Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров



Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров
Способ прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2577712:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области клинико-лабораторной диагностики и предназначено для прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) с использованием молекулярно-генетических маркеров. Из образцов периферической крови пациентки с трубно-перитонеальным фактором бесплодия выделяют ДНК, посредством ПЦР в режиме реального времени определяют полиморфные локусы AMHR2 (-482 A>G) [rs2002555], LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275], ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938], LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652]. Полученные данные включают в дискриминантную функцию. Вероятность получения незрелых ооцитов определяют по формуле p=1/(1+e-z). В случае р меньше 0,5 предполагают, что событие не наступит, в противном случае предполагается наступление события. Изобретение обеспечивает создание эффективного способа прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах ВРТ, в частности с целью предикции исходов программы ЭКО. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области клинико-лабораторной (молекулярно-генетической) диагностики с целью предикции вероятности получения зрелых ооцитов и касается оптимизации проводимой терапии бесплодия методом вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ).

В связи с интенсивным развитием ВРТ возросла необходимость в индивидуализации протоколов стимуляции суперовуляции с использованием клинических, гормональных и функциональных маркеров овариального ответа [1; 2; 3]. При этом прогноз качества получаемых гамет и эмбрионов представляет собой одну из наиболее трудноразрешимых проблем при лечении пациенток методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). Предложены различные маркеры исходов программ ВРТ (возраст, овариальный резерв, гормональный статус и другие) [2; 4; 5]. Однако эти факторы не обладают достаточной предиктивной способностью. Генетическая предрасположенность представляется важным фактором, детерминирующим данные процессы в программе ЭКО [6; 7].

При интерпретации результатов исследования генома, полученные данные не меняются с возрастом, не зависят от веса, от дня менструального цикла и так далее, и могут определяться однократно, в отличие от гормональных маркеров. Исследование влияния генетических маркеров продолжает формировать научный и практический интерес современной медицины.

Описаны проведенные однофакторные модели, основанные на молекулярно-генетических предикторах, позволяющих прогнозировать овариальный ответ на стимуляцию суперовуляции и качество ооцитов. Однако недостатками таких моделей являются низкая предиктивная способность и противоречивость данных [8].

В литературе встречаются достаточно редкие попытки создания мультигенных моделей. Так, наиболее аналогичной работой является исследование, проведенное на популяции индийских женщин, в ходе которого установлено, что у гомозиготных женщин по аллелю 680Ser полиморфизма гена FSHR (Asn680Ser) [rs 6166, здесь и далее rs - регуляторная область гена] и 49Ser гена АМН (Ile49Ser) [rs10407022], получают большее количество зрелых ооцитов, чем у пациенток, гомозиготных по аллелю 680Asn полиморфизма гена FSHR (Asn680Ser) [rs 6166] и/или гомозиготных по аллелю 49Ile гена АМН (Ile49Ser) [rs10407022] (р=0,009) [9]. Аналогичным исследованием является работа de Castro et al., проведенная на популяции европейских женщин, были представлены данные анализа мультигенной модели 680Ser (FSHR 2039 A>G (Ser680Asn) [rs6166]) - T (ESR1-397 T>C [PvuII] [rs2234693] - G (ESR2+1730G (AluI) [rs1256049/A]), которая прогнозировала «бедный» овариальный ответ на стимуляцию суперовуляции препаратами рФСГ, но не было выявлено ассоциации полиморфизма гена с качеством ооцитов и эмбрионов [2].

Задача настоящего изобретения - создать мультигенную модель прогнозирования получения незрелых ооцитов в программах ВРТ путем предварительного генотипирования пациенток перед началом стимуляции функции яичников. Исследование полиморфизма гена может служить мало инвазивным, нетрудоемким, недорогим тестом, позволяющим анализировать одновременно большое количество образцов.

Цель настоящего изобретения - создание многофакторной молекулярно-генетической модели предикции получения незрелых ооцитов, оптимизации проводимой терапии бесплодия методом ВРТ.

Поставленная цель достигается генотипированием пациентки по следующим полиморфным локусам:

AMHR2(-482 A>G) [rs2002555]; LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275]

ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938]; LHCGR (Asn291Ser) [rs 12470652].

Определяют генотип по данным позициям с применением полимеразной цепной реакции (ПЦР) или аналогичного метода, позволяющего определить указанные генетические маркеры. ПЦР и определение температуры плавления олигонуклеотидных проб проводят при помощи детектирующего амплификатора ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). ДНК для генотипирования выделяют из образцов периферической крови, взятой с ЭДТА (этилендиаминтетрауксусная кислота) в качестве антикоагулянта, объемом 0,5 мл, смешивают в микроцентрифужных пробирках (объемом 1,5 мл) типа Эппендорф с лизирующим раствором (0,5 мл), состоящим из 10 мМ Трис-HCl рН 7,5, 0,32 М сахарозы, 5 мМ MgCl, 1% Тритона Х-100 центрифугируют. Центрифугирование проводится в течение 1 мин при 10000 об/мин, супернатант удаляется, осадки клеточных ядер двукратно отмывают соответствующим буфером. В последующем протеолиз проводят в буферном растворе (50 мкл), содержащем 10 мМ Трис-HCl рН 8,3, 50 мМ KCl, 0,45% NP40, 045% Твина 20 и 250 мкг/мл протеиназы К, 2,5 мМ MgCl, в течение 20 минут при 37°С. Инактивация протеиназы К производится в течение 20 минут при температурном режиме 98°C. Концентрация ДНК определяется на ДНК-минифлуориметре (Hoefer, США) и составляет около 50-100 мкг/мл. Идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов проводят с помощью модифицированного метода «примыкающих проб» (adjacent probes, kissing probes), с использованием оригинальных олигонуклеотидов [10; 11].

Определение полиморфизма генов сначала проводится ПЦР с праймерами, которые связываются с комплементарными последовательностями, и между циклами нагревания (для денатурации ДНК) и охлаждения (для обеспечения синтеза) синтезируются копии данной области гена [12]. Праймеры общие для обоих вариантов нуклеотидной последовательности, после чего температуру реакционной смеси для гибридизации матрицы с олигонуклеотидными пробами понижают. Для определения типа последовательности используют два варианта олигонуклеотидов. В первом случае олигонуклеотиды метят флуорофором, во втором - гасителем флуоресценции. Этот процесс протекает при помощи ферментов, способных соединять нуклеотидные основания и выдерживать необходимые для денатурации температурные режимы [12]. В качестве такого фермента используется Taq-полимераза, блокированная специфическими антителами, чтобы предотвратить неспецифический отжиг праймеров и повысить чувствительность тест-систем.

В режиме реального времени измеряют уровень флуоресценции в процессе температурной денатурации дуплексов олигонуклеотидов и полученных матриц. Генотип определяется путем анализа кривых плавления. В том случае, если анализируемый образец содержит только один тип нуклеотидной последовательности гена, т.е. гомозиготен по данному полиморфизму, температура плавления для пробы, образующей совершенный дуплекс, выше, чем для пробы, образующей несовершенный дуплекс. В том случае, если анализировался гетерозиготный образец, содержащий два типа нуклеотидной последовательности, каждый из вариантов проб может образовать совершенный дуплекс, поэтому температуры плавления одинаковы [12].

Бинарная логистическая регрессия рассчитывает вероятность наступления события (в данном случае получение незрелых ооцитов) в зависимости от значений независимых переменных (в данном случае полиморфизма исследуемых генов).

Вероятность наступления события (р) для некоторого случая рассчитывается по формуле, имеющей общий вид:

где

р - искомая вероятность наступления события;

z (классифицирующая дискриминантная функция) = a+b1*X1+b2*X2+…+bn*Xn,а - константа; X1 - независимые переменные; b1 - коэффициенты, расчет которых является задачей бинарной логистической регрессии.

В случае р меньше 0,5 предполагают, что событие не наступит; в противном случае предполагается наступление события.

В бинарной логистической регрессионной модели исходом является переменная, характеризующая получение незрелых ооцитов, предикторами - генотип по следующим полиморфным локусам: AMHR2 (-482 A>G) [rs2002555]; LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275]; ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938]; LHCGR (Asn291Ser) [rs 12470652].

При построении бинарной логистической регрессионной модели используют метод обратной селекции. Качество приближения регрессионных моделей при каждом последующем шаге оценивают при помощи функции подобия. Мерой правдоподобия служит отрицательное удвоенное значение логарифма этой функции (-2LL). В качестве начального значения для -2LL применяется значение, которое получается для регрессионной модели, содержащей только константы. После добавления переменной влияния значение -2LL равно 198,613. Разность между значением -2LL начальной и конечной модели составила 20,391 (р=0,009). Подобное снижение величины означает улучшение полученной модели.

Мера определенности указывает часть дисперсии, которую можно объяснить с помощью логистической регрессии. Мера определенности по Коксу и Шелу имеет тот недостаток, что значение, равное 1, является теоретически не достижимым; этот недостаток устранен благодаря модификации данной меры по методу Наделькеркеса. Часть дисперсии, объяснимой с помощью логистической регрессии, в данном уравнении составляет 16,1% (вычисляется по методу Наделькеркеса).

Результаты рассчитанных коэффициентов в логистической регрессии и проверке их значимости приведены в таблице (табл. 1).

Проверка значимости отличия коэффициентов от нуля проводится при помощи статистики Вальда, использующей распределение хи-квадрат, которая представляет собой квадрат отношения соответствующего коэффициента к его стандартной ошибке.

Согласно полученной константе и согласно значимым коэффициентам для прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов (р) классифицирующая дискриминантная функция имеет вид:

Z=23,601-1,131*AMHR2A/G-0,672*AMHR2G/G+0,932*ESR2A/A+0,168*ESR2A/G-0,606*LHCGR(Ser312Asn)A/G-1,435*LHCGR(Ser312Asn)A/A-23,065*LHCGR(Asn291Ser)A/G-23,627*LHCGR(Asn291Ser)A/A, где

23,601 - константа;

AMHR2A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена AMHR2(-482 A>G) [rs2002555] (1 - да, 0 - нет);

AMHR2G/G - наличие у пациентки генотипа G/G гена AMHR2(-482 A>G) [rs2002555] (1 - да, 0 - нет);

ESR2A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938] (1 - да, 0 - нет);

ESR2A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938] (1 - да, 0 - нет);

LHCGR (Ser312Asn)A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275] (1 - да, 0 - нет);

LHCGR (Ser312Asn)A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275] (1 - да, 0 - нет);

LHCGR (Asn291Ser)A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена LHCGR (Asn291Ser) [rs 12470652] (1 - да, 0 - нет);

LHCGR (Asn291Ser)A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652] (1 - да, 0 - нет);

-1,131, -0,672, 0,932, 0,168, -0,606, -1,435, -23,065, -23,627 - коэффициенты; и вероятность получения незрелых ооцитов определяют по формуле p=1/(1+e-z),

где в случае р меньше 0,5 предполагают, что событие не наступит; в противном случае предполагается наступление события.

Точность прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов с использованием следующих полиморфных локусов AMHR2(-482 A>G) [rs2002555]; LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275]; ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938]; LHCGR (Asn291Ser) [rs 12470652] составляет 68,6%. Провели ROC-анализ для валидации полученной модели (фиг. 1). Чувствительность составила 73,6%, специфичность - 62,5%, значение AUC (площадь под кривой) для данной модели составляет 0,704, 95% доверительный интервал от 0,622 до 0,786.

Пример

Прогнозирование вероятности получения незрелых ооцитов провели у пациентки X. 28 лет, обратившейся для проведения программы ЭКО и ПЭ по поводу трубно-перитонеального фактора бесплодия. Из анамнеза: беременностей 0, в 2011 г. проведена лапароскопия, двухсторонняя тубэктомия по поводу гидросальпинксов. Данная попытка ЭКО первая.

Кровь для генотипирования у пациентки X. брали натощак из локтевой вены в стерильную пробирку. Определяли замены однонуклеотидных последовательностей с применением ПЦР. ПЦР и определение температуры плавления олигонуклеотидных проб проводили при помощи детектирующего амплификатора ДТ-96 (ООО «НПО ДНК-Технология», Россия). Центрифугирование проводили в течение 1 мин при 10000 об/мин, супернатант удалялся, осадки клеточных ядер двукратно отмывали соответствующим буфером. В последующем протеолиз проводили в буферном растворе (50 мкл), содержащем 10 мМ Трис-HCl рН 8,3, 50 мМ KCl, 0,45% NP40, 045% Твина 20 и 250 мкг/мл протеиназы К, 2,5 мМ MgCl, в течение 20 минут при 37°С. Концентрацию ДНК определяли на ДНК-минифлуориметре (Hoefer, США). Идентификацию однонуклеотидных полиморфизмов проводили с помощью модифицированного метода «примыкающих проб» (adjacent probes, kissing probes), с использованием оригинальных олигонуклеотидов.

Определение полиморфизма генов сначала проводили ПЦР с праймерами, которые связываются с комплементарными последовательностями, и между циклами нагревания (для денатурации ДНК) и охлаждения (для обеспечения синтеза) синтезируются копии данной области гена.

Результат генотипирования пациентки X.:

AMHR2(-482 A>G) [rs2002555] - A/G

ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938] - A/G

LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275] - A/A

LHCGR (Asn291Ser) [rs 12470652] - A/A.

Значение дискриминантной функции составило:

z=23,601-1,131*1+0,168*1-1,435*1-23,627*1=-2,424

Вероятность (р) получения незрелых ооцитов у данной пациентки рассчитывали по формуле 1:

р=1/(1+е-2,424)=0,925

Рассчитанная вероятность р указывает на исполнение прогноза, в данном случае - на получение незрелых ооцитов с вероятностью 92,5%.

В результате проведения программы ВРТ у пациентки всего было получено 11 ооцитов, из них 9 ооцитов - незрелые, 2 - зрелые.

Согласно полученным данным прогноз вероятности получения незрелых ооцитов при проведении программ ВРТ носит статистически достоверный характер.

Полученный результат свидетельствует о независимой генетической детерминации процессов оогенеза. Следовательно, способ прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров может быть использован в клинико-лабораторной практике с целью предикции исходов программы ЭКО.

На фиг. 1 приведен ROC-анализ ассоциации полиморфизма генов AMHR2(-482 A>G) [rs2002555]; LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275]; ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938]; LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652] с вероятностью получения незрелых ооцитов (sensitivity - чувствительность; specificity - специфичность).

Список использованных источников

1. Gearhart J., Coutifaris С. In vitro fertilization, the Nobel Prize, and human embryonic stem cells // Cell stem cell. - 2011. - Vol. 8. - №1. - P. 12-15.

2. Altmae S., Hovatta O., Stavreus-Evers A., Salumets A. Genetic predictors of controlled ovarian hyperstimulation: where do we stand today? // Human reproduction update. - 2011. - Vol. 17. - №6. - P. 813-828.

3. Серебренникова К.Г. и др. Современные технологии лечения бесплодия у женщин с оперированными яичниками. // Международный журнал экспериментального образования. 2010 - №9. С. 115-117.

4. Сухих Г.Т., Сароян Т.Т., Корнеева И.Е. Иммунные аспекты патофизиологии синдрома гиперстимуляции яичников. // Акушерство и гинекология. 2009 - №3. С. 3-6.

5. O'Brien Т.J., Kalmin М.М., Harralson A.F., Clark А.М., Gindoff I., Simmens S.J., Frankfurter D., Gindoff P. Association between the luteinizing hormone/chorionic gonadotropin receptor (LHCGR) rs4073366 polymorphism and ovarian hyperstimulation syndrome during controlled ovarian hyperstimulation // Reproductive biology and endocrinology: RB&E. - 2013. - Vol. 11. - №1. - P. 71.

6. Twigt J.M., Hammiche F., Sinclair K.D., Beckers N.G., Visser J.A., Lindemans J., de Jong F.H., Laven J.S., Steegers-Theunissen R.P. Preconception folic acid use modulates estradiol and follicular responses to ovarian stimulation // The Journal of clinical endocrinology and metabolism. - 2011. - Vol. 96. - №2. - P. E322-329.

7. Alviggi C, Humaidan P., Ezcurra D. Hormonal, functional and genetic biomarkers in controlled ovarian stimulation: tools for matching patients and protocols // Reproductive biology and endocrinology: RB&E. - 2012. - Vol. 10. - P. 9.

8. van Disseldorp J., Franke L., Eijkemans R., Broekmans F., Macklon N., Wijmenga C, Fauser B. Genome-wide analysis shows no genomic predictors of ovarian response to stimulation by exogenous FSH for IVF // Reproductive biomedicine online. - 2011. - Vol. 22. - №4. - P. 382-388.

9. Boudjenah R., Molina-Gomes D., Torre A., Bergere M., Bailly M, Boitrelle F., Taieb S., Wainer R., Benahmed M, de Mazancourt P., Selva J., Vialard F. Genetic polymorphisms influence the ovarian response to rFSH stimulation in patients undergoing in vitro fertilization programs with ICSI // PloS one. - 2012. - Vol. 7. - №6. - P. e38700.

10. Кофиади И.А., Ребриков Д.В. Методы детекции однонуклеотидных полиморфизмов: аллель-специфичная ПЦР и гибридизация с олигонуклеотидной пробой // Генетика 2006 - Т. 42 (1). С. 22-32.

11. Lyon Е. Mutation detection using fluorescent hybridization probes and melting curve analysis // Expert Rev Mol Diagn. - 2001. - Vol. 1. - №1. - P. 92-101.

12. Элдер К., Дэйл Б. Экстракорпоральное оплодотворение / М.: МЕДпресс-информ, 2008. - 276 с.

Способ прогнозирования вероятности получения незрелых ооцитов в программах вспомогательных репродуктивных технологий с использованием молекулярно-генетических маркеров, включающий выделение ДНК из образцов периферической крови пациентки с трубно-перитонеальным фактором бесплодия, определение полиморфных локусов AMHR2 (-482 A>G) [rs2002555]; LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275]; ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938]; LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652] с применением ПЦР в режиме реального времени, после чего полученные данные включают в функцию
Z=23,601 -1,131 * AMHR2A/G -0,672 * AMHR2G/G + 0,932 * ESR2A/A + 0,168 * ESR2A/G -0,606 * LHCGR (Ser312Asn)A/G -1,435 * LHCGR (Ser312Asn)A/A -23,065 * LHCGR (Asn291Ser)A/G -23,627 * LHCGR (Asn291Ser)A/A, где
23,601 - константа;
AMHR2A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена AMHR2 (-482 A>G) [rs2002555] (1 - да, 0 - нет);
AMHR2G/G - наличие у пациентки генотипа G/G гена AMHR2 (-482 A>G) [rs2002555] (1 - да, 0 - нет);
ESR2A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938] (1 - да, 0 - нет);
ESR2A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена ESR2 G>A [RsaI] [rs4986938] (1 - да, 0 - нет);
LHCGR (Ser312Asn)A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275] (1 - да, 0 - нет);
LHCGR (Ser312Asn)A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена LHCGR (Ser312Asn) [rs2293275] (1 - да, 0 - нет);
LHCGR (Asn291Ser)A/G - наличие у пациентки генотипа A/G гена LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652] (1 - да, 0 - нет);
LHCGR (Asn291Ser)A/A - наличие у пациентки генотипа А/А гена LHCGR (Asn291Ser) [rs12470652] (1 - да, 0 - нет);
-1,131, -0,672, 0,932, 0,168, -0,606, -1,435, -23,065, -23,627 - коэффициенты; и вероятность получения незрелых ооцитов определяют по формуле p=1/(1+e-z), где в случае р меньше 0,5 предполагают, что событие не наступит; в противном случае предполагается наступление события.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики дисбиотических нарушений в биоптатах слизистых носа и глотки у детей раннего и дошкольного возраста с постоянно рецидивирующими острыми респираторными инфекциями.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для ПЦР-диагностики гена резус-фактора плода по крови беременной женщины. Предложен набор с лиофилизированными праймерами, содержащий готовые к амплификации реакционные пробирки с лиофилизированными праймерами и праймерами-зондами для экзонов RHD-5 и RHD-7 гена RHD.

Изобретение относится к области онкологии и касается комплекса, включающего сочетания полиинозинполицитидиловой кислоты (pIC) и полиэтиленимина (PEI), и его применения в качестве средства для лечения рака, в частности меланомы.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу неинвазивной диагностики развития тубулоинтерстициального фиброза (ТИФ) у пациентов с фокально-сегментарным гломерулосклерозом (ФСГС).
Изобретение относится к медицине, в частности к кардиологии. Изобретение представляет cпособ диагностики предрасположенности к прогрессированию атеросклероза у больных с хронической ишемической болезнью сердца, включающий анализ образца для определения содержания интерлейкин-10-продуцирующих T-лимфоцитов, отличающийся тем, что из периферической венозной крови выделяют мононуклеарную фракцию клеток с последующей активацией клеток в культуре, фенотипированием лимфоцитов с использованием моноклональных антител к CD4 и интерлейкину-10 (ИЛ-10), меченных флуоресцентными метками, и цитофлуориметрией в потоке, при этом содержание ИЛ-10-продуцирующих T-лимфоцитов (CD4+ИЛ-10+ клеток), выраженное в процентном (%) отношении от CD4+ лимфоцитов, менее 3,5% свидетельствует о высоком риске прогрессирования атеросклероза.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ мониторинга экспрессии представляющего интерес гена полипептида CADM1, Rb, ZMYND10, RASSF5, PTEN, SERPINB5, EPB41L3 или DAPK1 для определения терапевтического эффекта соединения при лечении заболевания, связанного с экспрессией указанного представляющего интерес гена полипептида.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу диагностики возможности заражения новорожденных вирусными гепатитами В и С у беременных женщин, больных этой инфекцией или носителей вирусов.
Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способу культивирования одиночной В-клетки, которая получена из популяции В-клеток экспериментального животного.
Изобретение касается способа выявления пациента с риском развития расстройства щитовидной железы в результате лечения в режиме, который истощает лимфоциты. Способ включает определение до лечения наличия антител, направленных против пероксидазы щитовидной железы или микросом щитовидной железы, у пациента.

Изобретение относится к медицинской технике. Портативный медицинский прибор для измерения уровня глюкозы в крови содержит корпус с кассетоприемником, помещаемую в кассетоприемник сменную кассету с тест-лентой и привод, включающий в себя электрический двигатель и передаточный механизм, предназначенный для поворачивания катушки кассеты с тест-лентой таким образом, чтобы тест-лента кассеты наматывалась на катушку с возможностью последовательного использования расположенных на тест-ленте тест-элементов.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования у пациента с влажной возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD) повышенной вероятности эффекта от лечения высокоаффинным антителом против VEGF, в частности, ранибизумабом. Предложен набор, содержащий первый олигонуклеотид и вторые олигонуклеотиды, специфичные для аллелей полиморфизма гена BATF, соответствующего rs175714. Если генотип содержит АА или AG, у пациента прогнозируют повышенную вероятность эффекта от указанного лечения. Предложенная группа изобретений обеспечивает эффективные средства и методы для прогнозирования повышенной вероятности эффекта от лечения у пациента с влажной AMD. 2 н. и 7 з.п. ф-лы, 1 ил., 5 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и касается способа очистки гозерелина, включающего растворение гозерелина-сырца в водном растворе уксусной кислоты, фильтрование полученного раствора и последующую трехстадийную хроматографическую очистку: жидкостную хроматографию низкого давления на колонне с полистиролдивинилбензольным сорбентом, ионообменную хроматографию низкого давления и ВЭЖХ. Изобретение обеспечивает получение высокоочищенного целевого продукта. 1 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования вероятности риска возникновения преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России. Сущность способа состоит в том, что осуществляют забор венозной крови, выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ полиморфизма гена по локусу -344С/Т CYР11 В2 в сочетании с другими предикторами развития данного осложнения беременности. Прогнозируют риск развития преэклампсии по результатам уравнения Р=еy/(1+еy), где е - математическая константа, равная 2,72, а y находят из уравнения бинарной логистической регрессии следующего вида: y=16,462+0,820*x1+0,680*x2-2,470*х3-2,444*х4-0,132*х5, где x1 - генетический вариант по локусу - 344С/Т CYР11 В2, где СС или ТС - 1, ТТ - 0; х2 - курение: да - 0, нет - 1; х3 - наличие ПЭ у родственников: да - 0, нет - 1; х4 - наличие патологии со стороны сердечно-сосудистой системы: да - 0, нет - 1; х5 - САД до беременности, мм рт.ст. Использование заявленного способа позволяет эффективно спрогнозировать вероятность риска возникновения преэклампсии у женщин русской национальности, являющихся уроженками Центрально-Черноземного региона России. 2 табл., 1 ил., 2 пр.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ прогнозирования риска развития осложнений ХИЭ у индивидуумов русской национальности, уроженцев Центрального Черноземья РФ, отличающийся тем, что способ включает выделение ДНК из периферической венозной крови, анализ генетического полиморфизма лимфотоксина α(+250A/G Ltα) в сочетании с такими предикторами, как наличие очагов хронической инфекции и уровень лейкоцитов, прогноз риска развития осложнений по уравнениям линейной дискриминантной функции следующего вида: у1=-114,015+108,475x1+1,267x2+2,743x3 у2=-114,720+103,793x1+2,370x2+3,399x3, где x1 - наличие очагов хронической инфекции (да - 1; нет - 2), x2 - уровень лейкоцитов (1012/л), x3 - генетический вариант по локусу+250 A/G Ltα: AA - x3=1; AG - x3=2; GG - x3=3. Прогнозируют риск развития осложнений, таких как вторичная грибковая и бактериальная инфекции ХИЭ в случае, если значение у2 больше значения у1. Прогнозируют отсутствие риска развития осложнений ХИЭ, в случае, если значение у1 больше значения у2. Изобретение позволяет получить критерии оценки риска развития осложнений хронической истинной экземы. 2 табл.
Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки эффективности процедуры радиочастотной симпатической денервации почечных артерий у пациентов с медикаментозно-резистентной артериальной гипертензией, характеризующийся тем, что пациенту в условиях стационара проводят измерение β-адренореактивности эритроцитарных мембран периферической крови до и через 7 дней после процедуры, и при снижении значения β-адренореактивности мембран на 10 условных единиц и более процедуру оценивают как эффективную. Осуществление изобретения обеспечивает расширение арсенала способов оценки эффективности процедуры радиочастотной симпатической денервации почечных артерий. 2 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для диагностики рака желудка. В сыворотке крови определяют концентрации фактора роста эндотелия сосудов, раково-эмбрионального антигена и пепсиногена-1. При соблюдении одного из следующих условий: значения VEGF больше или равны 226-360 пг/мл, СЕА больше или равны 2,8 нг/мл, PG-1 меньше 30 мкг/л; значения VEGF больше 360 пг/мл, СЕА больше или равны 5,2 нг/мл, PG-1 меньше 49 мкг/л; значения VEGF больше 1000 пг/мл, СЕА больше или равны 5,0 нг/мл, PG-1 больше или равны 105 мкг/л, устанавливают наличие онкотрансформации желудочного эпителия. Способ позволяет повысить точность раннего выявления у пациентов с заболеваниями гастродуоденальной зоны онкотрансформации желудочного эпителия. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей. В крови заболевших детей в период с 1 по 7-й день болезни определяют X- значение уровня лимфоцитов, на поверхности которых находятся СD3+IL4+ маркеры, рассчитывают значение Y по формуле 1,12+9,32*X. При значении Y выше критического значения 1,28 делают заключение, что возбудителем заболевания являются вирусы Коксаки группы В, если Y ниже критического значения 1,28, то делают заключение, что возбудителем являются вирусы ЕСНО. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность определения типа энтеровируса, явившегося причиной развития менингита у детей. 1 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к хирургии, и может быть использовано для прогнозирования эндогенной интоксикации у больных острым перитонитом. Способ осуществляют следующим образом: начиная с первых суток после оперативного лечения в динамике определяют содержание молекул средней массы и малонового диальдегида, на основе которых рассчитывают индекс прогнозирования эндогенной интоксикации по определенной формуле. При значении индекса прогнозирования эндогенной интоксикации до 0,95 констатируют положительную динамику эндогенной интоксикации, при значении от 0,95 до 1,34 - низкую степень вероятности прогрессирования эндогенной интоксикации, при значении 1,35 и выше - высокую степень вероятности прогрессирования эндогенной интоксикации. Изобретение позволяет точно и адекватно отражать вероятность прогрессирования эндогенной интоксикации путем определения индекса прогнозирования эндогенной интоксикации больных острым перитонитом, что позволяет судить о направленности (прогрессирование или купирование) течения синдрома эндогенной интоксикации и оценивать в динамике эффективность оперативного лечения, а также действия дезинтоксикационной и эфферентной терапии. 2 пр., 3 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии, молекулярно-генетической диагностики и молекулярной биологии. Предложен набор, содержащий два олигодезоксирибонуклеотидных праймера и флуоресцентно-меченый ДНК-зонд. Изобретение обеспечивает эффективную амплификацию и детекцию эндогенного внутреннего контроля при исследованиях биологического материала крупного рогатого скота методом ПЦР в режиме «реального времени» и уменьшает частоту недостоверных результатов. 2 ил., 3 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биохимии. Описан набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченого зонда для идентификации генетического материала риккетсий методом ПЦР в реальном времени. Набор содержит последовательности олигонуклеотидов, видоспецифичных к риккетсиям: прямой праймер (PrF_gltA) 5`→3`: 5'-GGCTTCGGTCATCGTGT-3' (17 н); обратный праймер (PrR_gltA) 5`→3`: 5'-TTGCTATTTGTAAGAGCGGATTG-3' (23 н); флуоресцентно-меченый ДНК-зонд Z(ROX)_gltA 5`→3`: ROX-CCACGTGCCGCAGTACTTAAAGAAAC-BHQ2' (26 н). Техническим результатом заявляемого изобретения является создание набора специфичных олигонуклеотидных праймеров и зонда для выявления генетического материала риккетсий, в том числе R. tarasevichiae и R. raoultii, в гомогенатах клещей, клинических образцах и биологических жидкостях, распространенных на территории Российской Федерации методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени. 1 ил., 3 табл., 3 пр.
Наверх