отрицательный и положительный контроли формируются путем изменения количества исходного раствора стандартного образца иммуноглобулина: 0,2 мл и 0,6 мл для отрицательного и положительного контролей, соответственно. Известный стандартный образец характеризуется нестабильностью аттестованных характеристик, подтверждаемой значительным коэффициентом вариации: для отрицательного контроля - 33%, для положительного контроля - 15% [3]. Его использование не может быть рациональным, так как при растворении лиофилизата получают более 105,4 мл раствора с ограниченным сроком хранения (не более 14 суток), а его расход на одно исследование не превышает 0,8 мл. При хранении полученного раствора стандартного образца возможна его контаминация микроорганизмами и изменение значений аттестованных характеристик.

Задачей изобретения является повышение стабильности аттестуемых характеристик стандартного образца, а также повышение эффективности его использования, упрощение пробоподготовки и улучшение воспроизводимости результатов определения антикомплементарной активности иммуноглобулина человека.

Поставленная задача решается благодаря тому, что для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека используется положительный контроль стандартного образца иммуноглобулина человека, полученный по способу, включающему следующие стадии:

- термическая обработка образца иммуноглобулина человека на водяной бане при температуре (56±1)°C;

- охлаждение термически обработанного образца иммуноглобулина человека при температуре (22±3)°C;

- определение антикомплементарной активности образца положительного контроля, при этом значения определяемой активности должны находиться в диапазоне от 60 до 95%.

Стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности содержит положительный контроль, полученный по способу, описанному выше, и отрицательный контроль с антикомплементарной активностью, находящейся в диапазоне 10-45%.

Заявляемый стандартный образец иммуноглобулина человека, используемый для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека, включает две ампулы из прозрачного нейтрального стекла, содержащие раствор иммуноглобулина человека, имеющие маркировку на внешней поверхности, отражающую информацию о названии стандартного образца, наименовании контроля с указанием значения антикомплементарной активности, изготовителе, дате изготовления, сроке годности, условии хранения, инструкцию по применению, и упакован в тару для хранения и транспортировки.

Между совокупностью существенных признаков заявленного стандартного образца и достигаемым техническим результатом существует причинно-следственная связь, а именно использование двух компонентов с аттестованным содержанием белка: раствор иммуноглобулина человека с антикомплементарной активностью в диапазоне 60-95% для положительного контроля, и раствор иммуноглобулина человека с антикомплементарной активностью в диапазоне 10-45% для отрицательного контроля, позволяет повысить стабильность аттестуемых характеристик, исключить дополнительные стадии пробоподготовки, оказывающие влияние на погрешность определения целевого значения; при этом более удобная форма выпуска (ампула) позволяет более рационально хранить и использовать заявляемый стандартный образец.

Для стадии термической обработки и охлаждения в способе получения положительного контроля продолжительность воздействия температуры определяется объемом раствора иммуноглобулина человека, помещенного в контейнер, и может составлять 5 мин и более.

Для отрицательного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности используется образец иммуноглобулина человека, не прошедший термическую обработку.

Дополнительно стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности аттестован по содержанию белка. Количество белка определяется технологией получения препаратов иммуноглобулинов человека.

Благодаря решению таких задач, как повышение стабильности аттестованных характеристик стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности и более рациональное его использование, изобретение позволяет повысить достоверность получаемых результатов определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека в различных диапазонах.

Краткое описание чертежей и графических материалов

Фиг. 1. Приготовление проб с положительным и отрицательным контролем заявляемого стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности и контроля комплемента.

Фиг. 2. Порядок подготовки проб для определения остаточной активности комплемента.

Фиг. 3. Среднее значение аттестуемых характеристик антикомплементарной активности в стандартном образце иммуноглобулина человека.

Фиг. 4. Изучение стабильности стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности.

Возможность осуществления заявляемого изобретения показана следующими примерами.

Пример 1. Приготовление желатин-солевого раствора/желатин-барбиталового буферного раствора

1. Желатин-солевой раствор (ЖСР)

1 г желатина помещают в мерную колбу вместимостью 250 мл, добавляют примерно 200 мл воды очищенной и оставляют набухать. Смесь нагревают при температуре (45±3)°C до полного растворения. Полученный прозрачный раствор охлаждают до комнатной температуры.

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 8,5 г натрия хлорида, 0,1 г кальция хлорида безводного, 0,04 г магния хлорида 6-водного, растворяют в небольшом количестве воды очищенной и добавляют приготовленный раствор желатина. Общий объем раствора доводят водой очищенной до метки и перемешивают. pH раствора доводят до 7,2-7,3 0,1 М раствором натрия гидроксида. Раствор используют свежеприготовленным.

2. Желатин-барбиталовый буферный раствор

2.1. Приготовление исходного раствора кальция и магния

4,412 г кальция хлорида дигидрата и 20,332 г магния хлорида 6-водного растворяют в небольшом количестве воды очищенной в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре (5±3)°C в течение 1 мес.

2.2. Приготовление исходного барбиталового буферного раствора pH 7,3

83,0 г натрия хлорида и 10,192 г барбитала натрия растворяют в 1700 мл воды очищенной в мерной колбе вместимостью 2000 мл, постоянно перемешивая. Показатель pH доводят до 7,3 1 М раствором хлористоводородной кислоты. Добавляют 5 мл исходного раствора кальция и магния, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре (5±3)°C в течение 1 мес.

2.3. Приготовление раствора желатина

В мерную колбу вместимостью 1000 мл помещают 1,25 г желатина, прибавляют 500 мл воды очищенной и тщательно перемешивают. Полученную смесь нагревают при температуре (45±3)°C до полного растворения желатина. Полученный раствор охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора до метки водой очищенной и перемешивают. Используют только свежеприготовленный раствор.

2.4. Приготовление желатин-барбиталового буферного раствора

Прибавляют 4 части раствора желатина к 1 части исходного барбиталового буферного раствора, тщательно перемешивают и доводят pH до 7,2-7,3 с помощью 1 М раствора натрия гидроксида или 1 М раствора хлористоводородной кислоты. Раствор используют свежеприготовленным.

Оборот барбитала и его натриевой соли в России ограничен, т.к. данные вещества входят в Список психотропных веществ, оборот которых в Российской Федерации ограничен и в отношении которых допускается исключение некоторых мер контроля в соответствии с законодательством Российской Федерации и международными договорами Российской Федерации (список III); для его использования необходимо наличие лицензии. Ввиду ужесточения требований за оборотом барбитала и его натриевой соли необходимо использовать в качестве альтернативы желатин-солевой раствор.

Пример 2. Приготовление эритроцитов барана

Кровь барана можно использовать не ранее чем через 7 дней после взятия и использовать в течение 21 дня.

Стабилизированная в цитратном растворе кровь барана: берут один объем крови в один объем цитратного раствора и перемешивают. Хранят при температуре (5±3)°C.

Приготовление цитратного раствора:

20,5 г глюкозы, 8,0 г натрия лимоннокислого трехзамещенного и 4,2 г натрия хлорида растворяют в 750 мл воды очищенной, pH раствора доводят до 6,1 раствором лимонной кислоты (100 г/л), объем раствора доводят до 1000 мл водой очищенной. Стерилизуют текучим паром в течение 30 мин при температуре 100°C. Хранят при температуре (5±3)°C в течение 1 мес.

Пример 3. Приготовление гемолитической системы (суспензии сенсибилизированных эритроцитов барана)

Предварительно оттитрованную согласно методике, изложенной в Европейской фармакопее [4], гемолитическую сыворотку разводят до 2 МГЕ/мл и добавляют к 5% суспензии эритроцитов барана, приготовленной согласно методике, изложенной в Европейской фармакопее [4], в соотношении 1:1. Инкубируют в термостате при температуре (37±0,5)°C в течение 15 минут, используют в течение 6 ч после приготовления, хранят при температуре (5±3)°C.

Пример 4. Приготовление комплемента морских свинок

Готовят пул сыворотки из крови не менее 10 морских свинок. Сыворотку отделяют от сгустка крови центрифугированием при температуре (5±3)°C. Сыворотку хранят в небольших количествах при температуре ниже минус 70°C.

Определение исходной активности комплемента проводят согласно методике, изложенной в Европейской фармакопее [4]. После определения исходной активности комплемента готовят раствор комплемента, содержащий 100 CH₅₀/мл, т.е. 1 мл раствора комплемента разбавляют ЖСР в N раз.

Пример 5. Способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности

Применяемые материалы и оборудование:

- баня водяная Julabo ED-19M (Julabo Labortechnik GmbH, Германия);

- термометр технический стеклянный ТТМ (диапазон измерений от 0 до 100°C, ОАО «Термоприбор», Россия);

- вода очищенная.

Способ осуществляют следующим образом. Для получения положительного контроля стандартного образца ампулы по 1,5 мл с образцом иммуноглобулина человека подвергают термической обработке на водяной бане при следующих параметрах:

- температура воды (56±1)°C;

- время термической обработки 5 минут.

При этом изменение формы выпуска образца иммуноглобулина человека приводит к изменению продолжительности прогревания.

В результате получают образцы иммуноглобулина человека, имеющие высокую антикомплементарную активность.

Охлаждают термически обработанные образцы иммуноглобулина человека при следующих параметрах:

- температура (22±3)°C;

- время охлаждения 15 минут.

Пример 6. Способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности

Аналогично примеру 5 возможно использовать для получения положительного контроля стандартного образца флаконы по 25 мл с образцом иммуноглобулина человека, при этом время термической обработки на водяной бане составляет 15 минут, а время охлаждения - 20 минут.

Пример 7. Способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности

Аналогично примеру 5 возможно использовать для получения положительного контроля стандартного образца ампулы по 3 мл с образцом иммуноглобулина человека, при этом время термической обработки на водяной бане составляет 7 минут, а время охлаждения - 15 минут.

Пример 8. Определение аттестуемой характеристики антикомплементарной активности

В полученном согласно примеру 5 готовом положительном контроле стандартного образца иммуноглобулина человека и отрицательном контроле, представляющем собой раствор иммуноглобулина человека, не прошедший термическую обработку, определяют аттестуемые характеристики следующим образом.

Приготовление проб с положительным и отрицательным контролем заявляемого стандартного образца и контроля комплемента приведено в Фиг. 1.

Приготовление проб с положительным контролем заявляемого стандартного образца по примерам 6, 7 и проб с отрицательным контролем, представляющем собой раствор иммуноглобулина человека, не прошедший термическую обработку, проводят в зависимости от аттестованного значения содержания белка в растворе иммуноглобулина человека, указанного в паспорте на стандартный образец.

Подготовленные пробы инкубируют в термостате при температуре (37±0,5)°C в течение 60 мин. По истечении времени инкубации готовят разведение 1:50 для пробы с контролем комплемента и разведение 1:20 для проб отрицательного и положительного контроля. После чего проводят определение остаточной активности комплемента (в двух повторностях) в соответствии с Фиг. 2.

Для приготовления контрольных проб без гемолиза в три пробирки вносят по 1,3 мл БР.

Для приготовления контрольных проб с полным гемолизом в три пробирки вносят по 1,3 мл воды очищенной.

Затем в каждую пробирку (пробирки 1-12 и пробирки с контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы, тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре (37±0,5)°C в течение 60 мин, затем охлаждают 10 мин при температуре (5±3)°C и центрифугируют при 1000 g в течение 5 мин.

Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения - ЖСР. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле 1:

где:

Ап - среднее значение оптической плотности испытуемой пробы;

Ао - среднее значение оптической плотности контрольной пробы без гемолиза;

Ак - среднее значение оптической плотности контрольной пробы с полным гемолизом;

На миллиметровой бумаге с логарифмическим масштабом по обеим осям или с использованием программного обеспечения строят график со значениями Y/(1-Y) на оси абсцисс и количеством разведенного комплемента в мл на оси ординат. Строят оптимизированную кривую (при построении графика учитывают значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до 0,85; значения, находящиеся за пределами указанного диапазона не учитывают), соответствующую нанесенным точкам, и определяют ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1.

Если центрифугирование и/или считывание результатов не может быть сделано немедленно, пробирки хранят при температуре (5±3)°C не более 1 ч.

Вычисляют активность комплемента в гемолитических единицах (СН₅₀/мл) по формуле 2:

где:

В - величина, обратная степени разведения комплемента;

С - объем разведенного комплемента (мл), вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1);

5 - множитель для учета количества эритроцитов.

Результат титрования комплемента считают достоверным при условии, что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале 0,18-0,30.

Вычисляют антикомплементарную активность (в процентах) в отрицательном и положительном контролях по отношению к контролю комплемента, принятому за 100%, по формуле 3:

где:

b - значение СН₅₀/мл для контроля комплемента, рассчитанное по формуле 2;

а - значение СН₅₀/мл для отрицательного, положительного контроля и испытуемого образца, рассчитанное по формуле 2.

Результаты теста считают достоверными, если:

1. значения антикомплементарной активности отрицательного и положительного контроля находятся в пределах 10-45% и 60-95% соответственно;

2. активность комплемента в контроле комплемента находится в пределах от 80 до 120 СН₅₀/мл.

В противном случае проводят повторный анализ.

Результаты определения антикомплементарной активности в стандартном образце иммуноглобулина человека представлены на Фиг. 3.

Из данных, представленных на Фиг. 1, следует, что отсутствует необходимость растворения стандартного образца и подтверждения содержания белка, при этом наблюдаются следующие положительные моменты:

- упрощение пробоподготовки.

Из данных, представленных на Фиг. 3, следует, что аттестуемое значение антикомплементарной активности положительного контроля стандартного образца, приготовленного по предлагаемому способу, соответствует заявленным требованиям: антикомплементарная активность в диапазоне 60-95%, аттестуемое значение антикомплементарной активности отрицательного контроля укладывается в диапазон 10-45%, также стандартный образец имеет коэффициент вариации для отрицательного контроля - 5,7%, для положительного контроля - 3,6%, при этом наблюдаются следующие положительные моменты:

- повышенная стабильность аттестуемых характеристик стандартного образца.

Пример 9. Изучение стабильности стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности

Для изучения стабильности образцы полученного стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности хранят при температуре (5±3)°C и определяют контролируемые параметры в момент закладки на хранение, далее каждый месяц в течение первых трех месяцев, далее с интервалом в 3 месяца до 15 месяцев. Контролируемые параметры: антикомплементарная активность и содержание белка. Результаты изучения стабильности представлены на Фиг. 4. Для установления окончательного срока хранения наблюдения продолжаются.

Пример 10. Набор, содержащий стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности

Набор содержит положительный контроль (ампула 1,5 мл), полученный в примере 5, и отрицательный контроль (ампула 1,5 мл), представляющий собой раствор иммуноглобулина человека, не прошедший термическую обработку, аттестованные по методике, изложенной в примере 8. Набор упаковывают в пачку картонную и прикладывают инструкцию по применению и паспорт на стандартный образец.

Пример 11. Хранение и транспортирование стандартного образца

Упакованные наборы стандартного образца хранят при температуре (5±3)°C в защищенном от света месте. Транспортирование осуществляют всеми видами крытого транспорта согласно СП 3.3.2.1248-03 при температуре (5±3)°C.

Аналогичным образом, с учетом раскрытия изобретения в описании специалистом в данной области могут быть получены, выполнены другие варианты изобретения, которые охватываются формулой изобретения, приводимой ниже.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Buchacher A., Schluga P., Mullner J., Schreiner М. Anticomplementary activity of IVIG concentrates - important assay parameters and impact of IgG polymers //Vox sanguinis. 2010. V. 98. N 3p1. P. e209-e218.

2. Лист-вкладыш к стандартному образцу иммуноглобулина человека BRP. [Электронный ресурс] URL: http://crs.edqm.eu/db/4DCGI/db/4DCGI/ leaflet?leaflet=Y0001504_1 (дата обращения: 21.03.2014).

3. Sandberg Е., Costanzo A., Daas A., Buchheit К.-Н. Calibration of the human immunoglobulin BRPs for АСА and molecular size (batch 1) and for Fc function and molecular size (batchs 1&2)// Pharmeuropa Bio&SN. 2012. P. 1-15. [Электронный ресурс] URL: http://pharmeuropa.edqm.eu/PharmeuropaBioSN/ (дата обращения: 21.03.2014).

4. European Pharmacopoeia 8.1, 01/2010:20617 corrected 7.6 «Test for anticomplementary activity of immunoglobulin)). [Электронный ресурс] URL: http://online6.edqm.eu/ep801/# (дата обращения: 21.03.2014).

1. Способ получения положительного контроля стандартного образца иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека, включающий следующие стадии:
- термическая обработка на водяной бане образца иммуноглобулина человека при температуре (56±1)°C;
- охлаждение термически обработанного образца иммуноглобулина человека при температуре (22±3)°C;
- определение антикомплементарной активности образца положительного контроля, при этом значения определяемой активности должны находиться в диапазоне от 60 до 95%.

2. Стандартный образец иммуноглобулина человека для определения антикомплементарной активности препаратов иммуноглобулинов человека, содержащий положительный контроль, полученный способом по п. 1, и отрицательный контроль с антикомплементарной активностью, находящейся в диапазоне 10-45%.

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для прогноза анемии, развивающейся у больных хроническим гепатитом С (ХГС) в результате проведения комбинированной противовирусной терапии (КПТ).

Способ оценки подавления активности аденилатциклазы в мембранах эритроцитов при обострении цитомегаловирусной инфекции у беременных на третьем триместре гестации // 2577300

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки угрозы формирования гемической анемии у беременных на третьем триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции.

Способ определения активизации выработки кортизола у беременных при индуцировании синтеза адренокортикотропного гормона, вызванного обострением цитомегаловирусной инфекции в период гестации // 2577295

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике, и может быть использовано для оценки угрозы нарушения формирования фетоплацентарной системы и развития плода при обострении цитомегаловирусной инфекции на первом и третьем триместре гестации.

Способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени // 2576241

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования раннего токсикоза тяжелой степени, включающий определение в крови беременных женщин концентрации лептина и фактора роста плаценты (ФРП), отличающийся тем, что дополнительно производят определение значения максимальной амплитуды агрегации тромбоцитов (МААТ), содержания лимфоцитов CD95+ (Л CD95+), уровня общего IgE и концентрации C-реактивного белка (СРБ), и при значении этих показателей в сроки 6-8 недель и 9-12 недель беременности соответственно: концентрации лептина (нг/мл) - 18,9±2,8 и 23,4±3,2; концентрации ФРП (пг/мл) - 55±4,1 и 91±6,2; значении МААТ (%) - 42,6±1,4 и 45,1±1,5; содержании Л CD95+ (%) - 44,2±3,5 и 49,7±3,8; уровня общего IgE (пг/мл) - 295±19 и 322±16; концентрации СРБ (мкг/мл) - 96±4,2 и 108±5,3 прогнозируют ранний токсикоз тяжелой степени.

Способ диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией // 2575835

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностике, и может быть использовано в неврологии для диагностики полиневропатии тонких волокон у пациентов с целиакией.

Способ неинвазивной диагностики тубулоинтерстициального фиброза при фокально-сегментарном гломерулосклерозе // 2575826

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу неинвазивной диагностики развития тубулоинтерстициального фиброза (ТИФ) у пациентов с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС).

Способ патоморфологической диагностики бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга // 2575588

Изобретение относится к области медицины, а именно к посмертной патоморфологической диагностике бифуркационной недостаточности сосудов артериального круга большого мозга.

Способ диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами в и с у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов // 2575577

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов.

Способ прижизненного определения морфофункциональных характеристик соединительно-тканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени // 2575575

Изобретение относится к медицине, а именно офтальмологии, и касается методов прижизненного исследования биологических материалов органа зрения для определения морфофункциональных характеристик соединительнотканных оболочек глазного яблока при стационарной миопии средней степени.

Устройство для определения содержания глюкозы в крови // 2575568

Изобретение относится к устройствам, предназначенным для неинвазивного определения содержания глюкозы в крови с использованием электромагнитных волн. Устройство для определения содержания глюкозы в крови содержит отрезок металлической волноводной линии передачи, плоскопараллельную пластину, второй отрезок металлической волноводной линии передачи.

Способ определения количества воды, поступившей с пищей в организм человека // 2577707

Изобретение относится к диагностической медицине, а именно к измерению водного баланса организма человека. Для этого определяют количество воды, поступившей с пищей в организм человека к моменту времени ti, как величину, пропорциональную общему количеству глюкозы, поступившей в кровь человека к моменту времени ti, определяемому как сумма упомянутого количества глюкозы, поступившей в кровь человека за каждый интервал времени от первого - Δt1 до i-го - Δti. После начала приема пищи периодически через интервалы времени Δti измеряют концентрацию глюкозы Gi в крови человека и за указанный интервал времени Δti. Таким образом определяют приращение концентрации глюкозы ΔGi в крови, приращение количества глюкозы в плазме крови ΔG(pl)i, количество глюкозы ΔG(tis)i, поступившей в инсулин зависимые ткани, количество глюкозы ΔG(met)i, израсходованной на метаболические процессы в организме, и количество глюкозы ΔG(tm)i, израсходованной на метаболические процессы в инсулин зависимых тканях. На основе полученных данных определяют количество глюкозы ΔG(Σ)i, поступившей в кровь человека за данный интервал времени Δti, согласно формуле ΔG(Σ)i=ΔG(pl)i+ΔG(tis)i+ΔG(met)i-ΔG(tm)i. Изобретение обеспечивает возможность определения количества воды, поступившей с пищей в организм человека, независимо от ее состава и в любой промежуток времени с учетом индивидуальных особенностей организма человека по усвоению пищевых продуктов. 11 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.

Способ определения количества воды, поступившей с пищей в организм человека // 2577707

Способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности // 2577719

Изобретение относится к клинической биохимии и представляет собой способ определения литической активности множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности (ммЛНП) путем обработки сыворотки крови 20% раствором поливинилпирролидона с молекулярной массой 35000 (ПВП-35000) при объемном соотношении сыворотка: ПВП (1:0,84), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, агрегаты ммЛНП осаждают центрифугированием, декантируют, осадок ммЛНП растворяют в буфере без ПВП, добавляют аутологичные отмытые стандартизованные эритроциты человека, инкубируют в течение 48 часов при комнатной температуре, измеряют оптическую плотность на фотометре при длине волны 620 нм, по калибровочному графику определяют степень лизиса и при лизисе более 10% констатируют повышенную литическую активность ммЛНП. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов определения литической активности ммЛНП. 4 пр., 4 табл., 1 ил.

Способ оценки эффективности противотуберкулезной терапии у пациенток с генитальным туберкулезом // 2577723

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности терапии генитального туберкулеза, включающий контрольные иммунологические обследования, отличающийся тем, что по окончании интенсивной фазы терапии проводят 1-й контроль, который включает определение индекса стимуляции интерферона-гамма (ИФН-γ) с туберкулином очищенным (ППД-Л), определение уровней специфических иммуноглобулинов (IgA, IgM) к микобактерии туберкулеза (МБТ) методом иммуноферментного анализа (ИФА), а 2-й контроль проводят через 6-11 месяцев после окончания основного курса терапии, при этом в случае если индекс стимуляции ИФН-γ с ППД-Л по окончании интенсивной фазы противотуберкулезной терапии был выше 7, 8 - только по ИФН-γ с ППД-Л, в случае если оптическая плотность IgM к МБТ была более 0,600 - только по IgM к МБТ, в случае если оптическая плотность при IgA к МБТ была более 0,450 - контроль проводят только по IgA к МБТ; при этом по результатам контрольных исследований рекомендуют продление, или коррекцию, или окончание терапии. Осуществление изобретения обеспечивает повышение точности оценки противотуберкулезной терапии. 2 пр., 1 табл.

Способ прогнозирования исхода субклинического мастита у лактирующих коров // 2577733

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для прогнозирования перехода острого течения субклинического мастита лактирующих коров в клинически выраженное, наступление самовыздоровления или перехода его в хроническое течение. Двукратно выявляют уровень бактериальной обсемененности патологического секрета молочной железы с интервалом 7÷10 дней. При возрастании бактериальной обсемененности в 10 и более раз прогнозируют переход скрытого воспаления в клинически выраженное. При снижении в 10 и более раз - самовыздоровление. При сохранении первоначального уровня обсемененности - хроническое течение воспалительного процесса. Заявленный способ позволяет быстро и точно спрогнозировать исход субклинического мастита. 1 пр.

Портативный диагностический прибор и способ его применения с электронным устройством и диагностическим картриджем при диагностическом экспресс-исследовании // 2578023

Группа изобретений относится к диагностическим экспресс-исследованиям. Описан портативный диагностический прибор, содержащий порт для приема с возможностью извлечения диагностического картриджа, элемент, соединенный с электронным устройством, датчики для регистрации данных исследования биологического или природного образца после реакции с реактивами, содержащимися в картридже. Диагностический прибор также содержит память, в которой хранятся алгоритмы для выгрузки в электронное устройство, позволяющие его процессору: ожидать истечения заданного времени после реакции образца с реактивами; после этого передавать датчиками команду регистрации данных исследования; генерировать данные представления на основе данных исследования; и представлять данные представления пользователю посредством элемента представления электронного устройства. Также описан соответствующий способ, который включает шаги соединения, выгрузки, представления, ввода картриджа, ожидания, считывания и обработки в электронном устройстве. Достигается упрощение и повышение надежности диагностических экспресс-исследований. 2 н. и 40 з.п. ф-лы, 11 ил.

Способ экспресс-определения резистентности к окислению липопротеинов низкой плотности сыворотки крови человека // 2578027

Изобретение относится к клинической биохимии и представляет собой способ экспресс-определения резистентности к окислению липопротеинов низкой плотности сыворотки крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, отличающийся тем, что обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 15% раствором ПВП-12600 в 0,01М Трис-HCl-буфере, pH 7,4, содержащем 0,15М NaCl, при объемном соотношении сыворотка : ПВП (1 : 6), инкубируют 10 и 20 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение спектрофотометрически при длине волны 450 нм в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при отсутствии разницы констатируют нормальную резистентность к окислению ЛНП в сыворотке крови человека. Осуществление изобретения позволяет расширить арсенал указанных способов, а также снизить трудоемкость анализа. 4 пр., 4 табл.

Способ оценки состояния здоровья женщин при прогнозировании физиологического и осложненного течения беременности на ранних сроках гестации // 2578028

Изобретение относится к микроэкологии и иммунологии и может использоваться для интегральной оценки состояния здоровья женщин при прогнозировании физиологического и осложненного течения беременности на ранних сроках гестации. Способ заключается в оценке состояния микробиоценоза слизистых открытых полостей, регистрации степени нарушения микробиоценоза конкретного биотопа слизистых независимо от его локализации как показателя общей реактивности макроорганизма у беременных женщин. В зависимости от полученного результата судят о состоянии здоровья беременных и прогнозируют физиологическое или осложненное течение беременности: физиологическое течение беременности при регистрации I или II степени микробиоценоза слизистых открытых полостей, отсутствии индикации возбудителей урогенитальных инфекций и отсутствии клинических проявлений невынашивания; осложненное течение беременности при регистрации I или II степени микробиоценоза слизистых открытых полостей, отсутствии индикации возбудителей урогенитальных инфекций и наличии клинических проявлений невынашивания неинфекционного генеза, заканчивающегося рождением плода; осложненное течение беременности при регистрации III или IV степени микробиоценоза слизистых открытых полостей, отсутствии индикации возбудителей урогенитальных инфекций и отсутствии клинических проявлений невынашивания (продромальный период инфекционного процесса и угрожающий выкидыш); иммунологическое отторжение плода при регистрации III или IV степени микробиоценоза слизистых открытых полостей, индикации возбудителей урогенитальных инфекций и наличии клинических проявлений невынашивания (начавшийся выкидыш). 1 ил., 9 табл., 3 пр.

Способ диагностики стеатогепатита // 2578029

Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ диагностики синдрома неалкогольного стеатогепатита, включающий исследование слюны больного, отличающийся тем, что к капле слюны больного добавляют каплю кристаллообразующего вещества - 3% спиртового раствора хлорида меди, выдерживают полученный препарат в течение 24 часов в горизонтальном положении при температуре 20-25°C, влажности 50-70%, вдали от прямых солнечных лучей и нагревательных приборов и исследуют под микроскопом, при этом наличие и выраженность неалкогольного стеатогепатита определяют присутствием и количеством в микроскопическом препарате аморфных темно-желтых масс с наложением на кристаллы в виде «метелок» или «пучков», а отсутствие неалкогольного стеатогепатита определяют наличием в микроскопическом препарате кристаллов в виде «метелок» или «пучков» без наложения аморфных темно-желтых масс. Осуществление изобретения позволяет проводить быструю неинвазивную диагностику стеатогепатита. 2 табл., 2 ил.

Способ прогнозирования достоверности ответа на стандартную двухкомпонентную противовирусную терапию пегилированными интерферонами и рибавирином у пациентов с хроническим гепатитом с, генотипом 1в // 2578030

Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования ответа на стандартную двухкомпонентную противовирусную терапию у пациентов с хроническим гепатитом С (ХГС), генотипом 1в. Для прогнозирования достоверности ответа на стандартную двухкомпонентную противовирусную терапию пегилированными интерферонами и рибавирином у пациентов с хроническим гепатитом С, генотипом 1в, осуществляют генетическое исследование крови на полиморфизм гена IL28B и определяют групповую принадлежность крови. Прогнозируют устойчивый вирусологический ответ в 100% случаев у пациентов с группой крови 0αβ (I) и полиморфизмом гена IL28B в rs12979860 с генотипом С/С и генотипом Т/Т в rs8099917. Прогнозируют устойчивый вирусологический ответ в 80% случаев у пациентов с группой крови Аβ (II) и при однонуклеотидной замене цитозина на тимин (С>Т) в локусе rs12979860 гена IL28B. При однонуклеотидной замене тимина на гуанин (T>G) в rs8099917 гена IL28B устойчивый вирусологический ответ прогнозируют только у пациентов с группой крови Вα (III). Использование изобретения позволяет повысить достоверность и эффективность прогнозирования стандартной противовирусной терапии. 2 табл.